专利名称：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物配制方法及制剂的制作方法
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物配制方法及制剂技术领域：
本发明涉及一种室内质控物，尤其涉及一种测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性的室内质控物。背景技术：
葡萄糖_6_ 憐酸脱氧酶(glucose-6-phosphatase dehydrogenase, G-6-PD)缺乏症为红细胞内该酶显著缺乏所致的一种遗传性疾病，俗称蚕豆病。其主要临床表现是溶血性贫血。
本病发生溶血的机制尚未完全明了，目前认为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是红细胞葡萄糖磷酸戊糖旁路代谢中所必需的脱氢酶，它使6-磷酸葡萄糖释出H+，从而使氧化型辅酶II(NADP+)还原成还原型辅酶II (NADPH)，NADPH是红细胞内抗氧化的重要物质，它能使红细胞细胞内的氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)和维持过氧化氢酶 (Catalase7Cat)的活性。Cat是过氧化氢(H202)还原成水的还原酶。GSH的主要作用是 ①保护红细胞内含巯基(-SH)的血红蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性，避免H202对含-SH 物质的氧化。②与谷胱甘肽过氧化氢(GSHPX)共同使H202还原成水。葡萄糖_6_磷酸脱氢酶缺乏时，NADPH生成不足，Cat和GSH减少。因此，当机体受到氧化物侵害时，氧化作用产生的H202不能被及时还原成水，过多的H202作用于含-SH的血红蛋白、膜蛋白和酶蛋白致血红蛋白和膜蛋白均发生氧化损伤。血红蛋白氧化成高铁血红蛋白和变形珠蛋白小体 (Heinzbody),红细胞膜的过氧损伤则致膜脂质和膜蛋白巯基的氧化,上述作用最终造成细胞的氧化损伤和溶血。
测定红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性是诊断本病的主要手段。
2006年卫生部颁布j的《医疗机构临床实验室管理办法》第二十五条规定“医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验项目进行室内质量控制，绘制质量控制图”。目前， 多数定量检测(如谷丙转氨酶活性测定等)已有商品化质控物，但葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定没有商品化质控物，如不自行配制就难以开展室内质控。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法及制剂
本发明是通过以下技术方案来实现的
所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法，包括如下步骤
(I)配制咪唑缓冲液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2 -2H20)、酶保护剂、叠氮钠适量，溶于900ml蒸馏水中，用lmol/L醋酸调节pH至7. 4，加蒸馏水稀释至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物取上述咪唑缓冲液三份，分别加入适量葡萄糖-6-磷酸脱氢酶至终浓度约为6000U/L、3000U/L、1000U/L。
(3)分装与保存将葡萄糖-6-磷酸脱氢酶质控物分装至一次性塑料离心管，置-20°C冰箱保存。
高浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为
咪唑(g)3. 4 至 34;
EDTANa2 · 2H20 (g) O. 93 至 9. 3 ;
酶保护剂(g) 5至20;
叠氮钠(g)I 至 10;
G-6-PD (U) 5000-7000 ；
lmol/L 醋酸调 pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
中浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为
咪唑(g)3. 4 至 34;
EDTANa2 · 2H20 (g) O. 93 至 9. 3 ;
酶保护剂(g) 5至20 ;
叠氮钠(g)I 至 10 ;
G-6-PD(U)2000-4000 ；
lmol/L 醋酸调 pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
低浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为
咪唑(g)3. 4 至 34 ;
EDTANa2 · 2H20 (g) O. 93 至 9. 3 ;
酶保护剂(g) 5至20;
叠氮钠(g)I 至 10 ;
G-6-PD(U)500-1500 ；
lmol/L 醋酸调 pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000。
本发明的有益效果在于本发明可作为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定的室内质控物，既可监测相应试剂在流通、保存、使用过程中是否出现变质，还可监测仪器设备的运行状况，这既是法规的要求，更是实际工作的迫切需要，本发明制备的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物均一性好，管间差异小于2%，本发明制备的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物中均含有防腐剂和酶保护剂，在低温保存条件下，有效期大于一年。
具体实施方式
下面根据具体实施方式
对本发明做进一步描述
实施例I :
所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法，包括如下步骤
(I)配制咪唑缓冲液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2 -2H20)、酶保护剂、叠氮钠适量，溶于900ml蒸馏水中，用lmol/L醋酸调节pH至7. 4，加蒸馏水稀释至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高浓度质控物取上述咪唑缓冲液三份，分别加入适量葡萄糖-6-磷酸脱氢酶至终浓度约为6000U/L。4
(3)分装与保存将葡萄糖-6-磷酸脱氢酶质控物分装至一次性塑料离心管，置-20°C冰箱保存。
高浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为
咪唑(g)3.4 ;
EDTANa2 · 2H20(g) O. 93 ；
酶保护剂(g) 5 ；
叠氮钠(g) I ;
G-6-PD(U)5000 ；
lmol/L醋酸调pH至7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
使用本发明的高值质控物开展葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定室内质控一年，累积均值为6017U/L，累积标准差为175. 7U/L，累积CV值为2. 92%。
实施例2
所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法，包括如下步骤
(I)配制咪唑缓冲液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2 ·2Η20)、酶保护剂、叠氮钠适量，溶于900ml蒸馏水中，用lmol/L醋酸调节pH至7. 4，加蒸馏水稀释至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶中浓度质控物取上述咪唑缓冲液三份，分别加入适量葡萄糖-6-磷酸脱氢酶至终浓度约为3000U/L。
(3)分装与保存将葡萄糖-6-磷酸脱氢酶质控物分装至一次性塑料离心管，置-20°C冰箱保存。
中浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为
咪唑(g) 18 ；
EDTANa2 · 2H20(g) 4. 5 ；
酶保护剂(g) 12 ;
叠氮钠(g) 5 ；
G-6-PD(U)3000 ；
lmol/L醋酸调pH至7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
使用本发明的中值质控物开展葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定室内质控一年，累积均值为2976U/L,累积标准差为103. 3U/L，累积CV值为3. 47%.
实施例3
所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法，包括如下步骤
(I)配制咪唑缓冲液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2 ·2Η20)、酶保护剂、叠氮钠适量，溶于900ml蒸馏水中，用lmol/L醋酸调节pH至7. 4，加蒸馏水稀释至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶低浓度质控物取上述咪唑缓冲液三份，分别加入适量葡萄糖-6-磷酸脱氢酶至终浓度约为1000U/L。
(3)分装与保存将葡萄糖-6-磷酸脱氢酶质控物分装至一次性塑料离心管，置-20°C冰箱保存。
低浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为
咪唑(g)34;
EDTANa2 · 2H20 (g) 9. 3 ；
酶保护剂(g) 20 ；
叠氮钠(g)10 ；
G-6-PD(U) 1500 ；
lmol/L 醋酸调 pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000。
使用本发明的低值质控物开展葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定室内质控一年，累积均值为1038U/L,累积标准差为50. 3U/L，累积CV值为4. 85%。
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式
，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。
权利要求
1.一种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法，其特征在于包括如下步骤 (1)配制咪唑缓冲液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2· 2H20)、酶保护剂、叠氮钠适量，溶于900ml蒸馏水中，用lmol/L醋酸调节pH至7. 4，加蒸馏水稀释至IL ； (2)配制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物取上述咪唑缓冲液三份，分别加入适量葡萄糖-6-磷酸脱氢酶至终浓度约为6000U/L、3000U/L、1000U/L ； (3)分装与保存将葡萄糖-6-磷酸脱氢酶质控物分装至一次性塑料离心管，置_20°C冰箱保存。
2.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂，其特征在于高浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为 咪唑(g) 3. 4至34;EDTANa2 · 2H20(g)O. 93 至 9. 3 ; 酶保护剂(g) 5至20 ; 叠氮钠(g) I至10 ;G-6-PD(U)5000-7000 ；lmol/L醋酸调pH至7. 4 ;H20(ml) 1000 ； 中浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为 咪唑(g) 3. 4至34;EDTANa2 · 2H20(g)O. 93 至 9. 3 ; 酶保护剂(g) 5至20 ; 叠氮钠(g) I至10 ;G-6-PD(U)2000-4000 ；lmol/L醋酸调pH至7. 4 ;H20(ml) 1000 ； 低浓度葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物制剂的成份为 咪唑(g) 3. 4至34;EDTANa2 · 2H20(g)O. 93 至 9. 3 ; 酶保护剂(g) 5至20 ; 叠氮钠(g) I至10 ;G-6-PD(U)500-1500 ；lmol/L醋酸调pH至7. 4 ;H20(ml)1000。
全文摘要
本发明提供了一种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定质控物的配制方法，包括如下步骤(1)配制咪唑缓冲液(2)配制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物；(3)分装与保存，本发明的有益效果在于本发明可作为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定的室内质控物，既可监测相应试剂在流通、保存、使用过程中是否出现变质，还可监测仪器设备的运行状况，这既是法规的要求，更是实际工作的迫切需要，本发明制备的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物均一性好，管间差异小于2％，本发明制备的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶高、中、低浓度质控物中均含有防腐剂和酶保护剂，在低温保存条件下，有效期大于一年。
文档编号C12Q1/32GK102925536SQ20121043462
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月2日 优先权日2012年11月2日 公开号201210434626.发明者刘和录, 袁咏梅, 吴雄君, 窦宇红, 华建江, 汪奇云 申请人:刘和录