专利名称：一种毛冬青冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种毛冬青冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
毛冬青为冬青科植物毛冬青的干燥根，是我国南方常用中药，具有活血通脉、消肿止痛、清热解毒之功效，临床上广泛用于治疗冠心病、心绞痛和脉管炎等疾病。文献报道，毛冬青中所含的黄酮类化合物是主要有效成分。已上市的有毛冬青片、毛冬青胶囊和毛冬青注射液，其中所含的主要有效成分均为黄酮类化合物。片剂、胶囊剂、注射液(WS3-B-3786-98)和复方毛冬青注射液(CN93114604，用于治疗各种病毒性疾病)制备方法中对毛冬青均采用水提醇沉方法进行提取，除杂的各步由于沉淀的吸附、包裹，对于有效成分的损失很大。申请号为CN00127593的专利申请文献中虽然经过处理使得制成的提取物中总黄酮和总皂苷的含量大于或等于50％，但是用于治疗勃起功能障碍等症。对于心血管疾病的治疗来说，其中所含的总皂苷为非活性成分，应该除去不要。而且大量皂苷的存在，限制了药物不能用于静脉注射，因为皂苷可以使红细胞破裂，造成溶血或红细胞凝聚(即凝血)的现象，给机体带来严重的危害。注射液对稳定性要求高，在携带、储藏、运输时容易破碎，带来许多麻烦。
在资料检索中未发现有关毛冬青冻干粉针剂的任何报道。
发明内容
本发明的目的是公开一种富含活性成分、疗效好、副作用小、方便使用的可用于肌内注射或静脉注射的毛冬青冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。
毛冬青中除含有有效成分总黄酮外，还含有大量的鞣质。鞣质若不去除，会在注射时使患者有疼痛的感觉，使病人难于接受。但是鞣质和黄酮都含有羟基，性质相似，若用普通的除去鞣质的方法，在除去鞣质的同时，使黄酮类有效成分损失很多。鞣质的分子量普遍较大，而黄酮类化合物的分子量较小，利用超滤法，选择合适的分子筛可以除去大部分的鞣质而对黄酮类化合物几乎没有损失。毛冬青提取物经聚酰胺柱吸附，用水洗脱后，柱上吸附的主要是黄酮类化合物和皂苷类化合物，利用聚酰胺对黄酮类化合物和皂苷类化合物的吸附能力的不同，选用合适的洗脱溶剂可以除去大量的皂苷类成分。然后再用碱液洗脱，最终得到以总黄酮为有效部位的提取物。
本发明通过以下技术方案实现。
一、制备方法(1)原料药的处方为毛冬青1.2-2.0重量份；(2)取毛冬青药材，粉碎，用6-12倍量的水提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以10000-20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用4-6倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去稀乙醇洗脱液，再换用碱性水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物2.0-4.5重量份。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入冻干赋型剂2.5-5.0重量份，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-6.5，灌装，冷冻干燥，即得。
二、制剂含量测定含量测定方法采用毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)质量标准中含量测定项下的方法进行测定。编号1毛冬青注射液(广东省博罗先锋药业集团有限公司)；编号2毛冬青注射液(按照CN00127593的专利申请文献方法制备)；编号3本发明毛冬青冻干粉针剂，由北京乾露春科技有限公司提供。结果见表1。
表1 制剂中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定编号样品含量(mg/支)批次1231 41.3 53.7 60.52 40.6 50.2 57.73 38.7 52.8 59.6以上含量测定结果说明，本发明的毛冬青冻干粉针剂的有效成分总黄酮的含量明显高于编号1的毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)的含量，也高于编号2的毛冬青注射液(按照CN00127593的专利申请文献方法制备)。说明本发明的制备方法更加合理，更加科学，更具有实用性。
三、提取物含量测定含量测定方法采用毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)质量标准中含量测定项下的方法进行测定。1号提取物(按照毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)中的制法所得)；2号提取物(按照CN00127593的专利申请文献方法制备)；3号提取物(按照本发明的方法制备)，由北京乾露春科技有限公司提供。结果见表2。
表2 提取物中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定编号样品含量(％)批次123124.2 43.5 55.7226.6 44.2 53.8325.3 41.8 52.4以上含量测定结果说明，本发明的制备方法得到的提取物中的有效成分总黄酮含量明显高于1号提取物(按照毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)中的制法所得)和2号提取物(按照CN00127593的专利申请文献方法制备)。说明本发明的制备方法更加合理，更加科学，更具有实用性。
四、溶血实验编号1毛冬青注射液(按照CN00127593的专利申请文献方法制备)；编号2本发明毛冬青冻干粉针剂，由北京乾露春科技有限公司提供。
取编号1和编号2的相同浓度的生理盐水稀释液各0.3ml，加生理盐水2.2ml与2％兔红细胞生理盐水混悬液2.5ml，摇匀，置于37℃的恒温水浴中，观察1小时。结果见表3。
表3 溶血实验结果编号现象1 +2 -注+表示有溶血现象；-表示无溶血现象。
以上溶血实验结果说明，本发明的冻干粉针剂的制备方法去除了其中的非活性的皂苷类成分，不会对人体造成溶血和凝血现象。所用本发明不仅可用于肌内注射，还可用于静脉注射。
五、药理实施例以下药理实验所用阳性对照药毛冬青注射液(按照CN00127593的专利申请文献方法制备)和本发明毛冬青冻干粉针剂均由北京乾露春科技有限公司提供。
1.对小鼠缺氧耐力的影响实验实验方法取健康昆明种小鼠30只，体重20～24g。随机分成对照组，毛冬青注射液组、本发明毛冬青冻干粉针剂组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水，1次/天，连续7d。于末次给药后1h，将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中，内放15g钠石灰，密闭观察其存活时间。结果见表4。
表4 对小鼠常压缺氧的影响(X±SD)组别鼠数(只) 平均存活时间(min)对照组 1015.61±3.76毛冬青注射液组 1029.77±3.26*本发明毛冬青冻干粉针剂组1035.13±3.82*#注与对照组比较*P＜0.01；与毛冬青注射液组比较#P＜0.05。
本发明毛冬青冻干粉针剂和毛冬青注射液均能提高小鼠常压缺氧耐力，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；本发明毛冬青冻干粉针剂和毛冬青注射液相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明本发明毛冬青冻干粉针剂的药理作用强于毛冬青注射液。
2.对大鼠体内血栓形成的影响将大鼠随机分成3组，每组10只，分别为生理盐水对照组、毛冬青注射液组、本发明冻干粉针剂组。将各组动物给药(生理盐水组给予等体积的生理盐水)，每日1次，连续给药7天，末次给药后1小时，将大鼠用10％水合氯醛，按0.3g/kg体重麻醉后固定，分离左颈总动脉，在血栓仪上以2mA电流刺激血管7min后，记录血栓形成时间。结果见表5。
表5 对大鼠体内血栓形成的影响(X±SD)组别鼠数(只) 血栓形成时间(min)对照组 10640.78±95.22毛冬青注射液组 10774.24±82.16*本发明毛冬青冻干粉针剂组10827.38±76.44*#注与对照组比较*P＜0.01；与毛冬青注射液组比较#P＜0.05本发明毛冬青冻干粉针剂和毛冬青注射液都能延长大鼠体内血栓的形成(P＜0.01)；本发明毛冬青冻干粉针剂和毛冬青注射液相比，延长时间也有差异(P＜0.05)。说明本发明毛冬青冻干粉针剂的药理作用强于毛冬青注射液。
3.对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响取体重250～300g Wistar大鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，连续ip.给药7d。各组动物于末次给药30min后，腹腔注射25％乌拉坦0.4ml/100g麻醉，仰卧固定，标准电压1mv＝15mm，走纸速度50mm/s，记录II导联心电图。舌下静脉注射垂体后叶素0.75u/kg于5s内注射完。每30s记录一次心电图。大鼠静脉注射垂体后叶素1min内，大多数表现为心率减慢，T波高耸，ST段抬高等变化。分别观察用药前后30s、1min及50min上T波增殖的变化。结果见表6。
表6 对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响。
鼠数 T波增值(mV)组别(只) 30s1min 5min生理盐水组 10 0.35±0.16 0.26±0.140.18±0.027毛冬青注射液组 10 0.23±0.08*0.16±0.07*0.087±0.016*本发明毛冬青冻干粉针剂组10 0.20±0.07*# 0.12±0.06*#0.068±0.014*#注与对照组比较*P＜0.01与毛冬青注射液组比较#P＜0.05本发明毛冬青冻干粉针剂和毛冬青注射液均能显著降低30s、1min及5min时的T波增殖(P＜0.01)；本发明毛冬青冻干粉针剂和毛冬青注射液相比，降低的程度也有差异(P＜0.05)。说明本发明毛冬青冻干粉针剂的药理作用强于毛冬青注射液。
六、制备实施例实施例1(1)原料药的处方为毛冬青20kg；(2)取毛冬青药材，粉碎，用12倍量的水提取3次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用60％乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去乙醇洗脱液，再换用pH值为11.0的氢氧化钠水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用盐酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物450g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖250g，加注射用水至规定量，调节pH值至6.5，灌装，冷冻干燥，即得毛冬青冻干粉针剂1000支。
实施例2(1)原料药的处方为毛冬青12kg；(2)取毛冬青药材，粉碎，用6倍量的水提取1次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以10000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用6倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用40％乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去乙醇洗脱液，再换用pH值为8.5的碳酸钠水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用硫酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物200g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇、果糖和乳糖500g，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0，灌装，冷冻干燥，即得毛冬青冻干粉针剂1000支。
实施例3(1)原料药的处方为毛冬青16kg；(2)取毛冬青药材，粉碎，用10倍量的水提取2次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以15000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用5倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用50％乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去乙醇洗脱液，再换用pH值为9.0的氢氧化钾水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用醋酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物350g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入聚乙烯吡咯烷酮350g，加注射用水至规定量，调节pH值至6.0，灌装，冷冻干燥，即得毛冬青冻干粉针剂1000支。
实施例4(1)原料药的处方为毛冬青14kg；(2)取毛冬青药材，粉碎，用8倍量的水提取3次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以12000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用4倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用45％乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去乙醇洗脱液，再换用pH值为9.5的碳酸氢钠水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用磷酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物270g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入右旋果糖和乳糖430g，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5，灌装，冷冻干燥，即得毛冬青冻干粉针剂1000支。
实施例5(1)原料药的处方为毛冬青18kg；(2)取毛冬青药材，粉碎，用9倍量的水提取2次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以18000转份的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用5倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用47％乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去乙醇洗脱液，再换用pH值为10.5的碳酸钾水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用冰醋酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物410g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇和葡聚糖290g，加注射用水至规定量，调节pH值至6.2，灌装，冷冻干燥，即得毛冬青冻干粉针剂1000支。
实施例6(1)原料药的处方为毛冬青17kg；(2)取毛冬青药材，粉碎，用8倍量的水提取3次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以16000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用6倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用55％乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去乙醇洗脱液，再换用pH值为10.0的氢氧化钾和碳酸氢钠水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用盐酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物385g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入葡萄糖和果糖315g，加注射用水至规定量，调节pH值至5.7，灌装，冷冻干燥，即得毛冬青冻干粉针剂1000支。
本发明一次1支，一日1-2次。
权利要求
1.一种毛冬青冻干粉针剂，其特征在于它是由毛冬青水提物2.0-4.5重量份和药用辅料2.5-5.0重量份组成；其中毛冬青水提物中有效部位总黄酮的重量百分含量大于或等于50％。
2.根据权利要求1所述的毛冬青冻干粉针剂，其中药用辅料为冻干赋型剂，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。
3.一种毛冬青冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)原料药的处方为毛冬青1.2-2.0重量份；(2)取毛冬青药材，粉碎，用6-12倍量的水提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液过滤，滤液浓缩至溶液∶药材为1∶1，静置，过滤，滤液以10000-20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的聚酰胺柱，先用4-6倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用乙醇溶液洗脱至Molisch反应为阴性，弃去稀乙醇洗脱液，再换用碱性水溶液洗脱，收集碱洗脱液，用酸调pH值为中性，减压浓缩，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物；(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，滤过，加入冻干赋型剂，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-6.5，灌装，冷冻干燥，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其中洗脱聚酰胺柱的乙醇溶液的浓度为40％-60％。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其中洗脱聚酰胺柱的乙醇溶液的浓度为45％-50％。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于其中碱性水溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠中的一种或几种的混合物的水溶液。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其中碱性水溶液的pH值为8.5-11.0。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其中碱性水溶液的pH值为9.0-10.0。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于其中所述的酸为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸中的一种或几种的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种毛冬青冻干粉针剂及其制备方法。它是由毛冬青中提取的总黄酮有效部位以及药用辅料组成的。总黄酮有效部位采用水提、超滤、聚酰胺柱除杂的方法获得，占到了毛冬青提取物中的50％以上。本发明既可以用于肌内注射，也可用于静脉注射。含量测定结果和药理实验结果说明，本发明有效成分含量更高，药理作用更强，具有很好的预防和治疗心血管疾病的作用。
文档编号A61P9/14GK1628832SQ20041007408
公开日2005年6月22日 申请日期2004年9月3日 优先权日2004年9月3日
发明者张平 申请人:张平