专利名称：用肌苷一磷酸脱氢酶抑制剂进行的dapd联合治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗或预防宿主中人体免疫缺陷病毒(HIV)感染的药物组合物和方法，所说的方法包括使用该类组合物。本申请要求了在2000年12月15日提交的美国临时申请60/256,068申请和在2001年3月1日提交的美国临时申请60/272,605的优先权。
背景技术：
AIDS，获得性免疫缺陷综合征，是一种遍及全球的灾难性疾病。从1998年7月至1999年6月，仅在美国就一共报告了47,083例AIDS病例。在1998年的死亡人数超过了二百二十万，HIV/AIDS现在已经变成了第四位导致死亡的原因，并且它的影响正在不断增加。根据最新UNAIDS报告，由于AIDS而导致的死亡已经达到了每年二百六十万人的记录，同时新的HIV感染仍在以增长的速率不断蔓延。
在1981年，当表面看来健康的同性恋男子由于两种已知仅会袭击免疫缺陷患者的机会性疾病——Karposi′s肉瘤(KS)和卡氏肺囊虫性肺炎(PCP)而倒下时，AIDS首次引起了疾病控制和预防中心(CDC)的注意。两年后，巴黎的Pasteur Institute分离出了AIDS的诱发剂，一种与逆转录病毒有关的淋巴腺病，人体免疫缺陷病毒(HIV)，之后，在美国国家癌症学会通过一种独立来源对其进行了证实。
在1986年，在巴黎召开的第二次国际AIDS会议提出了用药物对抗AIDS的初步报告。这种药物，3′-叠氮基-3′-脱氧胸腺嘧啶核苷(AZT，齐多夫定，Retrovir)，被食品药品管理委员会(FDA)所批准，其变成了第一种用于对抗AIDS的药物。因为AZT的出现，一些核苷类似物已经表现出具有对抗I型人体免疫缺陷病毒(HIV-I)的有效抗病毒活性。特别是许多2′，3′-二脱氧-2′，3′-二脱氢-核苷已经表现出具有有效的抗-HIV-1活性。用于HIV治疗的2′，3′-二脱氧-2′，3′-二脱氢-胸腺嘧啶核苷(“D4T”；也被称为1-(2，3-二脱氧-β-D-甘油基-戊-2-烯并(eno)-呋喃糖基)胸腺嘧啶))目前由Bristol Myers Squibb以Stavudine的名称进行销售。
已经认识到在用抗病毒物质进行长期治疗后会出现具有抗药性的HIV的变异体。一般大多数抗药性都是通过编码病毒复制所用的酶的基因的突变而产生的，并且其中所说的酶在HIV的情况中最常见的一般是逆转录酶、蛋白酶或DNA聚合酶。最近已经证明，通过联合使用化合物或交替用第二种并且也许是第三种可以诱导与主要药物所诱导的突变不同的突变的抗病毒化合物来进行给药可以延长、增加、或修复一种药物对抗HIV感染的功效。或者可以通过该类联合或交替治疗来改变药物的药物动力学、生物学分布、或其它参数。一般而言，相对于交替治疗而言更优选联合治疗，这是因为联合治疗可以同时给病毒施加多种压力。但是，不能预测所使用的药物将在HIV-1基因组中诱导何种突变、该突变是永久性的还是临时性的、或带有变异的HIV-1序列的被感染细胞将对用其它物质联合或交替进行的治疗表现出怎样的反应。缺乏用现代抗逆转录病毒物质进行治疗的长期细胞培养物的抗药性动力学数据的事实加剧了这种情况。
已经从用3′-叠氮基-3′-脱氧胸腺嘧啶核苷(AZT)、2′，3′二脱氧肌苷(DDI)或2′，3′-二脱氧胞嘧啶核苷(DDC)长期进行单一治疗的患者体内分离出了对这些药物有抗药性的HIV-1变异体(LarderBA，Darby G，Richman DD.Science 1989；2431731-4；St ClairMH，Martin JL，Tudor WG，等人Science 1991；2531557-9；St ClairMH，Martin JL，Tudor WG，等人Science 1991；2531557-9；以及Fitzgibbon JE，Howell RM，Haberzettl CA，Sperber SJ，GockeDJ，Dubin DT.Antimicrob Agents Chemother 1992；36153-7)。测定的临床证据表明AZT耐药性是儿童和成人低下的临床结果的预示(Mayers DL.Lectur e，第三十二次抗菌剂和化疗国际科学会议(Anaheim，CA.1992)；Tudor-Williams G，St Clair MH，McKinney RE，等人Lancet 1992；33915-9；Ogino MT，Dankner WM，Spector SA.JPediatr 1993；1231-8；Crumpacker CS，D′Aquila RT，Johnson VA，等人第三次病毒抗药性抗药性研讨会.(Gaithersburg，MD.1993)；和Mayers D，和the RV43 Study Group.第三次病毒抗药性研讨会。(Gaithersburg，MD.1993))。
在细胞培养物和人的临床试验中都已经报道了HIV-1对于非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTIs)会迅速形成抗药性(Nunberg JH，SchleifWA，Boots EJ，等人JVirol 1991；65(9)4887-92；Richman D，ShihCK，Lowy I，等人Proc Natl Acad Sci(USA)1991；8811241-5；Mellors JW，Dutschman GE，Im GJ，Tramontano E，WinklerSR，Cheng YC。Mol Pharm 1992；41446-51；Riclman DD和the ACTG164/168研究小组。第二次国际HIV-1药物抗药性研讨会。(Noordwi jk，the Netherlands.1993)；以及Saag MS，EminiEA，Laskin OL，等人N Engl J Med 1993；3291065-1072)。在NNRTIL′697，661的情况中，HIV-1的抗药性在开始治疗后2-6周内出现，同时相关的病毒血症回复至治疗前的水平(Saag MS，Emini EA，LaskinOL，等人N Engl J Med 1993；3291065-1072)。新形成的与抗药性菌株出现有关的病毒血症也可以用包括蛋白酶抑制剂在内的其它类型的HIV-1抑制剂来处理(Jacobsen H，Craig CJ，Duncan IB，HaenggiM，Yasargil K，Mous J.第三次病毒抗药性研讨会。(Gaithersburg，MD.1993))。这种体验已经使人意识到在对所有用于HIV-1的新治疗进行的临床前评估中必需尽早地对可能出现的HIV-1抗药性进行评估。
1，3-二氧戊环基核苷类化合物各种合成的核苷在抑制HIV在体内和体外复制方面所取得的成功使得人们进行了大量的研究来对在核苷的3′-位上用杂原子取代了碳原子的核苷进行设计和试验。Norbeck，等人公开了(+/-)-1-[(2-β，4-β)-2-(羟基甲基)-4-二氧戊环基]胸腺嘧啶(被称为(+/-)-二氧戊环-T)表现出对抗HIV的有限的活性(在ATH8细胞中EC50为20μM)，并且在200μM的浓度下对未被感染的对照细胞没有毒性。Tetrahedron Letters 30(46)，6246，(1989)。
在1988年4月11日，Bernard Belleau，Dilip Dixit，和NgheNguyen-Ba在BioChem Pharma提交的专利申请U.S.S.N.07/179,615公开了一种用于治疗HHIV的外消旋的2-取代的-4-取代的-1，3-二氧戊环核苷的基因组。该‘615专利申请到期后深入到转让给BioChemPharma，Inc.的编号为0 337 713的欧洲专利公开物；编号为5,041,449的美国专利；和编号为5,270,315的美国专利中。
在1990年12月5日，Chung K.Chu和Raymond F.Schinazi申请的U.S.S.N.07/622,762公开了一种通过立体选择性合成来制备对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环核苷的不对称的方法和某些用该方法唑制备的核苷，包括(-)-(2R，4R)-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]鸟嘌呤(DXG)、以及其用于治疗HIV的用途。这篇专利申请作为编号为5,179,104的美国专利而被授权。
在1991年5月21日，Tarek Mansour，等人，在BioChem Phanna申请的U.S.S.N.07/703,379涉及一种用立体选择性的合成方法来获得1，3-二氧戊环核苷对映异构体的方法，该方法包括通过将1，3-二氧戊环中间体用甲硅烷基路易斯酸共价结合到一种手性辅助物上来进行缩合。其在欧洲提交的相应申请是EP 0 515 156。
在1992年8月25日，Chung K.Chu和Raymond F.Schinazi申请的U.S.S.N.07/935,515公开了某些用于治疗HIV感染的人的如下式所示的对映体富集的8-D-二氧戊环基嘌呤化合物 其中R是OH、Cl、NH2或H，或该化合物的可药用盐或衍生物，其可任选地位于可药用的载体或稀释剂中。其中R是氯的化合物被称为(-)-(2R，4R)-2-氨基-6-氯-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]嘌呤。其中R是羟基的化合物是(-)-(2R，4R)-9-[(2-羟基-甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]鸟嘌呤。其中R是氨基的化合物是(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]腺嘌呤。其中R是氢的化合物是(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]嘌呤。该申请作为编号为5,925,643和5,767,122的美国专利被授权。
在1992，Kim等人发表了一篇教导如何由1，6-脱水-L-β-吡喃葡萄糖获得(-)-L-β-二氧戊环-C和(+)-L-β-二氧戊环-T的文章。Kim等人，(-)-L-β-二氧戊环-C和(-)-L-β-二氧戊环-T的有效抗-HIV和抗-HBV活性以及其不对称合成法，Tetrahedron Letters Vol 32(46)，第5899-6902页。
在1992年10月28日，Raymond Schinazi申请的U.S.S.N.07/967,460涉及了在U.S.S.N.07/935,515中所公开的化合物用于治疗乙型肝炎的应用。该申请以编号为5,444,063；5,684,010；5,834,474；和5,830,898的美国专利被授权。
在1993年，Siddiqui，等人在BioChem and Glaxo上发表了顺式-2，6-二氨基嘌呤二氧戊环可以用腺苷脱氨基酶选择性地脱氨基。Siddiqui，等人，抗病毒的光学纯的二氧戊环嘌呤核苷类似物，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，第3卷(8)，第1543-1546页(1993)。
作为一种逆转录酶抑制剂(RTI)，(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-I，3-二氧戊环-4-基]腺嘌呤(DAPD)是一种体外HIV-1复制的选择性抑制剂。认为在体内DAPD可以通过一种由普遍存在的酶——腺苷脱氨基酶脱氨基而得到(-)-β-D-二氧戊环鸟嘌呤(DXG)，其随后可以被转化成相应的5′-三磷酸酯(DXG-TP)。生化分析已经证明带有0.019μM的Ki的DXG-TP是一种有效的HIV逆转录酶(HIV-RT)抑制剂。
在得到与Abbott Laboratories，Inc.合作的Emory University的许可同意的条件下，Triangle Pharmaceuticals，Inc.(Durham，N.C.)目前正在开发这种用于HIV和HBV治疗的化合物。
利巴韦林(Ribavirin)利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-羧酰胺)是一种合成的、非干扰素诱导的广谱抗病毒核苷类似物，其以Virazole的商标进行销售(The Merck Index，第11版，主编Budavari，S.，Merck &Co.，Inc.，Rahway，NJ，第1304页，1989)。U.S.专利3,798,209和RE29,835公开并要求保护利巴韦林。在美国，首先被批准的是用于儿童的用于治疗某些类型呼吸系统病毒感染的气雾剂形式的利巴韦林。利巴韦林在结构上与鸟嘌呤核苷相似，并且在体外具有对抗包括Flaviviridae在内的一些DNA和RNA病毒的活性(Gary L.DavisGastroenterology118S104-S114，2000)。在40％的患者中利巴韦林都将血清中氨基转移酶的水平降至了正常的水平，但是其并没有降低血清中HCV-RNA的水平(Gary L.DavisGastroenterology118S104-S114，2000)。因此，单独使用利巴韦林并不能有效减少病毒的RNA水平。正在对其与DDI一起进行的抗HIV治疗进行研究。就在最近，其已经表现出对抗A型、B型和C型肝炎的活性。自从在AIDS危象开始以来，人们已经用巴韦林来进行抗-HIV治疗，但是，当单独用其进行治疗时，一些受控制的研究已经表明利巴韦林并不能有效的对抗HIV。其对T4细胞、T8细胞或p24抗原无效。
已经有报道称IFN和利巴韦林联合用于治疗HCV感染在第一次用药物进行治疗的IFN患者的治疗中是有效的(Battaglia，A.M.等人，Ann.Pharmacother.34487-494，2000)。在肝炎形成前或当出现组织学疾病时这种联合治疗的结果都有希望(Berenguer，M.等人Antivir.Ther.3(增刊3)125-136，1998)。联合治疗的副作用包括溶血、flulike症状、贫血、以及疲劳(Gary L.Davis.Gastroenterology118S104-S114，2000)。
利巴韦林霉酚酸已知霉酚酸(6-(4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-5-氧化邻二甲苯基(phthalanyl))-4-甲基-4-己酸)可以通过抑制肌苷一磷酸脱氢酶(“IMPDH”)来减少鸟苷酸一磷酸重新合成的速率。其还可以减少淋巴细胞增生。
霉酚酸科学家已经表明当在体外与Abacavir(Ziagen)合用时，霉酚酸具有协同作用。霉酚酸消耗了鸟嘌呤核苷——一种DNA构造片段所必需的物质。Abacavir是一种鸟嘌呤核苷的类似物并且因此，为了具有治疗作用，其必需与体内天然的鸟嘌呤核苷的产生相竞争。通过消耗天然产生的鸟嘌呤核苷，霉酚酸改善了细胞对Abacavir的摄取。科学家已经认为霉酚酸和Abacavir联合在对抗对Abacavir有抗药性的病毒时具有很高的活性。但是，可能是由于霉酚酸抑制了胸腺嘧啶核苷的磷酸化作用，霉酚酸和齐多夫定或stavudine的联合特别是具有拮抗作用。第39次杀菌剂和化疗的国际科学会议，旧金山，加利福尼亚，1999年9月26-29日。Heredia，A.，Margolis，D.M.，Oldach，D.，Hazen，R.，Redfield，R.R.(1999)与IMPDH抑制剂——霉酚酸联合的Abacavir具有对抗对多种药物有抗药性的HIV的活性。J AcquirImmune Defic Syndr.；22406-7。Margolis，D.M.，Heredia，A.，Gaywee，J.，Oldach，D.，Drusano，G.，Redfield，R.R.(1999)Abacavir和霉酚酸，一种肌苷一磷酸脱氢酶抑制剂具有很高的和协同的抗HIV活性，J Acquir Immune Def ic Syndr.，21362-370。
US专利4,686,234描述了各种霉酚酸的衍生物、其合成方法及其在治疗自身免疫性病症、牛皮癣、以及炎性疾病中特别是包括类风湿性关节炎、肿瘤、病毒中的应用以及用于治疗同种移植物排斥反应中的应用。
在1995年5月5日，Morris等人在US专利5,665,728中公开了一种通过单独使用抗增生有效量的雷怕霉素或将其与霉酚酸联合应用来预防或治疗哺乳动物中过度增生的血管疾病的方法。
针对HIV流行对全球造成的威胁，本发明的目的是要提供治疗HIV的新方法和组合物。
本发明的另一个目的是要提供治疗HIV的抗药性菌株的方法和组合物。
发明概述已经意想不到地发现当联合使用β-D-1，3-二氧戊环基核苷和IMPDH抑制剂时，HIV的抗药性菌株表现出初次用药物进行试验的病毒的行为。在一个非限制性的实施方案中，该HIV菌株对于β-D-1，3-二氧戊环基核苷具有抗药性。
因此，本发明涉及用于治疗或预防受感染的宿主特别是人体中的HIV的组合物和方法，并且特别涉及HIV的抗药性菌株，其非限制性的包括对DAPD和/或DXG具有抗药性的HIV菌株，该方法包括与肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合使用或交替使用有效量的如下式所示的β-D-二氧戊环基嘌呤1，3-二氧戊环基核苷(“β-D-1，3-二氧戊环基核苷”)或其可药用的盐或前体药物 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，包括磷脂、或一种醚-脂，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
在一个实施方案中，将对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，特别是DAPD，与IMPDH抑制剂联合或交替进行给药，其中所说的IMPDH抑制剂例如利巴韦林、霉酚酸、苯甲酰胺核糖核苷、噻唑呋林、硒制那唑呋啉(selenazofurin)、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-羧酰胺(EICAR)、或(S)-N-3-[3-(3-甲氧基-4-噁唑-5-基-苯基)-脲基]-苄基-氨基甲酸四氢呋喃-3-基-酯(VX-497)，当用HIV-1的野生型或突变菌株进行试验时，它们可有效降低DXG的EC50。
在一个实施方案中，该IMPDH抑制剂是霉酚酸。在本发明另一个优选的实施方案中，该IMPDH抑制剂是利巴韦林。在一个优选的实施方案中，该核苷是与该IMPDH联合给药的。在一个优选的实施方案中，该核苷是DAPD。
在另一个实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与一种能减少鸟嘌呤核苷或脱氧鸟嘌呤核苷核苷酸重新合成速率的化合物联合或交替进行给药的。
在一个优选的实施方案中，DAPD是与能减少鸟嘌呤核苷核苷酸重新合成速率的利巴韦林或霉酚酸联合或交替进行给药的。
还是在另一个优选的实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与能有效增加细胞内DXG-TP浓度的化合物联合或交替进行给药的。
还是在另一个优选的实施方案中，DAPD是与能有效增加细胞内DXG-TP浓度的利巴韦林或霉酚酸联合或交替进行给药的。
还已经发现，例如，这种药物联合可用于治疗对DAPD有抗药性和对DXG有抗药性的HIV菌株。在用所公开的药物联合进行治疗后，DAPD和DXG抗药性HIV菌株表现出第一次用药物进行试验时的病毒特性。
因此，还是在本发明的另一个实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与能有效逆转在HIV-1突变菌株中所观测到的抗药性的IMPDH抑制剂联合或交替进行给药的。
还是在本发明的另一个实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与能有效逆转在HIV-1突变菌株中所观测到的对DAPD或DXG的抗药性的IMPDH抑制剂联合或交替进行给药的。
一般而言，在交替治疗期间是将各种物质的有效剂量连续地进行给药，而在联合治疗中是将两种或多种物质的有效剂量一起进行给药。该剂量将取决于诸如各个药物的吸收、生物分布、代谢和排泄的因素以及其它一些本领域的技术人员所公知的因素。应当注意的是，该剂量值应当随着所要缓解的病症的严重程度而变化。还应当进一步理解的是，应当根据个体需要或根据进行给药的人或对该组合物的给药进行监督的人的职业判断来随时间调整任何一种特定的受试者、特定剂量方案和时间表。在科学文献和Physicians Desk Reference中可以发现适宜剂量范围的实例。这里所描述的许多其它化合物的适宜剂量范围的实例也可以在公开文献中找到或可以用公知的方法来确定。可以根据需要对这些剂量范围作出修改以获得所需的结果。
所公开的联合和交替方案可用于预防和治疗HIV感染以及其它相关病症，如AIDS-相关复征(ARC)、持续的扩散性淋巴结病(PGL)、与AIDS有关的神经病性病症、抗-HIV抗体阳性和HIV-阳性的病症、卡波济氏肉瘤、血小板减少性紫癜和机会性感染。此外，这些化合物或制剂还可预防性地用于预防或减缓抗-HIV抗体或HIV-抗原呈阳性的个体或曾接触过HIV的个体的临床疾病进展。
发明详述已经出乎意料地发现，当联合给予β-D-1，3-二氧戊环基核苷和一种IMPDH抑制剂时，具有HIV的抗药性菌株表现出第一次用药物进行试验时的病毒行为。在一个非限制性的实施方案中，该HIV菌株对β-D-1，3-二氧戊环基核苷有抗药性。
IMPDH催化了肌苷-5′-一磷酸酯(IMP)的NAD-依赖性地氧化成黄嘌呤核苷-5′-一磷酸酯(XMP)，这种氧化在鸟嘌呤核苷核苷酸合成中是一个必需的步骤。已经发现通过抑制肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)而导致的细胞内脱氧鸟嘌呤核苷5′-三磷酸酯(dGTP)水平的减少可以有效增加细胞内DXG-TP的浓度，从而增进了对HIV复制的抑制作用。但是，仅凭这一点并不能解释HIV的抗药性形式对在存在IMPDH抑制剂的情况下给药β-D-1，3-二氧戊环基核苷具有意想不到的敏感性。
因此，本发明涉及用于治疗或预防宿主中的HIV，特别是具有抗药性的HIV菌株如对DAPD和/或DXG具有抗药性的HIV菌株的组合物和方法，其中所说的宿主是例如哺乳动物，特别是人，该方法包括与肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合使用或交替使用有效量的如下式所示的对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，包括磷脂、或一种醚-脂，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
在一个实施方案中，将对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，特别是DAPD，与IMPDH抑制剂联合或交替进行给药，其中所说的IMPDH抑制剂例如利巴韦林、霉酚酸、苯甲酰胺核糖核苷、噻唑呋林、硒利那唑呋啉、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-羧酰胺(EICAR)、或(S)-N-3-[3-(3-甲氧基-4-噁唑-5-基-苯基)-脲基]-苄基-氨基甲酸四氢呋喃-3-基-酯(VX-497)，当用HIV-1的野生型或突变菌株进行试验时，它们可有效降低DXG的EC50。
在一个优选的实施方案中，该IMPDH抑制剂是霉酚酸。在本发明另一个优选的实施方案中，该IMPDH抑制剂是利巴韦林。在一个优选的实施方案中，该核苷是与该IMPDH抑制剂联合给药的。在另一个优选的实施方案中，该核苷是DAPD。
在另一个实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3一二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与一种能减少鸟嘌呤核苷和脱氧鸟嘌呤核苷核苷酸重新合成速率的化合物联合或交替进行给药的。
在一个优选的实施方案中，DAPD是与能减少鸟嘌呤核苷核苷酸重新合成速率的利巴韦林或霉酚酸联合或交替进行给药的。
还是在另一个优选的实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与能有效增加细胞内DXG-TP浓度的化合物联合或交替进行给药的。
还是在另一个优选的实施方案中，DAPD是与能有效增加细胞内DXG-TP浓度的利巴韦林或霉酚酸联合或交替进行给药的。
还已经发现，例如，这种药物联合可用于治疗对DAPD有抗药性和对DXG有抗药性的HIV菌株。在用所公开的药物联合进行治疗后，对DAPD和DXG抗药性的HIV菌株表现出第一次用药物进行试验时的病毒特性。
因此，还是在本发明的另一个实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与能有效逆转在HIV-1突变菌株中所观测到的抗药性的IMPDH抑制剂联合或交替进行给药的。
还是在本发明的另一个实施方案中，该对映体富集的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤，并且特别是DAPD，是与能有效逆转在HIV-1突变菌株中所观测到的对DAPD或DXG的抗药性的IMPDH抑制剂联合或交替进行给药的。
I.定义除非特别说明，否则本文所用的术语“被保护的”指的是被添加到氧、氮、或磷原子上以防止其进一步反应或为了其它目的而进行添加的基团。各种氧和氮保护基团对于有机合成领域中技术人员而言是公知的。
本文所用术语卤素包括氯、溴、碘和氟。
除非特别说明，否则则正如这里所用的这样，术语烷基指的饱和的直链、支链或环状的一般为C1至C10的伯、仲或叔烃，并且特定地包括甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、叔-丁基、戊基、环戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、环己基、环己基甲基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、和2，3-二甲基丁基。该定义既包括被取代的烷基，又包括未被取代的烷基。烷基可以被取代的部分选自羟基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸盐、膦酸，磷酸酯、或膦酸酯，这些部分可以是未被保护的形式或者按需要进行保护，正如本领域技术人员所公知的或例如Greene，等人，在有机合成中的保护基，John Wiley and Sons，第二版，1991中所教导的那样被保护起来，该文献在这里被引入作为参考。
除非特别说明，否则则正如这里所用的这样，术语低级烷基指的是包括被取代和未被取代的形式在内的C1至C4饱和的直链、支链或如果必要的话，环状(例如环丙基)的烷基。除非本申请特别说明，否则当烷基是一种适宜部分时，优选低级烷基。类似地，当烷基或低级烷基是一种适宜的部分时，优选未被取代的烷基或低级烷基。
除非特别说明，否则则正如这里所用的这样，术语芳基指的是苯基、联苯基、或萘基，并且优选苯基。该术语同时包括被取代和未被取代的形式。该芳基可以被一个或多个选自羟基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸盐、膦酸、磷酸酯、或膦酸酯的部分所取代，这些部分可以是未被保护的形式或者按需要保护起来，正如本领域技术人员所公知的或例如Greene，等人，在有机合成中的保护基，John Wiley and Sons，第二版，1991中所教导的那样被保护起来。
术语酰基指的是其中该酯基的非羰基部分是选自直链、支链、或环状的烷基或低级烷基、包括甲氧基甲基在内的烷氧基烷基、包括苄基在内的芳烷基、芳氧基烷基如苯氧基甲基、包括被卤素(例如F、Cl、Br或I)取代或未被卤素取代的苯基在内的芳基、C1至C4烷基或C1至C4烷氧基、磺酸酯如包括甲磺酰基在内的烷基或芳烷基磺酰基、一、二或三磷酸酯、三苯甲基或单甲氧基三苯甲基、被取代的苄基、三烷基甲硅烷基(例如二甲基-叔-丁基甲硅烷基)或二苯基甲基甲硅烷基的羧酸酯。在该酯中的芳基最佳地包含一个苯基。术语“低级酰基”的定义指的是其中的非羰基部分是低级烷基的酰基。
在整篇说明书中所用的术语“对映体富集”的定义是用来描述一种包括约95％或更高，优选至少96％，更优选至少97％，甚至更优选至少98％，并且甚至更优选至少约99％或更多的该化合物的单一的对映体的化合物。当在本说明书中涉及一种特定构型(D或L)的核苷时，除非特别说明，否则则假定该核苷是一种对映体富集的核苷。
正如这里所用的这样，术语“宿主”的定义指的是病毒可以在其中进行复制的单细胞或多细胞的生物体，包括细胞系和动物，并且优选地是指人。或者该宿主可以运载该病毒基因组的一部分，通过本发明的化合物可以改变其复制或功能。术语宿主特定地指的是被感染的细胞、带有该病毒基因组的全部或一部分的细胞和动物，特别是灵长目动物(包括黑猩猩)和人。在本发明的大多数动物应用中，该宿主是人类患者。然而，在某些适应征中，由本发明可以清楚地预期到兽医的应用(如黑猩猩的猿免疫缺陷病毒)。
可药用的前体药物指的是在宿主中可以被代谢例如被水解或氧化成本发明的化合物的一种化合物。前体药物的一般实例包括在该活性化合物的功能部分上具有生物学上不稳定的保护基团的化合物。前体药物包括可以被氧化、还原、胺化、去氨基化、羟基化、脱羟基化、水解、脱水、烷基化、脱烷基化、酰基化、脱酰基化、磷酰化、去磷酰化从而可以产生该活性化合物的化合物。可药用的盐包括这些得自可药用的无机或有机的碱和酸的盐。适宜的盐包括这些得自碱金属如钾和钠的盐、碱土金属如钙和镁的盐、以及其它药学领域中众所周知的许多其它酸的盐。本发明的化合物具有抗病毒活性，或者可以被代谢成可表现出该类活性的化合物。
II.可药用的盐和前体药物在这里所公开的任何一种化合物都具有足够的碱性或酸性以形成稳定的无毒的酸或碱盐，将该化合物以可药用盐的形式进行给药可能是适当的。可药用盐的实例包括与酸形成的可形成生理上可接受的阴离子的有机酸加成盐，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。也可以形成适宜的无机盐，包括硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐以及碳酸盐。
可药用的盐可以用本领域中众所周知的标准方法来获得，例如可以通过将足够的碱性化合物如胺与适宜的可提供生理上可接受的阴离子的酸进行反应来获得。还可以制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或碱土金属(例如钙)盐。
这里所描述的任何核苷都可以以核苷酸前体药物的形式进行给药以增加该核苷的活性、生物利用度、稳定性或改变其其它性质。许多核苷酸前体药物配体都是已知的。一般而言，该化合物羟基的烷基化、酰基化或其它亲脂性修饰或该核苷的一、二或三磷酸酯将可以增加该核苷酸的稳定性。可以替代该磷酸酯部分中的一个或多个氢的取代基的实例有烷基、芳基、甾族化合物、碳水化合物，包括糖、1，2-二酰基甘油和醇。在R.Jones和N.Bischofberger，AntiviralResearch，27(1995)1-17中对许多物质进行了描述。这些物质中的任何一种都可以与所公开的核苷结合使用以获得所需的效果。
这里所描述的用于联合或交替治疗中的任何一种化合物都可以以酰基化的前体药物的形式进行给药，其中术语酰基指的是其中酯基的非羰基部分是选自直链、支链、或环状烷基或低级烷基、包括甲氧基甲基在内的烷氧基烷基、包括苄基在内的芳烷基、芳氧基烷基如苯氧基甲基、包括被卤素取代或未被卤素取代的苯基在内的芳基、C1至C4烷基或C1至C4烷氧基、磺酸酯如烷基或芳烷基磺酰基，包括甲磺酰基、一、二或三磷酸酯、三苯甲基或单甲氧基三苯甲基、被取代的苄基、三烷基甲硅烷基(例如二甲基-叔-丁基甲硅烷基)的羧酸酯。
正如在下面的参考资料中所公开的那样，有活性的核苷或其他包含羟基的化合物还可以以醚一脂的形式被提供(特别是核苷的5′-醚脂或5′-二氧磷基醚脂)，正如在下列文献中所公开的那样这些文献在这里引入本文作为参考Kucera，L.S.，N.Iyer，E.Leake，A.Raben，ModestE.K.，D.L.W.，和C.Piantadosi.1990.“可抑制有传染性的HIV-1产生并能诱导有缺陷的病毒形成的与膜相互作用的新型醚脂类似物。”AIDSRes.Hum.Retro Viruses.6491-501；Piantadosi，C.，J.Marasco C.J.，S.L.Morris-Natschke，K.L.Meyer，F.Gumus，J.R.Surles，K.S.Ishaq，L.S.Kucera，N.Iyer，C.A.Wallen，S.Piantadosi，和E.J.Modest.1991.“新型的醚脂核苷共轭物的合成和抗HIV活性评估。”J.Med.Chem.341408.1414；Hosteller，K.Y.，D.D.Richman，D.A.Carson，L.M.Stuhmiller，G.M.T.van Wijk，和H.van den Bosch.1992.“通过二肉豆蔻酰甘油3′-脱氧胸腺嘧啶核苷二磷酸酯，3，-脱氧胸腺嘧啶核苷的一种脂类前体药物来极大地提高对在CEM和HT4-6C细胞中1型人体免疫缺陷病毒复制的抑制作用。”Antimicrob.Agents Chemother.362025.2029；Hostetler，K.Y.，L.M.Stuhmiller，H.B.Lenting，H.van den Bosch，和D.D.Richman，1990。“叠氮基胸腺嘧啶核苷和其他抗病毒核苷的磷脂类似物的合成及抗逆转录病毒活性。”J.Biol.Chem.26561127。
公开了适宜的可以共价结合地引入到该核苷或其它包含羟基或胺的化合物，特别是该核苷或亲脂性制剂的5′-OH位置中的亲脂性取代基的美国专利的非限制性实例包括US 5,149,794(1992年9月22日，Yatvin等人)；5,194,654(1993年3月16日，Hostetler等人，5,223,263(1993年6月29日，Hostetler等人)；5,256,641(1993年10月26日，Yatvin等人)；5,411,947(1995年5月2日，Hostetler等人)；5,463,092(1995年10月31日，Hostetler等人)；5,543,389(1996年8月6日，Yatvin等人)；5,543,390(1996年8月6日，Yatvin等人)；5,543,391(1996年8月6日，Yatvin等人)；和5,554,728(1996年9月10日；Basava等人)，所有这些专利文献都在这里被引入本文作为参考。公开了可以连接在本发明的核苷上或亲脂性制剂上的亲脂性取代基的外国专利申请包括WO 89/02733、WO90/00555、WO 91/16920、WO 91/18914、WO 93/00910、WO 94/26273、WO 96/15132、EP 0350287、EP 93917054.4、和WO 91/19721。
核苷酸前体药物的非限制性实例在如下的参考文献中进行了描述Ho，D.H.W.(1973)“在人和小鼠组织内1β-D-阿糖呋喃基胞嘧啶的激酶和脱氨基酶的分布。”Cancer Res.33，2816-2820；Holy，A.(199 3)同极性的亚磷-修饰的核苷酸类似物，“InDeClercq(Ed.)，Advances in Antiviral Drug Design，第I卷，JAIPress，第179-231页；Hong，C.I.，Nechaev，A.，和West，C.R.(1979a)“氢化可的松和可的松的1-β-D-阿糖呋喃基胞嘧啶共轭物的合成和抗肿瘤活性。”Bicohem.BiopAlys.Rs.Commun.88，1223-1229；Hong，C.I.，Nechaev，A.，Kirisits，A.J.Buchheit，D.J.和Wes t，C.R.(1980)“作为可能的抗肿瘤物质的核苷共轭物。3.皮质类固醇和所选择的亲脂性醇的1-(β-D-阿糖呋喃基)胞嘧啶共轭物的合成和抗肿瘤活性。”J.Med.Chem.28，171-177；Hosteller，K.Y.，Stuhmiller，L.M.，Lenting，H.B.M.van den Bosch，H.和Richman J Biol.Chem.265，6112-6117；Hosteller，K.Y.，Carson，D.A.和Richman，D.D.(1991)；“磷脂酰叠氮基胸腺嘧啶核苷在CEM细胞中抗逆转录病毒作用的机理。”J.Biol Chem.266，11714-11717；Hosteller，K.Y.，Korba，B.Sridhar，C.，Gardener，M.(1994a)“在B型肝炎感染细胞中磷脂酰-二脱氧胞嘧啶核苷的抗病毒活性和在小鼠中增强的肝吸收。”Antiviral Res.24，59-67；Hosteller，K.Y.，Richman，D.D.，Sridhar.C.N.Felgner，P.L.Felgner，J.，Ricci，J.，Gardener，M.F.Selleseth，D.W.和Ellis，M.N.(1994b)“磷脂酰叠氮基胸腺嘧啶核苷和磷脂酰-ddC在小鼠淋巴组织中吸收性的评估和在人体免疫缺陷病毒感染的细胞和醚酩酊麻醉的白血病病毒感染的小鼠中抗病毒活性的评估。”Antimicrobial Agents Chemother.38，2792-2797；Hunston，R.N.，Jones，A.A.McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.，和DeClercq，E.(1984)“一些得自2′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷的环状二磷氧基三酯的合成和生物学性质。”J.Med.Chem.27，440-444；Ji，Y.H.，Moog，C.，Schmitt，G.，Bischoff，P.和Luu，B.(1990)；“作为可能的抗肿瘤物质的7-β-羟基胆固醇的一磷酸酯和嘧啶核苷的一磷酸酯合成和抗肿瘤活性的初步评估。”J.Med.Chem.33 2264-2270；Jones，A.S.，McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.和DeClercq，E.(1984)“一些核苷环状氨基磷酸酯的合成、性质和生物学活性。”J.Chem.Soc.Perkin Trans.I，1471-1474；Juodka，B.A.和Smrt，J.(1974)“二核糖核苷磷(P→N)氨基酸衍生物的合成。”Coll.Czech.Chem.Comm.39，363-968；Kataoka，S.，Imai，J.，Yama ji，N.，Kato，M.，Saito，M.，Kawada，T.和Imai，S.(1989)“烷基化cAMP衍生物；选择性合成和生物学活性。”Nucleic Acids Res.Sym.Ser.21，1-2；Kataoka，S.，Uchida，“(cAmP)苄基和甲基三酯。”Heterocycles 32，1351-1356；Kinchington，D.，Harvey，J.J.，O′Connor，T. J.，Jones，B.C.N.M.，Devine，K.G.，Taylor-Robinson D.，Jeffries，D.J.和McGuigan，C.(1992)“齐多夫定氨基磷酸酯和二氨基磷酸酯衍生物在体外对抗HIV和ULV的抗病毒作用的比较。”Antiviral Chem.Chemother.3，107-112；Kodama，K.，Morozumi，M.，Saithoh，K.I.，Kuninaka，H.，Yosino，H.和Saneyoshi，M.(1989)“一种1-β-D-阿糖呋喃基胞嘧啶的口服有效的衍生物——1-β-D-阿糖呋喃基胞嘧啶-5′-硬脂酰基磷酸酯的抗肿瘤活性和药理学。”Jpn.J.Cancer Res.80，679-685；Korty，M.和Engels，J.(1979)“腺苷-和鸟嘌呤核苷3′，5′含磷的和酸性苄基酯对豚鼠心室心肌的作用。”Naunyn-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol.310，103-111；Kumar，A.，Goe，P.L.，Jones，A.S.Walker，R.T.Balzarini，J.和DeClercq，E.(1990)“一些环状氨基磷酸酯核苷衍生物的合成和生物学评估。”J.Med.Chem，33，2368-2375；LeBec，C.，和Huynh-Dinh，T.(1991)“作为抗癌的前体药物的一种阿糖胞苷的5-氟尿嘧啶核苷的亲脂的磷酸三酯衍生物的合成。”Tetrahedron Lett.32，6553-6556；Lichtenstein，J.，Barner，H.D.和Cohen，S.S.(1960)“大肠埃希氏杆菌对外原性供给的核苷酸的代谢作用，”J.Biol.Chem.235，457-465；Lucthy，J.，VonDaeniken，A.，Friederich，J.Manthey，B.，Zweifel，J.，Schlatter，C.和Benn，M.H.(1981)“三种天然存在的氰基环硫烷烃的合成和毒理学性质”。Mitt.Geg.Lebensmittelunters.Hyg.72，131-133(Chem.Abstr.95，127093)；McGigan，C.Tollerfield，S.M.和Riley，P.a.(1989)“抗病毒药物Ara.的一些磷酸三酯衍生物的合成和生物学评估”Nucleic Acids Res.17，6065-6075；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，Galpin，S.A.，Jeffries，D.J.和Kinchington，D.(1990a)“作为抗HIV化合物的3′-叠氮基-3′-脱氧胸腺嘧啶核苷(AZT)的一些新型的氨基磷酸酯衍生物的合成和评估。”Antiviral Chem.Chemother.1107-113；McGuigan，C.，O′Connor，T.J.，Nicholls，S.R.Nickson，C.和Kinchington，D.(1990b)“AZT和ddCyd的一些新型的被取代的二烷基磷酸酯衍生物的合成和抗-HIV活性。”Antiviral Chem.Chemother.1，355-360；McGuigan，C.，Nicholls，S.R.，O′Connor，T.J.，和Kinchington，D.(1990c)“作为可能的抗AIDS药物的3′-修饰核苷的一些新型二烷基磷酸酯衍生物的合成。”Antiviral Chemother.1，25-33；McGuigan，C.，Devin，K.G.，O′Connor，T.J.，和Kinchington，D.(1991)“3′-叠氮基-3′-脱氧胸腺嘧啶核苷(AZT)的一些卤代烷基氨基磷酸酯衍生物的合成和抗-HIV活性；三氯乙基甲氧基丙氨酸基化合物的有效活性。”Antiviral Res.15，255-263；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Balzarini，J.和DeClercq，E.(1993b)“由AZT的芳基磷酸酯衍生物所形成的生物活性的AZT核苷酸的细胞内传递。”J.Med.Chem.36，1048-1052。
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III.药物组合物患有由这里所述的任何一种疾病所引起的后果的人，特别是患有由抗药性的HIV菌株所引起的感染的人可以通过给患者在存在可药用载体或稀释剂的情况下使用与一种IMPDH抑制剂联合或交替使用的有效量的所定义的β-D-1，3-二氧戊环基核苷，特别是DAPD或DXG，或其可药用的盐或酯来进行治疗，其中所说的IMPDH抑制剂包括利巴韦林或霉酚酸。该活性物质可以以液体或固体的形式通过任何适宜途径来进行给药，例如可以通过口服、非肠道给药、肠内给药、静脉内给药、真皮内给药、皮下给药、局部给药、鼻腔给药、直肠给药来进行给药。
活性化合物以足以能给患者传递一种治疗有效量的化合物的数量被包含在可药用的载体或稀释剂中，其中所说的治疗有效量指的是可抑制体内病毒复制，特别是HIV复制而不会对所治疗的患者造成严重的毒性作用的数量。“抑制数量“指的是正如通过例如一种试验所测定的那样，活性组分的量足够发挥抑制作用，其中所说的试验如这里所述的一种试验。
用于上述所有病症的化合物的优选剂量为每天约1至50mg/kg体重的范围内，优选每天1至20mg/kg体重，一般更优选每天0.1至约100mg/kg领受者体重。可药用衍生物的有效剂量范围可以以所传递的母体核苷的重量为基础进行计算。如果该衍生物本身具有活性，则该有效剂量可以如上所述的用衍生物的重量来进行估算，或者可以用本领域技术人员所公知的其它方法来进行估算。
该化合物方便地以任何适宜的单位剂型的形式来进行给药，非限制性地包括一种每单位剂型包含7至3000mg，优选70至1400mg活性成分的剂型。一般口服剂量为50至1000mg是方便的。
虽然优选活性组分的组合物，但该活性成分中的至少一种在理论上应当被给药以获得约0.2至70mM，优选约1.0至10mM的活性化合物血浆峰浓度。这一点可以通过例如静脉内注射活性成分0.1至10％的溶液来实现，该溶液可以是生理盐水溶液，也可以不是生理盐水溶液，或者可以通过活性成分的丸药的形式来进行给药。
在药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、分布、代谢和排泄速率以及其它本领域技术人员所公知的因素。应当注意的是剂量值还将随着所要缓解病症的严重程度而变化。应当进一步理解的是，对于任何特定的个体而言，应当根据个体的需要和进行给药的人或对该组合物的给药进行监督的人的职业判断来随时间对特定的剂量方案作出调整，并且这里所述的浓度范围仅仅是为了举例说明，而并不是要对所要求保护的组合物的范围或操作进行限制。该活性成分可以一次给药，或可以被分割成许多较小的给药剂量以不同的时间间隔进行给药。
该活性化合物一种优选的给药方式是口服。口服组合物一般包括一种惰性稀释剂或可食用的载体。它们可以被包封在明胶胶囊中或被压缩成片剂。对于治疗性的口服给药的目的而言，可以将该活性化合物与赋形剂进行混合，然后以片剂、锭剂、或胶囊剂的形式进行应用。可药用的粘合剂和/或辅剂材料也可以作为该组合物的一部分被包含在该组合物中。
片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等等可以包含下面的成分、或类似性质的化合物中的任何一种物质粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖；崩解剂如海藻酸、Primogel、或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂如胶质二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或矫味剂如薄荷、甲基水杨酸酯、或橙子香料。当该单位剂型是胶囊剂时，除了上述类型的物质外，其还可以包含一种液体载体如脂肪油。此外，单位剂型还可以包含可改变该剂量单位的物理形式的各种其它物质，例如糖、虫胶、或其它肠溶物质的包衣。
该化合物可以作为以酏剂、混悬液、糖浆、糯米纸囊剂、口香糖等物质的一种成分的来进行给药。除活性化合物外，一种糖浆剂还可以包含作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料和着色剂以及矫味剂。
正如上面所详细讨论的那样，化合物或其可药用的衍生物或盐还可以与不会损害所需作用的其它活性物进行混合，或可以与可增加所需作用的物质如抗生素、抗真菌剂、抗炎剂、蛋白酶抑制剂、或其它核苷或非-核苷的抗病毒物质进行混合。用于非肠道、真皮内、皮下、或局部应用的溶液或混悬液可以包含如下组分一种无菌的稀释剂如注射用水、生理盐水溶液、固定油、聚乙二醇类、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或尼泊金甲酯；抗氧剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如醋酸盐、枸橼酸盐或磷酸盐和用于调节渗透压的物质如氯化钠或葡萄糖。非肠道制剂可以被包含在用玻璃或塑料所制备的安瓿、一次性的注射器或多剂量小瓶中。
如果静脉内给药的话，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)。
如果通过鼻喷雾或吸入来进行给药的话，这些组合物可以根据药物制剂领域众所周知的技术来进行制备并且可以通过使用苯甲醇或其它适宜的防腐剂、用以提高生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物、和/或其它本领域公知的增溶剂或分散剂来被制备成在生理盐水中的溶液。
如果以栓剂的形式直肠给药，则这些组合物可以通过将药物与适宜的非刺激性赋形剂如可可脂、合成的聚乙二醇的甘油酯进行混合来进行制备，其中所说的非刺激性赋形剂在普通温度下是固体，但是在直肠腔中会液化和/或溶解，从而可以释放出药物。
在一个优选的实施方案中，该活性化合物是与可以保护该化合物不会从体内快速消除的载体一起进行制备的，如控缓释制剂，包括植入物和微囊传递系统。可以使用可生物降解、可生物相容的聚合物如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备该类制剂的方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。这些物质可以从Alza Corporation通过商业途径获得。
还优选脂质体混悬液(包括带有作用于病毒抗原的单克隆抗体的可靶向作用于受感染的细胞的脂质体)作为可药用的载体。这些物质可以根据本领域技术人员所公知的方法来进行制备，例如可以根US4,522,811中所述的方法来进行制备(该专利文献在这里被整体引入本文作为参考)。例如，脂质体制剂可以通过将适宜的脂(脂们)(如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、arachadoyl磷脂酰胆碱、和胆固醇)溶解在无机溶剂中，然后将该溶剂蒸发掉，在容器的表面留下一层干燥的脂的薄膜来进行制备。然后将该活性化合物或其一磷酸酯、二磷酸酯和/或三磷酸酯衍生物的水性溶液加入到该容器中。然后用手将该容器进行涡动，使得脂物质从该容器的壁上游离下来并使之分散成脂质聚集体，从而形成了该脂质体混悬液。
IV.用于治疗HIV感染的联合和替代治疗一般而言，在交替疗法中，各个药剂的有效剂量是连续给药的，而在联合疗法中，一起给药有效剂量的两种或多种药剂。该剂量将取决于诸如各种药物的吸收、生物分布、代谢和排泄速氧的因素以及其它一些本领域技术人员所公知的因素。应当注意的是，该剂量值应当随着所要缓解的病症的严重程度而变化。还应当进一步理解的是，应当根据个体需要或根据进行给药的人或对该组合物的给药进行监督的人的职业判断来随时间调整任何一种特定的受试者、特定剂量方案和时间表。在科学文献和Physicians Desk Reference中可以发现适宜剂量范围的实例。这里所描述的许多其它化合物的适宜剂量范围的实例也可以在公开文献中找到或可以用公知的方法来确定。可以根据需要对这些剂量范围作出修改以获得所需的结果。
所公开的联合和交替方案可用于预防和治疗HIV感染和其它相关病症，例如AIDS-相关复征(ARC)、持续的扩散性淋巴结病(PGL)、与AIDS有关的神经性病症、抗-HIV抗体阳性和HIV-阳性的病症、卡波济氏肉瘤、血小板减少性紫癜和机会性感染。此外，这些化合物或制剂还可预防性地用于预防或减缓抗-HIV抗体或HIV-抗原呈阳性的个体或曾接触过HIV的个体的临床疾病进展。
例如已经发现这种药物组合物可用于治疗对DAPD和DXG有抗药性的HIV菌株。在用所公开的药物联合进行治疗后，对DAPD和DXG具有抗药性的HIV菌株表现出第一次用药物进行试验时的病毒特性。
此外，本发明的化合物可以与一种或多种抗病毒、抗-HBV、抗-HCV或抗疱疹的物质或干扰素、抗癌剂、抗增生剂或抗菌剂、包括本发明的其它化合物联合或交替进行给药。本发明的有些化合物可以通过减少其它化合物的代谢、异化作用或灭活而来有效的增强本发明某些物质的生物学活性，因此，为了获得这种预期的效果，可以将其共同进行给药。
下面提供了一些用于对本发明进行解释的非限制性实施例。这些实施例并不是要对本发明的范围进行限制。
V.与DAPD结合的利巴韦林在体外对利巴韦林(RBV)对抗HIV-1的活性进行分析，同时对其在体外对两种dGTP类似物——DAPD和DXG的抗HIV活性的影响进行了分析。还用实验室适应的细胞系MT2和外周血液单核细胞(PBMC)对RBV的细胞毒性进行了评估。RBV是一种酶——IMP脱氢酶的抑制剂。这种酶是细胞在进行GTP的重新合成时所用途径的一部分。
细胞毒性试验用以XTT为基础的试验对RBV对实验室适应的T-细胞系MT2和PBMC的细胞毒性进行了试验。XTT(2，3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-sulfoxy苯基)-5[(苯基氨基)羰基]-2H-四唑鎓氢氧化物)试验是一种体外比色的细胞-保护试验。由线粒体脱氢酶所进行的XTT的还原导致了XTT的四唑鎓环的裂解，产生了一种可溶解于水性溶液中的橙色的甲结晶。将所得的橙色溶液在450nM波长下用一种分光光度计进行读数。以100mM的最终浓度制备在100％DMSO中的RBV。对于该细胞毒性试验而言，用细胞培养物介质(添加有10％胎牛血清、L-谷氨酰胺1mg/ml和20ug/ml庆大霉素的RPMI)制备2mM的RBV溶液，然后向96孔板中加入一系列2倍的稀释溶液。以3×104/孔(MTX)和2×105/孔(PBMC)的数量将细胞加入到板中，然后将该板在37℃下在5％CO2孵化器中培养5天(向板中进行了稀释的化合物中加入细胞获得最终1mM的高浓度)。在该5-天的培养结束时，向各孔中加入XTT，然后将其在37℃下培养3小时，然后再向其中加入酸化的异丙醇。将该板用96孔板读数器在450nm下进行读数。用在不存在化合物情况下所生长细胞的吸收值作为100％保护来获得一条剂量响应曲线。
在这些试验中，在最高至1mM的浓度下RBV是无毒的，表1。
表1.RBV的细胞毒性
灵敏度试验XXT试验用实验室适应的细胞系MT2对RBV对抗HIV-1的xxLAI菌株的活性进行了试验。在96孔板中用细胞培养介质来制备RBV的稀释液；最高试验浓度为100μM。将该化合物的样品一式三份地进行试验。将MT2细胞用xxLAI在0.03的多重感染(MOI)下在37℃下在5％CO2中感染3小时。将被感染的细胞以3.0×104/孔的数量接种到该包含药物稀释液的96孔板中，然后将其在37℃下在CO2中培养5天。用如上所述的XTT试验对RBV的抗病毒活性进行测定。这种方法已经被修改成一种敏感性试验，并且已被用于各种体外抗病毒试验中，其可容易地适用于任何使用一种裂解病毒的体系(Weislow，O.S.，等人，1989)。用细胞对照的吸收值作为100％保护和没有药物存在时的数值，用被病毒感染的细胞作为0％保护，通过用Y轴上的保护％对X轴上的药物浓度作图来获得一条剂量响应曲线。从这条曲线可以测得EC50值。
在这些试验中，在任何试验浓度下RBV都没有对抗HIV-1的活性。
P24 Assay还用以p24为基础的ELISA试验对RBV对抗在PBMCs中HIV-1的xxLAI菌株的活性进行了试验。在这种试验中，将细胞上清液在用HIy-1 p24核抗原的抗体进行了涂布的酶联免疫吸附测定微(microelisa)孔中进行培养。随后，向其中加入用辣根过氧化物酶进行了标记的抗HIV-1共轭物。将该进行了标记的抗体结合到预先形成的固相抗体/抗原复合体上。向其中加入四甲基联苯胺反应物会出现蓝色。当该反应停止时，其颜色会变成黄色。然后将该板用平板读数器在490nm下进行分析。该吸收度是对各孔中所产生的HIV-1数量的直接测定，颜色变浅表示病毒的生成下降。在96孔板用细胞培养介质制备RBV的稀释液，所试验的RBV的最高浓度为100μM。通过将得自HIV-1阴性供血者的血液与Ficoll梯度进行结合来获得PBMC，在用HIV-1进行感染前将其用植物凝集素(phytohemaglutinin)(PHAP)刺激48小时，然后用病毒在37℃下用0.001的MOI感染4小时。将被感染的细胞接种到包含一系列稀释了5倍的RBV的96孔板中。将板在37℃下培养3天。用NEN p24试验来测定各孔中的病毒浓度。用细胞对照物的吸收值作为100％保护并不含药物时的值，病毒感染的细胞作为0％保护，通过用Y轴上的保护百分比对X轴的药物浓度作图来获得一条剂量响应曲线。从该曲线可以测得EC50值。
RBV抑制了在PBMCS中的HIV-1复制，EC50的中值为20.5μM±11.8。
联合试验用如上所述的MT2/XTT和PBMC/p24试验对RBV对DAPD和DXG的体外抗HIV-1活性的影响进行了评估。还对RBV对Abacavir和AZTD活性的影响进行了分析。
MT2/XTT试验联合试验是用各种浓度的DAPD、DXG、Abacavir和AZT单独使用或与固定浓度的RBV一起使用来进行的。在96孔板中用如下的药物浓度来完成试验化合物的5倍系列稀释DAPD 100μM、DXG 50μM、Abacavir 20μM和AZT 10μM。所用RBV的浓度为1、5、10、20、40和60μM。试验是用如上所述的在XXT灵敏度试验部分中的MT2细胞系来完成的。在这些试验中发现加入带有如上所列的化合物的40和60μM的RBV是有毒性的，因此，在存在和不存在1、5、10和20μM RBV的情况下测定了这些化合物的EC50值(表2)。
表2.用MT2细胞进行的RBV对DAPD、DXG、Abacavir和AZT的抗病毒活性的影响EC50的均值(μM)
a＝平行测定的数目加入1、5、10和20μM的RBV降低了DAPD和DXG所获得的EC50值。表3列出了与RBV结合使用的各化合物所得的EC50值的差异倍数。
表3.在MT2细胞中与RBV合用的EC50值的差异倍数
加入20μM RBV对DAPD和DXG的抗病毒活性具有最大的影响，分别将表观EC50值降低了14.2倍和12倍。加入RBV对Abacavir的活性没有影响(表观EC50的差异小于2倍)。加入20μM RBV使得AZT表观EC50增加了6倍以上，这表明该组合物在HIV的抑制上是相拮抗的。虽然比使用较高浓度的RBV时所观察到结果的程度小，但添加1、5和10μM RBV时也获得了类似的结果。
对DAPD有抗药性的HIV-1突变体还对RBV对DAPD和DXG对抗HIV突变菌株的活性的影响进行了分析(表4)。所分析的耐药菌株包括通过直接定位诱变所产生的病毒——K65R和L74V，还包括包含在一些位置上突变的重组病毒——98S、116Y、151M和215Y。为了进行比较，还分析了产生了这些突变的野生型主链——xxLAI。所试验的DAPD和DXG的浓度同上面在MT2/XTT联合试验部分所述的浓度一样。与DAPD和DXG结合的RBV是在20μM的固定浓度下进行试验的。所试验的突变病毒对DAPD和DXG都表现出增加的EC50值(高于4倍)，这表明了其对这些化合物的抗药性。加入20μM RBV降低了DAPD和DXG对抗这些病毒的EC50值。在存在20μMRBV的情况下所测得的DAPD和DXG的EC50值比这些用野生型病毒获得的结果至少低2.5倍。将这些结果概括地列于表4中。
表4.RBV对DAPD和DXG抗病毒活性的影响抗药性病毒EC50值(μM)
a[RBV]＝20μMb表示得自WT的倍数差异PBMC/p24试验还在PBMCs中通过单独使用各种浓度的DAPD、DXG、Abacavir和AZT以及与固定浓度的RBV联合使用各种浓度的DAPD、DXG、Abacavir和AZT来进行了联合试验。化合物稀释液和试验条件如上所述。所用RBV的浓度为1、5、10、20、40和60μM。在这些试验中发现与如上所列的化合物一起加入40和60μM的RBV是有毒性的。将在存在和不存在1、5、10和20μM RBV的情况下所测得的化合物的EC50如表5所示。
表5.RBV对DAPD、DXG、Abacayir和AZT在PMBCs中抗病毒活性的影响EC50均值(μM)
a＝平行试验的数目加入1μM RBV可略微降低(少于3倍)DAPD和DXG以及Abacvir的EC50，但是其对AZT的EC50值没有影响。随着RBV浓度的增加，这些影响变得更加显著。表6表明了与1、5、10和20μM的RBV结合使用时所得各化合物EC50值的差异倍数。
表6.使用RBV时EC50值差异倍数
RBV抑制了HIV-1在PBMCs中的复制，EC50为20.5μM。利巴韦林在最高至1mM的浓度下对这些细胞无毒，这使其产生了一种＞48的治疗指数。在所有的试验浓度下向DAPD、DXG和Abacavir中加入20μM RBV都可以完全抑制PBMCs中的HIV-1复制，但是对AZT的活性几乎没有影响。加入较低浓度的RBV也对DAPD、DXG和Abacavir的活性有显著影响。在MT2细胞系中，RBV没有对抗HIV复制的活性。加入20μM RBV可以分别将DAPD和DXG的表观EC50降低14.2和12-倍。加入20μM RBV对于Abacavir的活性没有影响，并且可以使AZT的表观EC50增加6倍，这表明该联合对于HIV抑制的拮抗作用。虽然比使用较高浓度的RBV时所观察到结果的程度小，但添加5和10μM RBV时用MTSs也获得了类似的结果。当用HIV-1的突变菌株进行试验时，20μM RBV与DAPD或DXG联合可以将这些化合物的EC50值降低至低于用野生型病毒所观察到的结果的水平上，即之前具有抗药性的病毒菌株现在对于DAPD和DXG的抑制作用敏感。Weislow，O.S.，R.Kiser，D.L.Fine，J.Bader，R.H.Shoemaker，和M.R.Boyd.1989。用于HIV-1细胞病变的新的可溶解的甲试验用于对合成和天然产品AIDS抗病毒活性的高通量筛选。J.of NCI.81577-586。
VI.与DAPD联合的霉酚酸在体外对霉酚酸(MPA)对抗HIV-1的活性以及其对两种dGTP类似物——DAPD和DXG的体外抗HIV活性的影响进行了分析。还用实验室适应的细胞系MT2和外周血液单核细胞(PBMC)对MPA的细胞毒性进行了评估。MPA是一种酶——IMP脱氢酶的抑制剂。这种酶是细胞在进行GTP的重新合成时所用途径的一部分。还用Abacavia、AZT和FTC进行了联合试验。
细胞毒性试验用以XTT为基础的试验对MPA对实验室适应的T-细胞系MT2和PBMC的细胞毒性进行了试验。XTT(2，3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5[(苯基氨基)羰基]-2H-四唑鎓氢氧化物)试验是一种体外比色的细胞-保护试验。由线粒体脱氢酶所进行的XTT的还原导致了XTT的四唑鎓环的裂解，产生了一种可溶解于水性溶液中的橙色的甲结晶。将所得的橙色溶液在450nM波长下用一种分光光度计进行读数。以100mM的最终浓度制备在100％DMSO中的MPA。对于该细胞毒性试验而言，用细胞培养物介质(添加有10％胎牛血清、L-谷氨酰胺1mg/ml和20ug/ml庆大霉素的RPMI)制备200μM的MAP溶液，然后向96孔板中加入一系列稀释2倍的溶液。以3×104/孔(MTX)和2×105/孔(PBMC)的数量将细胞加入到板中，然后将该板在37℃下在5％CO2孵化器中培养5天(向板中进行了稀释的化合物中加入细胞获得最终100μM的高浓度)。在该5-天的培养结束时，向各孔中加入XTT，然后将其在37℃下培养3小时，然后再向其中加入酸化的异丙醇。将该板用96孔板读数器在450nm下进行读数。用不存在化合物情况下所生长细胞的吸收值作为100％保护来获得一条剂量响应曲线。
在两种细胞系中MPA都是无毒的，在MT2细胞系中50％细胞毒性剂量(CC50)为5.7μM，在PBMC中为4.5μM。见表7。
表7.MPA的细胞毒性
灵敏度试验XXT试验用实验室适应的细胞系MT2对MPA对抗HIV-1的xxLAI菌株的活性进行了试验。在96孔板中用细胞培养介质来制备MPA的稀释液；最高试验浓度为1μM。将该化合物的样品一式三份地进行试验。将MT2细胞用xxLAI在0.03的多重感染(MOI)下在37℃下在5％CO2中感染3小时。将被感染的细胞以3.0×104/孔的数量接种到该包含药物稀释液的96孔板中，然后将其在37℃下在CO2中培养5天。用如上所述的XTT试验对MPA的抗病毒活性进行测定。这种方法已经被修改成一种敏感性试验，并且已用于各种体外抗病毒试验中，其可容易地适用于任何使用一种裂解病毒的体系(Weislow，O.S.，等人，1989)。用细胞对照的吸收值作为100％保护和没有药物存在时的数值，用被病毒感染的细胞作为0％保护，通过用Y轴上的保护％对X轴上的药物浓度作图来获得一条剂量响应曲线。从这条曲线可以测得EC50值。在这些试验中，在任何试验浓度下MPA都没有对抗HIV-1的活性。
P24 Assay还用以p24为基础的ELisa试验对MPA对抗在PBMCs中HIV-1的xxLAI菌株的活性进行了试验。在这种试验中，将细胞上清液在用HIV-1 p24核抗原的抗体进行了涂布的酶联免疫吸附测定微孔中进行培养。随后，向其中加入用马辣根过氧化物酶进行了标记的抗HIV-1共轭物。将该进行了标记的抗体结合到预先形成的固相抗体/抗原复合体上。向其中加入四甲基联苯胺反应物会出现蓝色。当该反应停止时，其颜色会变成黄色。然后将该板用平板读数器在490nm下进行读数。该吸收度是对各孔中所产生的HIV-1数量的直接测定，颜色变浅表示病毒的生成下降。在96孔板用细胞培养介质制备MPA的稀释液，所试验的RBV的最高浓度为1μM。通过将得自HIV-1阴性供血者的血液与Ficoll梯度进行结合来获得PBMC，在用HIV-1进行感染前将其用植物凝集素(PHAP)刺激48小时，然后用病毒在37℃下用0.001的MOI感染4小时。将被感染的细胞接种到包含一系列稀释了4倍的MPAV的96孔板中。将板在37℃下培养3天。用NEN p24试验来测定各孔中的病毒浓度。用细胞对照物的吸收值作为100％保护和不含药物时的值，病毒感染的细胞为0％保护，通过用Y轴上的保护％对X轴的药物浓度作图来获得一条剂量响应曲线。从该曲线可以测得EC50值。
MPA抑制了在PBMCS中的HIV-1复制，EC50的中值为95nM±29。
联合试验用如上所述的MT2/XTT和PBMC/p24试验对MPA对DAPD和DXG的体外抗HI V-1活性的影响进行了评估。还对MPA对Abacavir、AZT和FTC活性的影响进行了分析。
MT2/XTT试验联合试验是用各种浓度的DAPD、DXG、Abacavir、AZT和FTC单独使用或与固定浓度的MPA一起使用来进行的。在96孔板中用如下的药物浓度来完成试验化合物的5倍系列稀释DAPD-100μM、DXG-50μM、Abacavir-20μM和AZT-10μM、以及FTC-10μM。所用MPA的浓度为1、0.5、0.25、0.1和0.01μM。试验是用3.1部分中所述的MT2细胞系来完成的。在这些试验中发现加入带有如上所列的化合物的1和0.5μM的MPA是有毒性的，因此，在存在和不存在0.25、0.1和0.01μM MPA的情况下测定了这些化合物的EC50值(表8)。
表8.用MT2细胞进行的MPA对DAPD、DXG、Abacavir、AZT和FTC的抗病毒活性的影响EC50的均值(μM)
a＝平行测定的数目加入0.01μM的MPA对于这些化合物中任何一种的EC50值都没有影响。表9列出了与0.1和0.25μM MPA结合使用的各化合物所得EC50值的差异倍数。
表9.在MT2细胞中与MPA合用的EC50值的差异倍数
加入0.25μM MPA对DAPD和DXG的抗病毒活性具有最大的影响，分别将其表观EC50值降低了16.7倍和10.5倍。加入0.25μM MPA对Abacavir和FTC的活性几乎没有影响，表观EC50的下降小于2倍，并且使得AZT的表观EC50增加了2.3倍，这表明该组合物在HIV的抑制上是相拮抗的。虽然比使用较高浓度的MPA时所观察到结果的程度小，但添加0.1μM MPA时也获得了类似的结果。
对DAPD有抗药性的HIV-1突变体还对MPA对DAPD和DXG对抗HIV突变菌株的活性的影响进行了分析(表10)。所分析的耐药菌株包括通过直接定位诱变所产生的病毒——K65R和L74V，还包括包含在一些位置上突变的重组病毒——98S、116Y、151M和215Y。为了进行比较，还对其主链中产生了这些突变的野生型主链——xxLAI进行了分析。所试验的DAPD和DXG的浓度同4.1部分中所述的浓度一样。与DAPD和DXG结合的MPA是在0.25μM的固定浓度下进行试验的。DAPD和DXG具有对抗所试验的所有HIV野生型菌株的活性。所试验的突变病毒对DAPD和DXG都表现出增加的EC50值，这表明了其对这些化合物的抗药性。加入0.25μM MPA降低了DAPD和DXG对抗这些病毒的EC50值。在存在0.25μM MPA的情况下所测得的DAPD和DXG的这些值类似于这些用野生型病毒获得的结果。
表10.MPA对DAPD和DXG抗病毒活性的影响抗药性病毒EC50值(μM)
a[MPA]＝0.25μMb表示得自WT的倍数差异PBMC/p24试验还在PBMCs中通过单独使用各种浓度的DAPD、DXG、Abacavir、AZT和FTC以及与固定浓度的MPA联合使用各种浓度的DAPD、DXG、Abacavir、AZT和FTC来进行了联合试验.化合物稀释液和试验条件如上所述。所用MPA的浓度为1、0.5、0.25、0.1和0.01μM。在这些试验中发现与如上所列的化合物一起加入1和0.5μM的MPA是有毒性的。将在存在和不存在0.25、0.1和0.01μM MPA的情况下所测得的化合物的EC50如表11所示。
表11.MPA对DAPD、DXG、Abacavir、AZT、和FTC在PMBCs中抗病毒活性的影响EC50均值(μM)
a＝平行试验的数目加入0.01μM MPA可降低DAPD和DXG的EC50，但是其对Abacavir、AZT和FTC的EC50值没有影响(EC50的改变小于2倍)。加入0.1和0.25μM MPA可降低DAPD、DXG以及Abacavir的EC50，但是其对AZT和FTC的EC50值没有影响。表12表明了与0.01、0.1和0.25μM的MPA结合使用时所得各化合物EC50值的差异倍数。
表12.使用MPA时EC50值差异倍数
霉酚酸抑制了HIV-1在PBMCs中的复制，EC50为0.095μM。在这些细胞中所得MPA的CC50值为4.5μM，这使其治疗指数为47。在所有的试验浓度下向DAPD、DXG和Abacavir中加入0.25μM MPA可以完全抑制HIV在PBMCs中的复制，但是其对AZT和FTC的活性几乎没有影响(EC50的改变小于2倍)。加入较低浓度的MPA也对DAPD、DXG的活性有显著影响，但是对Abacavir、AZT和FTC的活性几乎没有影响。在MT2细胞系中，MPA没有对抗HIV复制的活性。加入0.25μMMPA可以分别将DAPD和DXG的表观EC50降低16.7和10.5倍。加入0.25μM MPA对Abacavir和FTC的活性几乎没有影响，并且可以将AZT的表观EC50增加2.3倍，这表明其对HIV的抑制作用是拮抗的。虽然比使用较高浓度的MPA时所观察到结果的程度小，但添加0.1μM MPA时用MT2也获得了类似的结果。当用HIV-1的突变菌株进行试验时，与DAPD或DXG联合使用0.25μM的MPA可以将这些化合物的EC50值降低至低于用野生型病毒所观测到的结果，即之前具有抗药性的病毒菌株现在对DAPD和DXG的抑制作用敏感。
在PBMCs中DXG-TP的浓度在外周血液单核细胞(PBMC)中对霉酚酸对DXG-三磷酸酯(DXG-TP)细胞内浓度的影响进行了评估。PBMC得自HIV-1阴性供血者，前将其用植物凝集素进行刺激，然后在37℃下用另外添加了各种浓度的DXG(5μM或50μM)的完全介质在存在或不存在0.25μM霉酚酸的情况下进行培养。在培养48或72小时后对PBMC进行收集，然后用如下所述的LC-MS-MS法对细胞内的DXG-TP水平进行测定。与单独用DXG进行培养的细胞中的水平相比，加入0.25μM霉酚酸将细胞内DXG-TP的中值浓度增加了1.7倍。
对得自外周血液单核细胞的DXG-TP进行分析所用的生物分析法使用离子对固相萃取(SPE)和偶合了电喷射离子化(ESI)质谱的离子对HPLC。将包含大约0.5×107个细胞的成团的PBMC样品用包含内标(2′，3′-二脱氧胞嘧啶核苷-5′-三磷酸酯(ddCTP))和DXG-TP的溶液机械稀释，然后在C-18药筒上用离子对SPE对ddCTP进行选择性萃取。采用使用Waters Xterra MS C18分析柱的微内径离子对HPLC对DXG-TP和ddCTP进行分离，其保留时间约为10分钟。在MicromassQuattro LC三倍四级质谱仪上通过ESI-MS/MS以阳离子方式对感兴趣的化合物进行检测。
在分析DXG-TP PBMC样品时，用六个点，1/x2的权重，二次方程校准曲线，0.008至1.65pmoles/106细胞的范围来对样品进行定量。一般在各分析流程中，在两个浓度下(0.008和1.65pmoles/106细胞)一式两份地对定性控制(QC)的样品进行分析以检测该方法的精密度。
该生物分析方法的可再现的提取效率大约为80％。定量限(LOQ)为0.008pmoles/106细胞。测定范围为0.008至1.65pmoles/106细胞。
已经参考其优选的实施方案对本发明进行了描述。从本发明前面的详细描述来看，本发明的各种变化和修改对于现有技术中的技术人员而言都是显而易见的。所有这些变化和修改都包括在本发明的范围内。
权利要求
1.一种用于治疗或预防宿主中HIV感染的药物组合物，其包含与至少一种肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂结合的有效量的如下式所示的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，包括磷脂、或一种醚-脂，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-腺嘌呤(DAPD)。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-鸟嘌呤(DXG)。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的组合物，其中所说的IMPDH抑制剂选自利巴韦林、霉酚酸、苯甲酰胺核糖核苷、噻唑呋林、硒利那唑呋啉、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-羧酰胺(EICAR)和(S)-N-3-[3-(3-甲氧基-4-噁唑-5-基-苯基)-脲基]-苄基-氨基甲酸四氢呋喃-3-基-酯(VX-497)。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所说的IMPDH抑制剂是霉酚酸。
6.如权利要求4所述的组合物，其中所说的IMPDH抑制剂是利巴韦林。
7.如权利要求1-6所述的组合物，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是对映体富集的。
8.如权利要求1所述的在可药用载体中的适宜口服进行传递的组合物。
9.如权利要求1所述的在可药用载体中的适宜静脉内进行传递的组合物。
10.如权利要求1所述的在可药用载体中的适宜非肠道进行传递的组合物。
11.如权利要求1所述的在可药用载体中的适宜局部进行传递的组合物。
12.如权利要求1所述的在可药用载体中的适宜全身进行传递的组合物。
13.一种治疗或预防宿主中的HIV感染的抗药性菌株的方法，该方法包括与一种肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合或交替使用有效量的如下式所示的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
14.如权利要求13所述的方法，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-腺嘌呤(DAPD)。
15.如权利要求13所述的方法，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-鸟嘌呤(DXG)。
16.如权利要求13-15中任意一项所述的方法，其中所说的IMPDH抑制剂选自利巴韦林、霉酚酸、苯甲酰胺核糖核苷、噻唑呋林、硒利那唑呋啉、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-羧酰胺(EICAR)和(S)-N-3-[3-(3-甲氧基-4-噁唑-5-基-苯基)-脲基]-苄基-氨基甲酸四氢呋喃-3-基-酯(VX-497)。
17.如权利要求16所述的方法，其中所说的IMPDH抑制剂是霉酚酸。
18.如权利要求16所述的方法，其中所说的IMPDH抑制剂是利巴韦林。
19.如权利要求16所述的方法，其中所说的HIV感染对于DAPD和/或DXG具有抗药性。
20.如权利要求13-19中任意一项所述的方法，其中所说的宿主是人。21.一种治疗或预防宿主中HIV感染的方法，该方法包括与一种肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合或交替使用有效量如下式所示的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
22.如权利要求21所述的方法，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-腺嘌呤(DAPD)。
23.如权利要求21所述的方法，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-鸟嘌呤(DXG)。
24.如权利要求21-23中任意一项所述的方法，其中所说的IMPDH抑制剂选自利巴韦林、霉酚酸、苯甲酰胺核糖核苷、噻唑呋林、硒利那唑呋啉、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-羧酰胺(EICAR)和(S)-N-3-[3-(3-甲氧基-4-噁唑-5-基-苯基)-脲基]-苄基-氨基甲酸四氢呋喃-3-基-酯(VX-497)。
25.如权利要求24所述的方法，其中所说的IMPDH抑制剂是霉酚酸。
26.如权利要求24所述的方法，其中所说的IMPDH抑制剂是利巴韦林。
27.如权利要求21-26中任意一项所述的方法，其中所说的宿主是人。
28.与一种肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合或交替使用的有效量的如下式所示的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物在医学治疗中的应用 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
29.与一种或多种有效的肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合或交替使用的有效量的如下式所示的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物在预防或治疗宿主中HIV感染中的应用 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
30.与一种或多种有效的肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂联合或交替使用的有效量的如下式所示的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤或其可药用的盐或前体药物在制备治疗或预防宿主中HIV感染的药物中应用 其中R是H、OH、Cl、NH2或NR1R2；R1和R2分别是氢、烷基或环烷基，并且R3是H、烷基、芳基、酰基、磷酸酯，包括一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯或一个稳定的磷酸酯部分，其可任选地位于一种可药用的载体或稀释剂中。
31.如权利要求29或30中任意一项所述的应用，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-2-氨基-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-腺嘌呤(DAPD)。
32.如权利要求29或30中任意一项所述的应用，其中所说的β-D-1，3-二氧戊环基嘌呤是(-)-(2R，4R)-9-[(2-羟基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-鸟嘌呤(DXG)。
33.如权利要求29或30中任意一项所述的应用，其中所说的至少一种IMPDH抑制剂选自利巴韦林、霉酚酸、苯甲酰胺核糖核苷、噻唑呋林、硒利那唑呋啉、5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-羧酰胺(EICAR)和(S)-N-3-[3-(3-甲氧基-4-噁唑-5-基-苯基)-脲基]-苄基-氨基甲酸四氢呋喃-3-基-酯(VX-497)。
34.如权利要求29或30所述的应用，其中所说的IMPDH抑制剂是霉酚酸。
35.如权利要求29或30所述的应用，其中所说的IMPDH抑制剂是利巴韦林。
36.如权利要求29或30所述的应用，其中所说的HIV感染对DAPD有抗药性和/或对DXG-有抗药性。
37.如权利要求29-36中任意一项所述的应用，其中所说的宿主是人。
全文摘要
已经出乎意料地发现当联合使用β－D－1，3－二氧戊环基核苷和IMPDH抑制剂时HIV的抗药性菌株表现出第一次用药物进行试验时的病毒行为。在一个非限制性的实施方案中，该HIV菌株对β－D－1，3－二氧戊环基核苷具有抗药性。
文档编号A61K31/365GK1501828SQ01822643
公开日2004年6月2日 申请日期2001年12月12日 优先权日2000年12月15日
发明者P·A·福尔曼, K·博罗托－埃索达, P A 福尔曼, 尥 埃索达 申请人:三角药品公司