酵母培养物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及酵母细胞固态发酵技术领域，具体涉及一种酵母培养物及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 酵母培养物是一种微生态制剂，是指在特定工艺条件控制下，在特定培养基上经 充分厌氧发酵后所形成的微生态制品。该微生态制品不含大量的活性酵母细胞，酵母菌只 起发酵作用，其存活与否对产品的使用效果没有影响。其主要作用成分是酵母利用固体基 质发酵所产生的细胞外代谢产物、发酵后变性的固体基质、酵母细胞内容物以及酵母细胞 壁等。该产品成分复杂，主要包括小肽、有机酸、维生素、增味物质、甘露寡糖、葡聚糖和 氨基酸以及"未知促生长因子"等，这些物质是动物胃肠道内微生物的绝好营养底物，可以 有效刺激有益菌的生长，激发它们的代谢活性，稳定体内微生态环境，进而提高动物的生产 性能。对反刍动物而言，酵母培养物可通过调控瘤胃微生物进而有效提高反刍动物对饲料 的利用率，是集保健和营养等多重功效为一体的微生态饲料添加剂。酵母培养物的功能及 其机制主要为：改善胃肠道菌群落结构，提高动物生产性能；补充营养，改善消化功能；提 高机体免疫力及抗病力。
[0003] 但是，目前常用的酵母培养物的固体发酵方法存在以下问题：培养的活菌数低，而 且酵母不能充分利用固体发酵原料，导致发酵效果低，经济成本也较高，不能满足人们的要 求。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提出一种酵母培养物及其制备方法，以增加培养过 程中的活菌数，使酵母充分利用发酵原料，从而提高发酵效果。
[0005] 基于上述目的，本发明提供的酵母培养物的制备方法包括以下步骤：
[0006] 1)先将酿酒酵母菌接种至YEH)液体培养基中扩大培养，再将得到的酵母菌种子 培养液接种至糖蜜液体培养基中有氧发酵，制得酵母菌液体发酵菌液；
[0007] 2)先将黑曲霉接种至马铃薯液体培养基中扩大培养，再将得到的黑曲霉种子培养 液接种至固体糖蜜培养基中有氧发酵，得到固体发酵初产物；然后将所述固体初发酵产物 接种至固体糖蜜培养基中进一步扩大培养，得到接种有黑曲霉的固体培养基；
[0008] 3)将所述酵母菌液体发酵菌液与接种有黑曲霉的固体培养基混合，在28~35°C 条件下有氧发酵12~24小时，得到固体发酵产物；
[0009] 4)将所述固体发酵产物置于28~35°C条件下厌氧发酵48~85小时，再将厌氧 发酵后的产物进行干燥，即得到酵母培养物。
[0010] 作为本发明的又一个实施例，在所述步骤3)中，所述有氧发酵条件为：空气相对 湿度70~80%，所述酵母菌液体发酵菌液与接种有黑曲霉的固体培养基混合后的水分控 制在40~45wt %，pH控制在4. 6~5. 5。
[0011] 作为本发明的又一个实施例，在所述步骤3)中，所述酵母菌液体发酵菌液与接种 有黑曲霉的固体培养基以质量比为1:0. 5~0. 8混合，所述酵母菌液体发酵菌液中酵母菌 活菌数为0. 2~0. 6亿CFU/ml，所述固体培养基中黑曲霉活菌数为5~10亿CFU/g。
[0012] 作为本发明的又一个实施例，所述酿酒酵母菌为酿酒酵母菌Sa-10,保藏于中国普 通微生物菌种保藏管理中心，保藏号是CGMCC No. 6120。
[0013] 作为本发明的又一个实施例，经步骤3)的有氧发酵后，酵母菌活菌数达到5~7 亿 CFU/g。
[0014] 作为本发明的又一个实施例，在所述步骤1)中，将所述酵母菌种子培养液以2~ 10%的接种量接种至糖蜜液体培养基中扩繁，于28~30°C条件下有氧发酵17~24小时， 制得酵母菌液体发酵菌液。
[0015] 作为本发明的又一个实施例，述YEH)液体培养基的组成为：每1L水中含葡萄糖 10~30g、蛋白胨10~30g和酵母粉5~15g ;
[0016] 所述糖蜜液体培养基由以下物质按照质量百分比组成：
[0017]糖蜜8~15 %，尿素0? 2~0? 5 %，玉米浆0? 1~0? 2 %，硫酸镁0? 05~0? 2 %， 氯化钙0. 005~0. 02%，磷酸二氢钾0. 05~0. 2%，余量为水，调节该培养基的初始pH至 5. 5~6. 5,控制该培养基溶氧在40 %~60%。
[0018] 作为本发明的又一个实施例，在所述步骤2)中，将所述黑曲霉种子培养液按 1:0. 4~0. 6的质量比接种量接种至固体糖蜜培养基中扩繁，在30~35°C有氧条件下培养 24~48h，得到固体发酵初产物；然后将所述固体初发酵产物以2~6%的接种量接种至固 体糖蜜培养基中进一步扩大培养，在30~35°C有氧条件下培养24~48小时，得到接种有 黑曲霉的固体培养基。
[0019] 作为本发明的又一个实施例，所述固体糖蜜培养基由以下物质按照质量百分比组 成：
[0020] 按照玉米粉20~30 %、麸皮20~40 %、玉米胚芽柏2~10%、DDGS饲料20~ 30%、玉米芯粉10~20%配置成固体培养基，再向固体培养基中加入糖蜜，每千克固体培 养基中加入50ml糖蜜；
[0021] 或者，按照玉米粉20~40%、麸皮30~50%、玉米胚芽柏5~15%、玉米芯粉 10~30 %配置成固体培养基，再向固体培养基中加入糖蜜，每千克固体培养基中加入50ml 糖蜜；
[0022] 或者，按照玉米5~20%、麸皮70~90%、豆柏2~10%配置成固体培养基，再向 固体培养基中加入糖蜜，每千克固体培养基中加入50ml糖蜜。
[0023] 本发明还提供一种酵母培养物，所述酵母培养物根据上述酵母培养物的制备方法 制备得到。
[0024] 从上面所述可以看出，本发明提供的酵母培养物的制备方法采用黑曲霉菌种进行 发酵原料预处理，利用黑曲霉具有产酶能力强、酶系丰富等特点，可以分泌多种消化酶，充 分预处理原料；再接种具有耐高温和耐强酸能力的酿酒酵母菌种，对发酵原料进行充分地 厌氧发酵，产生丰富的代谢产物，最终制备成具有独特活性的功能性的酵母培养物。
【具体实施方式】
[0025] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发 明进一步详细说明。
[0026] 实施例1
[0027] 作为本发明的一个实施例，所述酵母培养物的制备方法包括以下步骤：
[0028] (1)将酿酒酵母菌菌种活化，再将分离纯化后的酿酒酵母菌接种到一级摇瓶培养 基中，500ml三角瓶培养基装量为100ml，28~30°C、180~200rpm摇瓶培养17~24h，得到 一级种子液，然后将一级种子液接种到二级摇瓶培养基，2000ml三角瓶装量450ml，28°C~ 30°C、180~200rpm摇瓶培养20~24h。其中，所述酵母菌的种子培养基为YEH)液体培养 基，所述YEH)液体培养基的组成为：葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母粉10g，1000ml水，自然 pH。该培养基在115°C条件下高温灭菌30min。
[0029] 在本实施例中，所述酿酒酵母菌为酿酒酵母菌Sa-10,保藏于中国普通微生物菌种 保藏管理中心，保藏号是CGMCC No. 6120。
[0030] 接着，再将得到的酵母菌种子培养液以2~5%的接种量接种至糖蜜液体培养基 中扩繁，于28~30°C条件下有氧发酵17~20小时，制得酵母菌液体发酵菌液。其中，所述 糖蜜液体培养基由以下物质按照质量百分比组成：糖蜜9%，尿素0.42%，玉米浆0. 15%， 硫酸镁〇. 1 %，氯化钙〇. 01 %，磷酸二氢钾〇. 1 %，余量为水；调节该培养基的初始pH至 5. 5~6. 5。发酵过程中不调控pH，控制该培养基溶氧在40%~60%。
[0031] (2)将黑曲霉菌种活化，从新鲜黑曲霉斜面中挑取一环菌，接种到装有数粒玻璃珠 的一级摇瓶培养基中，500ml三角瓶培养基装量为100ml，30~35°C、120~150rpm振荡培 养20~24h，得到一级种子液，然后将一级种子液接种到装有数粒玻璃珠的二级摇瓶培养 基，2000ml三角瓶装量500ml，30~35°C、120~150rpm振荡培养20~24h。其中，所述黑 曲霉的种子培养基为马铃薯液体培养基，每升马铃薯液体培养基中含有：马铃薯200g、蔗 糖20g，水1000ml。该培养基在115°C在条件下高温灭菌30min。
[0032] 接着，将得到的黑曲霉种子培养液按1:0.4的质量比接种至固体糖蜜培养基中， 在30~35 °C有氧条件下培养24~48h，得到固体发酵初产物；然后将所述固体初发酵产物 以2~6%的接种量接种至固体糖蜜培养基中进一步扩大培养，在30~35°C有氧条件下培 养24~48小时，得到接种有黑曲霉的固体培养基。
[0033] 进一步地，还可以以此含有黑曲霉的固体培养基为种子，以2~6%的接种量进一 步逐级扩大固体糖蜜培养基处理量，实际处理量以所需固体培养基重量为准。
[0034] 其中，所述固体糖蜜培养基由以下物质按照质量百分比组成：按照玉米粉30%、 麸皮20%、玉米胚芽柏10%、DDGS饲料20%、玉米芯粉20%配置成固体培养基，再向固体 培养基中加入糖蜜，糖蜜加入量为每kg固体培养基中加入50ml糖蜜。
[0035] 在该步骤中，玉米粉、麸皮主要提供碳源，玉米胚芽柏、DDGS饲料主要提供氮源，玉 米芯粉主要作为一种吸附成分，有效吸附菌