用于调节应激-活化蛋白激酶系统的吡啶酮衍生物的制作方法

专利名称：用于调节应激-活化蛋白激酶系统的吡啶酮衍生物的制作方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2005年5月10日提交的美国临时专利申请No.60/679,471，和2005年11月1日提交的美国临时专利申请No.60/732,230的权益，该两篇文献的全部内容据此特别地引入本文作为参考。
发明领域 本发明涉及可用于治疗各种炎性病症和/或纤维化病症，包括与激酶p38的增强的活性有关的那些病症的化合物和方法。

背景技术：
已经认识到大量的慢性和急性症状都与炎症响应的干扰状态有关。大量细胞因子参与该响应，包括IL-I、IL-6、IL-8和TNFα。似乎这些细胞因子在炎症调节作用中的活性可能与细胞信号途径酶的活化有关，称作p38的MAP激酶家族中的一员，还称作SAPK、CSBP和RK。
已经对若干种p38抑制剂，例如NPC 31169、SB239063、SB203580、FR-167653和吡非尼酮进行了体外和/或体内试验，而且发现其能有效调节炎症响应。
仍旧需要安全有效的药物来治疗各种炎症和/或纤维化病症，例如炎症性肺部纤维化和/或特发性肺部纤维化。
发明概述 本发明的一个实施方案是一种调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统的方法，包括使化合物与p38促分裂原-活化蛋白激酶(MAPK)接触，其中该化合物抑制至少一种p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；而且其中该接触在SAPK-调节浓度小于该化合物抑制至少一种p38MAPK时的EC30的条件下进行。
本发明的另一个实施方案是一种治疗或预防主体的疾病状态的方法，包括确定有患病风险或已患病的主体，其中所述病症选自炎性病症和纤维化病症；将有效量的化合物给药于该主体以治疗或预防该病症；其中该化合物抑制至少一种p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；而且其中该有效量产生小于抑制该至少一种p38MAPK时的EC30的血液或血清或另一种体液的浓度。
本发明的另一个实施方案是一种确定药物活性化合物的方法，包括提供化合物库；对该库中的多个化合物进行试验，以确定其对至少一种p38MAPK的抑制作用；和从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中该所选化合物在抑制该至少一种p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
本发明的另一个实施方案是一种确定药物活性化合物的方法，包括提供化合物库；对该库中的多个化合物进行试验，以确定其在体内对体液中的TNFα分泌的抑制作用；和从该库中选择至少一种化合物，其中该所选化合物在体内抑制体液中的TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
本发明的另一个实施方案是一种确定药物活性化合物的方法，包括提供化合物库；对该库中的多个化合物进行试验，以确定在体外对培养细胞TNFα分泌的抑制作用；和从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中该所选化合物在体外抑制培养细胞TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
本发明的另一个实施方案是一种确定药物活性化合物的方法，包括提供化合物库；对该库中的多个化合物进行试验，以确定其在体内对体液中的TNFα分泌的抑制作用；和从该多个化合物中选择至少一种化合物，其中该所选化合物在体外抑制培养细胞TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
本发明的另一个实施方案是一种确定药物活性化合物的方法，包括提供化合物库；对该库中的多个化合物进行试验，以确定在体外对培养细胞TNFα分泌的抑制作用；和从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中该所选化合物在体内抑制体液中的TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
本发明的另一个实施方案是一种具有亚类III的结构式的化合物
亚类III； 其中，X3选自H、F和OH；和R2选自H和CF3；且其中，该化合物在对p38MAPK进行抑制时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；或该化合物的药学可接受的盐、酯、溶剂化物或前体药物。
本发明的另一个实施方案是一种具有类VI的结构式的化合物
类VI 其中，Ar为吡啶基或苯基；Z为O或S；X3为H、F、Cl、OH或者OCH3；R2为甲基、C(＝O)H、C(＝O)CH3、C(＝O)O-葡糖基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲基甲氧基、甲基羟基或苯基；和R4为H或羟基；条件是当R2为三氟甲基，Z为O，R4为H，且Ar为苯基时，该苯基不是仅在4′位上被H、F或OH取代；其中该化合物在对p38MAPK进行抑制时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；或该化合物的药学可接受的盐、酯、溶剂化物或前体药物。
本发明的另一个实施方案是一种具有类VII的结构式的化合物
类VII 其中，X3为H、卤素、C1-C10烷氧基或OH；Y1、Y2、Y3和Y4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基；R4为H、卤素或OH；且其中，该化合物在对p38MAPK进行抑制时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；或该化合物的药学可接受的盐、酯、溶剂化物或前体药物。
本发明的进一步实施方案是一种药物组合物，其含有具有上述结构式的化合物和药学可接受的赋型剂。
下面对这些和其它实施方案进行更详细地描述。
附图简述

图1为p38MAPK信号级联的示意性说明(现有技术，图1来自Underwood等人，2001Prog Respir Res 31342-345)。该示意图显示了各种刺激对p38信号级联的活化作用，以及p38活化通过转录活化和翻译/mRNA稳定化作用而在炎症响应中产生的下游作用。
图2为显示各种吡非尼酮代谢物和类似物对p38γ的部分抑制的图，其中所述吡非尼酮代谢物和类似物是该化合物的浓度的函数。这些化合物的EC50浓度在图的右侧部分显示。该试验的详细描述可以在实施例5中看到。
图3为显示各种吡非尼酮代谢物和类似物对p38γ的部分抑制的图，其中所述吡非尼酮代谢物和类似物是该化合物的浓度的函数。这些化合物的EC50浓度在图的右侧部分显示。该试验的详细描述可以在实施例5中看到。
图4为各种吡非尼酮代谢物和类似物的生物化学数据总结。借助图4中的取代图案对图2、3、5和6中提到的该吡非尼酮代谢物和类似物进行了描述。该总结显示了在三个位置的取代对于抑制p38α和p38γ的EC50浓度的影响。
图5为显示各种吡非尼酮代谢物和类似物的部分活性(响应于LPS而从巨噬细胞中释放出TNFα)，其中该部分活性为每个化合物的浓度的函数。该试验的详细描述可以在实施例5中看到。
图6为一系列柱形图表，其显示了在不同化合物浓度下各个吡非尼酮代谢物和类似物的细胞毒性。在该化合物的存在下，通过在细胞培养之后测量LDH的释放来确定细胞毒性。将释放的LDH量标准化至用Triton-X-100进行治疗时所释放的水平，并相对于化合物浓度作图。
优选实施方案的详细描述 现已发现，在治疗与激酶p38的增强的活性有关的各种疾病时使用相对低-效的p38激酶抑制剂化合物可以实现高的治疗效果。
因此，在一个实施方案中提供一种通过使化合物与p38促分裂原-活化蛋白激酶(MAPK)接触而调节应激-活化激酶(SAPK)系统的方法。优选的化合物在抑制至少一种p38MAPK时显示的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。为了使该化合物对p38产生抑制作用，该化合物与p38MAPK的接触浓度通常小于EC30。优选，该浓度小于EC20，甚至更优选，该浓度小于EC10。
“促分裂原-活化蛋白激酶(MAPK)”是进化的保藏丝氨酸/苏氨酸激酶，其参与调节许多细胞事件。在哺乳动物细胞内已经确定了若干MAPK组，包括胞外信号-调节激酶(ERK)、p38和SAPK/JNK。人们相信MAPK被其特定的MAPK激酶(MAPKK)激活ERK被MEK1和MEK2激活，p38被MKK3和MKK6激活，和SAPK/JNK被SEK1(也称作MKK4)和MKK7(SEK2)激活。这些MAPKK还可以被各种MAPKK激酶(MAPKKK)，例如Raf、MLK、MEKK1、TAK1和ASK1激活。
人们相信MAPK网络包括至少12个克隆的、高度保守的脯氨酸-指向的丝氨酸-苏氨酸激酶，该激酶在被细胞应激(氧化性应激、DNA损坏、热或渗压震扰、紫外辐射、局部缺血-再灌注)、外源性试剂(茴香霉素、亚砷酸钠、脂多糖、LPS)或促炎性细胞因子、TNF-α和IL-1β激活时，其可以发生磷酸化作用并激活其它激酶或核蛋白，例如细胞质或细胞核内的转录因子(图1)。
p38MAPK 如本文中所用的，“p38MAPK”是应激-活化蛋白酶家族中的一员，其包括至少4种异构形式(α、β、γ、δ)，人们认为其中的若干种异构形式在对于炎症响应和组织重建至关重要的过程中是很重要的(Lee等人，2000Immunopharmacol.47185-201)。在单核细胞和巨噬细胞的主要激酶中，p38α和p38β与p38γ(骨骼肌)或p38δ(睾丸、胰腺、前列腺、小肠，以及唾液腺、垂体和肾上腺)相比似乎具有更广泛的表达。p38γ异构形式在成肌纤维细胞中进行表达，其与包括α-平滑肌肌动蛋白表达的肌细胞具有一些表型类似性。已经鉴定出许多p38MAP激酶的底物，包括其它激酶(MAPKAP K2/3、PRAK、MNK 1/2、MSK1/RLPK、RSK-B)、转录因子(ATF2/6、肌细胞增强因子2、核转录因子-β、CHOP/GADD153、E1k1和SAP-1A1)和癌蛋白18(stathmin)，其中的许多激酶在生理上都是很重要的。
Jiang，Y.等人在1996J Biol Chem 27117920-17926中报道了p38β作为与p38-α密切相关的372-氨基酸蛋白的特性。p38α和p38β被促炎性细胞因子和环境应力激活，p38β优选被MAP激酶激酶-6(MKK6)激活，并优选使被激活的转录因子2(ATF2)发生磷酸化作用。Kumar，S.等人在1997Biochem Biophys Res Comm 235533-538中和Stein，B.等人在1997J Biol Chem 27219509-19517中报道了p38β的第二个异构形式，p-38β2，其含有364种氨基酸，其中73％与p38α一致。虽然与p38α的更普遍的组织表达相比，第二个报道的p38β异构形式，p38β2似乎优先在中枢神经系统(CNS)、心脏和骨骼肌内表达，但人们还是认为p38β被促炎性细胞因子和环境应力激活。而且，人们相信对于p38β2和p38α，被激活的转录因子-2(ATF-2)是p38β2更好的底物。
Li，Z.等人在1996Biochem Biophys Res Comm 228334-340中报道了p38γ的鉴定，Wang，X.等人在1997J Biol Chem 27223668-23674中和Kumar，S.等人在1997Biochem Biophys Res Comm 235533-538中报道了p38δ的鉴定。基于其组织表达图案、底物的利用、对于直接和间接刺激的响应和对于激酶抑制剂的敏感性，这两个p38异构形式(γ和δ)代表MAPK家族的特有的亚类。基于主要的序列保藏，p38α和β密切相关，但是与γ和δ不同，而γ和δ彼此却更加密切相关。
通常，p38MAP激酶途径被细胞表面受体，例如受体酪氨酸激酶、趋化因子或G蛋白-偶合受体直接或间接激活，而该细胞表面受体被特定的配体，例如细胞因子、趋化因子或结合在同类受体上的脂多糖(LPS)所激活。随后，p38MAP激酶被特定苏氨酸和酪氨酸残基上的磷酸化作用所激活。被激活之后，p38MAP激酶可以使其它胞内蛋白，包括蛋白激酶发生磷酸化作用，并且可以被转移到细胞核内，在细胞核内其使转录因子发生磷酸化作用并将其激活，从而导致促-炎性细胞因子和促进炎症响应的其它蛋白的表达、细胞粘着和蛋白水解的降解。例如，在骨髓系细胞，例如巨噬细胞和单核细胞内，IL-Iβ和TNFα响应p38的激活而被转录。这些和其它细胞因子随后所进行的翻译和分泌引发相邻组织内以及通过白细胞浸渗的局部或系统性炎症响应。尽管该响应为针对细胞应激的正常部分的生理响应，急性或慢性细胞应激导致对促炎性细胞因子的过量表达、无节制表达，或者过量且无节制的表达。其反过来导致组织损伤，通常引起疼痛和虚弱。
在肺泡巨噬细胞中，p38抑制剂，SB203580对p38激酶的抑制作用减少了细胞因子基因产物。人们相信炎性细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-5)和趋化因子(IL-8、RANTES、eotaxin)能够调节或支持慢性呼吸道炎症。呼吸道炎症的很多潜在媒介物的产生和作用都显示依赖于应激-活化MAP激酶系统(SAPK)或p38激酶级联(Underwood等，2001Prog RespirRes 31342-345)。由许多环境刺激引起的p38激酶途径的激活使识别出的炎症媒介物得到修饰，其中人们认为该识别出的炎症媒介物的产生被认为受到翻译调节。此外，各种炎症媒介物激活p38MAPK，其然后再激活包括其它激酶或转录因子的MAPK下游靶标，从而产生放大肺内的炎症过程的潜力。
MAP激酶的p38组的下游底物 p38α或p38β蛋白激酶底物MAP激酶-活化蛋白激酶2(MAPKAPK2或M2)、MAP激酶相互作用蛋白激酶(MNK1)、p38调节/活化激酶(PRAK)、促分裂原-和应激-活化激酶(MSKRSK-B或RLPK)。
p38激活的转录因子激活转录因子(ATF)-1、2和6、SRF辅助蛋白1(Sap 1)、CHOP(可诱使生长停止和DNA损坏的基因153或GADD153)、p53、C/EBPβ、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、MEF2A、MITF1、DDIT3、ELK1、NFAT和高迁移率族-匣(group-box)蛋白(HBP1)。
其它类型的p38底物cPLA2、Na+/H+交换剂异构形式-1、τ、角蛋白8和癌蛋白18。
由p38途径调节的基因c-jun、c-fos、junB、IL-I、TNF、IL-6、IL-8、MCP-1、VCAM-1、iNOS、PPARγ、环加氧酶(COX)-2、胶原酶-1(MMP-1)、胶原酶-3(MMP-13)、HIV-LTR、Fg1-2、脑钠尿肽(BNP)、CD23、CCK、磷酸烯醇丙酮酸酯羧酸-激酶-胞浆、细胞周期调节蛋白D1、LDL受体(Ono等，2000Cellular Signalling 121-13)。
p38活化的生物学结果 p38和炎症 人们相信，急性和慢性炎症是许多疾病发病机理的关键，例如类风湿性关节炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合症(ARDS)。p38途径的激活在下述过程中可能起至关重要的作用(1)促炎性细胞因子，例如IL-1β、TNF-α和IL-6的产生；(2)对酶例如COX-2的诱导，其控制病理状况下的结缔组织重塑；(3)胞内酶例如iNOS的表达，其调节氧化作用；(4)对粘附蛋白，例如VCAM-1和许多其它与炎症有关的分子进行诱导。除此之外，p38途径在免疫系统细胞的增殖和分化中起到调节作用。p38可以参与GM-CSF、CSF、EPO和CD40-诱导的细胞增殖和/或分化。
在若干动物模型中研究了p38途径在炎症相关的疾病中的作用。SB203580对p38的抑制作用降低了由内毒素-诱导的休克的鼠科模型的死亡率，而且抑制小鼠的胶原质-诱导的关节炎和大鼠辅助关节炎的发展。最近的研究显示，SB220025，一种更有效的p38抑制剂，使肉芽瘤的血管密度产生显著的剂量-依赖性降低。这些结果说明p38或者p38途径的组分可以作为用于炎症疾病的治疗靶标。
p38和细胞凋亡 据显示，p38的伴随激活和凋亡由各种试剂诱导，例如NGF的停药和Fas结扎。半胱氨酸蛋白激酶(caspases)是凋亡途径的关键，而且其被表达为无活性的酶原。之后Caspase抑制剂可以通过Fas交联来阻断p38的活化。但是，显性的活化MKK6b的过表达也可能诱发caspase活性和细胞死亡。p38在细胞凋亡中的作用依赖于细胞类型和刺激物。虽然已经显示p38信号可以促进一些细胞系中的细胞死亡，但是据显示在不同的细胞系中p38也能提高存活、细胞生长和分化。
细胞周期中的p38 p38α在酵母菌中的过表达导致增殖作用的显著减慢，其说明p38α参与细胞的生长。当用p38α/β抑制剂，SB203580处理细胞时观察到培养的哺乳动物细胞的增殖减慢。
p38和心肌细胞肥大 已经对p38在心肌细胞肥大中的活化和功能进行了研究。在肥大发展过程中，p38α和p38β的水平都提高，而且肌原纤维节组织和升高的前房利尿钠因子的表达使由基本活化的MKK3和MKK6-引起的肥大响应得以增强。而且，在心脏内减弱的p38信号通过涉及钙调磷酸酶-NFAT信号的机理来促进肌细胞的分化。
p38和发育 尽管剔除p38的小鼠无存活能力，但是有证据表明p38在发育中的分化作用。在若干研究中人们已经将p38与胎盘的血管形成联系起来，但是未将其与心脏血管的发育联系起来。此外，还将p38与红细胞生成素的表达联系起来，暗示其在红细胞的生成中具有作用。最近发现PRAKD涉及鼠科动物移植物的细胞发育。已发现PRAK mRNA以及p38异构形式在胚泡发育的整个过程中进行表达。
p38和细胞分化 人们发现对于若干不同的细胞类型而言，p38α和/或p38β在细胞分化中都起重要的作用。3T3-L1细胞分化为脂肪细胞和PC12细胞分化为神经细胞的分化作用都需要p38α和/或β。还发现p38途径对于SKT6分化为血球蛋白(hemoglobinized)细胞以及C2C112分化为肌管(myotubules)是必不可少也是足够的。
在衰老和肿瘤抑制中的p38 p38在肿瘤的产生和衰老中具有作用。已报道，取决于p38MAPK的活性，MKK6和MKK3的激活会产生衰老表型。而且，据显示p38MAPK活性是响应端粒缩短、H2O2暴露和慢性RAS致癌基因信号从而产生衰老的根源。肿瘤细胞的普遍特征是衰老损失，而且某些细胞中的p38与肿瘤的产生有关联。已报道，无论用于这些研究中的细胞系或肿瘤诱导试剂如何，肿瘤中的p38活化都减弱，而且p38途径组分，例如MKK3和MKK6的损失导致增殖和类似的致瘤转化作用的增加。
p38MAP激酶抑制剂 “p38MAPK抑制剂”为抑制p38活性的化合物。可以通过熟练技术人员公知的各种方法测量化合物对p38活性的抑制作用。例如，可以通过测量抑制脂多糖(LPS)-刺激型细胞因子产生的水平来测量抑制作用(Lee等人，1988 Int J Immunopharmacol 10835-843；Lee等人，1993AnnNY Acad Sci 696149-170；Lee等人，1994Nature 372739-746；Lee等人，1999Pharmacol Ther 82389-397)。
研发p38MAPK抑制剂的力量都集中于提高效力上。人们发现SB203580和其它2，4，5-三芳基咪唑是有效的p38激酶抑制剂，其EC50值在纳摩尔范围内。例如，测得SB203580的EC50为48nM。下面显示的吡啶基咪唑SKF 86002(P1)和SB203582(P2)已经被用作大部分p38抑制剂的模板。最近的公开物(Lee等人，2000 Immunopharmacology47185-201)已公开了下示的p38抑制剂(P3-P6)。这些抑制剂引人注意的特征是针对化合物4所描述的相对较高的效力和选择性(p38EC50＝0.19nM)，和SB 220025(P6)对于由炎症驱使的新血管形成的抑制作用。
临床研发中报道的两种p38抑制剂为HEP689(P7)和VX-745(P8)。在用于类风湿性关节炎的II期试验中报道了VX-745。已经公开了HRP689的有效的局部抗炎活性，据报道其已经进入临床研发阶段，用以探索其作为局部试剂用于治疗牛皮癣和其它皮肤病的潜力。


对p38抑制剂的进一步探讨可以在Boehm等人，2000Exp Opin TherPat 1025-37；和Salituro等人，1999Curr Med Chem 6807-823中找到。
本文中描述的优选的p38抑制剂为显示相对低的p38抑制效力，但由于这种抑制作用而令人惊讶地仍具有相对高的治疗效果的吡非尼酮衍生物和类似物(例如，用于调节SAPK系统)。优选，该实施方案的p38抑制剂在抑制p38MAPK时显示的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。
吡非尼酮衍生物和类似物 吡非尼酮(5-甲基-1-苯基-2-(1H)-吡啶酮)本身是已知化合物，而且其药理学作用已经被例如下述文献
公开日本专利申请KOKAI(公开)No.87677/1974和1284338/1976；美国专利No.3,839,346，1974年10月1日出版；美国专利No.3,974,281，1976年8月10日出版；美国专利No.4,042,699，1977年8月16日出版；和美国专利No.4,052,509，1977年10月4日出版，所有文献的全文据此引入本文作为参考，其描述了5-甲基-1-苯基-2-(1H)-吡啶酮的制备方法及其作为抗炎试剂的用途。
吡非尼酮及其衍生物是可用于调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统的化合物。
本文中使用的术语“烷基”指1-10个碳原子的单价直链或支链基团，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等。
本文中使用的术语“烯基”指含有碳双键的2-10个碳原子的单价直链或支链基团，包括但不限于1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
本文中使用的术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
本文中使用的术语“卤代烷基”指连在烷基上的一个或多个卤素基团。
本文中使用的术语“硝基烷基”指连在烷基上的一个或多个硝基。
本文中使用的术语“硫代烷基”指连在烷基上的一个或多个硫基。
本文中使用的术语“羟基烷基”指连在烷基上的一个或多个羟基。
本文中使用的术语“烷氧基”指通过-O-连接而共价键合在母体分子上的直链或支链烷基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
本文中使用的术语“烷氧基烷基”指连在烷基上的一个或多个烷氧基。
本文中使用的术语“羧基”指任选连接在烷基上的-COOH。羧基的例子包括但不限于-COOH、-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-CH(COOH)(CH3)等。
术语“烷氧基羰基”指-(CO)-O-烷基。烷氧基羰基的例子包括但不限于甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基，等。
碳水化合物为多羟基醛或酮，或水解后产生这些化合物的物质。碳水化合物包括元素碳(C)、氢(H)和氧(O)，且氢与碳和氧的比为2。
在其基本形式中，碳水化合物是简单的糖类或单糖。这些简单的糖可以彼此结合形成更复杂的碳水化合物。两种单糖结合后是二糖。由2-10个单糖组成的碳水化合物称作低聚糖，而具有更多单糖的碳水化合物称作多聚糖。
术语“糖醛多糖(uronide)”指在非环部分的碳上具有羧基(-COOH)的单糖。糖醛多糖的名字中保留了单糖的词根，但是将糖的后缀-ose变为-uronide。例如，葡萄糖醛多糖(Glucoronide)的结构对应于葡萄糖。
如本文中所用的，基团指具有单个、未配对的电子的物质，则含有该基团的物质可以共价键合到另一种物质上。因此，在本文中，基团不一定是自由基。相反，基团指较大分子的特定部分。术语“基团”可以与术语“基”替换使用。
如本文中所用的，被取代的基团衍生自未取代的母体结构，其中该结构的一个或多个氢原子已经交换为另一个原子或基团。当被取代时，取代基为一个或多个单独或独立地选自下列基团的基团C1-C10烷基、C1-C10环烷基、芳基、稠合芳基、杂环基、杂芳基、羟基、C1-C10烷氧基、芳氧基、巯基、C1-C10烷硫基、芳硫基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、C1-C10烷氧基羰基、硝基、甲硅烷基、三卤代甲磺酰基、三氟甲基和氨基，包括单-和二-取代氨基，及其被保护的衍生物。可以形成上述取代基的保护衍生物的保护基团是本领域熟练技术人员已知的，而且可以在参考文献中找到，例如Greene和WutsProtective Groups inOrganic Synthesis；John Wiley和SonsNew York，1999。无论何种情况，只要取代基被描述为“任选被取代”，则该取代基可以被上述取代基取代。
术语“纯化的”指已经从其它化合物中分离出来的化合物，则在试验时其包括至少95％的被测物质。
本文中描述的化合物中可以存在不对称碳原子。所有这种异构体，包括非对映异构体和对映异构体及其混合物都意图包括在所述化合物的范围内。在某些情况下，化合物可以存在互变异构形式。所有互变异构形式也意图包括在所述化合物的范围内。同样地，当化合物含有烯基或亚烯基时，化合物可能存在顺式-和反式-异构形式。顺式-和反式-异构体，以及顺式-和反式异构体的混合物都是可预期的。因此，除非上下文中明确地另外指出，否则本文中所指的化合物包括所有前述异构形式。
各种形式都包括在实施方案中，包括多晶型物、溶剂化物、水合物、构象异构体、盐和前体药物衍生物。多晶型物为具有相同化学式但不同结构的组合物。溶剂化物为通过溶剂化作用而形成的组合物(溶剂分子与溶质分子或离子的组合)。水合物为通过与水的结合而形成的化合物。构象异构体是一种构象异构体结构。构象异构是具有相同结构式但围绕旋转键具有不同原子构象(构象异构体)的现象。化合物的盐可以通过本领域熟练技术人员已知的方法制备。例如，可以使适当的碱或酸与等化学计量的化合物反应而制备化合物的盐。前体药物是在进行生物转化(化学转化)之后才显示药理8学作用的化合物。因此例如，可以将前体药物视为含有特定保护基团的药物，其中所述保护基团被短暂使用以改变或消除母体分子中的不希望的性质。因此，除非上下文中明确另外指出，否则本文中所指的化合物包括所有前述形式。
下面描述的化合物可以用在本文中的方法中。在一个实施方案中，下面描述的化合物在抑制p38MAPK时显示的EC50为约1μM-约1000μM。
一个实施方案提供了由下类(类Ia)代表的化合物族
类Ia； 其中，R1、R2、R3和R4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖；和 X1、X2、X3、X4和X5独立地选自H、卤素、烷氧基和羟基。
另一个实施方案提供由下类(类Ib)代表的化合物族
类Ib； 其中，X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基和OH； R2选自H、卤素、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖；和 R4选自H、卤素和OH。
另一个实施方案提供由下类(类Ic)代表的化合物族
类Ic； 其中，X3选自H、F、OH和OCH3； R2选自H、CF3、CHF2、CH2F、CH2OH、COOH、CO-葡萄糖醛多糖、Br、CH3和CH2OCH3；和 R4选自H和OH； 条件是当R4和X3为H时，R2不为CH3。
另一个实施方案提供由下列亚类(亚类II)代表的化合物族
亚类II； 其中，X3选自H、OH和OCH3； R2选自H、CH2OH、COOH、CO-葡萄糖醛多糖、Br、CH3和CH2OCH3；和 R4选自H和OH，条件是当X3为OH时，则R2不为CH3。
另一个实施方案提供由下列亚类(亚类III)代表的化合物族
亚类III； 其中，X3选自H、F和OH；和 R2选自H、Br、CH2F、CHF2和CF3。
另一个实施方案提供由下列亚类(亚类IV)代表的化合物族
亚类IV； 其中，X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基、OH、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、苯基、取代的苯基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖。
另一个实施方案提供由下列亚类(亚类V)代表的化合物族
亚类V； 其中，X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、苯基、取代的苯基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖。
另一个实施方案提供由下类(类VI)所代表的化合物族
类VI 其中，Ar为吡啶基或苯基； Z为O或S； X3为H、F、Cl、OH、CH3或OCH3； R2为甲基、C(＝O)H、C(＝O)CH3、C(O)OCH3、C(＝O)O-葡糖基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴代、甲基甲氧基、甲基羟基或苯基；和 R4为H或羟基； 条件是当R2为三氟甲基，Z为O，R4为H且Ar为苯基时，该苯基不是仅在4’位置上被H、F或OH取代。
类VI包括由亚类VIa和亚类VIb所代表的化合物族
亚类VIa 西安市 亚类VIb 其中，Z、X3、R2和R4如类VI中的定义。应该认识到由亚类VIa代表的结构中的苯环在4’位置上被X3所取代。
另一个实施方案提供由下类(类VII)所代表的化合物族
类VII 其中，X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基和OH； Y1、Y2、Y3和Y4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基；和 R4选自H、卤素和OH。
应该认识到本文中描述的具体化合物可以为一个以上的上述不同类中的一员。本文中描述的化合物可以用于调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统。下表1中列出了可用于调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统的类Ia-c、亚类II-V和类VI和VII的示例化合物。化合物1-6为亚类II的化合物的例子。化合物7-12为亚类III的化合物的例子。化合物13为吡非尼酮，亚类II的化合物的例子。化合物14-32为类VI的化合物的例子。化合物33为类VII的例子。
表1 化合物编号化合物 1
2
3
4
5
化合物编号化合物 6
7
8
9
10
11
12
化合物编号化合物 13
14
15
16
17
18
19
20
21
化合物编号化合物 22
23
24
25
26
27
化合物编号化合物 28
29
30
31
32
33
另一个实施方案涉及由类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII代表的纯化化合物。纯化程度可以表示为如上所述的百分量。在优选的实施方案中，基于包括该纯化化合物的组合物的总重量计，类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII代表的纯化化合物的纯度为约96％或更大，更优选为约98％或更大。例如，一个实施方案提供纯化的化合物3(表1)。
类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII的化合物可以通过不同反应来合成。合成的例子包括下列指示的合成方案1、2和3。
合成方案1
X1＝X2＝X3＝X4＝H、烷基、烯基、硝基烷基、硫代烷基、苯基、取代的苯基、CH2Phe、卤素、羟基、烷氧基、卤代烷基； R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝H、烷基、烯基、硝基烷基、硫代烷基、苯基、取代的苯基、CH2Phe、卤素、羟基、烷氧基、卤代烷基；
合成方案2
Ullmann反应Chem.Pharm.Bull.45(4)719-721。通过2-羟基吡啶的芳基化作用得到目标化合物N-芳基-吡啶-2-酮。Ullmann反应可用于制备公开的化合物，但除了5-溴代类似物和化合物33之外，这两个化合物例如通过合成方案3获得。
在135℃下于氩气氛下将2-羟基吡啶(1mmol)、芳基碘或溴(2mmol)、CuI(0.1-0.5mmol)和溶于DMF(3ml)中的无水碳酸钾(1mmol)的混合物搅拌过夜。将深色的反应混合物置于醋酸乙酯和10％的氢氧化铵中。有机层用盐水洗涤并在硫酸镁上干燥。经柱色谱获得为类白色固体的目标化合物，产率25-60％。
合成方案3
通过用烷基硼酸对2-羟基吡啶进行芳基化作用可以获得目标化合物N-芳基-2-吡啶酮(Tetrahedron Lett，42(2001)3415-3418)。该烷基硼酸途径可以用于制备已公开的化合物。室温下于敞开的空气中将2-羟基吡啶(5mmol)、芳基硼酸(10mmol)、醋酸铜(II)(0.5-1mmol)、吡啶(10mmol)和溶于二氯甲烷(25ml)中的分子筛4A(0.5-1g)的混合物搅拌24-48小时。用含有EDTA的饱和碳酸氢钠洗涤反应混合物，并在硫酸钠上干燥有机相。通过柱色谱分离出为白色固体的目标化合物N-芳基-2-吡啶酮，产率85-100％。
作为吡非尼酮衍生物，还可以基于已知的吡非尼酮的合成方案，通过本领域已知的任何常规反应来制备类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII的化合物，例如美国专利No.3,839,346；3,974,281；4,042,699；和4,052,509中所公开的方案，所有这些文献的全部内容据此明确地引入本文作为参考。
本文中描述的原料可以商购获得、为已知材料，或者可以通过本领域已知的方法制备。此外，本文中未描述的原料也可以商购获得、为已知材料，或者通过本领域已知的方法制备。
原料可以具有适当的取代基，从而最终得到具有相应取代基的希望的产物。或者，取代基可以加入到合成的任意点上，用以最终得到具有相应的取代基的希望的产物。
合成方案1-3显示了可以用于制备类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物的方法。本领域熟练技术人员应该理解，可以使用许多不同的合成反应方案来合成类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII的化合物。此外，本领域熟练技术人员应该理解，在合成反应中可以使用许多不同的溶剂、偶联剂和反应条件，以得到相当的结果。
本领域熟练技术人员应该理解反应顺序的改变，进一步地，还应该认识到可以根据所示的类似反应，或者根据其它已知的可以适当用于上述方法中以制备类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物的反应而对适当的反应条件进行变化。
在本文中描述的用于制备类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII的化合物的方法中，保护基团的使用通常是有机化学领域熟练技术人员公知的，因此在一些情况下适当的保护基团的使用可以暗含在本文的反应方案中，虽然这种基团可能未被明确地表达出来。这种保护基团的引入和除去是有机化学领域公知的；参见，例如T.W.Greene，″Protective Groupsin Organic Synthesis″，Wiley(New York)，1999。本文中描述的反应的产物可以按照常规方式分离，例如萃取、蒸馏、柱色谱等。
可以使适当的碱或酸与计量相当的化合物反应来制备类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物的盐，例如药学可接受的盐。类似地，类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物的药学可接受的衍生物(例如，酯)、代谢物、水合物、溶剂化物和前体药物可以按照本领域熟练技术人员公知的方法来制备。因此，另一个实施方案提供作为活性化合物的前体药物的化合物。通常，前体药物是在体内进行代谢(例如，通过代谢转换，例如去氨基、脱烷基、脱-酯化等)而提供活性化合物的化合物。“药学可接受的前体药物”意指在合理的医疗判断范围内，适宜药用于患者并且没有过分的毒性、刺激、变态反应反应等，而且可有效实现意图的用途的化合物，如果可能的话其包括本实施方案的化合物的药学可接受的酯以及两性离子形式。药学可接受的前体药物类型的例子在T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，A.C.S.Symposium Series的第14卷，以及Edward B.Roche，ed.，BioreversibleCarriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association andPergamon Press，1987中进行了描述，该两篇文献的全部内容据此特别地引入本文作为参考。
本文中描述的化合物和组合物还可以包括代谢物。如本文中所用的，术语“代谢物”意指实施方案的化合物或其药学可接受的盐、类似物或衍生物经代谢作用之后的产物，其在体外或体内与实施方案的化合物显示类似的活性。本文中描述的化合物和组合物还可以包括水合物和溶剂化物。如本文中所用的，术语“溶剂化物”指溶质(此处为类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII的化合物)与溶剂形成的络合物。用于实施方案的这种溶剂优选不应妨碍溶质的生物活性。作为例子，溶剂可以为水、乙醇或醋酸。从前述内容的角度来看，本文中所指的具体化合物或化合物亚类应该理解为包括上述的各种形式，除非另外说明否则包括其药学可接受的盐、酯、前体药物、代谢物和溶剂化物。
抑制p38MAP激酶的方法 在一个实施方案中，提供在体外或体内调节SAPK系统的方法。这些方法包括使SAPK-调节浓度的化合物与至少一种p38MAPK接触(例如，使该化合物与含有至少一种p38MAPK的细胞或组织接触)，其中在用该化合物对至少一种p38MAPK进行抑制时，对应于相对较高的抑制浓度，该化合物对于至少一种p38MAPK具有相对较低的抑制效力。
“与细胞接触”指一种条件，在该条件下化合物或物质的其它组合物与细胞或组织直接接触，或者足够紧密以至于在细胞或组织中诱使希望的生物学作用。例如，可以以能够使p38MAPK与化合物之间进行相互作用的任意方式使含有p38MAPK的细胞或组织与化合物接触，从而在细胞中产生希望的生物学作用。可以例如通过混合或给药化合物(例如，Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII和/或其盐、酯、前体药物和/或中间体，和/或包括一种或多种前述物质的药学可接受的组合物)来实现与细胞或组织的接触。
可选地，可以通过使化合物直接或间接靶向于含有p38MAPK的细胞或组织的方式引入化合物，从而实现与细胞或组织的接触。可以在使化合物与至少一种p38MAPK相结合的条件下实现与细胞或组织的接触。这种条件可以包括化合物和含有p38的细胞或组织的接近度、pH、温度或可以影响化合物对p38MAPK的结合的任何条件。
在某些实施方案中，使细胞与化合物在体外接触；在其它实施方案中，使细胞与化合物在体内接触。
当与细胞在体内接触时，化合物的有效浓度(EC)为该化合物使特定终点降低目标百分数(例如，50％、40％、30％、20％、10％)时的浓度，其中所述降低百分数为相对于可观察到的该化合物使特定终点产生的最大降低值而得的百分数。这种终点可以为生理响应，例如使血液或其他体液中的TNFα浓度发生降低。例如，将EC50、EC40、EC30、EC20和EC10确定为血清TNFα浓度分别降低50％、40％、30％、20％和10％时的浓度，其中所述百分率为相对于在剂量-响应曲线上可观察到的最大降低值的百分数。
当与细胞在体外接触时，除了细胞-基的试验之外，有效浓度(EC)均为使特定靶标的活性降低预定百分数(例如，50％、40％、30％、20％、10％)时的浓度。例如，将EC50、EC40、EC30、EC20和EC10确定为在剂量-响应曲线上使指定靶标的活性分别降低50％、40％、30％、20％和10％时的浓度。当没有实现对指定靶标的完全抑制时，化合物的有效浓度(EC)为相对于该化合物导致的靶标活性的最大降低值而言，使靶标活性降低预定百分数(例如，50％、40％，、30％、20％、10％)时的浓度。
当在细胞-基试验中与该细胞在体外接触时，化合物的有效浓度(EC)为相对于可观察到的该化合物产生的特定终点的最大降低值而言，使特定终点降低目标百分数(例如，50％，40％，30％，20％，10％)时的浓度。这种终点可以为细胞响应，例如，根据TNFα在细胞介质中的浓度而确定的TNFα分泌的减少。例如，将EC50、EC40、EC30、EC20和EC10确定为相对于在剂量-响应曲线上可观察到的最大降低而言，使TNFα浓度分别降低50％、40％、30％、20％和10％时的浓度。
在抑制至少一种p38MAPK时，SAPK系统-调节化合物的EC50优选为约1μM-约1000μM，更优选为约50μM-约650μM。因此，例如对于SAPK系统的调节可包括使浓度小于EC40，优选小于EC30，更优选小于EC20，甚至更优选小于EC10的化合物(例如，类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物)与至少一种p38MAPK接触，其中该化合物抑制至少一种p38MAPK的EC值要根据体内剂量-响应曲线来确定。
在某些实施方案中，提供的化合物为与药学可接受的载体结合在一起的药物组合物形式。
对化合物库进行筛选以找寻低-效力的p38抑制剂 在另一个方面中，提供了一种用于确定药物活性化合物的方法，例如用于确定化合物是否可用作潜在的治疗试剂，例如用于预防或治疗炎性病症(例如，p38-或细胞因子-有关的病症)。该方法包括试验多个化合物以确定其对至少一种p38MAPK的抑制作用，并选择显示出相对较低的p38MAPK抑制效力的化合物。优选，用于抑制至少一种p38MAPK时这种低-效p38抑制剂化合物的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。用于试验的多个化合物优选选自潜在化合物库。可以以各种方式对选自该库的多个化合物进行试验。例如，在一些实施方案中，该方法进一步包括使至少一种p38MAPK与多个化合物接触，并确定该化合物是否抑制细胞因子的活性。p38MAPK优选选自p38α、p38β、p38γ和p38δ。在优选的实施方案中，接触步骤在体内进行；在某些优选实施方案中，接触步骤包括使包括p38MAPK的细胞与该化合物接触。
在另一个实施方案中，提供用于在体外或在体内抑制细胞中p38MAPK活性的方法。通常，这种方法包括在抑制细胞中p38活性的条件下，使含有至少一种p38MAPK的细胞与p38-抑制有效量的化合物(例如，类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物)接触。这种方法的例子在下面的实施例部分有所提供。用于抑制至少一种p38MAPK时，优选该化合物的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。在该化合物对至少一种p38MAPK进行抑制时，优选在小于EC30，优选小于EC20，更优选小于EC10的SAPK系统-调节浓度下使至少一种p38MAPK与化合物进行接触。
体内方法包括例如将各种浓度的感兴趣的化合物(例如，类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII化合物)口服或通过注射引入到一组动物体内。引入该化合物之后，静脉内给药脂多糖。测量血清的TNFα水平并与对照组动物比较。优选的化合物能够抑制TNFα释放，因此降低试验动物血液试样中的TNFα水平。用于抑制TNFα的释放时，优选该化合物的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。
确定药物活性化合物的方法还可以进一步包括确定所选化合物的哺乳动物毒性。这种方法通常是本领域熟练技术人员已知的。确定药物活性化合物的方法还可以包括将所选化合物给药于试验主体，同时确定哺乳动物活性或者用于其它目的。在一个实施方案中，试验主体患有炎性病症或有患病风险。优选该试验主体为哺乳动物，而且可以是人。
治疗和/或预防方法 另一个实施方案提供了治疗或预防疾病状态，例如炎性病症和/或纤维化病症的方法。该方法包括确定有患病风险或已患有至少一种选自炎性病症和纤维化病症的病症的主体，和将有效量的化合物给药于该主体以治疗或预防炎性病症和/或纤维化病症。在优选的实施方案中，在抑制至少一种p38MAPK时，该化合物显示出的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。在优选的实施方案中，有效量所产生的血液或血清或另一种体液的浓度小于该化合物抑制p38MAPK时的EC30，或优选小于EC20，或更优选小于EC10。在优选实施方案中，当对TNFα分泌进行抑制时，该化合物显示出的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。在其它的优选实施方案中，当该化合物抑制LPS-刺激型TNFα在体液中的释放时，由该有效量产生的血液或血清或另一种体液的浓度小于EC30，或优选小于EC20，或更优选小于EC15，或更优选小于EC10。该有效量优选为在主体体内引起不希望的副作用时的量的约70％或更小，更优选小于约50％，所述副作用例如为但不限于嗜睡、恶心、寒症、胃肠紊乱和光变态反应性皮疹。用于治疗或预防的化合物优选为类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII的化合物。
用于确定有患病风险或已患有炎性病症的主体的方法对本领域熟练技术人员来说是已知的。可以用本文中描述的方法治疗或预防的炎性病症的例子包括与p-38有关的病症，例如与改变细胞因子活性有关的病症、与SAPK系统的调节有关的病症、自体免疫疾病和与急性和慢性炎症有关的疾病。细胞因子(或多个细胞因子)优选选自但不限于IL-Iβ、IL-6、IL-8和TNFα。在一个实施方案中，用于治疗或预防炎性病症的化合物为抑制SAPK信号途径中的激酶的化合物。优选化合物的例子包括类Ia-c、亚类II-V和/或类VI和VII。
术语“与p38-有关的病症”意指其中直接或间接涉及到p38MAP激酶信号途径的疾病或其它有害病症。与p38-有关的病症的例子包括由IL-1β、TNFα、IL-6或IL-8失调引起的病症或由源自持续、延长、增强或升高的p38活性水平的过表达而引起的病症。这种病症包括但不限于炎症性疾病、自体免疫疾病、纤维化疾病、破坏性骨病、增生性疾病、感染性疾病、神经退行性疾病、变态反应、中风性再灌注局部缺血、心脏病、血管疾病、器官缺氧、血管增生、心脏肥大、凝血酶-诱导的血小板凝集，和与前列腺素或环加氧酶途径有关的病症，例如涉及前列腺素内过氧化物合成酶的病症。与p38-有关的病症还可以包括任何与p38异构形式有关或由其介导的病症。
“纤维化病症”、“纤维增殖性病症”、“纤维化疾病”、“纤维增殖性疾病”、“纤维化病”和“纤维增殖性病”可相互替换地用于指特征在于增殖失调或纤维原细胞的活性失调和/或成胶组织的病理或过度聚集的病症、疾病或障碍。通常，任何这种疾病、障碍或病症都能够通过给药具有抗-纤维化活性的化合物来治疗。纤维化病包括但不限于肺部纤维化，包括特发性肺部纤维化(IPF)和由已知病因引起的肺部纤维化、肝纤维化和肾纤维化。其它示范性纤维化病症包括肌肉骨骼纤维化、心脏纤维化、手术后的粘连、硬皮病、青光眼和皮肤损伤，例如瘢痕瘤。
术语“调节SAPK系统”意指无论在体外或体内，例如通过抑制p38的活性来提高或降低应激-活化蛋白激酶系统活性的活性。在某些实施方案中，当与未处理的对照细胞的p38活性相比，细胞中的p38活性被抑制约50％、优选约40％、更优选约30％、再更优选约20％或又更优选约10％时，则SAPK系统受到调节。
如本文中所用的，与改变的细胞因子活性有关的病症指与非-疾病状态相比其中的细胞因子活性被改变了的病症。其包括但不限于由导致持续、延长、增强或提高的细胞因子活性水平的IL-1β、TNFα、IL-6或IL-8的过度产生或失调而引起的病症，其可能与p38的活性有关。这种病症包括但不限于炎症性疾病、自体免疫疾病、纤维化疾病、破坏性骨疾病、增殖性疾病、感染性疾病、神经退行性疾病、变态反应、中风性再灌注/局部缺血、心脏病、血管疾病、器官缺氧、血管增生、心脏肥大、凝血酶-诱导的血小板凝集和与环加氧酶和脂肪氧化酶信号途径，例如前列腺素内过氧化合酶有关的病症。与细胞因子-有关的病症可以包括与IL-1(尤其是IL-1β)、TNFα、IL-6或IL-8，或者能够被p38调节的任何其它细胞因子有关或由其介导的任何病症。在优选的实施方案中，与细胞因子有关的病症为与TNFα有关的病症。
本文中描述的方法还可以用于治疗自体免疫疾病和与急性或慢性炎症有关的疾病。这些疾病包括但不限于慢性阻塞性肺病(COPD)、闭塞性细支气管炎综合症(bronchiolitis obliterans syndrome)、慢性同种异体移植物纤维化、炎性肺部纤维化(IPF)、类风湿性关节炎；类风湿性脊椎炎；骨关节炎；痛风、其它关节炎病；脓毒症；感染性休克；内毒素性休克；革兰氏阴性脓毒症；中毒性休克综合症；肌筋膜疼痛综合症(MPS)；细菌性痢疾；哮喘；成人呼吸窘迫综合症；炎性肠病；克罗恩氏病；牛皮癣；湿疹；溃疡性结肠炎；肾小球肾炎；硬皮病；慢性甲状腺炎；Grave’s病；奥蒙德病；自体免疫性胃炎；重症肌无力；自体免疫性溶血性贫血；自体免疫性嗜中性白细胞减少症；血小板减少症；胰腺纤维化；慢性活动性肝炎，包括肝纤维化；急性和慢性肾病；肾纤维化；过敏性肠综合症；pyresis；再狭窄；脑型疟；中风和局部缺血性损伤；神经损伤；阿尔茨海默氏病；亨庭顿病；帕金森病；急性和慢性疼痛；变态反应，包括变态反应性鼻炎和变态反应性结膜炎；心脏肥大；慢性心力衰竭；急性冠状动脉综合症；恶病质；疟疾；麻风病；利什曼病；莱姆病；莱特尔综合征；急性滑膜炎；肌肉变性；粘液囊炎；腱炎；腱鞘炎；、疝性、破裂性或脱垂性椎间盘综合症；骨硬化症；血栓形成；硅沉着病；肺肉瘤病；骨吸收疾病，例如骨质疏松症或多发性的与骨髓瘤-相关的骨病；癌，包括但不限于转移性乳腺癌、结肠直肠癌、恶性黑素瘤、胃癌和非-小细胞肺癌；移植物-对-宿主的反应；和自体-免疫性疾病，例如多发性硬化症、狼疮和纤维素肌痛；AIDS和其它病毒性疾病，例如带状疱疹、单纯疱疹I或II、流感病毒、严重的急性呼吸综合症(SARS)和巨细胞病毒；以及糖尿病。此外，这些实施方案的方法还可以用于治疗增殖性疾病(包括良性和恶性增生)，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、卡波济氏肉瘤、转移性黑素瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌，包括转移性乳腺癌；结肠直肠癌；恶性黑素瘤；胃癌；非-小细胞肺癌(NSCLC)；骨转移等；疼痛疾病，包括神经肌肉疼痛、头痛、癌症性疼痛、牙疼、和关节炎性疼痛；血管疾病，包括实体肿瘤血管生成、眼的新血管化和幼儿血管瘤；与环加氧酶和脂氧酶信号途径有关的病症，包括与前列腺素内过氧化物合成酶-2有关的病症(包括水肿、发热、痛觉缺失和疼痛)；器官缺氧；凝血酶-诱导的血小板凝集。此外，本文中描述的方法还可以用于治疗动物，包括哺乳动物体内的原生动物疾病。
主体可以包括一个或多个细胞或组织，或有机体。优选的主体为哺乳动物。哺乳动物可以包括任何哺乳动物。作为非-限制性的例子，优选的哺乳动物包括牛、猪、绵羊、山羊、马、骆驼、水牛、猫、狗、大鼠、小鼠和人。高度优选的哺乳动物主体为人。可以通过本领域已知的任何药物输送途径将化合物给药于主体。具体的示例性给药途径包括口服、眼用、直肠、经口腔、局部、经鼻、眼科、皮下、肌肉内、静脉内(弹丸浓注和输液)、大脑内、透皮和经肺部。
如本文中所用的，术语“治疗有效量”和“预防有效量”指足以治疗、缓解或预防确定的疾病或病症的化合物的量，或者足以显示出可检测的治疗、预防或抑制作用的化合物的量。可以例如通过下列实施例中公开的试验检测该作用。用于主体的精确的有效量取决于主体的体重、身材大小和健康状况；病症性质和程度；以及所选的用于给药的治疗剂或治疗剂组合。可以通过在临床医生的技能和判断范围内的常规试验来确定针对给定病况的治疗和预防有效量。优选，实施方案的化合物有效量产生的血液或血清或另一种体液浓度小于抑制p38MAP激酶时的EC30、EC20或EC10。
对于任何化合物而言，都可以于最初在例如肿瘤细胞的细胞培养试验或在动物模型，通常为大鼠、小鼠、兔子、狗或猪中估计治疗或预防有效量。动物模型还可以用于确定适当的浓度范围和给药途径。然后可以将这种信息用于确定人类可用的剂量和给药途径。
可以通过在细胞培养物或试验动物体内进行标准药物学步骤来确定治疗/预防效力和毒性，例如ED50(对50％的群体治疗有效的剂量)和LD50(使50％的群体致死的剂量)。治疗效果和毒性作用之间的剂量比为治疗指数，其可以表达为比例，ED50/LD50。显示出大的治疗指数的药物组合物是优选的。但是，显示窄的治疗指数的药物组合物也包括在本实施方案的范围内。从细胞培养试验和动物研究中获得的数据可以用于规划人类用的剂量范围。这种组合物中含有的剂量优选在包括ED50且毒性很小或无毒的循环浓度范围内。取决于所用的剂型、患者的敏感性和给药途径，剂量可以在该范围内变化。
更具体地说，取决于给药途径，最大血浆浓度(Cmax)可以为约65μM-约115μM，或约75μM-约105μM，或约85μM-约95μM，或约85μM-约90μM。文献中提供了对于具体剂量和输送方法的指导，这对于本领域的行医者而言通常是有用的。对于体重为约40-约100kg的患者而言，剂量通常为约100mg/日-约10g/日，或约200mg-约5g/日，或约400mg-约3g/日，或约500mg-约2g/日，其为单一、分次或连续的剂量(可以针对超过或低于该体重范围的患者，尤其是低于40kg的儿童来调节剂量)。通常，该剂量应该为约25mg/kg-约300mg/kg体重/日。
行医者根据与需要治疗的患者有关的因素能够确定准确的剂量。对剂量和给药进行调节以提供足够的活性试剂水平或保持希望的效果。要考虑的因素包括病情的严重性、主体总的健康情况、年龄、体重和主体性别、饮食、给药时间和频率、药物的结合、反应敏感性和对治疗的耐受/响应。取决于特定制剂的半衰期和清除速率，长效药物组合物可以每日给药2次、每日1次、每两日1次、一周3次、一周2次、每3-4天或每周1次。例如，在一个实施方案中，药物组合物含有本文中描述的化合物量，所选量用于按照选自下述的时间表对患者给药每日2次、每日1次、每两日1次、每周3次、每周2次和每周1次。
应该理解，本文中所述的治疗包括预防疾病、缓解症状、减缓疾病的发展、逆转损害或治愈疾病。
在一个方面中，对炎性病症的治疗导致受治疗的主体群与未治疗的主体群相比平均存活时间延长。优选，平均存活时间延长大于约30天；更优选大于约60天；更优选大于约90天；再更优选大于约120天。可以采用任何可重复的方式测量群体存活时间的延长。在优选的方面中，可以例如在用活性化合物开始治疗之后计算群体的平均存活长度，从而测量群体平均存活时间的延长。在另一个优选方面中，还可以例如在完成活性化合物的第一轮治疗之后计算群体的平均存活长度，从而测量群体平均存活时间的延长。
在另一个方面中，对炎性病症的治疗导致受治疗主体群与仅接受载体的主体群相比死亡率降低。在另一个方面中，对炎性病症的治疗导致受治疗主体群与未治疗主体群相比死亡率降低。在进一步的方面中，对炎性病症的治疗导致受治疗主体与用非本实施方案的化合物，或其药学可接受的盐、代谢物、类似物或衍生物的药物进行单一治疗的群体相比死亡率降低。优选，死亡率降低大于约2％；更优选大于约5％；更优选大于约10％；最优选大于约25％。在优选方面中，可以通过任何可重复的方式测量受治疗主体群的死亡率的降低。在另一个优选方面中，可以例如在用活性化合物开始治疗之后计算每单位时间内与疾病有关的死亡群体的平均数，从而测量群体死亡率的降低。在另一个优选方面中，还可以例如在完成活性化合物的第一轮治疗之后计算每单位时间内与疾病有关的死亡群体的平均数，从而测量群体死亡率的降低。
在另一个方面中，对炎性病症的治疗导致肿瘤生长速率降低。优选，相对于治疗之前的数值而言，肿瘤生长速率降低至少约5％；更优选，肿瘤生长速率降低至少约10％；更优选降低至少约20％；更优选降低至少约30％；更优选降低至少约40％；更优选降低至少约50％；甚至更优选降低至少约60％；最优选降低至少约75％。可以通过任何可重复的测量方式测量肿瘤生长速率。在优选方面中，根据每单位时间内肿瘤直径的变化测量肿瘤生长速率。
在另一个方面中，对炎性病症的治疗导致细胞增殖速率降低。优选，在治疗之后细胞增殖速率降低至少约5％；更优选至少约10％；更优选至少约20％；更优选至少约30％；更优选至少约40％；更优选至少约50％；甚至更优选至少约60％；最优选至少约75％。可以通过任何可重复的测量方式测量细胞增殖速率。在优选方面中，例如通过测量每单位时间内组织试样内的分化细胞数量而测量细胞增殖速率。
在另一个方面中，对炎性病症的治疗导致增殖细胞比例的降低。优选，在治疗之后增殖细胞的比例降低至少约5％；更优选至少约10％；更优选至少约20％；更优选至少约30％；更优选至少约40％；更优选至少约50％；甚至更优选至少约60％；最优选至少约75％。可以通过任何可重复的测量方式测量增殖细胞的比例。在优选方面中，例如通过确定在组织试样中分化细胞数量相对于未分化细胞的量值来测量增殖细胞的比例。在另一个优选方面中，增殖细胞的比例等于有丝分裂指数。
在另一个方面中，对炎性病症的治疗导致细胞增殖区域或区的尺寸减小。优选，治疗后与治疗之前的尺寸相比，细胞增殖区域或区的尺寸减小至少约5％；更优选减小至少约10％；更优选减小至少约20％；更优选减小至少约30％；更优选减小至少约40％；更优选减小至少约50％；甚至更优选减小至少约60％；最优选减小至少约75％。可以通过任何可重复的测量方式测量细胞增殖区域或区的尺寸。在优选的方面中，细胞增殖区域或区的尺寸可以测定为细胞增殖区域或区的直径或宽度。
本文中描述的方法可以包括确定需要治疗的主体。在优选的实施方案中，该方法包括确定需要治疗的哺乳动物。在高度优选的实施方案中，该方法包括确定需要治疗的人类。可以通过任何方式来确定需要治疗的主体，只要该方式指示出能够从治疗中受益的主体即可。例如，可以通过临床诊断、实验室试验或本领域熟练技人员已知的任何其它方式，包括用于确定的方式的组合来确定需要治疗的主体。
如本文其它地方所描述的，本文中所述的化合物可以制成药物组合物，如果希望还可以通过可以治疗疾病或病症的任何途径给药。优选的给药途径为口服给药。可以采取单剂量的给药方式给药，或者可以经一段时间，作为分剂量或连续-释放的制剂或给药方法(例如，泵)来给药实施方案的化合物。但是，将实施方案的化合物给药于主体时，应该对给药的化合物量和所选的给药途径进行选择从而可以有效治疗疾病病症。
实施方案的方法还可以包括本文中描述的化合物与一种或多种其它治疗试剂一起用于治疗疾病病症的用途。因此例如，活性成分的组合可以为(1)共同配制和在组合制剂中同时给药或递送；(2)作为单独的制剂交替或平行递送；或(3)本领域已知的任何其它治疗方案。当在交替疗法中送药时，本文中描述的方法可以包括例如在单独的溶液、乳液、悬浮液、片剂、丸剂或胶囊中，或者通过单独的注射器中的不同注射剂依次给药或送药。通常，在交替治疗的过程中，依次给药，即连续给药有效剂量的各活性成分，而在同时治疗中，一起给药有效剂量的两种或多种活性成分。还可以使用间歇组合疗法的各种顺序。
诊断试验被视为本文中描述的方法的一部分。例如，可以从患有炎性病症，例如与p38-有关或与细胞因子-有关的病症的主体体内取得组织的活体组织切片试样。可以对活体组织切片进行试验以确定试样中存在的p38的活性水平(或细胞因子水平)，然后可以使试样与所选的实施方案的化合物接触，并测量p38的活性(或细胞因子的活性)以确定化合物是否具有希望的作用(例如，对p38或细胞因子活性的抑制作用的EC50为约100μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM)。这种试验可以用于确定使用这种化合物进行的治疗对该主体是否会有效。或者，可以使该试样与标记的化合物(例如，荧光-标记的化合物或辐射-标记的化合物)接触，然后检查样品并检测荧光或辐射信号以确定p38在组织试样中的分布。在治疗过程中还可以重复取得活体组织切片试样以用于研究治疗效果。根据本说明书的教导，则使用本文中描述的化合物的其它诊断试验对于本领域普通技术人员来说是显而易见的。
因此，例如一个实施方案提供确定p38蛋白在细胞或组织试样中的存在、位置或量或其任意组合的方法。该方法包括a)在能够使该化合物结合到至少一种p38MAPK上的条件下使细胞或组织试样与该实施方案的化合物接触；和b)确定该化合物在细胞或组织试样中的存在、位置或量，或其任意组合，从而确定至少一种p38MAPK在细胞或组织试样中的存在、位置或量，或其任意组合。可以通过揭示该化合物在细胞或组织中的存在、位置或量，或其任意组合的任何方式来确定该化合物在细胞或组织试样中的存在、位置或量，或其任意组合。例如，如之前的描述，可以使用辐射或荧光标记法。确定该化合物的存在、位置或量，或其任意组合的其它方法对于熟练技术人员而言是显而易见的。
另一个实施方案提供确定下述问题的方法(1)化合物是否可以用作对患有炎性病症的主体进行治疗的治疗剂，或(2)疾病的严重性，或(3)在用疾病-缓解试剂治疗的过程中疾病的进展。该方法包括a)在用本文中描述的化合物或另一种疾病-缓解试剂进行治疗之前、过程中和之后获得细胞或组织试样；b)使该试样与该化合物接触；和c)确定与试样结合的化合物的量，其中化合物与p38MAPK的结合与试样中的p38MAPK的量有关。
预计用本文中描述的化合物和方法治疗的疾病的具体例子COPD 慢性阻塞性肺部疾病(COPD)的特征在于肺内的慢性炎症过程，其包括(1)在气道和实质内的增加的炎症细胞数量(嗜中性白细胞、巨噬细胞和SD8+T细胞)，(2)增加的炎症细胞因子和趋化因子的表达，和(3)增加的蛋白酶数量(弹性蛋白酶、组织蛋白酶和底物金属蛋白酶、MMP)。人们相信许多潜在的气道炎症媒介物的产生和活动都依赖于应激-诱导的MAPK或p38激酶级联。若干报道都支持pfp38激酶的激活与肺部事件的关联有关LPS-和TNF-α-诱导的细胞间粘着分子-1在肺部微血管内皮细胞上的表达、MMP-9的激活、缺氧-诱导的对肺部动脉细胞的刺激、血清高渗透压-诱导的IL-8在支气管上皮细胞内的表达，和增强的嗜酸性粒细胞的流通和存活。
据Trifilieff等人(2005Brit J Pharmacol 1441002-10)的报道，CGH2466，一种结合的腺苷受体拮抗剂、p38MAPK和磷酸二酯酶4型抑制剂在体外和体内显示出对疾病，例如哮喘和COPD的有效的抗炎活性。Underwood等人(2000Am J Physiol Lung Cell MoI Physiol 279L895-L902)指出有效且具有选择性的p38MAPK抑制剂，SB239063能减少促炎性细胞因子的产生，包括IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-8，其由于具有调节纤维原细胞增殖和底物产生的能力而与气道的纤维化联系起来；其减少了肺内嗜中性白细胞的流通和活化。早期，人们发现同一化合物能够改变与博来霉素诱导的慢性纤维化有关的响应。该抑制活性对于p38的α和β异构形式具有选择性。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗COPD。
肺部纤维化 也称作特发性肺部纤维化(IPF)的肺部纤维化、间质弥漫性肺部纤维化、炎症性肺部纤维化或纤维性肺泡炎是炎症性肺部疾病和特征在于在肺泡之间异常形成纤维化组织的不同类病症，其中所述异常形成是由包括炎症性细胞渗透入肺泡隔膜而导致的纤维化的肺泡炎所引起的。IPF的作用是慢性、发展的且通常是致命的。已经证实了p38MAPK在患有肺部纤维化的患者肺内的激活。许多关于肺部纤维化的研究都表明一些细胞因子在肺内的持续和扩张性表达与炎症细胞的补充和胞外底物化合物在肺结构重塑之后所进行的聚集有关。尤其，据证实促炎症性细胞因子，例如TNF-α和白细胞间介素IL-1β在肺炎和肺部纤维化的形成中起主要作用。此外，促纤维化细胞因子，例如TGF-β和CTGF在肺部纤维化的发病机理中也起至关重要的作用。Matsuoka等人(2002Am JPhysiol Lung Cell MoI Physiol 283L103-L112)已经证实p38抑制剂，FR-167653改善鼠科动物的博来霉素-诱导的肺部纤维化。此外，还发现吡非尼酮(5-甲基-1-苯基-2-(1H)-吡啶酮)，一种具有组合的抗炎、抗氧化和抗纤维化作用的化合物在肺部纤维化的试验模型以及临床研究中都有效(Raghu等人，1999Am J Respir Crit Care Med 1591061-1069；Nagai等人，2002 Intern Med 411118-1123；Gahl等人，2002Mol Genet Metab76234-242；Azuma等人，2002Am J Respir Crit Care Med 165A729)。本文中描述的化合物和方法可用于治疗肺部纤维化，例如IPF。
闭塞性细支气管炎和闭塞性细支气管炎综合症 闭塞性细支气管炎及其相关的临床病症，闭塞性细支气管炎综合症的特征在于由于闭塞肺部小气管而产生的肺部通道的阻塞。在闭塞性细支气管炎中，病理检查特征性地发现了能够阻塞或闭塞肺内的小气管的损伤。这些损伤为粒状纤维素粘液组织和致密的粘膜下层瘢痕组织。损伤过程是由长时间、异常或不正常的小气管上皮和上皮-局部结构的炎症发展而来，其由促炎性细胞因子，例如TNF-α介导并导致过量的纤维化增殖。肺部小气管的闭塞进程性导致气流阻塞，其特征就在于一秒内的最大呼气量(FEV1)日益下降，并通常伴有低级呼吸道反复感染和由致病微生物导致的对肺部组织的占据。
闭塞性细支气管炎综合症影响50-60％的经肺移植手术之后存活5年的患者，而且在闭塞性细支气管炎综合症发病之后存活5年的仅有30-40％。患有闭塞性细支气管炎综合症的肺移植患者对于增强的免疫抑制的响应很差。在患有特发性肺部纤维化的患者中，患有闭塞性细支气管炎综合症之后的患者比患有肺气肿的患者存活时间短。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗闭塞性细支气管炎综合症。
同种异体移植物慢性纤维化 同种异体移植失败是移植处理中一个深奥的问题。同种异体移植失败的一个主要原因是同种异体移植物的慢性机能障碍。同种异体移植物慢性机能障碍的特点是慢性炎症和慢性纤维化，两种情况都与炎性细胞因子和生长因子的产生有关。炎性细胞因子和生长因子的介导，尤其是导致胶原质中断和TGF产生的介导可用于治疗慢性同种异体移植物纤维化。如本文中所用的，术语“慢性同种异体移植物纤维化”意图包括与慢性同种异体移植物纤维化有关的慢性炎症和慢性纤维化。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗慢性同种异体移植物纤维化。
肾纤维化 无论初始炎症的性质如何，都认为肾纤维化是肾病发展为最终-阶段的肾衰的普遍的、最终的途径。Stambe等人(2004JAm Soc Nephrol15370-379)在肾纤维化的大鼠模型中试验了Scios Inc.(San Francisco，CA)研发的p38活性(磷酸化的)形式的抑制剂，NPC 31169，而且报道了通过组织间隙体积、胶原质IV的沉积和结缔组织生长mRNA水平而评价得到的肾纤维化的显著降低。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗肾纤维化。
平滑肌瘤 子宫肌瘤或纤维化是女性最普遍的盆腔肿瘤，并且没有已知的长期有效的可用药物疗法。平滑肌瘤的特征在于增加的细胞增殖和组织纤维化。在培养的子宫肌层和平滑肌瘤平滑肌细胞中试验了吡非尼酮的细胞增殖和胶原质表达，而且发现其为子宫肌层和平滑肌瘤细胞增殖的有效抑制剂(Lee等人，1998J Clin Endocrinol Metab 83219-223)。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗平滑肌瘤。
心肌膜纤维化 心肌膜纤维化(EMF)是一种特征在于限制性心肌病的发展的疾病。有时认为EMF是包括

心内膜炎(非热带嗜酸性粒细胞的心内膜心肌纤维化或伴有嗜酸性粒细胞增多的纤维化壁性心内膜炎)的单一病程范围的一部分。在EMF中，潜在病程导致心脏内膜表面的不调和纤维化，导致顺应性下降，而且最终广泛地发生心肌膜表面的限制性生理机能。心内膜纤维化主要涉及右和左心室的流入管道，导致三尖瓣和二间瓣的回流。据显示MAPK的激活有助于患EMF的心律不齐心房结构的重塑。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗和/或预防心内膜心肌的纤维化。
其它炎性疾病 已经将许多自体免疫疾病和与慢性炎症有关的疾病以及急性响应与p38MAP激酶的激活和炎性细胞因子的过表达或失调联系起来。这些疾病包括但不限于类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎；骨关节炎；痛风，其它关节炎病；脓毒症；感染性休克；内毒素休克；革兰氏阴性脓毒症；中毒性休克综合症；哮喘；成人呼吸窘迫综合症；慢性阻塞性肺部疾病；慢性肺炎；炎性肠病；克罗恩氏病；牛皮癣；湿疹；溃疡性结肠炎；胰腺纤维化；肝纤维化；急性和慢性肾病；过敏性肠综合症；pyresis；再狭窄；脑型疟；中风和局部缺血性损害；神经损伤；阿尔茨海默氏病；亨庭顿病；帕金森病；急性和慢性疼痛；变态反应性鼻炎；变态反应性结膜炎；慢性心力衰竭；急性冠状动脉综合症；恶病质；疟疾；麻风病；利什曼病；莱姆病；莱特尔综合征；急性滑膜炎；肌肉变性；粘液囊炎；腱炎；腱鞘炎；疝性、破裂性或脱垂性椎间盘综合症；骨硬化症；血栓形成；癌；再狭窄；硅沉着病；肺肉瘤病；骨吸收疾病，例如骨质疏松症；移植物-对-宿主的反应；和自体-免疫性疾病，例如多发性硬化、狼疮和纤维素肌痛；AIDS和其它病毒性疾病，例如带状疱疹、单纯疱疹I或II、流感病毒和巨细胞病毒；以及糖尿病。
许多研究已经显示，通过基因或化学方式降低p38MAP激酶、其上游激活因子或其下游效应子可以使炎性响应减弱，并且预防或使组织损坏最小化(参见，例如English等人，2002Trends Pharmacol Sci 2340-45；和Dong等人，2002Annu Rev Immunol 2055-72)。因此，p38活性抑制剂还可以用作抗-炎试剂和疗法，其中所述p38活性抑制剂还抑制过量或未调节的细胞因子的产生并且可以抑制一种以上单独的促-炎性细胞因子。此外，大量的与p38MAP激酶-相关炎症响应有关的疾病表明还需要能够治疗这些病症的有效方法。
心血管病。炎症和白细胞激活/渗透在包括动脉硬化症和心力衰竭的心血管病的引发和发展中起主要作用。对急性p38促分裂原-活化蛋白激酶(MAPK)途径的抑制削弱组织损坏和白细胞在心肌局部缺血/再灌注损伤中的聚集。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗心血管病。
多发性硬化。中枢神经系统内的炎症发生在诸如多发性硬化的疾病中，并且导致神经轴突的机能障碍和破坏。体外和体内观察都显示，一氧化氮(NO)在介导炎性轴突病(axonopathy)中起非常重要的作用。p38MAP激酶经NO暴露而被激活，而且据显示对p38信号途径的抑制给神经元和轴突带来存活作用。OCM和IGF-I降低经NO-暴露后的皮质神经元中的p38活性，并改善暴露于NO后的培养物中的轴突存活性，该过程依赖于促分裂原-活化蛋白激酶/胞外信号-相关的激酶信号。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗多发性硬化。
原发性移植无功能(primary graft nonfunction)。非特异性炎症与原发性移植无功能(PNF)有关。炎性胰岛的损坏至少部分由促-炎性细胞因子，例如白细胞介素-1β(IL-1β)和固有胰岛巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所介导。已知p38途径参与细胞因子在单核-巨噬细胞系中的产生。化学p38抑制剂，SB203580对p38途径的抑制作用压抑了IL-1β和TNF-α在暴露于脂多糖(LPS)和/或炎性细胞因子下的人胰岛内的产生。虽然IL-1β主要由固有巨噬细胞所产生，但是发现双重细胞和胰岛血管内皮细胞是分离出的人胰岛内的另一种IL-Iβ细胞源。SB203580还抑制可诱导的一氧化氮合酶(iNOS)和环加氧酶-2(COX-2)在受治疗的胰岛内的表达。此外，在移植之前用SB203580处理人体胰岛1小时则显示出移植物机能的显著改善。本文中描述的化合物和方法可以用于改善移植物在临床胰岛移植中的存活。
急性肾损伤。顺铂是一种重要的化疗试剂，但是会引起肾损伤。这种急性肾损伤部分由肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导。顺铂激活p38MAPK并诱发癌细胞内的细胞凋亡。p38MAPK的活化导致缺血性损伤和巨噬细胞内TNF-α产生的增加。在体外，顺铂在近端小管细胞内引起p38MAPK的剂量依赖型激活。抑制p38MAPK的活化则导致对TNF-α的产生进行抑制。在体内，用单一剂量的顺铂治疗小鼠时其发生严重的肾机能障碍，其伴随有肾p38MAPK活性的提高和渗透白细胞的增加。但是，与用顺铂+载体治疗的动物相比，用p38MAPK抑制剂SKF86002和顺铂一起治疗的动物显示出较小的肾机能障碍、不太严重的组织损坏和较少的白细胞。本文中描述的化合物和方法可以用于预防急性肾损伤。
牙周炎。促炎性媒介物舒缓激肽(BK)在体外刺激白细胞介素-8(IL-8)在人体齿龈纤维原细胞内的产生，而且在各种炎性疾病包括牙周炎的发病机理中起重要作用。具体p38促细胞分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB 203580减少受BK和IL-1β组合刺激的IL-8的产生，以及IL-1β-刺激的IL-8的产生。本文中描述的化合物和方法可以用于治疗或预防牙周炎。
药物组合物 虽然可以将本文中描述的化合物单独给药，但是可优选将化合物制成药物组合物。这样，在又一个方面中，提供可用于本发明的方法中的药物组合物。更尤其，本文中描述的药物组合物除其他之外还可以用于治疗或预防炎性病症，例如与p38活性或细胞因子活性或其任意组合的病症。药物组合物为可以体外或体内或经两种方式给药于主体以治疗或缓解病症的任何组合物。在优选的实施方案中，药物组合物可以经体内给药。主体可以包括一种或多种细胞或组织，或有机体。优选的主体为哺乳动物。哺乳动物包括任何哺乳动物，例如作为非限定性的例子，为牛、猪、绵羊、山羊、马、骆驼、水牛、猫、狗、大鼠、小鼠和人。高度优选的哺乳动物主体为人。
在一个实施方案中，取决于特定的给药方式和剂型，可以用药学可接受的赋型剂，例如载体、溶剂、稳定剂、辅料、稀释剂等对药物组合物进行配制。通常应对药物组合物进行配制以获得生理相容的pH，而且取决于制剂和给药途径，pH可以为约3-约11，优选约3-约7。在可选的实施方案中，优选将pH调节至约5.0-约8。更尤其，药物组合物可以包括治疗或预防有效量的至少一种本文中描述的化合物，以及一种或多种药学可接受的赋型剂。任选地，药物组合物可以包括本文中描述的化合物的组合，或者可以包括可用于治疗或预防细菌感染的第二种活性成分(例如，抗-菌或抗-微生物剂)。
用于例如肠胃外或口服给药的制剂大都为固体、液体溶液、乳液或悬浮液，而用于肺部给药的吸入制剂通常为液体或粉末，且通常优选粉末制剂。还可以将优选的药物组合物配制成在给药之前经生理相容的溶剂而得以重构的冻干固体。还可以将可选的药物组合物制成糖浆、霜剂、膏剂、片剂等。
术语“药学可接受的赋型剂”指用于给药药物试剂，例如本文中描述的化合物的赋型剂。该术语指可以给药且没有过分的毒性的任何药物赋型剂。
药学可接受的赋型剂的确定部分依据给药的特定组合物，以及用于给药该组合物的特定方法。因此，存在多种适当的药物组合物制剂(参见例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences)。
适当的赋型剂可以为包括大的、缓慢代谢的大分子的载体分子，其中所述大分子例如为蛋白质、多聚糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物和无活性的病毒粒子。其它示例性赋型剂包括抗氧化剂，例如抗坏血酸；螯合试剂，例如EDTA；碳水化合物，例如糊精、羟基烷基纤维素、羟基烷基甲基纤维素、硬脂酸；液体，例如油、水、盐水、甘油和乙醇；湿润或乳化剂；pH缓冲物质；等等。脂质体也包括在药学可接受的赋型剂的范围内。
可以将本文中描述的药物组合物制成适用于意图的给药方法的任何形式。当意图口服使用时，可以制成例如片剂、锭剂、糖锭剂(lozenge)、水或油悬浮液、非水溶液、可分散的粉末或颗粒(包括微粉化的颗粒或纳米颗粒)、乳液、硬或软胶囊、糖浆或酏剂。可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法制备口服使用的组合物，而且这种组合物可以含有一种或多种包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，用以提供适口的制剂。
特别适合与片剂一起使用的药学可接受的赋型剂包括，例如惰性稀释剂，例如纤维素、碳酸钙或钠、乳糖、磷酸钙或钠；崩解剂，例如交联聚维酮、玉米淀粉或褐藻酸；结合剂，例如聚维酮、淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
片剂可以为未包衣的，或者可以用已知方法，包括将其装入微胶囊来进行包衣以延迟其在胃肠道内的崩解和吸收，从而提供较长时间内的持续作用。例如，可以单独或与石蜡一起使用延时物质，例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。
还可以将口服使用的制剂制成硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂，例如纤维素、乳糖、磷酸钙或高岭土混合，或者制成软明胶胶囊，其中活性成分与非-水性或者油性介质，例如甘油、丙二醇、聚乙二醇、花生油、液体石蜡或橄榄油等混合。
在另一个实施方案中，可以将药物组合物配制成包括实施方案的化合物与至少一种适于制备悬浮液的药学可接受的赋型剂相混合的悬浮液。
在又一个实施方案中，可以将药物组合物配制成适于通过加入适当的赋型剂而制备悬浮液的可分散粉末或颗粒。
适合与悬浮液结合使用的赋型剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、褐藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、阿拉伯树胶；分散或湿润剂，例如天然形成的磷脂(例如，卵磷脂)、氧化烯与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、氧化乙烯与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七烷乙烯氧基乙醇)、氧化乙烯与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯)；多聚糖和多聚糖-类化合物(例如，葡聚糖硫酸盐)；氨基多糖和氨基多糖-类化合物(例如，透明质酸)；和增稠剂，例如卡波姆、蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇。悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂，例如醋酸、对羟基苯甲酸甲酯和/或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种调味剂；和一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。
药物组合物还可以为水包油的乳液形式。油相可以为植物油，例如橄榄油或花生油，矿物油，例如液体石蜡，或这些的混合物。适当的乳化剂包括天然-形成的树胶，例如阿拉伯树胶和黄蓍胶；天然形成的磷脂，例如大豆卵磷脂、衍生自脂肪酸的酯或偏酯；己糖醇酐，例如山梨聚糖单油酸酯；和这些偏酯与氧化乙烯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯。乳液也可以含有甜味剂和调味剂。糖浆和酏剂可以与甜味剂，例如甘油、山梨糖醇或蔗糖一起制剂。这种制剂还可以含有缓和剂(demulcent)、防腐剂、调味剂或着色剂。
此外，药物组合物还可以为无菌注射制剂形式，例如无菌可注射含水乳液或油质悬浮液。可以根据已知技术，使用那些适当的分散剂或湿润剂和上面提及的悬浮试剂配制该乳液或悬浮液。无菌注射制剂还可以为溶于无毒的、注射用可接受的稀释剂或溶剂的无菌注射溶液或悬浮液，例如溶于1，2-丙二醇中的溶液。
还可以将无菌注射制剂制成冻干粉末。在可以使用的可接受的载体和溶剂中还有水、林格氏溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，还可以将无菌的不挥发油用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的单-或二甘油酯。此外，脂肪酸，例如油酸同样可以用在注射制剂中。
为了获得药物组合物的稳定的水溶性剂型，可以将本文中描述的化合物的药学可接受的盐溶解在有机或无机酸的水溶液，例如琥珀酸，或者更优选柠檬酸的0.3M溶液中。如果不能获得可溶的盐形式，则可以将化合物溶解在适当的共溶剂或共溶剂的组合中。适当的共溶剂的例子包括乙醇、丙二醇、聚乙二醇300、聚山梨醇酯80、甘油等，浓度为总体积的约0-60％。在一个实施方案中，将活性化合物溶解在DMSO并用水稀释。
药物组合物还可以为活性成分在适当的水性载体，例如水或等渗盐水或葡萄糖溶液中的溶液形式。还可以预期的是通过取代或加成化学或生化部分，例如通过酯化反应、糖基化反应、PEG化等而被改变的化合物，其中所述改变使其更适于输送(例如，提高溶解性、生物活性、适口性、降低副反应等)。
在优选的实施方案中，可以将本文中描述的化合物配制成适用于低溶解性化合物的液体-基制剂而用于口服给药。液体-基制剂通常可以提高这种化合物的口服生物利用度。
同样地，优选的药物组合物包括治疗或预防有效量的本文中描述的化合物，以及至少一种选自中等链长的脂肪酸或其丙二醇酯(例如，食用脂肪酸，例如辛酸和癸酸的丙二醇酯)的药学可接受的赋型剂，和药学可接受的表面活性剂，例如聚氧40氢化蓖麻油。
在可选的优选实施方案中，可以加入环糊精作为水溶性增强剂。优选的环糊精包括α-、β-和γ-环糊精的羟丙基、羟乙基、葡糖基、麦芽糖基和麦芽三糖基衍生物。特别优选的环糊精溶解性增强剂为羟丙基-o-环糊精(BPBC)，其可以加入到任何上述组合物中以改善实施方案的化合物的水溶性特征。在一个实施方案中，组合物包括约0.1％-约20％的羟丙基-o-环糊精，更优选约1％-约15％的羟丙基-o-环糊精，甚至更优选约2.5％-约10％的羟丙基-o-环糊精。所用的溶解性增强剂的量取决于组合物中的实施方案化合物的量。
药物组合物含有的活性成分的量应足以实现意图的治疗效果。更具体地说，在一些实施方案中，药物组合物含有治疗有效量的化合物(例如，SAPK-调节化合物的量能有效预防或治疗炎性疾病或病症的症状，其中该化合物在抑制至少一种p38MAPK时所显示的EC50为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM)。可以与载体物质结合而产生单位剂型的化合物的总量取决于治疗的宿主和特定的给药方式。优选，将组合物制成制剂，从而将0.01-100mg/kg体重/日剂量的SAPK-调节化合物给药于接受该组合物的患者。
实施例1 在体外根据化合物通过p38MAP激酶而抑制ATF2的磷酸化作用的能力来对化合物进行筛选。在该体外试验中化合物抑制ATF2磷酸化的能力与p38MAP激酶的抑制作用和TNFα在体内的表达相关，并因此而成为体内治疗活性的指示剂(Raingeaud，J.等人，1995J.Biol.Chem.2707420-7426；Brinkman，M.N.等人，1999J.Biol.Chem.27430882-30886；和Fuchs，S.Y.等人，J.Biol.Chem.27512560-12564，2000)。
所有激酶和底物ATF2都得自Upstate(Charlottesville，VA)。p38MAP激酶是具有氨基-末端GST融合的重组人全长蛋白，其在大肠杆菌(E.coli)内表达并由其纯化而来。ATF2是含有在大肠杆菌内表达的人ATF2的氨基酸19-96的GST融合蛋白。将所有蛋白分成整份并保存在-80℃下。
使用含有25mM HEPES，pH 7.5、10mM MgCl2、2mM DTT、20mMβ-甘油磷酸酯、0.1mM Na3VO4、40μM ATP和1.25μM的ATF2，以及6ng p38α蛋白、12ng p38β蛋白、1.5ng p38γ或0.4ng JNK2α2的试验缓冲液进行p38MAP激酶试验。将化合物依次稀释在DMSO中，并使用2μL各种浓度的试验化合物。载体对照仅接受DMSO。
室温下在激酶缓冲液(25mM HEPES，pH 7.5、10mM MgCl2、2mMDTT、20mM β-甘油磷酸酯和0.1mM Na3VO4)中用20μl酶预-培养试验化合物15分钟。在激酶缓冲液中加入30μl底物溶液引发40μM ATP和1.25μM ATF2的终浓度，从而引发反应。在37℃下将反应物培养30分钟，并加入18μl 200mM的EDTA来终止反应。使用ELISA法测量ATF2在Thr 69下的磷酸化作用。37℃下在高度结合的96-孔板上涂覆50μl的激酶反应物并保持1小时。用200μl洗涤缓冲液(25mM Tris HCl，pH 8.3、192mM甘氨酸、0.1％SDS和0.05％Tween-20)洗涤涂覆的板三次。然后用溶于TBS的SuperBlock(Pierce，37535)洗涤板三次。封阻之后，在37℃下用50μl兔抗-磷-ATF2抗体(细胞信号，922IL，1500)将板培养30分钟。
在37℃下用50μl HRP-共轭山羊抗-兔抗体(细胞信号，7074，1500)培养30分钟之前用洗涤缓冲液洗涤板三次。然后用洗涤缓冲液洗涤板三次，之后在室温下用50μl的Ultra TMB-ELISA(Pierce，34028)培养8分钟。最后，加入50μl磷酸(1M)以停止反应，并在SpectraMax 250读板仪上读出450nm处的板吸收率。
在该体外试验中该化合物抑制ATF2的磷酸化作用。优选化合物显示的EC50值为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。
实施例2 在体外根据化合物对于TNFα从脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞中的释放的抑制能力来对化合物进行筛选。在该体外试验中化合物抑制TNFα释放的能力与对p38活性和TNFα的抑制相关，并因此而成为体内治疗活性的指示剂(Lee J.C.等人，1993Ann.N.Y.Acad.Sci.696149-170；和1994Nature 372739-746)。
将得自ATCC(TIB202)的THP-1细胞维持在37℃、5％CO2中、含有4.5g/L葡萄糖，并补充10％的胎牛血清、1％的青霉素/链霉素和50μMβ-巯基乙醇的RPMI 1640培养基中(MediaTech，Herndon，VA)。
开始时将试验化合物溶解在含有1％DMSO(v/v)的RPMI培养基中。然后将化合物依次稀释在RPMI培养基中，所有物质都是逐级稀释。在无菌条件下进行试验。收集培养物密度为6-8×105细胞/ml的THP-I细胞，并以106细胞/ml的密度将其重新悬浮在RPMI培养基中。将100μl的再悬浮细胞加至每个孔中，则每个孔含有100μl的试验化合物。制备浓度为最终浓度二倍的试验化合物。最终的DMSO浓度不大于0.5％(v/v)。在用脂多糖(LPS)(Sigma L-2880，4mg/ml stock in PBS)进行刺激之前，在37℃、5％CO2下用化合物将细胞预培养60分钟。每个孔中TNFα和IL-1β释放物的最终LPS浓度分别为10或30μg/ml。未刺激的对照细胞悬浮液仅接受PBS载体。将TNFα和IL-1β释放物的细胞混合物分别培养18或48小时。取150μl上清液并转移至新鲜板中，在-20℃下保存至作进一步分析。使用ELISA试剂盒测量TNFα和IL-1β水平。将发光物质用作读板剂。用非-线性回归进行分析，得到剂量响应曲线。EC50计算值为使TNFα或IL-Iβ水平降低50％的试样化合物浓度。
在该体外试验中，化合物抑制TNFα或IL-1β的释放，或者抑制TNFα和IL-1β的释放。优选化合物对于TNFα和/或IL-1β显示出的EC50值为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。下表2中给出了数据。
表2
No.1X3R2R4ZTNFEC50(μM)2 毒性3 13 -H-CH3 -HOA ≥1mM 7 -H-H-HOB D 9 -OH -H-HOC D 11 -F-H-HOB D 8 -H-CF3 -HOB D 12 -F-CF3 -HOC D 5 -OH -CH3 -H O A≥1mM 1 -H -CH2OH -H O BD 2 -H-COOH -H OC D 3 -H -glucuronide -H O CD 6 -H -CH2OCH3 -H O A≥1mM 4 -H -CH3 -OH O A≥1mM 14 -F-CH3 -H OB D 15 -OCH3 -CF3 -H O CD 16 -COCH3 -H -H O CD 10 -OH -CF3 -H O AD 17 -H -苯基-H O CD 18 -H -CH3 -H S CD 25 见注释4 CH3 -H O BB 26 -H -Br -H O AB 27 -OCH3 -Br -H O AA 28 -OH -CH2F-H O CD 29 -OH -CHF2-H O CD 30 -OH -Br -H O AA 31 -OCH3 -CH2F-H O AA 32 -OCH3 -CHF2-H O AA 33 -H 见注释5 -H O CD 24 -H CO2CH3 -H O CD 1如表1中所示的化合物编号 2A≤2,000；B＞2,000；C无结果(例如，无数据或未观察到活性) 3D无效(例如，无数据或未观察到毒性) 4化合物25如表1所述，即连在2-吡啶酮的氮上的芳基为N-甲基吡啶鎓部分 5化合物33如表1所述，即稠合在2-吡啶酮环的5和6位上的溴芳基 实施例3 在体外根据化合物对于抑制TNFα从脂多糖(LPS)刺激的原生人周围单核血细胞(PBMC)中的释放的能力来对化合物进行筛选。在该体外试验中化合物抑制TNFα释放的能力与对p38活性的抑制相关，并因此成为体内治疗活性的指示剂(2002Osteoarthritis&Cartilage 10961-967；和Laufer，S.A.和Wagner，G.K.2002 J Med.Chem.452733-2740)。
根据3-8个献血者采集血清的Ficoll-HyPaque密度梯度，通过差速离心来分离人周围单核血细胞(PBMC)。分离出的PBMC含有约10％的CD-14阳性单核细胞、90％的淋巴细胞和＜1％的粒细胞和血小板。在聚苯乙烯板上培养PBMC(106/ml)，并在存在或不存在试验化合物系列稀释液的条件下，在不含血清的GIBCOTM RPM1培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中于37℃下用脂多糖(LPS；50ng/ml；Sigma，St.Louis，MO)刺激两份同样的培养物24小时。使用商购的试剂盒(MDS Panlabs#309700)用ELISA确定细胞上清液中的TNFα水平。
在该试验中，优选的化合物抑制TNFα释放的EC50值为约1μM-约1000μM，优选约50μM-约650μM。
实施例4 在体内动物模型中，根据化合物对于TNFα释放的抑制能力来对化合物进行筛选(参见例如，Griswold D.E.等人，1993Drugs Exp.Clin.Res.19243-248；Badger，A.M.等人，1996J.Pharmacol.Exp.Ther.2791453-1461；Dong，C.等人，2002Annu.Rev.Immunol.2055-72(及其中引用的文献)；Ono，K.和Han，J.2000Cellular Signalling 121-13(及其中引用的文献)；和Griffiths，J.B.等人，1999Curr.Rheumatol.Rep.1139-148)。
并非局限于任何特殊的理论，但人们相信在该模型中对TNFα的抑制是由于化合物对p38MAP激酶的抑制所导致的。
将雄性Sprague-Dawley大鼠(0.2-0.35kg)随机分成6或更多组，并通过静脉内输液或弹丸浓注进行剂量给药，或者在各个情况下将试验化合物的适当制剂口服剂量给药。静脉内输液或弹丸浓注结束30分钟后，和口服给药1-2小时后，对脂多糖大肠杆菌/0127B8(0.8mg/kg)给药IV。收集用LPS处理后经1.5小时的血样。使用Biosource(KRC3011C)的ELISA试剂盒确定血清的TNFα水平并与载体-处理的对照进行比较。
在该体内试验中，优选的化合物抑制TNFα的释放。优选化合物显示出的ED50值小于500mg/kg，优选小于400mg/kg，优选小于200mg/kg，优选小于100mg/kg，更优选小于50mg/kg，更优选小于40mg/kg，更优选小于30mg/kg，更优选小于20mg/kg，更优选小于10mg/kg。
确定化合物抑制p38的EC50的方法包括本领域已知的能够定量检测如上所述的p38MAPK的任意下游底物的方法。因此，这些方法还包括但不限于检测受p38单独调节或由基因排列调节的基因表达。
实施例5 下列方法可以(1)用来进行激酶试验以确定EC50，(2)用来进行非-放射计量激酶试验以确定EC50，(3)用来调节对TNFα表达的诱导，(4)用来进行细胞毒性试验，和(5)用于进行试验以测验化合物对胶原质产生的作用。
激酶试验 在32P-γ-ATP存在下，通过ATF-2的磷酸化作用确定P38的激酶异构形式P38γ和P38α的活性。确定在抑制剂存在或不存在下32P对ATF-2的结合作用。在该生物化学试验中试验吡非尼酮及其衍生物对P38γ和P38α激酶活性的抑制。将化合物溶解在水或DMSO中并使用适当溶剂作为稀释液和载体对照在0-10mM的不同浓度下进行试验。得到作为活化和纯化的重组蛋白的酶P38γ和P38α(Upstate，Charlottesville，VA)。在最终反应中使用24.8nM的活化酶。在于下列缓冲液(IM HEPES，pH7.4、500mM DTT、1％Triton X-100和10mg/ml BSA)中进行反应之前先稀释酶。反应在制备成2倍原液的下列溶液中进行(IM HEPES，pH 7.4、500mM DTT和1％Triton X-100)，而且反应中存在6.25μM ATP的非-放射性ATP(细胞信号，Beverly，MA)。为了确定ATF-2的磷酸化作用，将7.5μM浓度的γ-[32P]-ATP 3000Ci/mmol加入到每个反应中。所用的激酶底物ATF-2(细胞信号，Beverly，MA)为3μM。作为组合酶反应的第一个步骤，将活化激酶和抑制剂或适当的载体对照加入到反应缓冲液中，并在室温下培养30分钟。加入ATF-2和ATP混合物来引发反应。每个反应的终体积为20μl，并且在室温下反应30分钟。经过30分钟培养之后加入80ul Laemmlie缓冲液。随后在还原条件下用SDS-Page(BioRad，Hercules，CA)分离20％的反应物。经电泳之后，将凝胶暴露在磷光计板下并使用磷光计(Storm System，Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)进行分析。在背景校正之后定量获得信号，将使用载体对照的未抑制的激酶活性作为0％抑制，基于此而计算为抑制百分率。在不同抑制剂浓度下，使用Kaleidagraph(Synergy Software，Reading，PA)对激酶活性作图，以确定每个化合物的EC50，并试验P38激酶。
非-放射计量激酶试验 还采用可选的、非-放射计量激酶试验来定义抑制P38的EC50。在该试验中，p38激酶将磷酸盐由ATP转移至EGF-R肽底物中，结果导致形成磷酸化的EGF-R肽，并伴随ATP至ADP的转化。在非偶合反应中，在不存在肽底物的情况下p38还以较低速率水解ATP(Fox等人，FEBSLett 1999)，其略微有助于ATP的消耗。因此，ATP消耗量与p38活性直接成正比。在激酶反应结束时，使用Kinase-Glo+荧光激酶试验(Promega，Inc.，Madison，WI)确定剩余的ATP量。这些试剂使用剩余ATP来支持甲虫萤光素经ATP-依赖型酶转化而成为氧化萤光素，并伴有光的生成，其可以由光度计进行检测。
通过在试验缓冲液中混合化合物(稀释在DMSO和试验缓冲液中)和p38α或p38γ，以及EGF-R肽底物(AnaSpec，Inc.，San Jose，CA)来进行激酶反应。然后加入ATP来引发反应，并使反应在室温下进行45分钟。最终的缓冲条件为20mM HEPES(pH 7.4)、2mM DTT、0.1％Triton-X-100、10mM MgCl2、10％甘油、12.5mM p38α或p38γ(Upstate，Charlottesville，VA)、50μM EGF-R肽底物，和10μM ATP。最终试验体积为10μL。在不存在化合物的情况下进行对照反应。在各化合物浓度下进行略去p38的附加对照反应。
激酶反应开始45分钟后，加入10μLKinase-Glo及试验试剂来淬灭反应。使荧光素酶反应平衡15分钟，之后在预见性多标记读板仪(Envision Multilable Plate Reader)(Perkin Elmer Life and AnalyticalSciences，Boston，MA)上读数。在KaleidaGraph(Synergy Software，Reading，PA)上将数据作成发光信号对化合物对数浓度的图。由不存在p38的对照反应确定固定上限值(因为发光性与激酶活性逆相关)，使用该固定上限值将数据拟合成4-参数结合方程式，从而确定EC50值。
对TNFα诱导的抑制 在ATCC建议的常规组织培养条件下培育THP-1(ATCC，Rockville，MD)。在进行试验前的18小时，将细胞放置在置于含有1％血清的常规培养基中的96孔内，而且每个孔的培养物体积为0.25ml，密度为500,000个细胞。将三份同样的化合物加入到每个孔中，而且每个试验中都包括适当的溶剂对照。每个试验还包括1μM/ml(Upstate，Waltham，MA)的p38抑制剂SB203850，其作为阳性对照。为了诱导TNFα的表达，在加入化合物30分钟之后将1μg/ml LPS加入到每个孔中。在组织培养条件下培养4小时后，离心(10min，1000rpm，Beckman台式离心机)沉淀细胞并收集一部分细胞游离上清液，将其用在10倍稀释液中以定量确定TNFα的特异性ELISA(R&D系统，Minneapolis，MN)。根据制造商提供的说明进行TNFαELISA。检测以pg/ml计的TNFα，并将其标准化为在溶剂对照中的TNFα表达从而制成分数活性图。
在细胞基试验中测试的化合物毒性 将由于细胞膜断裂而产生的LDH释放用作细胞毒性的测量。使用可商购的诊断试剂盒(Roche Diagnostics，Cat#1644793)由其酶活性来检测LDH。为了与之前试验中的诱导TNFα表达相一致，使用THP-1细胞来确定细胞毒性。如之前描述的抑制TNFα诱导的试验，在置于1％血清和常规组织培养条件下的96孔内培养细胞。一式三份地加入不同浓度的化合物。将适当的溶剂对照用于各试验中。加入化合物之后在常规组织培养条件下培养细胞18小时。经过该培养阶段后，将Triton-X-100(2％v/v)加入到未处理的细胞中引发阳性对照，并且额外再培养10分钟以使细胞溶解完全。随后离心沉淀细胞并移出一部分上清液，根据制造商的指导进行LDH酶活性分析。Triton-X-100溶解细胞为100％细胞毒性，数据通常记录为相对于Triton-X-100而标准化的％细胞毒性。
还使用可商购的ATP试验(Molecular Probes′ATP Determination KitA22066，available from hivitrogen)和/或使用MTT试验来获得毒性数据。ATP和MTT试验都能够测量细胞的代谢竞争。MTT试验测量细胞减少标记物底物的能力，其与代谢竞争(即，成活力)相关。ATP试验测量存在和不存在化合物时的细胞ATP浓度。毒性化合物导致代谢活性降低，从而使ATP浓度降低。
关于化合物对于胶原质产生的作用的试验 在常规组织培养条件下，于含有10％胎牛血清(FBS；Mediatech，Inc.，Herndon，VA)的完全培养基中培育HFL-1细胞(ATCC，Rockville，MD)。将前一阶段的细胞放置在6孔板中。当细胞融合时除去培养基，用PBS洗涤细胞并使细胞在含有0.1％FBS的完全培养基中保持过夜。然后用新鲜培养基和0.1％FCS、10μM L-脯氨酸(EMD Chemicals，Gibbstown，NJ)、20μg/mL抗坏血酸(EMD Chemicals，Gibbstown，NJ)代替培养基。将化合物加入到一式三份的孔中，使其浓度由DMSO中的100X原液达到1mM的最终浓度。加入化合物1小时后，用TGF-β1(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)处理细胞，使其终浓度为10ng/mL(总计25ng)。加入TGF-β三天后除去培养基，用PBS洗涤细胞，然后使细胞溶解。借助染料-基胶原试验(Sircol Collagen Assay，Newtownabbey，Northern Ireland)和μQuant板-基分光光度计(BioTek Insturments，Inc.，Winooski，VT)根据适当的标准曲线来评价溶解细胞的总胶原含量。在TGF-β存在和不存在的情况下，用模拟处理(1％DMSO，不含化合物)的细胞来定义试验的动态范围。表3中给出了数据，其为按照下列方程确定的TGF-β-诱导的胶原的抑制百分数 ％抑制＝100*[(胶原，模拟的/+TGF-β)-(胶原，处理的/+TGF-β)]/[(胶原，模拟的/+TGF-β)-(胶原，模拟的/-TGF-β)] 表3 化合物编号对TGF-β刺激的 胶原合成的抑制％ 8 48 1423 1549 2658 3069 实施例6 1-(4-羟基苯基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶酮(化合物10)的制备在135℃下将5-(三氟甲基)-2(1H)-吡啶酮(815.5mg，5mmol)、4-碘代苯甲醚(2.34g，10mmol)、CuI(952mg，5mmol)、K2CO3(691mg，5mmol)和DMF(5ml)的混合物加热过夜。用10％的氨水(15ml)稀释反应混合物并用醋酸乙酯萃取。用饱和氯化钠洗涤有机萃取物，在硫酸镁上干燥并蒸发。经柱色谱纯化(30％的醋酸乙酯-己烷)得到526mg(39.2％)1-(4-甲氧基苯基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶酮。在0℃下用二氯甲烷(DCM，2ml)、DCM(5ml)中的1M BBr3溶液处理该化合物(268.2mg，1mmol)2小时。用DCM稀释反应混合物并用水洗涤3次。在硫酸钠上干燥有机相并蒸发。剩余物经柱色谱(20％的醋酸乙酯-DCM)纯化得到226mg(89％)为白色固体的目标化合物。1H NMR谱图与化合物10的结构一致。
实施例7 1-苯基-5-乙酰基-2-吡啶酮(化合物16)的制备100℃下用6N HCl处理2-甲氧基-5-乙酰基吡啶(1.51g，10mmol)5小时。用氢氧化钠将反应混合物中和至pH 7，然后用DCM萃取若干次。在硫酸钠上干燥有机层，蒸发并从醋酸乙酯中结晶剩余物，得到1.06g(78％)为白色固体的5-乙酰基-2(1H)-吡啶酮。135℃下，在CuI(95mg，0.5mmol)和溶于DMF(5ml)中的K2CO3(691mg，5mmol)存在下使该化合物(685.7mg，5mmol)与碘苯(0.84ml，7.5mmol)反应过夜。用10％的氨水(15ml)稀释反应混合物并用醋酸乙酯萃取。用饱和氯化钠洗涤有机萃取物，在硫酸镁上干燥并蒸发。经柱色谱(10％的醋酸乙酯-DCM)得到407mg(38％)为白色固体的目标化合物。1H NMR谱图与化合物16的结构一致。
实施例8 1-(4-吡啶基)-5-甲基-2-吡啶酮(化合物22)的制备135℃下，在CuI(60mg，0.3mmol)和溶于DMF(3ml)中的K2CO3(1.36g，10mmol)存在下，通过5-甲基-2(1H)-吡啶酮(327.4mg，3mmol)与4-溴吡啶盐酸盐(778mg，4mmol)的缩合反应合成化合物22。用10％的氨水(15ml)稀释反应混合物并用醋酸乙酯萃取。用饱和氯化钠洗涤有机萃取物，在硫酸镁上干燥并蒸发。经柱色谱(5％MeOH-DCM)得到197mg(35％)为浅黄色的目标化合物。1H NMR谱图与化合物22的结构一致。
实施例9 1-苯基-5-甲基-2-吡啶硫酮(化合物18)的制备90℃下，使1-苯基-5-甲基-2-吡啶酮(555.7mg，3mmol)与Lawesson试剂(606.7mg，1.5mmol)在甲苯(5ml)中反应。蒸发反应混合物并用柱色谱(20-30％的醋酸乙酯-己烷)以及随后从甲基叔丁基醚中结晶来分离目标化合物。产率403mg(67％)，黄色固体。1H NMR谱图与化合物18的结构一致。
实施例10 根据下列合成方案制备化合物33
化合物33 使商购的3，3-二乙氧基丙酸乙酯(9.7ml，50mmol)、氢氧化钠(10M，6ml，60mmol)和水(15ml)的混合物保持回流直至混匀(约30min)。冷却至0℃之后加入6N的盐酸以使溶液的pH达到2-3(～10ml)。用二氯甲烷萃取混合物，用水洗涤有机相，在硫酸钠上干燥，并减压除去溶剂得到酸1，其不经另外纯化即使用。
0℃下，向溶于DCM(100ml)的粗酸1中依次加入4-溴苯胺(10.3g，60mmol)、HOBT(675mg，5mmol)以及最后的DCC(12.4g，60mmol)。在0℃下搅拌反应混合物1小时，之后再回流4小时。过滤掉固体，滤液用饱和碳酸氢钠洗涤，在硫酸钠上干燥并减压除去溶剂，得到为浅黄色固体的酰胺2。0℃下将该固体溶解在硫酸(96％，50ml)中。将溶液保持在同样温度下3小时，然后倾入冰水(500ml)中。过滤掉固体，用水洗涤并与热乙腈(100ml)一起搅拌。过滤掉喹啉酮3并减压干燥。产率为10g(91％)。
室温下将化合物3(309mg，1.38mmol)、苯基硼酸(336mg，2.76mmol)、Cu(OAc)2(36mg，0.2mmol)、分子筛4a(0.3g)、吡啶(0.24ml)和DCM(10ml)的混合物搅拌2天。经硅藻土过滤反应混合物，用饱和碳酸氢钠、EDTA洗涤，并在硫酸钠上干燥有机相。经色谱(50％的醋酸乙酯-己烷-醋酸乙酯)分离化合物33。产率为352mg(85％)。
实施例11 在插入双管(右侧颈静脉/左侧颈动脉)的Sprague Dawley大鼠(Charles River实验室，Inc.，Wilmington，MA)内评价吡非尼酮、吡非尼酮类似物和衍生物的药代动力学(PK)性质。向重约275-300g的雄性大鼠静脉(5mg/Kg)或口服(管饲法，50mg/Kg)给药适当制剂的剂量化合物。使用EDTA作为抗凝血剂，在给药后的24小时内按希望的次数经动脉内的套管收集血浆试样。将3只动物用于每个化合物。按照适当的Institutional Animal Care and Use Committees(IACUC)准则，由训练有素的人员进行所有试验。
使用连在Shimadzu VP HPLC(Shimadzu Corp.，Kyoto，Japan)上，装配了Duragel G C18防护盒(Peeke Scientific，Redwood City，CA)的MDSSCIEX API 3000质谱仪(Applied Biosystems，Foster City，CA)，通过LC-MS评价化合物浓度。将已知量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物或衍生物与大鼠血浆混合制成校准试样。将校准试样逐次稀释在同一基质中以获得标准曲线。将等分血浆试样与3体积的含有内标的冰冷乙腈混合，以制备可以注射到HPLC中的标准和分析试样。然后离心试样。之后将所得的等分上清液与5体积的溶于水中的0.2％甲酸混合，注射到HPLC中并溶解于甲醇梯度液(含有0.18-0.2％的甲酸)。对完整的分析物信号进行内标校正，并与适当的标准曲线比较，以定义分析物浓度。
表4中显示的药代动力学参数是使用WinNonlin软件包(PharsightCorp，Mountain View，CA)得到的。
表4 给药剂量 化合物 T1/2 MRTinf Clobs AUClast E 途径mg/kg 小时 小时 mL/hr/kg ng-hr/mL ％ ×106 IV5 813.9 20.30.117 30.219 2.96 6.260.142 3526 1.62 2.4 0.691 10.3 口服 50 8 122.4 40.519 191.7 54.826 65.863.9 虽然为了清楚和理解的目的对本发明进行了一些详细地描述，但是本领域熟练技术人员应该理解在不偏离本发明的真实范围的情况下可以对形式和细节进行各种变化。上面提到的所有附图、表格、附录、专利、专利申请和公开的全部内容据此引入本文作为参考。
权利要求
1. 一种调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统的方法，包括使化合物与p38促分裂原-活化蛋白激酶(MAPK)接触，
其中，化合物抑制至少一种p38MAPK时显示的EC50为约1μM-约1000μM；而且
其中，该接触在小于该化合物抑制至少一种p38MAPK时的EC30的SAPK-调节浓度下进行。
2. 权利要求1的方法，其中p38MAPK选自p38α、p38β、p38γ和p38δ。
3. 权利要求1的方法，其中该接触在SAPK-调节浓度小于该化合物抑制p38MAPK时的EC20的SAPK-调节浓度下进行。
4. 权利要求1的方法，其中该接触在SAPK-调节浓度小于该化合物抑制p38MAPK时的EC10的SAPK-调节浓度下进行。
5. 权利要求1的方法，其中EC50值和EC30值得自剂量响应曲线。
6. 权利要求1的方法，其中SAPK-调节浓度有效使全血中的TNFα释放改变至少15％。
7. 权利要求1的方法，其中EC50为约50μM-约650μM。
8. 权利要求1的方法，其中化合物包括吡啶酮环。
9. 权利要求1的方法，其中化合物为类Ia的化合物
类Ia
其中，
R1、R2、R3和R4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖；和
X1、X2、X3、X4和X5独立地选自H、卤素、C1-C10烷氧基和羟基。
10. 权利要求9的方法，其中该化合物为类Ia化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
11. 权利要求1的方法，其中该化合物为类Ib化合物
类Ib；
其中，
X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基和OH；
R2选自H、卤素、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖；和
R4选自H、卤素和OH。
12. 权利要求1的方法，其中该化合物为类Ic化合物
类Ic；
其中，X3选自H、F、OH和OCH3；
R2选自H、CF3、CHF2、CH2F、CH2OH、COOH、CO-葡萄糖醛多糖、Br、CH3和CH2OCH3；和
R4选自H和OH；
条件是当R4和X3为H时，R2不为CH3。
13. 权利要求1的方法，其中该化合物为亚类II的化合物
亚类II；
其中，
X3选自H、OH和OCH3；
R2选自H、CH2OH、COOH、CO-葡萄糖醛多糖、CH3和CH2OCH3；和
R4选自H和OH，条件是当X3为OH时，则R2不为CH3。
14. 权利要求1的方法，其中该化合物为亚类III的化合物
亚类III；
其中，
X3选自H、F和OH；和
R2选自H、Br、CH2F、CHF2和CF3。
15. 权利要求1的方法，其中该化合物为亚类IV的化合物
亚类IV；
其中，X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基、OH、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、苯基、取代的苯基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖。
16. 权利要求1的方法，其中该化合物为亚类V的化合物
亚类V；
其中，
X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、苯基、取代的苯基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖。
17. 权利要求1的方法，其中该化合物为类VI的化合物
类VI
其中，
Ar为吡啶基或苯基；
Z为O或S；
X3为H、F、Cl、OH、CH3或OCH3；
R2为甲基、C(＝O)H、C(＝O)CH3、C(＝O)OCH3、C(＝O)O-葡糖基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴代、甲基甲氧基、甲基羟基或苯基；和
R4为H或羟基；
条件是当R2为三氟甲基、Z为O、R4为H且Ar为苯基时，该苯基不是仅在4’位置上被H、F或OH取代。
18. 权利要求1的方法，其中该化合物为类VII的化合物
类VII
其中，
X3为H、卤素、C1-C10烷氧基或OH；
Y1、Y2、Y3和Y4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基；和
R4为H、卤素或OH。
19. 权利要求18的方法，其中该化合物为
20. 一种治疗或预防主体的疾病状态的方法，包括
确定有患病风险或已患有选自炎性病症和纤维化病症的病症的主体；
将有效量的化合物给药于该主体以治疗或预防病症；
其中，该化合物抑制至少一种p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；和
其中，该有效量产生的血液或血清或另一种体液的浓度小于抑制至少一种p38MAPK时的EC30。
21. 权利要求20的方法，其中该病症选自纤维化、慢性阻塞性肺部疾病、炎性肺部纤维化、特发性肺部纤维化、闭塞性细支气管炎综合症、慢性同种异体移植物纤维化、类风湿性关节炎；类风湿性脊椎炎；骨关节炎；痛风；脓毒症；感染性休克；内毒素休克；革兰氏阴性脓毒症；中毒性休克综合症；肌筋膜疼痛综合症(MPS)；细菌性痢疾；哮喘；成人呼吸窘迫综合症；炎性肠病；克罗恩氏病；牛皮癣；湿疹；溃疡性结肠炎；肾小球肾炎；硬皮病；慢性甲状腺炎；Grave’s病；奥蒙德病；自体免疫性胃炎；重症肌无力；自体免疫性溶血性贫血；自体免疫性嗜中性白细胞减少症；血小板减少症；胰腺纤维化；慢性活动性肝炎；肝纤维化；肾病；肾纤维化、过敏性肠综合症；Pyresis；再狭窄；脑型疟；中风和局部缺血性损伤；神经损伤；阿尔茨海默氏病；亨庭顿病；帕金森病；急性和慢性疼痛；变态反应；心脏肥大、慢性心力衰竭；急性冠状动脉综合症；恶病质；疟疾；麻风病；利什曼病；莱姆病；莱特尔综合征；急性滑膜炎；肌肉变性；粘液囊炎；腱炎；腱鞘炎；疝性、破裂性或脱垂性椎间盘综合症；骨硬化症；血栓形成；硅沉着病；肺肉瘤病；骨吸收疾病；癌；多发性硬化、狼疮；纤维素肌痛；AIDS；带状疱疹、单纯疱疹；流感病毒；严重的急性呼吸综合症(SARS)；巨细胞病毒；和糖尿病。
22. 权利要求20的方法，其中该有效量小于给主体带来不希望的副作用的量的50％。
23. 权利要求20的方法，其中该化合物抑制SAPK信号途径中的激酶。
24. 权利要求20的方法，其中该化合物为吡非尼酮类似物。
25. 权利要求20的方法，其中该化合物为类Ia的化合物
类Ia
其中，
R1、R2、R3和R4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖；和
X1、X2、X3、X4和X5独立地选自H、卤素、烷氧基和羟基。
26. 权利要求25的方法，其中该化合物为类Ia化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
27. 权利要求20的方法，其中该化合物为类Ib的化合物
类Ib；
其中，
X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基和OH；
R2选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖；和
R4选自H、卤素和OH。
28. 权利要求27的方法，其中该化合物为类Ib化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
29. 权利要求20的方法，其中该化合物为类Ic的化合物
类Ic；
其中，
X3选自H、F、OH和OCH3；
R2选自H、CF3、CHF2、CH2F、CH2OH、COOH、CO-葡萄糖醛多糖、Br、CH3和CH2OCH3；和
R4选自H和OH；
条件是当R4和X3为H时，R2不为CH3。
30. 权利要求29的方法，其中该化合物为类Ic化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
31. 权利要求29的方法，其中该化合物选自如下所示的化合物1-12和14
化合物编号化合物
化合物编号化合物
化合物编号化合物
32. 权利要求20的方法，其中该化合物为亚类II的化合物
亚类II；
其中，
X3选自H、OH和OCH3；
R2选自H、CH2OH、COOH、CO-葡萄糖醛多糖、Br、CH3和CH2OCH3；和
R4选自H和OH，条件是当X3为OH时，则R2不为CH3。
33. 权利要求32的方法，其中该化合物为亚类II化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
34. 权利要求20的方法，其中该化合物为亚类III的化合物
亚类III；
其中，
X3选自H、F和OH；和
R2选自H、Br、CH2F、CHF2和CF3。
35. 权利要求34的方法，其中该化合物为亚类III化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
36. 权利要求20的方法，其中该化合物为亚类IV的化合物
亚类IV；
其中，
X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基、OH、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、苯基、取代的苯基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖。
37. 权利要求36的方法，其中该化合物为亚类IV化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
38. 权利要求20的方法，其中该化合物为亚类V的化合物
亚类V；
其中，X3选自H、卤素、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、苯基、取代的苯基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基、CO-糖醛多糖、CO-单糖、CO-低聚糖和CO-多聚糖。
39. 权利要求38的方法，其中该化合物为亚类V化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
40. 权利要求20的方法，其中该化合物为类VI的化合物
类VI
其中，
Ar为吡啶基或苯基；
Z为O或S；
X3为H、F、Cl、OH、CH3或OCH3；
R2为甲基、C(＝O)H、C(＝O)CH3、C(＝O)OCH3、C(＝O)O-葡糖基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴代、甲基甲氧基、甲基羟基或苯基；和
R4为H或羟基；
条件是当R2为三氟甲基、Z为O、R4为H且Ar为苯基时，该苯基不是仅在4’位置上被H、F或OH取代。
41. 权利要求40的方法，其中该化合物为亚类VI化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
42. 权利要求40的方法，其中该化合物选自如下所示的化合物14-32
43. 权利要求20的方法，其中该化合物为类VII的化合物
类VII
其中，
X3为H、卤素、烷氧基或OH；
Y1、Y2、Y3和Y4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基；和
R4为H、卤素或OH。
44. 权利要求43的方法，其中该化合物为类VII化合物的代谢物、水合物、溶剂化物或前体药物。
45. 权利要求44的方法，其中该化合物为
46. 一种确定药物活性化合物的方法，包括
提供化合物库；
对该库中的多个化合物进行试验，以确定其对至少一种p38MAPK的抑制作用；和
从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中所选化合物抑制该至少一种p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
47. 一种确定药物活性化合物的方法，包括
提供化合物库；
对该库中的多个化合物进行试验，以确定其在体内对体液中的TNFα分泌的抑制作用；和
从所述多个化合物中选择至少一个化合物，其中所选化合物在体内抑制体液中的TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
48. 一种确定药物活性化合物的方法，包括
提供化合物库；
对该库中的多个化合物进行试验，以确定其在体外对培养细胞TNFα分泌的抑制作用；和
从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中所选化合物在体外抑制培养细胞TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
49. 一种确定药物活性化合物的方法，包括
提供化合物库；
对该库中的多个化合物进行试验，以确定其在体内对体液中的TNFα分泌的抑制作用；和
从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中所选化合物在体外抑制培养细胞TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
50. 一种确定药物活性化合物的方法，包括
提供化合物库；
对该库中的多个化合物进行试验，以确定其在体外对培养细胞TNFα分泌的抑制作用；和
从该多个化合物中选择至少一个化合物，其中所选化合物在体内抑制体液中的TNFα分泌时显示出的EC50为约1μM-约1000μM。
51. 权利要求47-50中任一项的方法，其进一步包括确定所选化合物的哺乳动物毒性。
52. 权利要求47-50中任一项的方法，其进一步包括将所选化合物给药于试验主体。
53. 权利要求52的方法，其中该试验主体患有炎性病症或有患病风险。
54. 权利要求47-50中任一项的方法，其中该p38MAPK选自p38α、p38β、p38γ和p38δ。
55. 权利要求46的方法，其中EC50得自剂量响应曲线。
56. 权利要求46的方法，其中EC50为约50μM-约650μM。
57. 权利要求47的方法，其中EC50得自剂量响应曲线。
58. 权利要求47的方法，其中EC50为约50μM-约650μM。
59. 具有亚类III的结构式的化合物
亚类III；
其中，
X3选自H、F和OH；
R2选自H和CF3；且
其中，该化合物抑制p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；或该化合物的药学可接受的盐、酯、溶剂化物或前体药物。
60. 权利要求59的化合物，其中该化合物选自如下所示的化合物8-12
化合物编号化合物
61. 权利要求59的化合物，其抑制p38MAPK的EC50为约1μM-约1000μM。
62. 权利要求61的化合物，其中EC50为约50μM-约650μM。
63. 权利要求61的化合物，其在体内抑制体液中的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
64. 权利要求61的化合物，其在体外抑制培养细胞的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
65. 具有类VI的结构式的化合物
类VI
其中，
Ar为吡啶基或苯基；
Z为O或S；
X3为H、F、Cl、OH或者OCH3；
R2为甲基、C(＝O)H、C(＝O)CH3、C(＝O)O-葡糖基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲基甲氧基、甲基羟基或苯基；和
R4为H或羟基；
条件是当R2为三氟甲基、Z为O、R4为H、且Ar苯基时，该苯基不是仅在4′位上被H、F或OH取代；
其中，该化合物抑制p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；或该化合物的药学可接受的盐、酯、溶剂化物或前体药物。
66. 权利要求65的化合物，其中该化合物选自如下所示的化合物14-32
67. 权利要求68的化合物，其抑制至少一种p38MAPK的EC50为约1μM-约1000μM。
68. 权利要求67的化合物，其中EC50为约50μM-约650μM。
69. 权利要求67的化合物，其在体内抑制体液中的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
70. 权利要求67的化合物，其在体外抑制培养细胞的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
71. 具有类VII的结构式的化合物
类VII
其中，
X3为H、卤素、烷氧基或OH；
Y1、Y2、Y3和Y4独立地选自H、C1-C10烷基、取代的C1-C10烷基、C1-C10烯基、C1-C10卤代烷基、C1-C10硝基烷基、C1-C10硫代烷基、C1-C10羟基烷基、C1-C10烷氧基、苯基、取代的苯基、卤素、羟基、C1-C10烷氧基烷基、C1-C10羧基、C1-C10烷氧基羰基；
R4为H、卤素或OH；且
其中，该化合物抑制p38MAPK时显示出的EC50为约1μM-约1000μM；或该化合物的药学可接受的盐、酯、溶剂化物或前体药物。
72. 权利要求71的化合物，其抑制至少一种p38MAPK的EC50为约1μM-约1000μM。
73. 权利要求71的化合物，其中EC50为约50μM-约650μM。
74. 权利要求71的化合物，其在体内抑制体液中的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
75. 权利要求71的化合物，其在体外抑制培养细胞的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
76. 权利要求71的化合物，其具有下式
77. 权利要求71的化合物，其抑制至少一种p38MAPK的EC50为约1μM-约1000μM。
78. 权利要求71的化合物，其中EC50为约50μM-约650μM。
79. 权利要求71的化合物，其在体内抑制体液中的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
80. 权利要求71的化合物，其在体外抑制培养细胞的TNFα分泌的EC50为约1μM-约1000μM。
81. 一种药物组合物，其包括权利要求59的化合物和药学可接受的赋型剂。
82. 一种药物组合物，其包括权利要求65的化合物和药学可接受的赋型剂。
83. 一种药物组合物，其包括权利要求71的化合物和药学可接受的赋型剂。
84. 权利要求81的药物组合物，其中该组合物含有的所述化合物的量是按照患者的给药时间表来选择的，其中所述给药时间表选自每日2次、每日1次、每两日1次、每周3次、每周2次和每周1次。
85. 权利要求82的药物组合物，其中该组合物含有的所述化合物的量是按照患者的给药时间表来选择的，其中所述给药时间表选自每日2次、每日1次、每两日1次、每周3次、每周2次和每周1次。
86. 权利要求83的药物组合物，其中该组合物含有的所述化合物的量是按照患者的给药时间表来选择的，其中所述给药时间表选自每日2次、每日1次、每两日1次、每周3次、每周2次和每周1次。
87. 权利要求20的方法，其中按照选自下列的时间表将所述化合物给药于所述主体每日2次、每日1次、每两日1次、每周3次、每周2次和每周1次。
88. 权利要求21的方法，其中按照选自下列的时间表将所述化合物给药于所述主体每日2次、每1次、每两日1次、每周3次、每周2次和每周1次。
89. 权利要求21的方法，其中该病症为闭塞性细支气管炎综合症。
90. 权利要求21的方法，其中该病症为慢性同种异体移植物纤维化。
91. 权利要求21的方法，其中该病症为特发性肺部纤维化。
92. 权利要求21的方法，其中该病症为慢性阻塞性肺部疾病。
全文摘要
公开了用活性化合物调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统的方法，其中该活性化合物在抑制至少一种p38 MAPK时显示低的效力；而且其中在SAPK-调节浓度为该化合物抑制至少一种p38 MAPK时的低抑制百分浓度的条件下进行接触。还公开了吡非尼酮衍生物。这些衍生物可以调节应激活化蛋白激酶(SAPK)系统。
文档编号A61P43/00GK101237869SQ200680025160
公开日2008年8月6日 申请日期2006年5月9日 优先权日2005年5月10日
发明者L·M·布拉特, S·D·塞维尔特, L·贝格尔曼, R·拉达克里什南 申请人:英特芒尼公司