专利名称：一种纳米红花黄酮注射制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种纳米红花黄酮注射制剂及其制备方法。
背景技术：
红花为菊科一年生草本植物红花CarthamustinctoriusL.的干燥花，是常用的活血化瘀中药之一，具有抗凝、防栓、扩张血管之功效，其中黄酮类成分是红花中的一类主要活性成分，目前市场上出售的红花注射液中主要活性成分是总黄酮，黄酮类成分具有显著抑制由ADP、凝血酶、花生四烯酸诱导的血小板聚集作用，还具有抑制血小板激活因子介导的血小板活化作用；但在临床应用中，红花注射液稳定性差《时珍国医国药》2001年第12卷第6期，490，红花注射液的稳定性研究，出现大量的严重不良反应1.致过敏性休克；2.药疹；3.发热红花注射液致过敏反应，《医药导报》，2000，19(6)609因此，医药科研研究人员应将红花黄酮进行制剂研究，开发出一种起效迅速、安全性高的红花黄酮制剂；红花中黄酮类化合物对热不稳定，因此，在提取纯化红花黄酮有效部位的过程中，应注意温度的控制；查阅文献和专利，在提取红花黄酮的过程中，多采用加热醇提，没有控制提取温度；在纯化过程中，有报道采用有机溶剂萃取法，在处理回收有机溶剂的过程中，也没有很好控制温度，因此会导致红花提取物中红花黄酮的含量降低。
脂质体是将药物包封于类脂质双分子层形成的薄膜中间所制成的超微型球状载体制剂。构成脂质双分子层(载体)的物质主要有磷脂(卵磷脂、脑磷脂、豆磷脂)和胆固醇等，由于它们的分子结构中既有亲水基团又有疏水基团，当构成球形类脂双层结构时，其疏水基团相对构成的结构将药物包封起来。脂质体作为药物的载体具有以下优点(1)这种载体能保护被包裹物；(2)能有效地控制药物释放；(3)通过改变脂质体大小和电荷，可以控制药物在组织内的分布与在血液中的清除率；(4)改变某种物理因素，例如改变用药局部的pH、病变部位的温度等能明显改变脂质体膜的通透性，促使脂质体选择性的释放药物；(5)脂质体进入体内后主要被网状内皮系统吞噬，能激活机体的自身免疫功能，并使药物主要在脑、肝和骨髓等组织器官中积累，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物毒性；(6)脂质体本身对人体无毒性和免疫抑制作用。因此，脂质体在许多疾病，尤其是脑部疾病治疗中显示出明显的优越性。
查阅文献和专利，未检索到纳米红花黄酮注射制剂的资料。
发明内容
基于上述原因，我们通过大量的实验研究，对红花先采用超声醇提取，控制温度不超过40℃，在纯化过程中，我们采用D101型大孔吸附树脂柱进行制备，本发明所有浓缩过程采用旋转刮膜蒸发仪进行，控制温度不超过45℃，在整个提取纯化过程中，很好的控制了温度，防止红花提取物中活性成分红花黄酮分解。
将得到红花黄酮提取物进行化学性质和物理性质的分析，根据其性质与优选的乳化剂、脂质混合，控制好温度，制备成纳米红花黄酮，与药用辅料混合制备成水针剂、输液剂、粉针剂，药效学研究，本发明纳米红花黄酮注射制剂具有安全性高、药理作用好的特点。
本发明将红花黄酮制成纳米制剂的目的是要解决降低不良反应，达到起效快和维持良好的血药浓度。
本发明的目的是提供一种纳米红花黄酮注射制剂；本发明的另一目的是提供制备纳米红花黄酮注射制剂的方法。
本发明通过以下技术方案实现
一、工艺制法(1)红花黄酮有效部位的提取取红花，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的4-8倍体积的50％-70％乙醇超声提取25-40分钟，控制提取温度30℃-40℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-45℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液，静置12-24小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用3-6倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用4-8倍柱体积60％-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-45℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物；(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物8-12重量份，脂质48-142重量份、乳化剂32-58重量份；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至60-70℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在60-70℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂。
纳米红花黄酮注射制剂的制备方法中的脂质为单硬脂酸。
纳米红花黄酮注射制剂的制备方法中乳化剂为蛋黄卵磷脂。
二.检测分析按照《中华人民共和国药典》(2005年版，一部)103页，红花含量测定山柰素项检测方法，进行检测分析，实验结果见表1表1含量比较
结论通过上述实验表明，本发明工艺具有实际意义。
三.优选实验优选依据《中国药典》2005年版附录XIX E“微囊、微球与脂质体制剂指导原则”中的方法。H-7000型透射电镜仪(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相关光谱仪(英国Malvern公司)；LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-18G型台式高速离心机。
实验方法取本发明红花黄酮有效部位与不同脂质三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、单硬脂酸、硬脂酸，不同乳化剂大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、聚山梨醇、泊洛沙姆进行纳米药物制备，得到纳米红花黄酮进行实验；方案1三硬脂酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案2三棕榈酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案3三月桂酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案4三窬酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案5单硬脂酸、大豆卵磷脂；方案6单硬脂酸、蛋黄卵磷脂；方案7三硬脂酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案8三棕榈酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案9三月桂酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案10三窬酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案11硬脂酸、大豆卵磷脂；方案12硬脂酸、蛋黄卵磷脂；方案13三硬脂酸甘油酯、聚山梨醇；方案14三棕榈酸甘油酯、聚山梨醇；方案15三月桂酸甘油酯、聚山梨醇；方案16三窬酸甘油酯、聚山梨醇；方案17单硬脂酸、聚山梨醇；方案18硬脂酸、聚山梨醇；方案19三硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆；方案20三棕榈酸甘油酯、泊洛沙姆；方案21三月桂酸甘油酯、泊洛沙姆；
方案22三窬酸甘油酯、泊洛沙姆；方案23单硬脂酸、泊洛沙姆；方案24硬脂酸、泊洛沙姆；1.形态观察及粒径将上述纳米药物在透射电镜下进行形态观察，观察指标为呈何种状态、大小是否均匀，表面是否光滑、有无粘连，分别取1000-2000个纳米药物进行测定粒径大小、是否正态分布，实验结果见表2表2不同组别形态及粒径比较
2.包封率和载药量测定采用上述检测分析方法对不同方案的纳米药物进行红花黄酮含量测定，并用下述公式计算包封率和载药量包封率(％)＝(投药量-游离药物量)/投药量×100％；载药量(％)＝(投药量-游离药物量)/纳米药物的重量×100％。
实验结果见表3。
表3包封率和载药量比较
3.稳定性考察将不同方案纳米药物分别置于小瓶内，密封。于冰箱(3-5℃)、室温(20-25℃)和37℃(RH75％)的环境中放置，于3月观测纳米药物的外观、大小、再分散性等。结果见表4。
表4稳定性实验比较
4.血脑屏障研究取新西兰家兔，体重约2.5kg，雌雄不限。静脉注射给药，于给药后20分钟抽取0.5ml脑脊液进行实验。取脑脊液0.25ml加溶剂混悬15min后，静置15min，以10000r/min离心1min，取上清液20μl进样，以红花黄酮为指标测定，实验结果见表5(以方案6为标准指标，即100％)表5不同组别脑脊液中药物浓度
实验结论通过上述优选实验，我们确定脂质为单硬脂酸，乳化剂为蛋黄卵磷脂；通过上述实验表明，本发明纳米药物可见呈圆球体，大小较均匀，表面光滑，无粘连，根据纳米药物的光学显微照片测定了1500个，平均粒径为55±8nm，最大粒径为120nm，最小粒径为10nm，且粒径分布符合正态分布规律，包封率为92.0％，载药量为10.1％，稳定性好，通过血脑屏障作用好。
四.毒理实验实验1急性毒性实验实验药物本发明纳米红花黄酮注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售注射用红花注射液(哈尔滨圣泰制药有限公司)实验动物健康小鼠18-22g，，雌雄各半；实验方法取小鼠，分为市售红花注射液组、本专利纳米红花黄酮注射组，腹腔给药，按照体表面积换算成小鼠给药剂量，每天给药3次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，按改良寇氏法计算LD50值实验结果见表6
表6小鼠用药LD50值比较
实验2溶血性考察实验药物本发明纳米红花黄酮注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；实验方法2％红细胞混悬液的制备取兔耳缘静脉取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加10倍量的生理盐水溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水溶液洗涤2-3次，至上清液不呈红色时为止。将所得的红细胞用用生理盐水配成浓度为2％的混悬液，即得。
试验方法取试管6支，按表中的配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水溶液，混匀，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的药液(以第6管为空白对照)，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，共观察2小时。结果见表7。
表7各组别配比量
结果以第3试管为准，各管均未染有红色，显微镜下观察未见有红细胞破裂，说明本品不溶血，安全性好。
实验3血管刺激性考察实验方法取健康大耳家兔9只，将动物固定于兔箱内，用酒精将皮肤消毒后，于右侧耳缘静脉处注射纳米红花黄酮注射制剂5mg/kg，于另一侧对应部位注射同一体积的等渗葡萄糖水作为对照。每日注射1次，连续3次，观察兔耳缘静脉反应。于末次给药24h后将兔放血处死，取下两耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm处，解剖取出静脉，做组织切片检查，观察注射部位的反应。
结果试验过程中，肉眼观察两耳静脉注射部位处，未见红肿、热等刺激表现。表明给药组切片部位组织形态无明显差异，未见本品毒性所致的病理形态学改变(血管结构正常，无内皮细胞损伤，无血栓形成及其他病理性变化)。
结论通过上述实验表明，本发明纳米红花黄酮注射制剂比市售红花注射液安全性更好。
四.药理实验实验1对大鼠局部脑缺血的影响实验药物本发明纳米红花黄酮注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售注射用红花注射液(哈尔滨圣泰制药有限公司)实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，280～350g。
实验方法取大鼠，随机分为假手术组、模型对照组、市售红花注射液组、本发明纳米红花黄酮注射剂组，每组10只。禁食12h后，各组动物分别ig相应药物，给药量为3.5mg/kg。给药2h后进行手术，造成大鼠左侧大脑中动脉缺血，假手术组仅进行左侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)，24h后观察并记录大鼠的行为障碍。行为障碍评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干、冠状切成5片，TTC染色，照相，用病理图像分析软件求梗死面积比。数据用x±s表示，组间t检验。结果见表8。
表8不同制剂对大鼠局部脑缺血的影响
注与模型对照组比较**P＜0.01；与阳性对照组比较#P＜0.05.
实验2对大鼠静脉血栓形成的影响实验药物本发明纳米红花黄酮注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售注射用红花注射液(哈尔滨圣泰制药有限公司)实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，280～350g。
实验方法取大鼠，随机分为模型对照组、市售红花注射液组、本发明纳米红花黄酮注射剂组，每组10只，禁食12h后，各组动物分别ig相应药物，给药量为3.5mg/kg，2h后，水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉，开腹分离下腔静脉，，于左肾静脉下方用粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹部。6h后重新开腹，在结扎处下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓，称重。数据用x±s表示，组间t检验，结果见表9。
表9不同制剂对大鼠静脉血栓形成的影响
注与模型对照组比较**P＜0.01；与阳性对照组比较#P＜0.05.
实验3对大鼠血小板聚集的影响实验药物本发明纳米红花黄酮注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售注射用红花注射液(哈尔滨圣泰制药有限公司)实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，280～350g。
实验方法取大鼠，随机分为模型对照组、市售红花注射液组、本发明纳米红花黄酮注射剂组，每组10只，禁食12h后，各组动物分别ig相应药物，给药量为3.5mg/kg，2h后，禁食12h后，大鼠腹主动脉取血5mL，以3.8％枸橼酸钠抗凝。分离富血小板血浆(PRP)、贫血小板血浆(PPP)，并调整PRP的血小板数＜2×106/ml，移取0.3mlPRP至比浊管内，将比浊管放入用PPP调零后的血小板聚集仪中，加入10μl相应的药物，37℃温育3min后加入10μl ADP，同时开启血小板聚集仪进行记录，记录时间为6min。数据用x±s表示，组间t检验，结果见表10。
表10不同制剂对对大鼠血小板聚集的影响
注与模型对照组比较**P＜0.01；与阳性对照组比较#P＜0.05.
实验结论结果显示，在相同剂量下，试验组与阴性对照组比较差异有显著性意义，实验结果说明纳米红花黄酮注射制剂比市售红花注射液组具有更好的作用。
五、制备实施例实施例1(1)红花黄酮有效部位的提取取红花226.4克，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的4倍体积的50％乙醇超声提取25分钟，控制提取温度30℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃，真空度为0.1个大气压，得到浓缩液，静置12小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用4倍柱体积60％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃，真空度为0.1个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物12克；红花黄酮含量为50％(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物12克，脂质单硬脂酸142克、乳化剂蛋黄卵磷脂58克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至60℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在60℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂1000瓶；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂1000瓶；
冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂1000瓶。
纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米实施例2(1)红花黄酮有效部位的提取取红花135.6克，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的8倍体积的70％乙醇超声提取40分钟，控制提取温度40℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度45℃，真空度为0.2个大气压，得到浓缩液，静置24小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用6倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用8倍柱体积80％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度45℃，真空度为0.2个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物8克；红花黄酮含量为85％(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物8克，脂质单硬脂酸48克、乳化剂蛋黄卵磷脂32克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至70℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在70℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂1000瓶；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂1000瓶；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂1000瓶。
纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米实施例3(1)红花黄酮有效部位的提取取红花181.8克，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的6倍体积的60％乙醇超声提取35分钟，控制提取温度35℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度42℃，真空度为0.15个大气压，得到浓缩液，静置16小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度42℃，真空度为0.15个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物10克；红花黄酮含量为75％(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物10克，脂质单硬脂酸95克、乳化剂蛋黄卵磷脂45克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至65℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在65℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂1000瓶；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂1000瓶；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂1000瓶。
纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米实施例4(1)红花黄酮有效部位的提取取红花160.7克，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的5倍体积的55％乙醇超声提取30分钟，控制提取温度32℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度41℃，真空度为0.13个大气压，得到浓缩液，静置13小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用5倍柱体积65％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度41℃，真空度为0.12个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物9克；红花黄酮含量为55％(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物9克，脂质单硬脂酸52克、乳化剂蛋黄卵磷脂36克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至62℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在63℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂1000瓶；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂1000瓶；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂1000瓶。
纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米实施例5(1)红花黄酮有效部位的提取取红花203.7克，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的7倍体积的65％乙醇超声提取38分钟，控制提取温度38℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度44℃，真空度为0.19个大气压，得到浓缩液，静置22小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用7倍柱体积75％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度44℃，真空度为0.19个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物11克；红花黄酮含量为80％(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物11克，脂质单硬脂酸130克、乳化剂蛋黄卵磷脂51克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至68℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在68℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀6次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂1000瓶；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂1000瓶；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂1000瓶。
纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米实施例6(1)红花黄酮有效部位的提取取红花1872.7克，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的6倍体积的60％乙醇超声提取30分钟，控制提取温度35℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度43℃，真空度为0.14个大气压，得到浓缩液，静置15小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度43℃，真空度为0.16个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物103克；红花黄酮含量为70％(2)纳米红花黄酮的制备处方为红花黄酮提取物103克，脂质单硬脂酸953克、乳化剂蛋黄卵磷脂457克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至66℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在64℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂10000瓶；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂10000瓶；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂10000瓶。
纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米
权利要求
1.一种纳米红花黄酮注射制剂，其特征在于它是由超声醇提、旋转刮膜蒸发仪浓缩、浓缩液D101型大孔吸附树脂柱洗脱、洗脱液旋转刮膜蒸发仪浓缩、低温干燥得到红花黄酮提取物8-12重量份，脂质单硬脂酸48-142重量份、乳化剂蛋黄卵磷脂32-58重量份制备成的，其中红花黄酮提取物中红花黄酮含量为50％-85％，纳米红花黄酮注射制剂中纳米粒径为10-120纳米。
2.一种纳米红花黄酮注射制剂的制备方法，其特征为(1)红花黄酮有效部位的提取取红花，粉碎，放入超声提取罐中，加入红花质量的4-8倍体积的50％-70％乙醇超声提取25-40分钟，控制提取温度30℃-40℃提取液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-45℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液，静置12-24小时，离心，上清液上D101型大孔吸附树脂柱，先用3-6倍柱体积蒸馏水洗，水洗液弃去，再用4-8倍柱体积60％-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-45℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到红花黄酮提取物；(2)纳米红花黄酮的制备取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取红花黄酮提取物、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至60-70℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在60-70℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(4)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米红花黄酮输液制剂；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米红花黄酮冻干粉针制剂。
全文摘要
本发明公开了一种纳米红花黄酮注射制剂及其制备方法，其特征在于从中药红花中提取红花黄酮提取物与优选的药用载体组合制备成纳米红花黄酮，与药用辅料混合，制备成水针剂、输液剂、粉针剂；其特征还在于控制红花黄酮提取物中红花黄酮含量为50％－85％；药效学研究，本发明纳米红花黄酮注射制剂具有安全性高、药理作用好的特点。
文档编号A61P7/02GK1947713SQ200510112700
公开日2007年4月18日 申请日期2005年10月14日 优先权日2005年10月14日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙