专利名称：一种枯草芽孢杆菌及其在防治植物叶斑病中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物技术领域，具体涉及ー种枯草芽孢杆菌及其在防治铁皮石斛叶斑病中的应用。
背景技术：
生物农药(biopesticides)包括植物源农药，微生物农药，微生物次生代谢物(抗生素)等，用于防治各种昆虫和病害，因其具有危害小、使用安全等优点，已成为农业可持续发展中最关心的问题之一，已成为研究热点。随着公众对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注，充分利用有益微生物防治植物病害已日趋受到重视。尤其是进入21世纪以来， 各国政府和民众更加重视生物农药的开发和应用。我国也把微生物农药的研制和开发列为国家重点科技攻关和高新技术发展计划。生物农药的特性赋予了农业可持续发展战略，为保护农业生态环境，保障食品安全提供物质基础和技术支撑；同时生物农药产业也是未来经济中具有发展潜力的新增长点之一。铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)又名黑节草，兰科石斛属植物，为多年生附生草本，是ー种集栽培和观赏于一体的植物，为珍稀名贵的中药材，一直与灵芝、人參、冬虫夏草等被列为上品中药，被誉为“中华九大仙草”之首。铁皮石斛因表皮呈铁绿色而得名，具有滋阴清热、养胃生津、润肺止咳等功效，其所含的多糖成分具有增强人体免疫功能、防癌抗癌、恢复嗓音等功效，现代医学证明，铁皮石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力和有效减轻肝损伤等作用。由于铁皮石斛喜湿度大的环境，叶斑病的发生较为严重，但因药用的特性，决定了对其病虫害的防治不可使用高毒的化学农药。因此，寻找ー种经济、安全、有效的防治措施是当务之急，生物防治不失为重要的辅助手段，其中生防细菌在植物病害生物防治中起到非常重要的作用，其主要优势在于(I)种类和数量众多，在植物体内外大量存在；(2)对病原菌的作用方式多样化，包括竞争、拮抗、寄生、诱导植物抗性产生等；(3)繁殖速度快；(4)大多细菌在植物体内外定殖カ强；(5)能够人工培养，易于操作，便于生产应用；(6)有些细菌菌株不仅能够防治病害而且可以促进植物的生长，増加作物的产量。目前对铁皮石斛叶斑病的防治尚无理想的生防药剂，如果能使用生物农药或尽量少的使用农药对铁皮石斛叶斑病进行有效防治，将在一定程度上降低农药残留，大大提高其食用安全性。从保护生态环境和食品安全的角度出发，铁皮石斛生产需要有低毒、污染少，对人体安全的生物制剂来控制病害，达到安全食用的目的，这也符合农业的可持续发展战略。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种对铁皮石斛叶斑病病原菌具有拮抗作用的枯草芽孢杆菌。本发明还要解决的技术问题是提供上述枯草芽孢杆菌在防治铁皮石斛叶斑病中的应用。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下高效防治铁皮石斛叶斑病的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205是2010年10月在江苏农博园铁皮石斛栽植区内感病植株上分离获得的，该菌株对铁皮石斛叶斑病具有显著的拮抗作用，目前该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 6303，保藏日期为2012年6月28日。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205的生理活性特征如下枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌 落较小，黄色，直径一般3 5mm，圆形，边缘整齐，光滑湿润，产淡紫色色素，菌体杆状，大小为0.8X (广2) μ m，顶生ー根或三根鞭毛。革兰氏染色表现为阴性；葡萄糖氧化发酵反应(0/F反应)结果为氧化产酸、好氧；氧化酶反应为弱阳性。上述枯草芽孢杆菌在防治植物叶斑病中的应用，所述的植物为铁皮石斛、红叶石楠或草莓。将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205接种于发酵培养基中，在280C _35°C下发酵培养48-72小时，得到的发酵液作为防治铁皮石斛叶斑病的菌剂。本发明中所述发酵培养基的配方为1000mL蒸馏水，牛肉膏2_5g，蛋白胨5-10g，氯化钠 4-5g，pH6. 5-7.5。有益效果与现有技术相比，本发明的优点是(I)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205对多种植物病原菌具有抑制作用，在拮抗细菌对植物病害生物防治中起到非常重要的作用，便于生产应用，尤其是对真菌引起的铁皮石斛叶斑病的防治具有重要意义，也是保证食用安全的重要手段。(2)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205培养条件简单、容易保存，易于エ业化生产，具有良好的开发应用前景。
图I为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JSNL1205对铁皮石斛叶斑病病原菌芸苔链格孢(Alternaria brassicae)的室内平板对峙效果。其中A是枯草芽孢杆菌对病原菌的室内平板对峙图病原菌单接种图片(CK)，以下同。图2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JSNL1205对红叶石楠叶斑病病原菌葡萄孢盘菌(Botryotiniafuckeliana)的室内平板对峙效果。图3枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JSNL1205对草莓叶斑病病原菌小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)的室内平板对峙效果。
具体实施例方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例I :枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205对铁皮石斛叶斑病病原菌芸苔链格孢(Alternaria brassicae)、红叶石楠叶斑病病原菌葡萄孢盘菌(Botryotiniafuckeliana)、草莓叶斑病病原菌小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)的平板抑菌作用。将用LB斜面活化的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) JSNL1205菌株对称接种于PDA平板的两侧，再将铁皮石斛、红叶石楠和草莓叶斑病的病原菌的PDA平板培养物用直径5mm的打孔器打取同质同量的菌饼，接种于平板中央。27±1°C培养10天观察抑菌效果，并拍照记录，实验效果如图I-图3、表I所示。结果表明，枯草芽孢杆菌BacillussubtilisJSNL1205对3种病原菌均有明显的拮抗作用。用单接病原菌的PDA平板作为对、照。表I JSNL1205对3种病原菌的抑制效果
权利要求
1.一种枯草芽孢杆菌，其分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JSNL1205，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo. 6303，保藏日期为2012年6月28日。
2.权利要求I所述的枯草芽孢杆菌在防治植物叶斑病中的应用。
3.根据权利要求I所述的应用，其特征在于，所述的植物为铁皮石斛、红叶石楠或草毒。
全文摘要
本发明公开了一种枯草芽孢杆菌，其分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JSNL1205，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.6303，保藏日期为2012年6月28日。本发明还公开了上述枯草芽孢杆菌在防治铁皮石斛等植物叶斑病中的应用。本发明枯草芽孢杆菌JSNL1205对铁皮石斛上的多种病原真菌具有抑制作用；且能够人工培养，繁殖速度快，便于进行规模化生产，具有良好的开发应用前景。
文档编号C12N1/20GK102732471SQ20121025395
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月23日 优先权日2012年7月23日
发明者席刚俊, 张红岩, 徐超, 管斌, 赵桂华 申请人:江苏农林职业技术学院