微生物发酵方法和组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了用于培养甲基杆菌属细菌的方法。具体地，所述方法提供了有效地且廉价地培养这些细菌的方法。另外，本发明提供了利用这些细菌培养物改善植物农业的方法。
【专利说明】微生物发酵方法和组合物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本国际专利申请要求以下申请的权益：2013年3月14日提交且通过引用整体并 入本文的美国专利申请号61/784, 375 ;2012年6月1日提交且通过引用整体并入本文的美 国专利申请号61/654,504;和2012年6月1日提交且通过引用整体并入本文的美国专利 申请号 61/654, 394。
【背景技术】
[0003]-碳有机化合物（one-carbonorganiccompounds)诸如甲焼和甲醇广泛地 存在于自然界中，且被归类为甲烷氧化菌和甲基营养菌的细菌用作碳源。甲烷氧化细 菌包括在甲基细菌属（Methylobacter)、甲基单胞菌属（Methylomonas)、甲基微菌属 (Methylomicrobium)、甲基球菌属（Methylococcus)、甲基弯曲菌属（Methylosinus)、 甲基孢囊菌属（Methylocystis)、甲基球状菌属（Methylosphaera)、甲基暖菌属 (Methylocaldum)和甲基细胞菌属（Methylocella)中的种（Lidstrom，2006)。甲焼氧 化菌具有酶甲烷单加氧酶，该酶将来自02的氧原子掺入甲烷中，从而形成甲醇。所有甲 烷氧化菌都是专性一碳利用者，不能利用含有碳-碳键的化合物。另一方面，甲基营养 菌还可以利用更复杂的有机化合物，诸如有机酸、高级醇、糖等。因而，甲基营养细菌是 兼性的甲基营养菌。甲基营养细菌包括在甲基杆菌属（Methylobacterium)、生丝微菌属 (Hyphomicrobium)、嗜甲基菌属（Methylophilus)、甲基芽抱杆菌属（Methylobacillus)、口麓 甲基菌属（Methylophaga)、氨基杆菌属（Aminobacter)、耗甲基杆菌属（Methylorhabdus)、 甲基球形菌属（Methylopila)、Methylosulfonomonas、Marinosulfonomonas、副球菌属 (Paracoccus)、黄色杆菌属（Xanthobacter)、弯杆菌属（Ancylobacter)(也被称作微环菌 属（Microcyclus))、硫杆菌属（Thiobacillus)、红假单胞菌属（Rhodopseudomonas)、红 细菌属（Rhodobacter)、醋杆菌属（Acetobacter)、芽孢杆菌属（Bacillus)、分枝杆菌属 (Mycobacterium)、Arthobacter和诺卡氏菌属（Nocardia)中的种（Lidstrom，2006) 〇
[0004] 甲基杆菌属的大多数甲基营养细菌是粉红色的。它们常规地被称作PPFM细菌， 是粉红色的兼性甲基营养菌。Green(2005, 2006)在甲基杆菌属中鉴定了 12个经验证的 种，具体地是胺甲基杆菌（M.aminovorans)、氯甲焼甲基杆菌（M.chloromethanicum)、 二氯甲焼甲基杆菌（M.dichloromethanicum)、扭脱甲基杆菌（M.extorquens)、藤 泽氏甲基杆菌（M.fujisawaense)、嗜中温甲基杆菌（M.mesophilicum)、嗜有机甲基 杆菌（M.organophilum)、耐福射甲基杆菌（M.radiotolerans)、罗得西亚甲基杆菌 (M.rhodesianum)、玫瑰红甲基杆菌（M.rhodinum)、硫氛酸盐甲基杆菌（M.thiocyanatum) 和扎氏甲基杆菌（M.zatmanii)D但是，巢状甲基杆菌（M.nidulans)是一种非PPFM的固氮 甲基杆菌（Sy等人，2001)。甲基杆菌属普遍存在于自然界中，在土壤、灰尘、淡水、沉淀物和 叶表面中以及在工业和临床环境中发现（Green，2006)。
[0005] PPFM细菌作为大多数（如果不是全部的话）植物物种（范围从藻类、藓类和 苔类至被子植物和裸子植物）的叶表面的定殖者的存在，提示PPFM细菌可能在植物生 理学中起重要作用（Corpe和Rheem, 1989;Holland和Polacco, 1994 ;Holland, 1997 ;Kutschera, 2007)。植物产生和分泌甲醇（可能是作为生长中的植物细胞壁内的果胶代谢 的废产物）的事实，提示这些研宄人员存在共生关联：PPFM细菌以植物产生的甲醇为食， 并且反过来给所述植物提供积极益处。提示的PPFM细菌对植物生理学的益处包括通过 提供PPFM产生的细胞分裂素植物激素对氮代谢、种子发芽和植物生长刺激产生的积极效 果。PPFM细菌用于改善植物生长、植物产率、种子发芽、雄性能育性和植物营养特性的用 途，已经公开在美国专利5, 512, 069、美国专利5, 961，687、美国专利6, 174, 837、美国专利 6, 329, 320、美国专利7, 435, 878和美国专利申请
【发明者】格雷格·博戈西安 申请人:新叶共生有限公司