专利名称：一种珠蛋白酶解物及其制备和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及动物血液的开发利用，具体说是一种含有2-20肽的珠蛋白酶解物及其制备和应用，其是一种具有显著的血管紧张素I转换酶(ACE)抑制活性的珠蛋白水解产物。
背景技术：
高血压是最常见的心血管疾病之一，它能造成大脑、心血管、肾脏的损害，是引起脑卒中、心力衰竭和冠心病等的重要因素，严重威胁着人类的健康。因此，治疗和预防高血压对提高人类的健康水准，延长寿命有着重要的意义。
血管紧张素I转换酶(angiotensin I converting enzyme，略称为ACE)在人体肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统中，对血压调节起着重要的作用。ACE可以将血管紧张素I转换为血管紧张素II，使周围小动脉、血管平滑肌收缩，同时刺激醛固酮分泌，促进人体肾脏对Na+、K+的重吸收，引起钠储量和血容量的增加，使血压升高；还可以使舒缓激肽失活，引起血压升高。
综上所述，ACE一方面产生使血压上升的血管紧缩素II，另一方面，使具有血管舒张作用的舒缓激肽失活，这都造成了血压的上升。所以，如果抑制了ACE的活性，就可以起到降压的作用。
现有的作为治疗高血压的合成物卡普托利就是ACE的抑制剂，但它有很多副作用，所以源于食品蛋白中的ACE抑制肽因其无毒副作用，同时具有其它疗效而被广泛应用，市场前景极好。
发明内容
本发明的目的在于提供一种珠蛋白酶解物及其制备和应用，制得包含2-20肽的具有显著抑制ACE活性的酶解物，其源于动物蛋白，无毒副作用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种珠蛋白酶解物，以猪血中血红蛋白脱除血红素后得到的珠蛋白为原料，通过加入蛋白酶酶解，制成富含活性肽的蛋白酶解物。
珠蛋白酶解物的制备方法以猪血中的血红蛋白脱除血红素后得到的珠蛋白为原料，通过酶解、灭活、离心、过滤除去不溶物等步骤，获得含有2-20肽的活性多肽类化合物的蛋白酶解物。
酶法水解过程为，将珠蛋白粉末用缓冲液溶解后，加入蛋白酶，在30-50℃和蛋白酶所适用pH值条件下反应1-48小时，反应结束后，在90-100℃下加热≥10min灭活，终止酶解；其中酶与珠蛋白粉重量体积比为1-10g∶100ml，酶与底物(即珠蛋白粉)质量比为0.1-10％，pH值可选范围通常为2-10；所使用的蛋白酶为，胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶等，以及由这些酶构成的复合酶。
该蛋白酶解物中包含的多肽对ACE的抑制作用，可用于制备治疗和预防高血压的药物。
该酶解物进行离心、过滤、超滤后，再加工成各种剂型，药物的剂型可为散剂，颗粒剂，片剂，胶囊，水溶液，悬浮液，乳化液，喷剂，粉剂。
该酶解物进行离心、过滤、然后通过喷雾干燥制备得到的珠蛋白多肽粉，可以添加到各种食品当中，作为抑制血压的保健食品。食品的形态可以是液体的像清凉饮料，乳酸饮料，调味品，汤类；也可以是固体的如奶酪，火腿，点心等。
本发明具有如下优点1.本发明珠蛋白的酶解液对血管紧张素I转换酶有很好的抑制作用，应用到动物实验中，有很好的降血压作用；其可用于治疗和预防高血压，同时具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等作用。
2.本发明采用了单酶水解的方法，可以在温和的条件下，将珠蛋白酶解成2-20肽的活性多肽和氨基酸类物质。
3.本发明将猪血先除去血红素制得珠蛋白后，再用酶在温和的条件下水解，这样比猪血直接作为底物具有更高的底物浓度和酶解液的得率。
4.本发明酶解液中没有了血红素的颜色和腥味，可以作为很多食品的添加剂。
5.本发明酶解液源于动物蛋白，无毒副作用。
图1为口服不同剂量的珠蛋白酶解液后高血压大鼠的收缩压变化随时间变化曲线。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步的阐述按常规方法进行血红素的分离新鲜猪血加0.8％的柠檬酸三钠(防止血液凝集)，搅拌均匀后，3000r/min离心，取血球(沉淀部分)加等量的蒸馏水，搅拌30分钟后，血球溶血，加5倍体积的含3％HCl的丙酮溶液，搅拌静置后，过滤，取沉淀部分，喷雾干燥后即得珠蛋白粉末。(参考文献周淡宜，徐水祥，周敏子.血红素制备工艺的实验研究.药物生物技术.2002，9(2)103-104.)实施例1单酶水解称取珠蛋白粉末1g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入0.1％(酶与底物比)的胰蛋白酶，在37℃和pH7的条件下酶解48小时，反应结束后，在100℃下加热10min，终止酶解，进行酶解物的ACE抑制活性检测约为82％。
实施例2单酶水解称取珠蛋白粉末5g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入1％(酶与底物比)的糜蛋白酶，在37℃和pH7.5的条件下酶解12小时，反应结束后，在100℃下加热30min，终止酶解，进行酶解物的ACE抑制活性检测约为76％。
实施例3复合酶水解称取珠蛋白粉末3g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入1％(酶与底物比)的复合蛋白酶，在37℃和pH7的条件下酶解24小时，反应结束后，在95℃下加热18min，终止酶解，进行酶解物的ACE抑制活性检测约为81％。
实施例4单酶水解称取珠蛋白粉末8g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入6％(酶与底物比)的碱性蛋白酶，在55℃和pH8的条件下酶解36小时，反应结束后，在98℃下加热15min，终止酶解，进行酶解物的ACE抑制活性检测约为90％。
实施例5单酶水解称取珠蛋白粉末4g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入3％(酶与底物比)的碱性蛋白酶，在37℃和pH10的条件下酶解40小时，反应结束后，在100℃下加热15min，终止酶解，用HCl溶液调节酶解液成中性进行酶解物的ACE抑制活性检测约为83％。
实施例6单酶水解称取珠蛋白粉末3g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入1％(酶与底物比)的胃蛋白酶，在37℃和pH2的条件下酶解12小时，反应结束后，在100℃下加热10min，终止酶解，用NaOH溶液调节酶解液成中性，进行酶解物的ACE抑制活性检测约为92％。
实施例6单酶水解称取珠蛋白粉末2g溶于100ml的磷酸缓冲液中，加入0.15％(酶与底物比)的胃蛋白酶，在37℃和pH5的条件下酶解24小时，反应结束后，在100℃下加热10min，终止酶解，用NaOH溶液调节酶解液成中性，进行酶解物的ACE抑制活性检测约为79％。
应用例1珠蛋白多肽粉胶囊的制备对上述实施例1制备的珠蛋白酶解液进行离心、分离除去水不溶性杂质后，进一步过滤精制，通过超滤除去大分子的物质，然后通过喷雾干燥制备得到珠蛋白多肽粉，经过罐装，制成珠蛋白多肽粉胶囊。
应用例2 动物实验选择自发性高血压大鼠为实验模型，大鼠饲养一周后，将其分组，每组八只，用500-1000mg/kg剂量的灌胃，采用尾部测压的方法每天测量一次血压，一直测到两周。结果表明，用500mg/kg的剂量灌胃，四天后对照组大鼠的血压保持170±6mm Hg，而治疗组自发性高血压大鼠的血压从170±6mm Hg降至156±5mm Hg明显下降，下降了13.8±5.3mm Hg，最大抑制效果出现在一周后，血压降到最低(153±4.2mm Hg)。用750mg/kg、1000mg/kg的剂量用同样的大鼠只数和同样的方法进行实验，结果表明随着灌胃量的增加，血压的降低呈剂量依赖关系(如图1所示)。由此可知此酶解液具有很好的降血压效果。
权利要求
1.一种珠蛋白酶解物，其特征在于以猪血中血红蛋白脱除血红素后得到的珠蛋白为原料，通过加入蛋白酶酶解，制成富含活性肽的蛋白酶解物。
2.一种权利要求1所述珠蛋白酶解物的制备方法，其特征在于以猪血中的血红蛋白脱除血红素后得到的珠蛋白为原料，通过酶解、灭活、离心、过滤除去不溶物后，获得含有2-20肽的活性多肽类化合物的蛋白酶解物。
3.按照权利要求1或2所述珠蛋白酶解物的制备方法，其特征在于酶法水解过程为，将珠蛋白粉末用缓冲液溶解后，加入蛋白酶，在30-55℃和蛋白酶所适用pH值条件下反应1-48小时，反应结束后，在95-100℃下加热≥10min灭活，终止酶解；其中酶与珠蛋白粉重量体积比为1-10g100ml，酶与底物质量比为0.1-10％，pH值可选范围通常为2-10。
4.按照权利要求3所述珠蛋白酶解物的制备方法，其特征在于所使用的蛋白酶为，胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶，以及由这些酶构成的复合酶。
5.一种权利要求1所述的珠蛋白酶解物的应用，其特征在于权利要求1所述珠蛋白酶解物用于制备治疗和预防高血压的药物。
6.按照权利要求5所述的珠蛋白酶解物的应用，其特征在于所述药物的剂型可为颗粒剂、片剂、胶囊、水溶液、悬浮液、乳化液、喷剂或粉剂。
7.一种权利要求1所述的珠蛋白酶解物的应用，其特征在于权利要求1所述珠蛋白酶解物过滤后，通过喷雾干燥得到的珠蛋白多肽粉，可以添加到各种食品当中，制备成作为抑制血压的保健食品。
8.按照权利要求7所述的珠蛋白酶解物的应用，其特征在于食品的形态可以是液体的清凉饮料、乳酸饮料、调味品或汤类，也可以是固体的奶酪、火腿或点心。
全文摘要
本发明涉及动物血液的开发利用，一种珠蛋白酶解物，其以猪血中的血红蛋白脱除血红素后得到的珠蛋白为原料，通过加蛋白酶酶解的方法，制成富含活性肽的蛋白酶解物。该酶解物具有显著抑制血管紧张素I转换酶活性的作用，可用于治疗和预防高血压，同时具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等作用。
文档编号A61K38/04GK1990875SQ20051013676
公开日2007年7月4日 申请日期2005年12月30日 优先权日2005年12月30日
发明者胡建恩, 杜昱光, 余奕珂, 白雪芳, 谭成玉, 王佳培 申请人:中国科学院大连化学物理研究所