专利名称：S1p受体调节剂的眼科应用的制作方法
SIP受体调节剂的眼科应用 本发明涉及SIP受体激动剂在生产用于治疗眼部病症的药物中的应用。根据本发明可被治疗的眼部病症通常包括直接或间接的涉及视网膜 或角膜细胞变性特别是细胞凋亡的眼部疾病和病症。本文所指的眼部病症 包括广义上的缺血性视网膜病变、前部缺血性视神经病、所有类型的视神经炎、干性(干AMD)和湿性(湿AMD)的年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖 尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿(DME)、增生性糖尿病性视网膜病 (PDR)、嚢样黄斑水肿(CME)、视网膜剥离、色素性视网膜炎(RP)、斯塔 加特病、Best卵黄样视网膜变性、莱伯氏先天性黑蒙和其他遗传性视网膜 变性、病理性近视、早产儿视网膜病变，以及莱伯氏遗传性视神经病、角 膜移植或角膜屈光手术的后遗效应、干燥性角膜结膜炎(KCS)或干眼症和 疱渗性角膜炎。优选的所述眼部病症选自干性年龄相关性黄斑变性(干AMD)、湿性年龄相关性黄斑变性(湿 AMD)、糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿(DME)、增生性糖尿病性 视网膜病(PDR)、色素性视网膜炎(RP)和干燥性角膜结膜炎(KCS)，而且更 优选的所述病症选自干性年龄相关性黄斑变性、湿性年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑 水肿(DME)和增生性糖尿病性视网膜病(PDR)。同样优选的所述病症是增生性糖尿病性视网膜病(PDR)。同样优选的所述病症是糖尿病性黄斑水肿(DME)。同样优选的所述病症是千燥性角膜结膜炎(KCS)。高度优选的所述病症选自干性年龄相关性黄斑变性和湿性年龄相关 性黄斑变性。
在本说明书中，术语"治疗，，指预防性或防止性的治疗以及治愈性或疾 病緩解性的治疗，包括对存在患有或怀疑患有该疾病的风险的病人和受困 于疾病或医学症状的已患病或已被诊断的患者的治疗。SIP受体激动剂是作为激动剂在一种或多种鞘氨醇-1磷酸受体，例如 S1P1到S1P8上传递信号的化合物。结合在S1P受体上的激动剂可以，例 如导致胞内异源三聚体的G蛋白解离为Ga-GTP和GPy-GTP，和/或增加 激动剂占据的受体的磷酸化和下游信号通路/激酶的活化。S1P受体激动剂通常是鞘氨醇的类似物，例如2-取代的2-氨基-丙烷 -1，3-二醇或2-氨基-丙醇衍生物，例如包含式X基团的化合物，CH2R1z (X)其中Z是氢、d-6烷基、C^链烯基、C^炔基、苯基、被羟基取代的苯 基、被1到3个选自卣素、C^环烷基、苯基和被羟基取代的苯基的取代基所取代的Cw烷基，或CH2-R4z，其中R"是羟基、酰氧基或式(a)的残基，'5zII OR6z其中Z，是直键或氧，优选氧；R&和Rk各自独立的是氢或任选的被1、 2或3个卤原子取代的Cw烷基；R^是羟基、酰氧基或式(a)的残基;且R2z和R3z各自独立的是氢、d-4烷基 或酰基。式X的基团是作为端基连接于一个部分上的官能团，所述的部分是亲 水或亲脂性的并且包含一个或多个脂肪族、脂环族、芳香族和/或杂环残基， 其结果是所得到的其中Z和Rlz中至少有一个是或包含式(a)的残基的分子 作为激动剂在一种或多种鞘氨醇-1磷酸受体上传递信号。
优选的S1P受体激动剂的例子是，例如- 在EP627406A1中披露的化合物，例如式I化合物或其可药用的盐、溶 剂化物或水合物，<formula>formula see original document page 7</formula>其中R,是直链或支链的(C,2，22)链，-其可以在链中含有选自双键、三键、氧、硫、其中R6是氢、烷基、芳烷 基、酰基或烷氧基羰基的NR6和羰基的键或杂原子，和/或-其可以含有作为取代基的烷氧基、链烯氧基、炔氧基、芳烷氧基、酰基、 烷基氨基、烷硫基、酰基氨基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、酰氧基、烷基氨甲酰基、硝基、卤素、氨基、肟基、羟基或羧基；或者 R,是-其中烷基是直链或支链的(C6一2o)碳链的苯基烷基；或-其中烷基是直链或支链的(Cwo)碳链的苯基烷基，其中所述苯基烷基被下述基团取代-任选的被闺素取代的直链或支链的(C6-2。)碳链，-任选的被卣素取代的直链或支链的(C6-2C)烷氧基链，-直链或支链的(c^。)链烯氧基链-苯基烷氧基、卣代苯基烷氧基、苯基烷氧基烷基、苯氧基烷氧基或苯氧-被(C6-20)烷基取代的环烷基烷基， -被(Cwo)烷基取代的杂芳基烷基，-杂环(<:6.2())烷基或-被Cwo烷基取代的杂环烷基，并且其中 烷基部分可以-在碳链中含有选自双键、三键、氧、硫、亚磺跣基、磺酰基或如上所定义的NR6的键或杂原子，和-含有作为取代基的烷氧基、链烯氧基、炔氧基、芳烷氧基、酰基、烷基 氨基、烷硫基、酰基氨基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、酰氧基、烷基 氨甲酰基、硝基、闺素、氨基、羟基或羧基，且R2、 R3、 R4和Rs各自独立的是氢、烷基或酰基；-在EP 1002792A1中披露的化合物，例如式II化合物或其可药用的盐、 溶剂化物或水合物，<formula>formula see original document page 8</formula>其中m是l到9，且RV R，3、 R，4和R，5各自独立的是氢、烷基或酰基;-在EP0778263A1中披露的化合物，例如式III化合物或其可药用的盐、 溶剂化物或7JC合物，(CH2)m,OR"3其中w是氢、Cw烷基、<:2_6链烯基或<:2.6炔基；未取代的或被羟基取代的苯基；R"40(CH2)n;或者被1到3个选自卤素、<:3_8环烷基、笨基和被 羟基取代的苯基的取代基所取代的Cl6坑基；X是氢或者具有p个碳原子的未取代的或取代的直链烷基或者具有(p-l)个 碳原子的未取代或取代的直链烷氧基，例如被1到3个选自下述基团的取 代基所取代Cw烷基、羟基、Cw烷氧基、酰氧基、氨基、Cw烷基氨基、 酰基氨基、氧代、卤代Cw烷基、卤素、未取代的苯基和被1到3个选自 C"烷基、羟基、Cw烷氧基、酰基、酰氧基、氨基、Cw烷基氨基、酰基氨基、卤代C"烷基和卤素的取代基所取代的苯基；Y是氢、C"烷基、羟基、C^垸氧基、酰基、酰氧基、氨基、C^烷基^J^、酰基M、卤代d—6烷基或卣素，Z2是单键或具有q个碳原子的直链亚烷基， p和q各自独立的是l到20的整数，条件是65p+q523， m，是l、 2或3， n是2或3，R，、、 R"2、 R"3和R"4各自独立的是氢、d—4烷基或酰基；-在WO02/18395中披露的化合物，例如式IVa或IVb化合物或者其可药 用的盐、溶剂化物或水合物，其中Xa是氧、硫、NRk或-(CH2)na-基团，该基团是未取代的或被1到4个卤素取代；iu是1或2， Rk是氢或者(Cw)烷基，该烷基是未取代的或被 卤素取代；F^是氢、羟基、(Cw)烷基或0(d-4)烷基，其中的烷基是未取 代的或被l到3个卣素取代；R化是氢、羟基或(Cw)烷基，其中的烷基是未取代的或被卣素取代；R2a各自独立的选自氢或(cl4)烷基，该烷基是未取代的或被卣素取代；R^是氢、羟基、卤素或O(Cw)烷基，其中的烷基 是未取代的或被卣素取代；且R外是氢、羟基、卣素、其中的烷基是未取 代的或者被羟基取代的(C"烷基、或其中的烷基是未取代的或被卣素取代 的0(d—4)烷基；Ya是-CHr、 -C(O)漏、-CH(OH)-、 -C(-NOH)曙、O或S， 且R4a是(<:4_14)烷基或((:4.14)链烯基； -在WO 02/076995中披露的化合物，例如式V化合物或者其可药用的盐、 溶剂化物或水合物，其中mc是l、 2或者3; Xc是氧或直键；Rk是氢；任选地被羟基、酰基、卣素、C3-w环烷基、苯基或羟基-亚苯基 取代的d_6烷基；C2_6链烯基；C2_6炔基；或者任选地被羟基取代的 苯基；R2c是其中Rsc是氢或者任选的被1、 2或3个卤原子取代的Ch4烷基，Rec是氢 或者任选的被卣素取代的C^烷基；R3c和R4e各自独立的是氢、任选的被卣素取代的d—4烷基，或者酰基，且Rc是任选的含有链中氧原子和任选的被硝基、卤素、氨基、羟基或M取 代的<:13.2))烷基；或者是式(a)的残基，其中R7c是氢、Cw烷基或Cw烷氧基，且Rsc是取代的d-20烷酰基、 其中的Cw4烷基任选的被卣素或羟基所取代的苯基Cw4烷基、环烷 基CV"烷氧基或苯基Cw4烷氧基，其中环烷基或苯基环任选地被卣 素、C,-4烷基和/或d-4烷氧基所取代、苯基Cw4烷氧基-d."烷基、 苯氧基C,."烷氧基或苯氧基Cw4烷基，(CH2)mc-XcR2c 当R^是d-4烷基、<:2_6链烯基或(:2_6炔基时，Rc也可以是式(a)的残基， 其中Rsc是Cw4烷氧基；
或者式VI化合物或其可药用的盐、溶剂化物或水合物，
其中
nx是2、 3或4，
R,x是氢；任选地被羟基、酰基、g素、环烷基、苯基或羟基-亚苯基取代 的C,—6烷基；Cw链烯基；<:2_6炔基；或者任选的被羟基取代的苯基；
Rh是氢、C,-4烷基或酰基，
R^和R"各自独立的是氢、任选的被卤素或酖基取代的C^烷基，
R5x是氢、d-4烷基或d-4烷氧基，且
R6x是任选的被环烷基取代的d.加烷酰基；环烷基Cw4烷氧基，其中环烷
基环任选的被卣素、CM烷基和/或Cw烷氧基所取代；苯基Cw4烷氧
基，其中苯环任选的被卣素、CL4烷基和/或CL4烷氧基所取代， 当Rh是被羟基取代的C2-4烷基时，R6x也可以是C4-"烷氧基，或者当Rlx 是d-4烷基时，Rfix可以是戊氧基或己氧基，
条件是当Rsx是氢或Rh是曱基时，R6x是除苯基-丁烯氧基之外的基团；
-在WO02/06268A1中披露的化合物，例如式VII化合物或者其可药用的 盐、溶剂化物或水合物，
-~(CH2)n CH，隱OR
其中R^和R2d各自独立的是氢或氨基保护基团;
<formula>formula see original document page 11</formula>
II OR8d
R3d是氢、羟基保护基团或式 Q 的残基，
R4d是低级烷基； nd是l到6的整数；
Xd是l，2-亚乙基、1，2-亚乙烯基、1，2-亚乙炔基、具有式-D-CH2-的基团(其 中D是羰基、-CH(OH)-、 O、 S或N)、芳基或者被最多3个选自如下文 所定义的基团的取代基所取代的芳基；
Yd是单键、C卬亚烷基、被最多3个选自基团组a和b的取代基所取代的 Cwo亚烷基、碳链中间或末端有氧或硫的Cwo亚烷基、或者被最多3个选 自基团组a和b的取代基所取代的碳链中间或末端有氧或硫的Cwo亚烷 基；
Rsa是氢、环烷基、芳基、杂环、被最多3个选自基团组a和b的取代基
所取代的环烷基、被最多3个选自基团组a和b的取代基所取代的芳基、
或者被最多3个选自基团组a和b的取代基所取代的杂环；
R6d和R7d各自独立的是氢或选自基团组a的取代基；
R8d和R9d各自独立的是氢或任选的被卤素取代的Cw烷基；
<基团组3>是卣素、低级烷基、卣代低级烷基、低级烷氧基、低级烷硫基、 羧基、低级烷氧基羰基、羟基、低级脂肪族酰基、M、单-低级烷基氨基、 二-低级烷基氨基、低级脂肪族酰基氨基、氰基或硝基；且 <基团组1>>是各自任选的被最多3个选自基团组a的取代基所取代的环烷 基、芳基、杂环；
条件是当Rsd是氢时，Yd是单键或直链的Cwo亚烷基；
-在JP-14316985 (JP2002316985)中披露的化合物，例如式VIII化合物或 者其可药用的盐、溶剂化物或7K合物， <formula>formula see original document page 13</formula>其中R,e、 R2e、 R3e、 Rie、 RSe、 R6e、 R7e、 ne、 Xe和Ye如JP画14316985中
所披露；
-在WO 03/29184和WO 03/29205中披露的化合物，例如式IX化合物或
者其可药用的盐、溶剂化物或水合物，
<formula>formula see original document page 13</formula>其中Xf是氧或硫，且Rlf、 R2f、 R3f和nf如WO 03/29184和WO 03/29205
—p<or8f II or9f
中所披露，R4f和Rsf各自独立的是氢或式 0 的残基， 其中Rsf和R9f各自独立的是氢或任选的被卣素取代的C^烷基；例如2-氨基-2-4-(3-苯甲氧基苯氧基)-2-氯苯基I丙基-l，3-丙烷-二醇或2-氨基 -2-4-(3-苯甲氧基苯硫基)-2-氯苯基丙基-1 ，3-丙烷-二醇；
-在WO03/062252A1中披露的化合物，例如式X，化合物或者其可药用的 盐、溶剂化物或水合物，
<formula>formula see original document page 13</formula>其中
Ar是苯基或萘基；mg和ng各自独立的是O或l; A选自COOH、 P03H2、 P02H、 S03H、 PO(Cw烷基)OH和1/T-四唑-5-基；R"和R2g各自独立的 是氢、卣素、羟基、COOH或任选的被卣素取代的Cm坑基；R3g是氢或 任选的被卣素或羟基取代的Cw烷基;R4g各自独立的是卣素或任选的被卤
素取代的Cw烷基或d_3烷氧基；且Rg和M各自具有如WO03/062252A1 中对B和C所指出的含义之一；
-在WO 03/062248A2中披露的化合物，例如式XI化合物，
<formula>formula see original document page 14</formula>
其中Ar是苯基或萘基；n是2、 3或4; A是COOH、 17-四唑-5-基、P03H2、 P02H2、 -S03H或PO(R5h)OH，其中R幼选自Cw烷基、羟基C"烷基、
苯基、-<:0-(:1-3烷氧基和-(:11(011)-苯基，其中所述苯基或苯基部分4壬选的
被取代；R化和R2h各自独立的是氢、卤素、羟基、COOH或者任选的被 囟代的C^烷基或苯基；R3h是氢或任选的被卣素和/或羟基取代的C^烷 基；R4h各自独立的是卣素、羟基、COOH、 d-4烷基、S(O)o， i或2Cw烷基、 Cw烷氧基、<:3-6环烷氧基、芳基或芳烷氧基，其中烷基部分可以任选的被 1到3个囟素取代；且Rg和M各自具有如WO03/062248A2中对B和C 所指出的含义之一；
-在WO 04/026817A中披露的化合物，例如式XII化合物，<formula>formula see original document page 14</formula>其中
R,j是卣素、三卣代甲基、CM烷基、d-4烷氧基、Cw烷硫基、Cw烷基亚
磺酰基、Cw烷基磺酰基、芳烷基、任选的被取代的苯氧基或芳烷氧基，
R2j是氢、卤素、三卤代甲基、d-4烷基、C"烷氧基、芳烷基或芳烷氧基， R3j是氢、卤素、CF3、 d-4烷基、Cw烷氧基、d-4烷硫基或苯甲氧基，
R4j是氢、Cw烷基、苯基、任选的被取代的苄基或苯曱酰基、或者低级脂
肪族d-s酰基，Rsj是氢、单卤代甲基、d-4烷基、Cw烷氧基甲基、d-4
烷硫基曱基、羟乙基、羟丙基、苯基、芳烷基、C2-4链烯基或炔基，R6j和
R7i各自独立的是氢或Cw烷基，或者R7i还可以是下式的残基，
<formula>formula see original document page 15</formula>
其中，Rsj和R9j各自独立的是氢或任选的被囟素取代的Cw烷基，Xj是O、 S、 SO或S02并且Hj是1到4的整数，例如，2-氨基-4-4-(3-苯甲氧基苯 硫基)-2-氯苯基I-2-甲基丁烷-l-醇或2-氨基-4-4-(3-苯甲氧基苯硫基)-2-氯 苯基卜2-乙基丁烷-l-醇；
-在WO 04/103306A、 WO 05/000833、 WO 05/103309或WO 05/113330中 披露的化合物，例如式XIIIa或XIIIb化合物和其N-氧化物或其前药，或 者其可药用的盐、溶剂化物或水合物，
<formula>formula see original document page 15</formula>
<formula>formula see original document page 15</formula>
其中
Ak是COORsk、 OPO(OR5k)2、 PO(OR5k)2, 、 S02OR5k、 PORSkORSk或l好-四唑-5-基，Rsk是氢或d-6烷基； Wk是键、d.3亚烷基或C2_3亚烯基；
Yk是任选的被1到3个选自卤素、羟基、硝基、C^烷基、C"烷氧基的 基团所取代的Cwo芳基或Cw杂芳基；卣代的C^烷基和卤代的Cw烷氧 基；
Zk是如WO 04/103306A中所指出的杂环基团，例如吖丁啶；Rik是任选的被Cw烷基、Cwn芳基、Cwo芳基Cw烷基、Cw杂芳基、C3-9杂芳基cl4烷基、Qj-8环烷基、C3-8环烷基CV4烷基、C3.8杂环烷基或<:3.8杂环烷基Cw烷基所取代的<:6.1()芳基或<:3.9杂芳基，其中r化的任何芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基可被1到5个选自卣素、d-6烷基、烷氧基和卣代-Cl6烷基或-Cw烷氧基的基团所取代；R2k是氢、<^.6烷基、卣代Cw烷基、<:2.6链烯基或<:2_6炔基；且R3k或R化各自独立的是氢、卤素、羟基、C^烷基、d-6烷氧基或卤代C^烷基或Cw烷氧基；根据本发明的另一个实施方案，用于本发明的S1P受体激动剂也是选 择性的S1P1受体激动剂，例如，具有对S1P1受体选择性高于S1P3受体 至少20倍例如100、 500、 1000或2000倍的化合物，这是在35S-GTPyS 的结合试验中评价S1P1受体的ECso与S1P3受体的ECso的比率来测定的， 所述化合物通过3SS-GTPyS结合试验的评价，具有100 nM或更低的结合 S1P1受体的EC5o。代表性的S1P1受体激动剂是，例如在WO03/061567 中列举的化合物，其内容引入本文作为参考，例如式XIV或XV的化合物，当式I到XV的化合物在分子内具有一个或多个不对称中心时，本发 明应理解为包括各种光学异构体，以及外消旋化合物、非对映异构体和其 混合物。式III或IVb的化合物中，当连接氨基基团的碳原子为不对称时， 在该碳原子上优选R-构型。
以上各式的化合物以游离形式或盐形式存在。以上各式化合物的可药用盐的例子包括无机酸的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐和硫酸盐；有机酸的 盐，例如乙酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、苹果酸 盐、曱磺酸盐和苯磺酸盐；或者在合适时，金属的盐，例如钠、钾、钙和 铝盐；铵盐例如三乙基胺，以及二碱基的氨基酸，例如赖氨酸的盐。本发 明的化合物和盐包括水合物和溶剂化物的形式。上面所指出的酰基是Ry-CO-残基，其中Ry是C^烷基、<:3-6环烷基、 苯基或苯基-Cw烷基。除非另有说明，烷基、烷氧基、链烯基或炔基可以 是直链的或支链的。当式I化合物中的碳链Ri是被取代的时，优选被面素、硝基、氨基、 羟基或羧基取代。当碳链被一个任选被取代的亚苯基间隔时，该碳链优选 是未取代的。当亚苯基部分是被取代的时，优选被卣素、硝基、氨基、甲 氧基、羟基或羧基取代。优选的式I化合物是那些其R是任选的被硝基、卣素、氨基、羟基或 M取代的C^2o烷基的化合物，和，更优选那些其R、是被任选被面素所 取代的C6-"-烷基链取代的苯基烷基且烷基部分是任选的被羟基取代的 Cw烷基的化合物。更加优选的Ri是苯基上被直链或支链的、优选直链的 C^4烷基链所取代的苯基-d-6烷基。该Q-"烷基链可以位于邻位、间位或 对位，优选对位。R2到Rs各自优选是氢。一个优选的式I化合物是2-氨基-2-十四烷基-l，3-丙二醇。 一个特别优 选的式I的S1P受体激动剂是FTY720，即游离形式或可药用盐形式的2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基丙烷-l，3-二醇(下文中的化合物A)，例如如下 所示的盐酸盐
一个优选的式II化合物是其R，2到R，s是氢且m是4的化合物，即游 离形式或可药用盐形式的2-氨基-2-{2-4-(1-氧代-5-苯基戊基)苯基乙基}丙 烷-l,3-二醇(下文中的化合物B)，例如盐酸盐。一个优选的式III化合物是其W是曱基、R",到R"3各自是氢、Z2 是l，2-亚乙基、X是庚氧基且Y是氢的化合物，即游离形式或可药用盐形 式的2-氨基-4-(4-庚氧基苯基)-2-甲基-丁醇(下文中的化合物C)，例如盐酸 盐。特别优选R-对映异构体。一个优选的式IVa化合物是FTY720-磷酸酯(R2a是H、 R^是羟基、 Xa是氧、Rh和R化是羟基)。 一个优选的式IVb化合物是化合物C-磷酸酯(Rh是H、 R外是羟基、Xa是氧、R^和R化是羟基、Ya是氧且R4a;iA基)。一个优选的式V化合物是化合物B-磷酸酯。一个优选的式V化合物是磷酸单-[(R)-2-氨基-2-曱基-4-(4-戊氧基-苯 基)-丁基l酯。一个优选的式VIII化合物是(2R)-2-氨基-4-[3-(4-环己氧基丁基)-苯并b瘗吩-6-基-2-甲基-l-丁醇。一个优选的式IX化合物是其Xf是硫或氧、R"是苯甲氧基、R2f、 R4f 和Rsn各自是氢、R3f是氯且nf是2的化合物。一个优选的式XII化合物是其Xj是S或O、 Rij是苯甲氧基、R2j、 R4j、 R6j和R"各自是氢、R3j是氯、Rsj是羟乙基或羟丙基且iij是2的化合物。S1P受体激动剂对人S1P受体的亲和性可在下面的试验中测定人S1P受体向HEK293细胞中的瞬时转染克隆EDG受体和Gi蛋白，将等量的4种即EDG受体、Gi-ot、 Grp 和Gi-y的cDNA混合并用于采用磷酸钩沉淀法转染单层的HEK293细胞(M. Wigler等人，Cell. 1977; 11; 223和DS. Im等人，Mol. Pharmacol. 2000; 57; 753)。简而言之，将含有25將DNA和0.25 M CaCl的DNA混合物加入 HEPES緩沖的2 mM Na2HP04中。接近汇合的单层HEK293细胞用25 mM氯查毒害，接着将DNA沉淀物应用于细胞。4小时之后，用磷酸盐緩沖盐 水冲洗单层并重新加入培养基(卯％ 1:1 Dulbecco改进的基础培养基 (DMEM): F-12+10。/o胎牛血清)。在加入DNA 48-72小时后，在水上通过 在含有10°/。庶糖的HME緩冲液(单位为mM: 20 HEPES， 5 MgCl2, 1 EDTA， pH 7.4)中刮取来收集细胞，使用Dounce匀浆器进行裂解。在800xg 离心后，上清液用无蔗糖的HME稀释并在100，000xg离心1小时。所得 沉淀再匀浆并在100，000xg再离心l小时。该粗的膜沉淀重悬于含蔗糖的 HME中，分装并浸入液氮来速冻。将这些膜储存于-70。C。蛋白浓度采用 Bradford蛋白检测法通过分光光度来测定。使用SIP受体/HEK293膜制品进行GTPyS结合试验GTPyS结合试验按照DS. Im等人在Mol. Pharmacol. 2000; 57:753中 的描述来进行。配基介导的GTPyS与G-蛋白的结合是在GTP结合緩沖液 (单位为mM: 50 HEPES， 100 NaCl， 10 MgCl2， pH 7.5)中使用来自瞬时转染 的HEK293细胞的25將膜制品测定的。在10 jiM GDP和0.1 nM [3SS
GTPyS (1200 Ci/mmol)存在下，向膜中加入配基并在30°C孵育30分钟。 结合和未结合的GTPyS用Brandel收集器(Gaithersburg， MD)进行分离， 用液体闪烁计数器计数。在可用于本文参考的例如WO 94/09010、 WO 95/16691、 WO 96/41807、 USP 5，362，718或WO 99/15530中披露了式A的化合物。它们可按照所披 露的或通过与这些参考文献中的方法类似的方法来制备。在一系列更为具体或可选的实施方案中，本发明还提供了1.1. 一种治疗眼科病症的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的S1P 受体激动剂。优选的S1P受体激动剂是化合物A、 B或C， (2R)-2-^J^-4-3-(4-环 己氧基丁基)-苯并b噻吩-6-基-2-甲基丁烷-l-醇，或者式IX的化合物，其中Xf是硫或氧，Rw是苯甲氧基，R2f、 IW和Rsfj各自是氢， R3f是氯，且nf是2。如本文所用，给药优选属于口服、直肠、胃肠外和局部给药。尤其更 优选的给药方式属于局部给药。在所述眼科病症中的功效可通过例如下列动物^^莫型来确定1) 视网膜变性的遗传动物模型，例如rd小鼠(如Li等人，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2001; 42: 2981-2989中所描述)、Rpe65-缺陷小鼠(Van Hooser等人，PNAS 2000.; 97: 8623-8628)、 RCS大鼠(Faktorovich等人， Nature 19卯；347:83-86)， rds小鼠(Ali等人，Nature Genetics 2000， 25: 306-310)， rcdl狗(Suber等人，PNAS 1993;卯3968-3972)。2) 由以下引起的实验性的视网膜变性-对小鼠(如Wenzel等人，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2001; 42:1653-1659 所描述)或大鼠(Faktorovich等人，J. Neurosci: 1992; 12: 3554-3567)的光照 画N-曱基-N陽亚硝基脲(Kiuchi等人，Exp. Eye Res. 2002; 74: 383画392)或^Ht 钠(Sorsby & Harding, Vision Res. 1962; 2:139-148)的给药。3) 视神经(ON)损伤的实验模型-通过小鼠(Levkovitch-Verbin等人，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000; 41: 4169-4174)和大鼠(Yoles和Schwartz, Exp. Neurol. 1998; 153:1-7)的视神经夹伤曙通过大鼠的视神经切断(如Martin等人，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002; 43: 2236-2243， Solomon等人J. Neurosci. Methods 1996; 70:21-25中所述)-通过大鼠眼血管结扎(如Lafuente等人，Invest. OpMhalmol. Vis. Sci. 2001; 42:2074-2084中所述)或前房插管(Buchi等人，Ophthalmologica 1991; 203:138-147)后实验性的短暂(急性)视网膜缺血
画通过在大鼠(Stokely等人，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002; 43: 3223-3230)或兔(Takei等人，Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol 1993; 231:476-481)眼内注射内皮素-l。本发明的药物组合物包含，例如，对于经肠的或胃肠外的给药方式， 从约5%到约卯％、优选从约10%到约80%的活性成分。根据本发明的经 肠的或胃肠外给药的药物组合物是例如单位剂量的形式，例如糖衣丸、片 剂、胶嚢、栓剂以及安瓿剂的形式。它们以本来已知的方法例如通过常规 的混合、制粒、制骨、溶解或冻干的方法进行制备。例如，口服的药物组 合物可以通过将活性成分与固体载体结合来获得，如果需要的话，将所得 混合物制粒，以及如果需要或必要，在加入合适的赋形剂后将该混合物或 颗粒加工成片剂或糖衣丸核。合适的载体尤其是填充剂，例如糖，如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、 纤维素制品和/或磷酸钩，例如磷酸三钩或磷酸氢钾；以及粘合剂，例如使 用如玉米、小麦、水稻或马铃薯淀粉的淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、曱基纤 维素和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，崩解剂例如上述的淀粉，以及羧甲 基淀粉、交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐例如海藻酸钠。赋 形剂尤其是助流剂、流动调节剂和润滑剂，例如珪酸、滑石、硬脂酸或其 盐，例如硬脂酸镁或钙，和/或聚乙二醇.可对糖衣丸核提供合适的、任选 为肠溶的包衣，所使用的尤其是浓缩的糖溶液，其可包含阿拉伯胶、滑石、 聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，或使用在合适的有机溶剂或溶 剂混合物中的包衣溶液，或者用于制备肠溶包衣的合适的纤维素制品，例 如邻苯二甲酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素的溶液，染料或色素可添加至片剂或糖衣丸的包衣中，例如为了辨认的目的或为了说明活 性成分的不同剂量。其它口服给药的药物组合物是硬明胶胶囊，还有由明胶和增塑剂例如 甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。硬明胶胶嚢包含颗粒形式的活性成分， 例如与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或助流剂如滑石或硬脂酸镁、以及 如果需要的话与稳定剂所形成的混合物。在软胶嚢剂中活性成分优选溶解
或悬浮于合适的液体，例如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇中，在其中也 可以加入穂、定剂。合适的直肠给药的药物组合物是，例如由活性成分与栓剂基质材料的 组合所组成的栓剂。合适的栓剂基质材料是，例如天然的或合成的甘油三 酯、烷属烃、聚乙二醇或高级链烷醇。也可以使用包含活性成分与基质材 料的明胶直肠胶嚢。合适的基质材料包括，例如液体甘油三酯、聚乙二醇 和烷属烃。适于胃肠外给药的是通过输注和/或注射特别是水溶性形式、例如水溶性盐形式的活性成分的水溶液；以及活性成分的悬浮液，例如相应的油悬 浮液，其使用合适的亲脂性溶剂或赋形剂，例如脂肪油，如芝麻油或合成 的脂肪酸酯类，例如油酸乙酯或甘油三酯，或者是包含增粘物质，例如羧 甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖，以及任选的稳定剂的水性悬浮液。还可将化合物在眼内或眼周围进行局部给药，例如滴眼液、眼用混悬 液或软骨、结膜下、眼球周围、3姊后或玻璃体内注射，可采用緩释装置， 例如结膜嵌入物、微球或其它眼周或眼内的贮库装置。活性成分的剂量依赖于温血动物的种类、年龄和个体条件以及给药方 式。通常对约75 kg体重的病人进行口服给药所估算的大概日剂量为从约 10 mg到约500 mg。对于局部给药，大概估计的日剂量在0.001到10 mg之间变化，其依 赖于给药方式。在局部用制剂中的活性成分的量通常大大低于口服或胃肠 外给药的剂型。通常，在局部用制剂中，活性成分的范围为总重的0.01% 到10% (重量)。
权利要求
1.S1P受体激动剂在生产用于治疗眼科病症的药物中的应用。
2. 可使用S1P受体激动剂进行治疗的眼科病症的治疗方法，所述方 法包括对患有所述眼科病症的个体给予有效量的S1P受体激动剂。
3. 根据任何上述权利要求的方法或应用，其中所述眼科病症选自 广义上的缺血性视网膜病、前部缺血性视神经病、所有类型的视神经炎、 干性(干AMD)和湿性(湿AMD)的年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视 网膜病、糖尿病性黄斑水肺(DME)、增生性糖尿病性视网膜病(PDR)、嚢 样黄斑水肿(CME)、视网膜剥离、色素性视网膜炎(RP)、斯塔加特病、Best 卵黄样视网膜变性、莱伯氏先天性黑蒙和其他遗传性视网膜变性、病理性 近视、早产儿视网膜病变，以及莱伯氏遗传性视神经病、角膜移植或角膜 屈光手术的后遗效应、干燥性角膜结膜炎(KCS)或干眼症和疱療性角膜炎。
4. 根据任何上述权利要求的方法或应用，其中的S1P受体激动剂是 或包含游离形式或可药用盐形式、其溶剂化物或水合物形式的式X的基团<formula>formula see original document page 2</formula>(X)其中Z是氢、d—6烷基、Cw链烯基、C2-6炔基、苯基、被羟基取代的苯基、被1到3个选自卣素、C^环烷基、苯基和被羟基取代的苯基的取代基所 取代的d-6烷基，或CH2-R^，其中R4z是羟基、酰氧基或式(a)的残基，<formula>formula see original document page 2</formula>其中Z，是直键或氧，优选氧；Rsz和R6z各自独立的是氢或任选的被1、 2或3个卣原子取代的d-4烷基; Rk是羟基、酰氧基或式(a)的残基；且R2z和R3z各自独立的是氢、C"烷 基或酰基，其中式X的基团是作为端基连接于一个部分上的官能团，所述的部分是亲 水或亲脂性的并且包含一个或多个脂肪族、脂环族、芳香族和/或杂环残基， 其结果是所得到的其中Z和Rlz中至少有一个是或包含式(a)的残基的分子 作为激动剂在一种或多种鞘氨醇-l-磷酸受体上传递信号。
5. 根据权利要求4的方法或应用，其中SIP受体激动剂是游离形式或 可药用盐形式的2-氨基-2-2-(4-辛基苯基)乙基j丙烷-l,3-二醇、化合物B或 C、 (2R)-2-H^-4-3-(4-环己氧基丁基)-苯并[W噻吩-6-基-2-曱基丁烷-l-醇， 或者以上所定义的式IX的化合物，其中Xf是硫或氧，R,f是苯甲氧基， R2f、 R4f和Rsfj各自是氢，R3f是氯，且iif是2。
6. 根据任何上述权利要求的方法或应用，其中S1P受体激动剂是游 离形式或可药用盐形式的2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基I丙烷-l，3-二醇(化 合物A)。
7. 根据任何上述权利要求的方法或应用，其中将所述S1P受体激动 剂眼内或眼周围局部给药。
8. 根据任何上述权利要求的方法或应用，其中所述S1P受体激动剂 是或包含式(I)的基团或其可药用盐、溶剂化物或水合物<formula>formula see original document page 3</formula>其中R,是直链或支链的(Cu.22)链，其可以在链中含有选自双键、三键、氧、硫、其中R6是氢、烷基、芳烷基、酰基或烷氧基羰基的NR6和羰基的键或杂原子，和/或其可以含有作为取代基的烷氧基、链烯氧基、炔氧基、芳烷氧基、酰基、 烷基氨基、烷硫基、酰基氨基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、酰氧基、烷基氨曱酰基、硝基、卣素、氨基、肟基、羟基或羧基；或者 R义其中烷基是直链或支链的(C6-2o)碳链的苯基烷基；或其中烷基是直链或支链的(Cwo)碳链的苯基烷基，其中所述苯基烷基被下述基团取代任选的被卣素取代的直链或支链的(<:6.2())碳链， 任选的被S素取代的直链或支链的(Cwo)烷氧基链，直链或支链的(C6-2。)链烯氧基链，苯基烷氧基、卣代苯基烷氧基、苯基烷氧基烷基、苯氧基烷氧基或苯氧基 烷基，被(C^2())烷基取代的环烷基烷基，被(C^。)烷基取代的杂芳基烷基，杂环(CV2。)烷基或被C2，20烷基取代的杂环烷基，并且其中烷基部分可以在碳链中含有选自双键、三鍵、氧、硫、亚磺酰基、磺酰基或其中的R6如上所定义的NR6的键或杂原子，和作为取代基的烷氧基、链烯氧基、炔氧基、芳烷氧基、酰基、烷基氨基、烷硫基、酰基氣基、烷 氧基羰基、烷氧基羰基氨基、酰氧基、烷基氨甲酰基、硝基、卤素、M、羟基或羧基，且R2、 R3、 Rt和Rs各自独立的是氢、CM烷基或酰基。
9. 根据任何上述权利要求的方法或应用，其中所述的眼科病症是干 性(干AMD)和湿性(湿AMD)的年龄相关性黄斑变性(AMD)。
全文摘要
本发明涉及S1P受体激动剂在生产用于治疗眼科病症的药物中的应用。
文档编号A61P27/00GK101132784SQ200680007031
公开日2008年2月27日 申请日期2006年3月2日 优先权日2005年3月4日
发明者E·J·拉图尔, G·N·朗布鲁 申请人:诺瓦提斯公司