专利名称：螠蛏组织提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种提取物的制备方法，特别是一种螆蛏组织提取物的制备方法，该
提取物具有抑菌活性好、抑菌普广的特点，同时具有强的清除超氧阴离子和羟自由基的活 性的作用，可作为治疗和预防与清除体内过氧化物相关的药物、保健食品、食品的添加剂。
背景技术：
鎰蛏(Sinonovacula constricta Iamarck)俗名蛏子、青子、竹蚶、海蛏，隶属于 软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(LameUibranchia)、真瓣鳃目(Eulamellibranchia)、蛏科 (Pharellidae)，是中国和日本特有的种类，也是中国沿海养殖的重要贝类之一。螆蛏肉味 鲜美，营养丰富，蛋白质含量5.5%，脂肪0.8%，糖1.8%和无机盐1. 1%。螆蛏的软体部还 有补虚的作用，对阴虚、血虚效果最佳，产后、病后多用之。近年来，海洋贝类的研究已引起 人们极大重视，海洋贝类中具有多种生物活性肽、多糖、不饱和脂肪酸，是研制海洋保健食 品和功能食品的重要原材料，如Bordenave等将太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)用胃蛋 白酶水解得到具有抑制ACE能力的水解产物；文蛤(Meretrix meretrix(Linnaeus))多糖 对不同剂量的环磷酰胺(CTX)引起的迟发型超敏反应(DTH)有双向调节功能等。但是目前 关于螆蛏的研究多集中在干制品加工及营养成分分析方面，对其生物活性的研究甚少，产 品品种单调，价格偏低，在一定程度上限制了螆蛏养殖业和螆蛏组织利用的发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺简单、好操作、易控制、成本低的螆蛏组织提取物的 制备方法，为治疗和预防与清除体内过氧化物相关的药物、保健食品、食品提供一种良好的 添加剂，克服现有技术的不足。
本发明的螆蛏组织提取物的制备方法，由如下步骤组成
将新鲜的螆蛏肉用组织捣碎，形成肉糜； 向上述肉糜内加入蒸馏水浸泡20小时 30小时，肉糜与蒸馏水的用量比为30g 肉糜加入45mL 55mL蒸馏水； 将肉糜与蒸馏水的混合物置于70°C 9(TC水浴中加热1. 5小时 2. 5小时；过
滤，分离出滤液备用；按上述方式向分离出的滤渣中加蒸馏水并加温第二次制备滤液备用； 再向滤渣中加蒸馏水并加温第三次制备滤液备用； 对上步三次形成的滤液进行合并冷冻干燥，形成螆蛏组织提取物。 本发明的螆蛏组织提取物的制备方法，工艺步骤简单，好操作，易控制，加工成本
低，原料来源广阔，为治疗和预防与清除体内过氧化物相关的药物、保健食品、食品提供了
一种良好的添加剂。
具体实施例方式本发明的方法由如下步骤组成
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1、将新鲜的螆蛏肉用组织捣碎，形成肉糜； 2、将上述肉糜装入三角瓶，向瓶内加入蒸馏水加塞浸泡20小时或24小时或26小 时或30小时，即在20小时 30小时之间均可，肉糜与蒸馏水的用量比为30g肉糜加入45mL 或50mL或55mL蒸馏水，即蒸馏水控制在45mL 55mL之间均可； 3 、将肉糜与蒸馏水的混合物置于70°C或80°C或90°C的水浴中加热，温度在 7(TC 9(TC之间均可，加热时间为1. 5小时或2小时或2. 5小时，在1. 5小时 2. 5小时之 间均可； 4、过滤，分离出滤液备用；按上述方式向分离出的滤渣中加蒸馏水并加温第二次
制备滤液备用；再向滤渣中加蒸馏水并加温第三次制备滤液备用； 5、对上步三次形成的滤液进行合并冷冻干燥，形成螆蛏组织提取物。 本发明的方法制备的提取物具有抑菌活性好、抑菌普广的特点，同时具有强的清
除超氧阴离子和羟自由基的活性的作用，可作为治疗和预防与清除体内过氧化物相关的药
物、保健食品、食品的添加剂。 实例l :将螆蛏肉用组织捣碎匀浆机匀浆捣碎、称重30g，装入三角瓶，加入50mL蒸 馏水，加塞浸泡24h ;然后置于8(TC水浴中加热2h，过滤分离出滤液，再向滤渣中加入50mL 蒸馏水再次水浴加热2h，分离滤液；再加入30mL蒸馏水，水浴处理lh，分离滤液。将3次所 得滤液合并冷冻干燥。 滤纸片法检测抑菌活性，邻苯三酚法检测超氧阴离子自由基(02—)清除作用， Fenton法检测羟自由基(*0H)清除作用。结果表明该螆蛏组织提取物可以作为治疗和预防 清除体内过氧化物的药物或保健食品，能与辅料混合形成各种形式的丸剂、散剂、片剂、膏 剂，粉剂、水剂，颗粒剂、胶囊等；使用可以任意选用生理盐水，稳定剂，悬浮剂或乳化剂等； 制备成保健食品可以是液体的比如像清凉饮料，口服液，乳酸饮料，调味品；作为食品添加 剂，比如加入到面食类，果冻，冰淇淋，腌制品，火腿，点心中。 实例2 :将螆蛏肉用组织捣碎匀浆机匀浆捣碎、称重30g，装入三角瓶，加入50mL蒸 馏水，加塞浸泡24h ;然后置于8(TC水浴中加热2h，过滤分离出滤液，再向滤渣中加入50mL 蒸馏水再次水浴加热2h，分离滤液；再加入30mL蒸馏水，水浴处理lh，分离滤液。将3次所 得滤液合并冷冻干燥。 滤纸片法检测组织提取液的抑菌活性大肠杆菌Escherichia coli(EC)、变形 杆菌Proteus vulgaris (PV)、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus (SA)、产气杆菌 Enterobacter aerogenes (EA)禾口枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis (BS)用牛肉膏蛋白胨培 养基，乳酸菌Lactobacterium delbruckii (LD)用MRS培养基。酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae(SC)用YPD培养基。以上各种菌分别接种于相应的液体培养基，振荡培养24h 作指示菌。分别用移液枪取指示菌液lOOii L于相应的固体培养基，用无菌三角涂棒涂抹均 匀，然后将平板分成六个区，每个区分别放入一张滤纸片，再分别用移液枪移取组织提取液 样品10iiL滴入滤纸片中央，置于37t:培养箱中培养。每个处理做3次重复，阳性对照为 75%酒精，阴性对照为无菌水。三天后观察指示菌的生长情况，测定抑菌圈的直径大小。结 果这种水提物对大肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌作用较强，对金黄色葡萄球菌、 产气杆菌均有抑制活性，而金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌和产气杆菌分别属于革兰 氏阳性和革兰氏阴性菌，因此用这种螆蛏组织提取物开发功能性食品或食品添加剂可因其抑菌活性而延长产品的保藏时间。 超氧阴离子自由基(02—)清除作用的测定取邻苯三酚O. lmL于试管中，加入 pH 8. 2的Tris-HCl缓冲溶液5mL，加入组织提取物溶液0. 25mL，迅速混匀。在25。C反应 15min。使用1cm比色皿，以蒸馏水做空白对照，在320nm处时测吸光度At，并测定本底扣除 水解液自身的干扰。酶解液对超氧阴离子自由基清除率的计算公式如下清除率S(X)= Ao-(Ai-Aj)/AoX100X。式中，Ao为试剂空白的吸光度值为样液的吸光度值；A」为样液 本底的吸光度值。虽然超氧阴离子自由基(02—)不能直接诱导生物和食品体系中的脂类氧 化，但它会在金属离子催化下发生Fenton反应产生有高活性的 0H，因此常用样品对超氧 阴离子自由基(02—)的清除能力来反映其抗氧化活性。试剂空白时的吸光度值Ao为0. 862， 经清除率公式S(X) = Ao-(Ai-Aj)/AoX100计算超氧阴离子自由基清除率。结果螆蛏组 织提取物的超氧阴离子自由基清除率高达83. 06% 。因此可用作抗氧化药物的制备或食品 抗氧化添加剂。羟自由基('0H)清除作用的测定取9mmol/L的FeS04 lmL、9mmol/L的水杨酸-乙 醇溶液lmL、样品溶液lmL，最后加入8. 8mmol/L的HA lmL启动反应。在37。C反应30分 钟。以水为参比，用可见光分光光度计在510nm下测各个提取液吸光度值。提取物对羟自 由基的清除效果用清除率表示，按下式计算
SA = [ (Ac-As) / (Ac-Ao) ] X 100 % 式中，Ac为对照组0D值；As为样品组0D值；A。为空白组0D值。
羟基自由基(*0H)是一种能够激发油脂过氧化反应的较强的氧化剂，被认为是体 内最活跃的活性氧自由基，辐射损伤等物理、化学因子都会促进其形成，是造成生物有机体 过氧化损伤的主要因素。羟自由基可介导许多病理变化，如引发不饱和脂肪酸的脂质过氧 化反应，并损伤生物膜的功能和结构，因此羟自由基的清除对于生物体具有重要意义。H202 和Fe2+混合发生Fenton反应，生成具有很高反应活性的*0H，能被水杨酸有效的捕捉，并生 成有色物质；但若加入具有清除作用的物质，便会与水杨酸竞争，从而使有色产物生成量减 少。 对照组0D值Ac为1. 243，空白组0D值Ao为0. 031 。经公式SA = [ (Ac-As) / (Ac-Ao) ] X 100%算出羟自由基清除率S%，结果该提取物的清除率达44. 9%，因此可用作 抗氧化药物的制备或食品抗氧化添加剂。
权利要求
一种螠蛏组织提取物的制备方法，其特征在于由如下步骤组成a、将新鲜的螠蛏肉用组织捣碎，形成肉糜；b、向上述肉糜内加入蒸馏水浸泡20小时～30小时，肉糜与蒸馏水的用量比为30g肉糜加入45mL～55mL蒸馏水；c、将肉糜与蒸馏水的混合物置于70℃～90℃水浴中加热1.5小时～2.5小时；d、过滤，分离出滤液备用；按上述方式向分离出的滤渣中加蒸馏水并加温第二次制备滤液备用；再向滤渣中加蒸馏水并加温第三次制备滤液备用；e、对上步三次形成的滤液进行合并冷冻干燥，形成螠蛏组织提取物。
全文摘要
一种螠蛏组织提取物的制备方法，由如下步骤组成将新鲜的螠蛏肉用组织捣碎，形成肉糜；向上述肉糜内加入蒸馏水浸泡20小时～30小时，肉糜与蒸馏水的用量比为30g肉糜加入45mL～55mL蒸馏水；将肉糜与蒸馏水的混合物置于70℃～90℃水浴中加热1.5小时～2.5小时；过滤，分离出滤液备用；按上述方式向分离出的滤渣中加蒸馏水并加温第二次制备滤液备用；再向滤渣中加蒸馏水并加温第三次制备滤液备用；对上步三次形成的滤液进行合并冷冻干燥，形成螠蛏组织提取物。工艺步骤简单，好操作，易控制，加工成本低，原料来源广阔，为治疗和预防与清除体内过氧化物相关的药物、保健食品、食品提供了一种良好的添加剂。
文档编号A23L1/29GK101732351SQ20091024896
公开日2010年6月16日 申请日期2009年12月29日 优先权日2009年12月29日
发明者张付云 申请人:大连水产学院