一种mdck细胞全悬浮培养的无血清培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基中，包含有氨基酸部分，维生素部分，无机盐部分和其他添加物部分。本发明的有益效果为：本发明提供的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，该培养基培养细胞密度高，成分明确，不含动物血清，有利于下游产品的纯化，提高产品品质，且配制和使用方便，适用于流感疫苗和禽流感疫苗的规模化生产。
【专利说明】—种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种无血清培养基，具体涉及一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。
【背景技术】
[0002]MDCK 细胞(Madin-Darby canine kidney cells,MDCK)由 Madin 和 Darby 于 1958年从美国Cocker Spaniel母曲架犬的肾脏组织分离培养的。MDCK细胞目前广泛运用于多种病毒的扩增和纯化，如呼肠孤病毒、腺病毒、犬细小病毒、猫粒细胞缺少症病毒及禽流感病毒等，由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，MDCK细胞系被公认为是最适于甲、乙型流感病毒疫苗生产的3种细胞系之一。
[0003]我国目前流感疫苗(包括人用流感疫苗、动物流感疫苗)均采用鸡胚法生产，该工艺存在周期长、操作繁琐、工作量大以及很容易产品和环境污染等缺陷。随着生物制品质量安全性标准的提高和动物细胞生物反应器高密度培养技术的推广应用，研究和生产MDCK细胞培养的流感疫苗具有广泛的应用前景。生物反应器高密度培养工艺中细胞全悬浮培养比细胞载体培养更具优势，主要表现在全悬浮培养可用无血清培养基，降低了生产成本，提高了下游产品的生物安全性；第二全悬浮培养规模可线性放大，国际上细胞生物反应器全悬浮培养的规模可达20000L/罐，国内已生产和运用的细胞生物反应器全悬浮培养的规模可达3000L/罐，但是细胞生物反应器载体培养的规模国内外最大的也超不过200L。目前国内还没有商品化的MDCK细胞无血清培养基。
【发明内容】
[0004]本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种低成本、成分明确的适用于MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。
[0005]为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为:一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为:
氨基酸部分:
L-丙氨酸100-120 mg/L,
L-精氨酸盐酸盐120-200 mg/L,
L-天冬酰胺5-10 mg/L,
L-天冬氨酸65-80 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 10-45 mg/L,
L-胱氨酸盐酸盐25-50 mg/L,
L-谷氨酸45-72 mg/L,
L-谷氨酰胺300-405 mg/L,
甘氨酸70-85 mg/L,
L-组氨酸盐酸盐110-155 mg/L，L-异亮氨酸142-180 mg/L,
L-亮氨酸150-180 mg/L,
L-赖氨酸盐酸盐150-250 mg/L,
L-蛋氨酸45-80 mg/L,
L-苯丙氨酸130-155 mg/L,
L-脯氨酸30-72 mg/L,
L-丝氨酸55-80 mg/L,
L-苏氨酸150-200 mg/L,
L-色氨酸190-250 mg/L,
L-酪氨酸二钠盐50-90 mg/L,
L-缬氨酸150-200 mg/L`,
维生素部分:
生物素0.001-0.005 mg/L,(国药试剂，67000260)，
氯化胆碱5-15 mg/L,
D-泛酸?丐2-5 mg/L,
叶酸2-5 mg/L,
烟酰胺2-5 mg/L,
盐酸批B多醇2-5 mg/L,
核黄素0.1-0.5 mg/L,
盐酸硫胺素0.1-0.5 mg/L,
肌醇5-20 mg/L,
B12 维生素0.5-1.0 mg/L,
无机盐部分:
无水氯化1丐70-120 mg/L,
氯化钾200-350 mg/L,
氯化镁20-40 mg/L,
无水硫酸镁30-50 mg/L,
氯化钠5000-8000 mg/L,
磷酸二氢钠50-76 mg/L,
磷酸氢二钠50-76 mg/L,
七水硫酸亚铁0.1-0.5 mg/L,
九水硝酸铁0.01-0.1 mg/L,
七水硫酸锌0.1-0.5 mg/L,
硅酸钠0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖1000-5000 mg/L,
丙酮酸钠100-150 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸盐1-5 mg/L,
亚油酸0.01-0.1 mg/L,鞘磷脂0.5-1.2 mg/L,
大豆卵磷脂5-10 mg/L,
胆固醇2-5 mg/L,
硫辛酸0.1-0.5 mg/L,
1-甲基组氨酸1-5 mg/L,
3-甲基组氨酸1-5 mg/L,
牛磺酸50-70 mg/L,
胸苷0.1-0.5 mg/L,
腺嘌呤1-5 mg/L,
胸腺嘧啶0.01-0.1 mg/L,
腐胺0.01-0.1 mg/L,
重组胰岛素5-20 mg/L，(通化东宝，Lot:LN09040`024)，
转铁蛋白5-20 mg/L, (SIGMA, T-3309)，
植物蛋白1000-5000 mg/L, (KERRY, 5X99023),
酵母粉200-2000 mg/L,` EGF 上皮生长因子0.1-0.5 mg/L, (PEPROTECH, AF-100-15)，
碘甲状腺原氨酸0.001-0.005 mg/L, (SIGMA, T-6397)，
PF-68 抗剪切剂100-400 mg/L, (GIBCO, 9-5080IP),
Ant1-Clumping 细胞分散因子 100-400 mg/L, (Invitrigen Corporation, 725230),将所有物质以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氢钠，再用IN氢氧化钠或IN盐酸调pH值至7.1-7.3。
[0006]进一步的，上述的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为:
氨基酸部分:
L-丙氨酸115.5 mg/L,
L-精氨酸盐酸盐147.5 mg/L,
L-天冬酰胺7.5 mg/L,
L-天冬氨酸75.65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 17.56 mg/L,
L-胱氨酸盐酸盐31.29 mg/L,
L-谷氨酸50.35 mg/L,
L-谷氨酰胺365 mg/L,
甘氨酸78.75 mg/L,
L-组氨酸盐酸盐131.48mg/L，
L-异亮氨酸154.47 mg/L,
L-亮氨酸159.05 mg/L,
L-赖氨酸盐酸盐191.25 mg/L,
L-蛋氨酸67.24 mg/L,
L-苯丙氨酸135.48 mg/L,L-脯氨酸47.25 mg/L,
L-丝氨酸76.25 mg/L,
L-苏氨酸153.45 mg/L,
L-色氨酸209.02 mg/L,
L-酪氨酸二钠盐55.79 mg/L,
L-缴氨酸152.85 mg/L,
维生素部分:
生物素0.0035 mg/L，(国药试剂，67000260)，
氯化胆碱8.98 mg/L,
D-泛酸|丐2.24 mg/L,
叶酸2.65 mg/L,
烟酰胺2.02 mg/L,
盐酸吡哆醇2.03 mg/L,
核黄素0.22 mg/L,
盐酸硫胺素0.2 mg/L,
肌醇12.6 mg/L,
B12 维生素0.68 mg/L,
无机盐部分:
无水氯化1丐116.69 mg/L,
氯化钾311.8 mg/L,
氯化镁28.64 mg/L,
无水硫酸镁48.84 mg/L,
氯化钠6995.5 mg/L,
磷酸二氢钠62.5 mg/L,
磷酸氢二钠71.02 mg/L,
七水硫酸亚铁0.42 mg/L,
九水硝酸铁0.05 mg/L,
七水硫酸锌0.432 mg/L,
娃酸钠0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖4500 mg/L,
丙酮酸钠110 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸盐2.67 mg/L,
亚油酸0.084 mg/L,
鞘磷脂I mg/L，
大豆卵磷脂6 mg/L,
胆固醇2.9 mg/L,
硫辛酸0.1 mg/L,
1-甲基组氨酸I mg/L，3-甲基组氨酸I mg/L,
牛磺酸50 mg/L,
胸苷0.365 mg/L,
腺嘌呤4 mg/L,
胸腺嘧啶0.04 mg/L,
腐胺0.081 mg/L,
重组胰岛素10 mg/L,
转铁蛋白10 mg/L,
植物蛋白3000 mg/L,
酵母粉1000 mg/L,
EGF上皮生长因子0.2 mg/L,
碘甲状腺原氨酸0.0034 mg/L，
PF-68 抗剪切剂300 mg/L,
Ant1-Clumping 细胞分散因子 200 mg/L,
将所有物质以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氢钠，再用IN氢氧化钠或IN盐酸调PH值至7.1-7.3
进一步的，上述的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，将所述原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于10°C -30°C混合，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的PH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。
[0007]进一步的，上述的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，将所述原料物质混合后磨成细粉，然后将所得细粉于10°c -30°c蒸馏水中溶解，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的PH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。
[0008]本发明的有益效果为:本发明提供的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，该培养基培养细胞密度高，成分明确，不含动物血清，有利于下游产品的纯化，提高产品品质，且配制和使用方便，适用于流感疫苗和禽流感疫苗的规模化生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1为本发明提供的MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基与现有市售产品针对细胞密度和细胞活力的对比效果示意图。
【具体实施方式】
[0010]实施例1:
一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于25.9°C混合，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.22，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其中，各原料物质的终浓度为:氨基酸部分:
L-丙氨酸100 mg/L,
L-精氨酸盐酸盐120 mg/L,
L-天冬酰胺5 mg/L,L-天冬氨酸65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 10 mg/L,
L-胱氨酸盐酸盐25 mg/L,
L-谷氨酸45 mg/L,
L-谷氨酰胺300 mg/L,
甘氨酸70 mg/L,
L-组氨酸盐酸盐110 mg/L，
L-异亮氨酸142 mg/L,
L-亮氨酸150 mg/L,
L-赖氨酸盐酸盐150 mg/L,
L-蛋氨酸45 mg/L,
L-苯丙氨酸130 mg/L,
L-脯氨酸30 mg/L,
L-丝氨酸55 mg/L,
L-苏氨酸150 mg/L,
L-色氨酸190 mg/L,
L-酪氨酸二钠盐50 mg/L,
L-缴氨酸150 mg/L,
维生素部分:
生物素0.001 mg/L，(国药试剂，67000260)，
氯化胆碱5 mg/L,
D-泛酸|丐2 mg/L,
叶酸2 mg/L,
烟酰胺2 mg/L,
盐酸吡哆醇2 mg/L,
核黄素0.1 mg/L,
盐酸硫胺素0.1 mg/L,
肌醇5 mg/L,
B12 维生素0.5 mg/L,
无机盐部分:
无水氯化70 mg/L,
氯化钾200 mg/L,
氯化镁20 mg/L,
无水硫酸镁30 mg/L,
氯化钠5000 mg/L,
磷酸二氢钠50 mg/L,
磷酸氢二钠50 mg/L,
七水硫酸亚铁0.1 mg/L,
九水硝酸铁0.01 mg/L,七水硫酸锌0.1 mg/L,
娃酸钠0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖1000 mg/L,
丙酮酸钠100 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸盐1 mg/L，
亚油酸0.01 mg/L,
鞘磷脂0.5 mg/L,
大豆卵磷脂5 mg/L,
胆固醇2 mg/L,
硫辛酸0.1 mg/L,
1-甲基组氨酸1 mg/L，
3-甲基组氨酸1 mg/L,
牛磺酸50 mg/L,
胸苷0.1 mg/L,
腺嘌呤1mg/L，
胸腺嘧啶0.01 mg/L,
腐胺0.01 mg/L,
重组胰岛素5 mg/L,(通化东宝，Lot:LN09040024)，
转铁蛋白5 mg/L，(SIGMA, T-3309)，
植物蛋白1000 mg/L, (KERRY, 5X99023)，
酵母粉200 mg/L,
EGF 上皮生长因子0.1 mg/L, (PEPROTECH, AF-100-15),
碘甲状腺原氨酸0.001 mg/L, (SIGMA, T-6397),
PF-68 抗剪切剂100 mg/L, (GIBCO, 89-5080IP),
Ant1-Clumping 细胞分散因子 100 mg/L, (Invitrigen Corporation, 725230)。
[0011]实施例2:
一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于25.1°C混合，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.12，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其中，各原料物质的终浓度为:氨基酸部分:
L-丙氨酸120 mg/L,
L-精氨酸盐酸盐200 mg/L,
L-天冬酰胺10 mg/L,
L-天冬氨酸80 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 45 mg/L,
L-胱氨酸盐酸盐50 mg/L,
L-谷氨酸72 mg/L,
L-谷氨酰胺405 mg/L,甘氨酸85 mg/L,
L-组氨酸盐酸盐155 mg/L,
L-异亮氨酸180 mg/L,
L-亮氨酸180 mg/L,
L-赖氨酸盐酸盐250 mg/L,
L-蛋氨酸80 mg/L,
L-苯丙氨酸155 mg/L,
L-脯氨酸72 mg/L,
L-丝氨酸80 mg/L,
L-苏氨酸200 mg/L,
L-色氨酸250 mg/L, L-酪氨酸二钠盐90 mg/L,
L-缴氨酸200 mg/L,
维生素部分:
生物素0.003 mg/L,(国药试剂，67000260),
氯化胆碱15 mg/L,
D-泛酸|丐5 mg/L,
叶酸5 mg/L,
烟酰胺5 mg/L,
盐酸批B多醇5 mg/L,
核黄素0.5 mg/L,
盐酸硫胺素0.5 mg/L,
肌醇20 mg/L,
B12 维生素1.0 mg/L,
无机盐部分:
无水氯化120 mg/L,
氯化钾350 mg/L,
氯化镁40 mg/L,
无水硫酸镁50 mg/L,
氯化钠8000 mg/L,
磷酸二氢钠76 mg/L,
磷酸氢二钠76 mg/L,
七水硫酸亚铁0.5 mg/L,
九水硝酸铁0.1 mg/L,
七水硫酸锌0.5 mg/L,
娃酸钠0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖5000 mg/L,
丙酮酸钠150 mg/L,磷酸烯醇丙酮酸盐5 mg/L,
亚油酸0.1 mg/L,
鞘磷脂1.2 mg/L,
大豆卵磷脂10 mg/L,
胆固醇5 mg/L,
硫辛酸0.5 mg/L,
1-甲基组氨酸5 mg/L,
3-甲基组氨酸5 mg/L,
牛磺酸70 mg/L,
胸苷0.5 mg/L,
腺嘌呤5 mg/L,
胸腺嘧啶0.1 mg/L,
腐胺0.1 mg/L,
重组胰岛素20 mg/L，(通化东宝Lot:LN09040024)，
转铁蛋白20 mg/L，(SIGMA, T-3309)，
植物蛋白5000 mg/L，(KERRY, 5X99023)，
酵母粉2000 mg/L,
EGF 上皮生长因子0.5 mg/L, (PEPROTECH, AF-100-15),
碘甲状腺原氨酸0.005 mg/L, (SIGMA, T-6397)
PF-68 抗剪切剂400 mg/L, (GIBCO, 89-5080IP),
Ant1-Clumping 细胞分散因子 400 m g/L, (Invitrigen Corporation, 725230)。
[0012]实施例3:
一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，将原料物质混合后磨成细粉，然后将所得细粉于28.6°C蒸馏水中溶解，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至
7.13，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其中，各原料物质的终浓度为: 氨基酸部分:
L-丙氨酸115.5 mg/L,
L-精氨酸盐酸盐147.5 mg/L,
L-天冬酰胺7.5 mg/L,
L-天冬氨酸75.65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 17.56 mg/L,
L-胱氨酸盐酸盐31.29 mg/L,
L-谷氨酸50.35 mg/L,
L-谷氨酰胺365 mg/L,
甘氨酸78.75 mg/L,
L-组氨酸盐酸盐131.48mg/L，
L-异亮氨酸154.47 mg/L,
L-亮氨酸159.05 mg/L,
L-赖氨酸盐酸盐191.25 mg/L,L-蛋氨酸67.24 mg/L,
L-苯丙氨酸135.48 mg/L,
L-脯氨酸47.25 mg/L,
L-丝氨酸76.25 mg/L,
L-苏氨酸153.45 mg/L,
L-色氨酸209.02 mg/L,
L-酪氨酸二钠盐55.79 mg/L,
L-缴氨酸152.85 mg/L,
维生素部分:
生物素0.0035 mg/L，(国药试剂，67000260)，
氯化胆碱8.98 mg/L,
D-泛酸|丐2.24 mg/L,
叶酸2.65 mg/L,
`烟酰胺2.02 mg/L,
盐酸吡哆醇2.03 mg/L,
核黄素0.22 mg/L,
盐酸硫胺素0.2 mg/L,
肌醇12.6 mg/L,
B12 维生素0.68 mg/L,
无机盐部分:
无水氯化1丐116.69 mg/L,
氯化钾311.8 mg/L,
氯化镁28.64 mg/L,
无水硫酸镁48.84 mg/L,
氯化钠6995.5 mg/L,
磷酸二氢钠62.5 mg/L,
磷酸氢二钠71.02 mg/L,
七水硫酸亚铁0.42 mg/L,
九水硝酸铁0.05 mg/L,
七水硫酸锌0.432 mg/L,
娃酸钠0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖4500 mg/L,
丙酮酸钠110 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸盐2.67 mg/L,
亚油酸0.084 mg/L,
鞘磷脂I mg/L，
大豆卵磷脂6 mg/L,
胆固醇2.9 mg/L,硫辛酸0.1 mg/L,
1-甲基组氨酸I mg/L，
3-甲基组氨酸I mg/L,
牛磺酸50 mg/L,
胸苷0.365 mg/L,
腺嘌呤4 mg/L,
胸腺嘧啶0.04 mg/L,
腐胺0.081 mg/L,
重组胰岛素10 mg/L,
转铁蛋白10 mg/L,
植物蛋白3000 mg/L,
酵母粉1000 mg/L,
EGF上皮生长因子0.2 mg/L,
碘甲状腺原氨酸0.0034 mg/L，
PF-68 抗剪切剂300 mg/L, (GIBCO, 89-5080IP),
Ant1-Clumping 细胞分散因子 200 mg/L, (Invitrigen Corporation, 725230)。
[0013]培养验证过程:
1、仪器设备:
生物反应器，型号:B10STATE0R B plus (德国Sartorius)，培养罐体积5L。
[0014]2、细胞:
全悬浮型MDCK细胞，由甘肃省动物细胞工程技术研究中心提供。
[0015]3、培养方法:
将全悬浮培养型MDCK细胞以5.0X105/ml接种到生物反应器中，反应器参数设置为:温度37°C，转速110rpm/min，溶氧60%，pH7.2。接通空气、氧气、氮气和二氧化碳四路气体以及IN氢氧化钠，每24h取样计数和检查细胞活力。
[0016]4、培养结果如表1所不。
[0017]表1
【权利要求】
1.一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，所述MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为: 氨基酸部分: L-丙氨酸100-120 mg/L, L-精氨酸盐酸盐120-200 mg/L, L-天冬酰胺5-10 mg/L, L-天冬氨酸65-80 mg/L, L-半胱氨酸一水合物 10-45 mg/L, L-胱氨酸盐酸盐25-50 mg/L, L-谷氨酸45-72 mg/L, L-谷氨酰胺300-405 mg/L, 甘氨酸70-85 mg/L, L-组氨酸盐酸盐110-155 mg/L， L-异亮氨酸142-180 mg/L,` L-亮氨酸150-180 mg/L, L-赖氨酸盐酸盐150-250 mg/L, L-蛋氨酸45-80 mg/L, L-苯丙氨酸130-155 mg/L, L-脯氨酸30-72 mg/L, L-丝氨酸55-80 mg/L, L-苏氨酸150-200 mg/L, L-色氨酸190-250 mg/L, L-酪氨酸二钠盐50-90 mg/L, L-缬氨酸150-200 mg/L, 维生素部分: 生物素0.001-0.005 mg/L, 氯化胆碱5-15 mg/L, D-泛酸?丐2-5 mg/L, 叶酸2-5 mg/L, 烟酰胺2-5 mg/L, 盐酸批B多醇2-5 mg/L, 核黄素0.1-0.5 mg/L, 盐酸硫胺素0.1-0.5 mg/L, 肌醇5-20 mg/L, B12 维生素0.5-1.0 mg/L, 无机盐部分: 无水氯化钙70-120 mg/L, 氯化钾200-350 mg/L, 氯化镁20-40 mg/L,无水硫酸镁30-50 mg/L, 氯化钠5000-8000 mg/L, 磷酸二氢钠50-76 mg/L, 磷酸氢二钠50-76 mg/L, 七水硫酸亚铁0.1-0.5 mg/L, 九水硝酸铁0.01-0.1 mg/L, 七水硫酸锌0.1-0.5 mg/L, 娃酸钠0.061 mg/L, 其余添加物部分: D-葡萄糖1000-5000 mg/L, 丙酮酸钠100-150 mg/L, 磷酸烯醇丙酮酸盐1-5 mg/L, 亚油酸0.01-0.1 mg/L, 鞘磷脂0.5-1.2 mg/L, 大豆卵磷脂5-10 mg/L, 胆固醇2-5 mg/L, 硫辛酸0.1-0.5 mg/L, 1-甲基组氨酸1-5 mg/L, 3-甲基组氨酸1-5 mg/L, 牛磺酸50-70 mg/L, 胸苷0.1-0.5 mg/L, 腺嘌呤1-5 mg/L, 胸腺嘧啶0.01-0.1 mg/L, 腐胺0.01-0.1 mg/L, 重组胰岛素5-20 mg/L, 转铁蛋白5-20 mg/L, 植物蛋 白1000-5000 mg/L, 酵母粉200-2000 mg/L, EGF上皮生长因子0.1-0.5 mg/L, 碘甲状腺原氨酸0.001-0.005 mg/L， PF-68 抗剪切剂100-400 mg/L, Ant1-Clumping 细胞分散因子 100-400 mg/L, 将所用物质均以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氢钠，并用IN氢氧化钠或IN盐酸调pH值至7.1-7.3。
2.根据权利要求1所述的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，所述MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为: 氨基酸部分: L-丙氨酸115.5 mg/L, L-精氨酸盐酸盐147.5 mg/L,L-天冬酰胺7.5 mg/L,L-天冬氨酸75.65 mg/L,L-半胱氨酸一水合物 17.56 mg/L,L-胱氨酸盐酸盐31.29 mg/L,L-谷氨酸50.35 mg/L,L-谷氨酰胺365 mg/L,甘氨酸78.75 mg/L,L-组氨酸盐酸盐131.48mg/L，L-异亮氨酸154.47 mg/L,L-亮氨酸159.05 mg/L,L-赖氨酸盐酸盐191.25 mg/L,L-蛋氨酸67.24 mg/L,L-苯丙氨酸135.48 mg/L,L-脯氨酸47.25 mg/L,L-丝氨酸76.25 mg/L,L-苏氨酸153.45 mg/L,L-色氨酸209.02 mg/L,L-酪氨酸二钠盐55.79 mg/L,L-缴氨酸152.85 mg/L,维生素部分:生物素0.0035 mg/L,氯化胆碱8.98 mg/L,D-泛酸|丐2.24 mg/L,叶酸2.65 mg/L,烟酰胺2.02 mg/L,盐酸吡哆醇2.03 mg/L,核黄素0.22 mg/L,盐酸硫胺素0.2 mg/L,肌醇12.6 mg/L,B12 维生素0.68 mg/L,无机盐部分:无水氯化1丐116.69 mg/L,氯化钾311.8 mg/L,氯化镁28.64 mg/L,无水硫酸镁48.84 mg/L,氯化钠 6995.5 mg/L,磷酸二氢钠62.5 mg/L,磷酸氢二钠71.02 mg/L,七水硫酸亚铁0.42 mg/L,九水硝酸铁0.05 mg/L, 七水硫酸锌0.432 mg/L, 娃酸钠0.061 mg/L, 其余添加物部分: D-葡萄糖4500 mg/L, 丙酮酸钠110 mg/L, 磷酸烯醇丙酮酸盐 2.67 mg/L, 亚油酸0.084 mg/L, 鞘磷脂I mg/L， 大豆卵磷脂6 mg/L, 胆固醇2.9 mg/L, 硫辛酸0.1 mg/L, 1-甲基组氨酸I mg/L， 3-甲基组氨酸I mg/L, 牛磺酸50 mg/L, 胸苷0.365 mg/L, 腺嘌呤4 mg/L, 胸腺嘧啶0.04 mg/L, 腐胺0.081 mg/L, 重组胰岛素10 mg/L, 转铁蛋白10 mg/L, 植物蛋白3000 mg/L, 酵母粉1000 mg/L, EGF上皮生长因子0.2 mg/L, 碘甲状腺原氨酸0.0034 mg/L， PF-68 抗剪切剂300 mg/L, Ant1-Clumping 细胞分散因子 200 mg/L, 将所有物质以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氢钠，再用IN氢氧化钠或IN盐酸调pH值至7.1-7.3。
3.根据权利要求1或2所述的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，将所述原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于10°c -30°c混合，使各原料物质终浓度如权利要求1或2所述，调节所得混合液的pH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。
4.根据权利要求1或2所述的一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，将所述原料物质混合后磨成细粉，然后将所得细粉于10°C -30°C蒸馏水中溶解，使各原料物质终浓度如权利要求1或2所述，调节所得混合液的pH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。
【文档编号】C12N5/071GK103555659SQ201310553738
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月11日 优先权日:2013年11月11日
【发明者】乔自林, 马忠仁, 令世鑫, 冯玉萍, 冯若飞, 李明生, 马祺 申请人:乔自林, 马忠仁, 令世鑫, 冯玉萍, 冯若飞, 李明生, 马祺