专利名称：以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基。
背景技术：
芽孢杆菌在增殖过程中产生的胞外淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶能把养殖水体中的生物残体、残饵和其他有机物降解为小分子有机物，同时芽孢杆菌对养殖水体中的氨氮、亚硝酸态氮、硝酸态氮和COD均有明显的降解作用，这在很大程度上减少了养殖水体的老化和富营养化，达到改良和修复养殖水体的目的；另外，芽孢杆菌还可以通过拮抗作用抑制养殖水体中多种致病菌的滋生。因此，基于芽孢杆菌开发的微生物制剂应用于海水养殖系统，具有广阔的应用前景。在芽孢杆菌规模化培养中，主要以淀粉、麸皮、大豆蛋白和酵母粉等为主要原料，以这些原料为主要成分建立的培养基对芽孢杆菌规模化培养后，活菌浓度也可达到工业化生产的要求，但培养基(液体)成本每吨为200元以上。为了进一步降低芽孢杆菌工业化生产成本，寻找一种经济廉价且来源广泛的培养基原料并建立以该原料为主要成分的芽孢杆菌培养基，是实现芽孢杆菌规模化培养、满足该制剂的广泛推广应用的必由之路。椰子树是海南各地种植的一种最常见的热带食品能源作物。其中的椰子水含有丰富的葡萄糖、果糖、蔗糖、蛋白质、脂肪、多种矿物质元素和维生素等，是木醋杆菌等微生物的重要培养基成分。而在海南传统的椰子加工业中，椰子水仅作为一种下脚料被直接排入周边环境，这不仅造成严重的环境污染，还造成了极大的资源浪费。
发明内容
本发明的目的是提供了经济、廉价、来源广泛的椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，同时建立其科学、合理的使用方法；按此使用方法，这些培养基可满足芽孢杆菌规模化培养的要求。为了实现上述目的，本发明的技术方案为:提供以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，包括:(I)刺激生长培养基(/L):椰子水 7(T200ml，黄豆粉 4 8g，K2HPO4 lg, MnSO4.H2O0.02g，灭菌海水 800 930ml，pH 7.2，121°C 灭菌 20min ；(2)液体扩大培养基(/L):椰子水10(T250ml，黄豆粉4 8g，玉米粉2g，K2HPO42g, MnSO4.Η20 0.05g, MgSO4.7Η20 0.lg，灭菌海水 750 900ml，pH 7.2，121°C灭菌 20min ;(3)菌落计数培养基(/L):椰子水10(T250ml，黄豆粉4 8g，玉米粉2g，K2HP04 2g,MnSO4.H2O 0.05g, MgSO4.7H20 0.lg，琼脂 16g，灭菌海水 750 900ml，pH 7.2，121°C 灭菌20mino本发明以椰子水为主要原料的芽孢 杆菌培养基的使用方法:(I)挑取芽孢杆菌单菌落至IOOml刺激生长培养基中，于37°C、180r/min条件下培养 24h ；
(2)吸取Iml刺激生长培养基菌液转接至新鲜的液体扩大培养基中，于37°C、180r/min条件下培养20h。本发明的优点:1、本发明充分利用海南椰子加工的下脚料椰子水，首次建立以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，为今后开展芽孢杆菌规模化培养提供了良好的廉价培养基配方，具有良好的应用前景。2、本发明为椰子水的高值化利用提供了一条有效途径，可明显增加椰子加工的附加值，同时减少了该加工业对环境的污染。
图1是芽孢杆菌的芽孢；图中箭头所示为芽孢，呈绿色，椭圆或柱形、端生或中生、大小多为0.6 0.7μπιΧ0.8 1.5μπι;营养体呈红色，杆状、大小多为
0.7 0.8 μ mX 3.0 4.0 μ m。图2是菌落计数培养基上的芽孢杆菌菌落形态。图中箭头所指为菌落，粗糙、表面干燥、灰白色、边缘不规则、扩散生长、不透明、d=2 5mm。
具体实施例方式下面用具体实施案例对本发明作进一步说明。实施案例一以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，按下列步骤对_80°C条件下保存I年的枯草芽孢杆菌进行规模化培养测试，具体如下:1、用40°C的温水将_80°C条件下保存I年的枯草芽孢杆菌快速解冻，吸取Iml解冻的菌悬液至IOOml刺激生长培养基中，于37°C、180r/min条件下培养24h ；2、吸取Iml培养24h后的刺激生长培养基菌液至IOOml液体扩大培养基中，于37°C、180r/min 条件下培养 20h ；3、吸取Iml液体扩大培养基菌液，梯度稀释为10_6、10_7、10_8的菌液；吸取0.1ml上述各梯度稀释菌液于菌落计数培养基上涂布、计数；设3个平行组。具体结果见表I。表I
权利要求
1.以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，其特征在于包括: (1)刺激生长培养基(/L):椰子水7(T200ml，黄豆粉4 8g，K2HPO4lg, MnSO4.H2O0.02g，灭菌海水 800 930ml，pH 7.2，121°C 灭菌 20min ； (2)液体扩大培养基(/L):椰子水10(T250ml，黄豆粉4 8g，玉米粉2g，K2HPO42g，MnSO4.H2O 0.05g, MgSO4.7H20 0.lg，灭菌海水 750 900ml，pH 7.2，121°C灭菌 20min ； (3)菌落计数培养基(/L):椰子水10(T250ml，黄豆粉4 8g，玉米粉2g，K2HPO42g，MnSO4.H2O 0.05g, MgSO4.7H20 0.lg，琼脂 16g，灭菌海水 750 900ml，pH 7.2，121°C 灭菌20mino
全文摘要
本发明公开了以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，包括(1)刺激生长培养基 (/L)；(2)液体扩大培养基(/L)；(3)菌落计数培养基(/L)。本发明以经济、廉价、来源广泛的椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，同时建立其科学、合理的使用方法；按此使用方法，这些培养基可满足芽孢杆菌规模化培养的要求。本发明充分利用海南椰子加工的下脚料----椰子水，首次建立以椰子水为主要原料的芽孢杆菌培养基，为今后开展芽孢杆菌规模化培养提供了良好的廉价培养基配方，具有良好的应用前景；为椰子水的高值化利用提供了一条有效途径，可明显增加椰子加工的附加值，同时减少了该加工业对环境的污染。
文档编号C12N1/20GK103146601SQ20131005635
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月21日 优先权日2013年2月21日
发明者谢珍玉, 周永灿, 吴海武, 郭伟良 申请人:海南大学