一种三颗针提取物的制备方法及其制备的三颗针提取物和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于水果病害防治和保鲜领域，具体涉及一种具有抑制柑橘采后病原菌作 用的三颗针提取物及其制备方法和新用途。
【背景技术】
[0002] 柑橘是世界第一大贸易水果，也是第三大贸易农产品。我国柑橘资源丰富、种植历 史悠久。目前我国柑橘的种植面积和产量均居世界第一位，2013年柑橘种植面积达3600多 万亩，总产量约为3200多万吨，柑橘产业在我国农业经济中占有非常重要的地位。
[0003] 柑橘果实组织细嫩多汁且富含糖分，在采摘、贮运和销售等过程中容易发生机械 损伤，果皮损伤后易受多种病原真菌的侵染而产生采后病害。柑橘采后发生的病理性病害 种类多达20余种，主要有意大利青霉（Penicilliumitalicum)引起的青霉病和指状青霉 (Penicilliumdigitatum)引起的绿霉病，这些病害易造成果实腐烂变质，腐烂率一般为 10 %?30 %，严重时可高达40 %?50 %以上，造成巨大的经济损失。柑橘其它的病理性病 害还包括黑腐病、酸腐病、褐腐病、褐色帝腐病、炭疽病和焦腐病等。
[0004] 长期以来，人们主要采用化学合成物质作为保鲜剂对柑橘进行保鲜，不同时期 使用的化学杀菌剂有所不同。硼砂、山梨酸及其盐类等是最早使用的柑橘防腐剂；包括 苯菌灵（Benomy1)、托布津（Thiophanate)、甲基托布津（Thiophanatemethyl)、多菌灵 (Carbendazim)、噻菌灵（Thiabendazole)等的苯并咪挫类杀菌剂是70年代应用的第二代 柑橘防腐剂；目前使用的第三代柑橘防腐剂包括抑霉唑（Imazalil)、双胍盐（Guazatine)、 咪鲜胺（Prochloraz)等。这些化学杀菌剂能杀死或抑制病原微生物的生长，有较好的防腐 保鲜效果。由于化学杀菌剂会造成药剂残留、污染环境，以及长期使用导致柑橘采后病菌产 生抗药性等原因使得化学杀菌剂的使用安全性日益得到人们的关注。另外，随着科技的发 展、检测分析手段的完善和化学杀菌剂毒理的深入研宄，发现一些化学防腐剂有致癌或潜 在致癌、致突变、致畸的可能性。目前一些化学杀菌剂已被欧美等发达国家禁止或限制使 用，如苯菌灵和双胍盐类杀菌剂等己被美国环保局明令禁止使用或在部分果实产品上限制 使用。
[0005] 近年来，人们开始转向天然植物源保鲜剂的研发。天然植物源保鲜剂具有高效、低 毒、低残留、无污染、使用安全等优点，采用其处理柑橘进行防腐保鲜将受到消费者的普遍 欢迎。另外，植物源药剂是通过多成分，多靶点发挥抑菌作用，不易产生抗药性。因此，有必 要从天然植物中寻找、开发天然植物源防腐剂对柑橘进行保鲜以减少对化学药剂的依赖。
[0006] 三颗针（BerberissargentianaSchneid)小檗科小檗属植物刺黑珠、细叶小檗、 小黄连刺、拟豪猪刺、匙叶小檗等同属植物的根皮或茎皮，收载于历年《中国药典》、《中药 大辞典》、《全国中草药汇编》、《四川中药志》、《中华本草》等多种中药学书籍中。三颗针又 名钢针刺、刺黄连等，其性寒，味苦，具有很好的清热利湿，泻火解毒、散瘀功效，用于湿热 赤痢，黄疸，湿瘆、咽痛，目赤，跌打损伤、痈肿疮毒等症。除人用外，有关三颗针的应用研 宄主要集中在作为禽类动物饲料添加剂方面的研宄；例如添加三颗针提取物喂食断奶仔 猪（王志祥，王自恒，刘岭，张子牛.三颗针提取物对仔猪生长及肠道菌群和挥发性脂 肪酸的影响[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2008, 36(6) :34-38, 44);抑制仔 猪肠道有害菌的生长，促进有益菌生长并提高仔猪肠道总挥发性脂肪酸的含量，改善仔 猪肠道内环境，减少仔猪腹泻，从而促进仔猪的生长发育（刘岭，王志祥，刘建华，丁景 华，姜树林.三颗针提取物对断奶仔猪生长、养分消化率和血清指标的影响[J].饲料研 宄，2006, 29(6) :20-23.);在肉仔鸡日粮中添加三颗针提取物可以显著增强肉仔鸡机体的 抗氧化水平，降低血液甘油三酯和总胆固醇含量，促进机体的脂类代谢，促进肉仔鸡的生长 发育（王志祥，王自恒，丁景华，刘建华.三颗针提取物对肉仔鸡抗氧化水平和脂类代谢 的影响[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2006, 34(10) : 16-20)。又如，发明名称 "三颗针净化畜禽养殖沼液中的应用"（公开号CN102616935A)的中国发明专利申请，公开 了三颗针在处理畜禽养殖沼液中的应用。发明名称"三颗针在做为天然饲料添加剂中的应 用"（公开号CN101084777A)的中国发明专利申请，公开了三颗针总生物碱类成分在天然饲 料添加剂中的应用。发明名称"一种三颗针外用药物"（公开号CN1813990A)的中国发明专 利申请，公开了一种含三颗针提取物的药物组合在治疗跌打损伤，风湿关节疾病的应用。
[0007] 可见现有技术对三颗针的研宄主要局限在以人或者动物为施用对象的医药用途。 迄今，尚未见三颗针提取物对柑橘采后病原真菌作用的报道，也没有关于超声波辅助提取 制备三颗针提取物的报道。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种三颗针提取物的制备方法及其制 备的三颗针提取物新用途。本发明以天然的中草药植物为原料，制备的三颗针提取物对柑 橘采后病原真菌的抑菌效果明显且无化学残留，对人体无健康危害，对环境无污染，预示着 很好的应用前景。
[0009] 为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
[0010] 一种三颗针提取物的制备方法，采用超声波辅助提取，以乙醇为提取溶剂，包括如 下步骤：
[0011] 所述三颗针中加入三颗针重量10?40倍的质量百分比浓度为40 %?100 %的乙 醇，在提取温度为40?60°C，提取时间为30min?120min，超声频率为30?40KHz的条件 下提取；过滤，回收乙醇，浓缩，干燥或不干燥，得到三颗针乙醇提取物。
[0012] 优选的，本发明所述制备方法还可以包括：
[0013] 将浓缩或干燥的三颗针乙醇提取物溶解于10倍量的蒸馏水中，用正丁醇萃取三 次，弃去正丁醇萃取液，减压浓缩正丁醇萃取后的水溶液，即得。
[0014] 在本发明所述制备方法中，优选的，乙醇的重量为所述三颗针重量的30?40倍； 更优选为40倍。
[0015] 优选的，乙醇的质量百分比浓度优选为50%?70% ;更优选为60%。
[0016] 优选的，超声波辅助提取时间优选为60?90min，更优选为60min。
[0017] 优选的，超声波辅助提取的温度为60°C。
[0018] 还优选的，乙醇提取前，所述三颗针40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末 进行超声波辅助提取。
[0019] 作为一个优选的【具体实施方式】，本发明提供一种三颗针提取物的制备方法，包括 如下步骤：
[0020] I.将三颗针40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末；
[0021] II.步骤I得到的粉末中加入所述三颗针重量30?40倍的质量百分比浓度为 50 %?70%的乙醇进行超声波辅助提取，提取温度为40°C?60°C，提取时间为60min? 90min，超声频率为30?40KHz;过滤，得到醇提取液；
[0022] III.步骤II得到的醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，即得。
[0023] 作为一个更优选的【具体实施方式】，本发明提供一种三颗针提取物的制备方法，包 括如下步骤：
[0024] I.将三颗针40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末；
[0025] II.步骤I得到的粉末中加入所述三颗针重量40倍的质量百分比浓度为60%的 乙醇进行超声波辅助提取，提取温度为40°C?60°C，提取时间为60min，超声频率为30? 40KHz;过滤，得到醇提取液；
[0026] III.步骤II得到的醇提取