用作DGAT抑制剂的嘧啶并-[4,5-b]-噁嗪的制作方法

专利名称：用作DGAT抑制剂的嘧啶并-[4,5-b]-噁嗪的制作方法
用作DGAT抑制剂的嘧啶并-[4,5-b]^恶嗪
本发明涉及抑制乙酰CoA(乙酰辅酶A): 二酰基甘油酰基转移酶 (DGAT1)活性的化合物、该化合物的制备方法、含有该化合物作为活性 成分的药物组合物、治疗与DGAT1活性有关的疾病的方法、所述化合 物作为药物的用途，及涉及所述化合物在制备用于抑制温血动物如人的 DGATl的药物中的用途。特别地，本发明涉及用于治疗温血动物如人患 有的II型糖尿病、胰岛素抵抗、糖耐量受损和肥胖的化合物，更特别地， 本发明涉及这些化合物在制备用于治疗温血动物如人患有的II型糖尿 病、胰岛素抵抗、糖耐量受损和肥胖的药物中的用途。
乙酰CoA:人们在细胞的微粒体中发现了二酰基甘油酰基转移酶 (DGAT)。其能催化磷酸甘油途径的最后反应，该途径被认为是细胞中 甘油三酯合成的主要途径，通过促进二酰基甘油与脂酰CoA的酰化， 从而形成甘油三酯。尽管还不清楚DGAT对于甘油三酯合成是否为限速 的，但其在该途径中仅催化负责产生该类型分子的步骤[Lehner&Kuksis (1996) "Biosynthesis of triacylglycerols" Prog. Lipid Res. 35: 169-201]。
目前已经克隆出两种DGAT基因，并进行了表征。尽管这两种经编 码的蛋白质不具有序列同源性，但它们催化相同的反应。由于DGATl基 因与乙酰CoA:胆固醇酰基转移酶(ACAT)基因相似，人们从基因检索 数据库中将其识别出来[Cases等人(1998) "Identification of a gene encoding an acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase ， a key enzyme in triacylglycerol synthesis" Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 13018-13023]。在 许多哺乳动物组织中发现了 DGATl活性，包括脂肪细胞。
由于以前缺少分子探针，人们对DGATl的调节了解很少。DGATl 已知在脂肪细胞分化中会被明显的上调。
对基因敲除小鼠的研究表明，DGATl活性的调节因子对II型糖尿 病和肥胖的治疗很有价值。DGATl敲除的小鼠(Dgatr")可以生育并且 可以合成甘油三酯，这一点可以通过正常的禁食状态血清甘油三酯水平 和正常的脂肪组织组成得到证实。与基础状态下的野生型小鼠相比， Dgatr"小鼠的脂肪组织较少，并且能抗饮食诱导的肥胖。常规饮食和高 脂肪饮食情况下的Dgatr"小鼠的代谢率比野生型小鼠的代谢率高~
20% [Smith等人(2000) "Obesity resistance and multiple mechanisms of triacylglycerol synthesis in mice lacking DGAT" Nature Genetics 25: 87-90] 。 Dgatl"-小鼠生理活性的增加部分是由于它们能量消耗的增加。 所述Dgatr"小鼠的胰岛素敏感性也增强，葡萄糖代谢清除率增加了 20%。 Dgatl小小鼠的瘦素(leptin)水平降低了 50%,与脂肪量减少50% 一致。
当Dgatl+小鼠与ob/ob小鼠杂交，这些小鼠表现出ob/ob显型[Chen 等人(2002) "Increased insulin and leptin sensitivity in mice lacking acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase" J. Clin. Invest 109:1049-1055],这i兌 明Dgatl"显型需要完整的瘦素途径。当Dgatr"小鼠与刺豚鼠杂交，会 发现体重减少，葡萄糖含量正常，胰岛素水平与野生型小鼠、刺豚鼠或 ob/ob/Dgatr"小鼠相比减少了 70%。
将脂肪组织从Dgatl+小鼠移植到野生型小鼠体内后，会使后者能抗 饮食诱导的肥胖和具有改善的葡萄糖代谢[Chen等人(2003) "Obesity resistance and enhanced glucose metabolism in mice transplanted with white adipose tissue lacking acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase " J. Clin. Invest 111 : 1715-1722]。
因此，目前还需要开发出新的DGAT抑制剂。
国际专利申请WO2004/047755 (Tularik and Japan Tabacco)公开了 稠合二环含氮杂环化合物，其是DGAT-1的抑制剂。WO2004/047755中 公开的许多化合物含有侧链，这些侧链包括二取代的单环烷类，特别是 环己烷。申请人出人意料地发现相应的含二环烷类和三环烷类的化合物 也可以作为DGAT抑制剂，这些化合物可能具有改善的药代动力学特 性，特别是具有较低的代谢清除率和较长的半衰期。这些改善的特性对 于人类患者来说，可以有利地实现较低的和/或每天一次的给药剂量，并 且由此可能带来副反应和/或患者依从和/或低成本方面的益处。
因此，本发明涉及通式(I)化合物或其盐<formula>complex formula see original document page 7</formula>(I)
其中
R1选自氬，曱基和三氟曱基； 112为氢，氯或氟；
环A是(7-10C)二环烷二基或(8-12C)三环烷二基； W是羧基或羧酸类似物(mimic )或生物电子等排体(bioisostere); R4和115各自独立地为氢或曱基； n是O或1。
本发明另一方面涉及如上所述通式(I)化合物或其盐，其中n是1， 环A是(7-10C)二环烷二基。
在本说明书中，术语(7-10C)二环烷二基包括二环[2.2.1]庚烷二基、 1,4-二环[2.2.2]辛烷二基、1,5-二环[3.2.1]辛烷二基、1,5-二环[3.2.2]壬烷 二基、1,5-二环[3.3.2]癸烷二基。
在本说明书中，术语(8-12C)三环烷二基包括金刚烷基。
应当理解的是，当nK)时，则W基团直接与环A相连。当n-l时， 基团-C(R"(R"(RS)直接与环A相连。
本发明中使用的羧酸类似物或生物电子等排体包括在The Practice of Medicinal Chemistry, Wermuth CG. Ed.: Academic Press: New York, 1996, 203页中定义的基团。这样基团的特定例子包括-S03H, S(0)2NHR13, -S(0)2NHC(0)R13, -CH2S(0)2R13, -C(0)NHS(0)2R13, -C(O)NHOH,画C(O)NH CN, -CH(CF3)OH, C(CF3)2OH, - (0)(0印2和如下次级-通式(&)-(1')代表的基 团 <formula>complex formula see original document page 8</formula><formula>complex formula see original document page 9</formula>
其中，R"是(1-6C)烷基，芳基或杂芳基；和R"是氢或(1-4C)烷基。可以 理解的是，在上述次级-通式(a)至(i')中，可能存在酮-烯醇互变异构现象， 次级-通式(a)至(i')应当包括这些化合物的所有互变异构体。
(l-6C)烷基的实例包括曱基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、戊基、 异戊基、l-2-二甲基丙基和己基；(l-6C)烷氧基的实例包括曱氧基、乙氧 基、丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基和戊氧基；(l-6C)烷硫基的实例包括 曱硫基、乙硫基、丙硫基、异硫丙基和丁硫基；卣素的例子包括氯、溴、 碘和氟；三卣代甲基的例子包括三氟曱基。
通式(I)化合物可以形成稳定的酸或碱盐，在这种情况下，可能适 合以化合物盐的形式给药，药学上可接受的盐可以由常规方法制备，如下面所述的那些方法。
合适的药学上可接受的盐包括酸加成盐如甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、
a-甘油磷酸盐、富马酸盐、盐酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、乙酸盐、酒 石酸盐和(较不优选的)氲溴酸盐。同样合适的盐还包括与磷酸和碌u酸形 成的盐。在另一个方面，合适的盐为与碱性盐，如与I族(碱金属)或 II族(碱土金属)形成的盐，有机胺盐如三乙胺、二乙醇胺、吗啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普鲁卡因、二节基胺、N,N-二苄基乙胺、三-(2-羟基乙基)胺、N-甲基d-葡萄糖胺和氨基酸如赖氨酸。根据带电荷官能 团的数目和阳离子或阴离子的化合价，所述化合物中可以含有多于一个 的阳离子或阴离子。
然而，为了有利于制备过程中将盐分离出来，优选在所用溶剂中溶 解度较小的盐，而不管其是否为药学可接受的盐。
在本发明中，应当理解的是通式(I)或其盐可以存在互变异构现象， 说明书中给出的通式结构图仅代表一种可能的互变异构形式。应当理解 的是，本发明涵盖能抑制DGAT1活性的任何互变异构形式，且本发明 并不限于通式结构图中给出的任何一种互变异构形式。
各种形式的前药也是本领域已知的。这种前药衍生物的例子参见
a) Design of Prodrugs, H. Bundgaard编辑,(Elsevier, 1985)和Methods in Enzymology, Vol. 42, 309-396页，K. Widder等编辑(Academic Press, 1985);
b) A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen 和H. Bundgaard编辑,笫5章"Design and Application of Prodrugs",由H. Bundgaard编辑，113-191页(1991);
c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews ， 8, 1-38(1992);
d) H. Bundgaard等人,Journal of Pharmaceutical Sciences, 77， 285 (1988); 和
e) N. Kakeya等人，Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984)。 这些例举的前药可在体内分裂成为本发明的化合物。含羧基的本发
明化合物体内可分裂的酯为如药学可接受的酯，其在人体或动物体内分 裂成为母体酸。对于羧基的合适的药学可接受的酯包括(1-6C)烷基酯， 如曱基或乙基酯；(l-6C)烷氧基曱基酯,如甲氧基甲基酯；(l-6C)烷酰基氧 基甲基酯，如新戊酰氧基甲基酯；2-苯并[c]呋喃酮基酯；(3-8C)环烷氧
基羰基氧基(1-6C)烷基酯，如l-环己基羰基氧基乙基酯；1,3-二氧戊环-2-基曱基酯，例如5-甲基-l,3-二氧戊环-2-基曱基酯；(l-6C)烷氧基羰基氧基 乙基酯，例如l-甲氧基羰基氧基乙基酯；甲酰胺基曱基酯和其单-或二 -N-((1-6C)烷基)变体，如N,N-二甲基甲酰胺基甲基酯和N-乙基曱酰胺基 甲基酯；并且可以在本发明化合物的任何一个羧基处形成上述酯。含有 羟基的本发明化合物的在体内可分裂的酯为例如药学可接受的酯，其在 人体或动物体内经分裂形成母体羟基。针对羟基的合适的药学上可接受 的酯包括(l-6C)烷酰基酯，如乙酰酯；苯甲酰酯，其中所述苯基可以经 氨基曱基或N-取代的单-或二-(l-6C)烷基氨基甲基取代，例如4-氨基甲 基苯曱酰酯和4-N,N-二甲基氨基曱基苯曱酰基酯。
本领域技术人员能够理解的是，通式(I)的某些化合物含有不对称取 代的碳原子，因此可能存在(可能分离得到)光学活性和外消旋形式。 某些化合物可能表现为多晶型形式。应该理解本发明涵盖任何外消旋 的、光学活性的、多晶型的或立体异构的形式，或它们的混合物，这些 形式具有适用于抑制DGAT1活性的性质，本领域已知如何制备光学活 性形式(如，通过重结晶技术拆分外消旋形式，以光学活性原料经合成 得到，通过手性合成，酶法拆分，生物转化或利用通过手性固定相通过 色谱分离)和如何通过后述标准实^^测定对DGAT1活性的抑制效果。
可以理解的是，通式(I)的某些化合物和其盐可以以溶剂合物和非溶 剂化的形式存在，如水合物形式。应当理解的是，本发明涵盖了能抑制 DGAT1活性的所有溶剂合物形式，包括通式(I)化合物的溶剂合物形式 和盐。因此，另一方面，本发明涉及通式(I)和其盐及其溶剂合物。溶剂 合物的特定实施例为实施例1的乙酸溶剂合物。
如上所述，我们已经发现了许多具有很好的DGAT1抑制活性的化 合物。他们总体上都具有很好的物理和/或药代动力学性质。下述化合 物具有优选的药学和/或物理和/或药代动力学性质。
本发明的特定方面包括通式(I)化合物，或其盐，特别是其药学可接 受的盐，其中上述任何基团/取代基具有如上所述的定义，或任何下述的 定义(根据需要，可以参考前述或后述任何的定义、发明内容和实施方 案)
本发明的一个实施方案涉及通式(I)化合物，另一个实施方案公开了 通式(I)化合物的药学可接受的盐。进一步的实施方案公开了通式(I)化合物的前药。再一实施方案公开了通式(I)化合物前药的药学上可接受的盐。
一个方面，W是氢。另一个方面，W是曱基。再一方面，W是三 氟甲基。
一个方面，W是氢。另一个方面，R"是氯。再一方面，R"是氟。
一方面，W是羧基。另一方面，113是羧酸类似物或生物电子等排体。
一方面，R"是氢。另一个方面，W是甲基。
一方面，W是氬。另一个方面，RS是甲基。
另一方面，114是曱基和115是氬。
另一方面，R"和R5都是氢。
一方面环A是(7C)二环烷二基。
另 一方面环A是(8C)二环烷二基。
另 一方面环A是(9C)二环烷二基。
另 一方面环A是(10C)二环烷二基。
另 一方面环A是(8-10C)二环烷二基。
另一方面环A是(8-9C)二环烷二基(即，二环辛烷二基或二环壬烷二基)。
另一方面环A是(8-12C)三环烷二基。 另一方面环A是金刚烷基。 另一方面，W和I^都是氢。 一方面，n是O。 另 一方面n是1。
本发明另一方面涉及通式(I)化合物或其盐，其中
W选自氢、曱基和三氟甲基；
W为氢、氯或氟；
环A是(7-10C)二环烷二基；
W是羧基；
W是氢或甲基；
W是氢或曱基；
n是O或1。
本发明另一方面涉及通式(I)化合物或其盐，其中 W选自氢、甲基和三氟甲基；
W是氢、氯或氟；
环A是(7-10C)二环烷二基；
R3是羧基；
W是氬或甲基；
W是氬或甲基；
n是1。
本发明另一方面涉及通式(I)化合物或其盐，其中:
R1选自氢、曱基和三氟曱基；
W是氢、氯或氟；
环A是(7- IOC)二环烷二基；
W是羧基；
W是氢或曱基；
R5是氢；
n是1。
本发明另一方面涉及通式(I)化合物或其盐，其中:
W选自氲、甲基和三氟曱基；
W是氢、氯或氟；
环A是(7-10C)二环烷二基；
W是羧基；
W是氢或曱基；
R5是氢；
n是l。
本发明另一方面涉及通式(I)化合物或其盐，其中
W是氢；
R2是氢；
环A是(7-10C)二环烷二基或(8-12C)三环烷二基；
W是羧基；
W是氢或甲基；
R5是氢；
n是O或1。
本发明另一方面涉及通式(I)化合物或其盐，其中 W是氢；
R2是氢；
环A是(8-9Q二环烷二基或金刚烷基；
R3是羧基；
W是氬或甲基；
R5是氢；
n是0或1。
本发明优选的化合物为每个实施例给出的化合物，或其盐，特别是 药学上可接受的盐，其各自构成了本发明的一个方面。进一步，本发明 也包括两个或更多个实施例公开的化合物或它们药学上可接受的盐。
本发明优选的化合物为如下的任何一个，或其盐
(4画[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r恶嗪-6-基)苯基]二环 [2.2.2]辛-1-基}乙酸；和/或
{3-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-71^-嘧啶并[4,5-1)][1,4]18恶嗪-6-基)苯基]-1-金刚烷基}乙酸；
3- [4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r恶嗪-6-基)苯基]金刚 烷-l-羧酸；
2-(4-[4-(4-氨基-7，7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r恶嗪-6-基)苯基]二 环[2.2.2]辛-1-基}丙酸；
{5-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b] [1,4]哺嗪-6-基)苯基]二 环[3.2.2]壬-1-基}乙酸；
4- [4-(4-氨基-7，7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]喝嗪-6-基)苯基]二环 [2.2.2]辛烷-1-羧酸.
方法
通式(I)化合物和其药学上可接受的盐可采用适于制备化学相关化 合物的任何已知方法进行制备。当采用这些方法制备通式(I)化合物或其 药学上可接受的盐时，其为本发明的一个方面。
本发明的另一方面也公开了通式(I)或其药学上可接受的盐可采用 如下方法a)制备(其中，所有变量与上述针对通式(I)化合物的定义相 同，或其经保护的变体，除非另有说明)
a)通式(n)化合物与通式(m)化合物或其盐进行反应，其中W为酯
基，如曱氧羰基；
其中，L是离去基团，如溴；之后，如果需要，可进行如下步骤
i) 将酯113水解成相应的羧酸；和/或
ii) 形成盐。
可以理解的是，通式(I)化合物，或其盐可通本领域已知的技术作为 溶剂合物形式分离出来，见实施例1。因此，形成溶剂合物是上述方法 任选的最终步骤。
乙醇水溶液中加;A来进行，优选在催化剂(二二盐酸)的存在下。通式
(II)的中间体可以通过在催化剂如氯化铝的存在下将通式(IV)化合物用 2-溴异丁酰溴酰化得到。
<formula>complex formula see original document page 15</formula>
通式(IV)化合物，其中R4=曱基和R5=H,可以利用如碘曱烷在合适的碱如二异丙基氨基化锂的存在下通过烷基化相应化合物得到，其中
R4=H。通式(IV)化合物，其中114和115都是甲基，可以采用相似的方法 通过连续的两个烷基化反应制备。
通式(IV)化合物，其中113为酯和！14=115= 和11=1,可以通过通式(V) 化合物转变为盐酸盐，然后与三曱基曱硅烷基重氮曱烷反应和随后与乙 醇反应而由同系化(homologation)得到。或者，可以采用本领域已知 的其它同系化方法，例如将通式(V)化合物或它们相应的酯转化为相应 的N-曱氧基-N-曱酰胺，然后用如氬化铝锂还原得到相应的醛。这些醛 接着经魏悌烯(Wittig)反应得到通式(VI)的烯醇醚，该烯醇醚可随后经如 氯铬酸吡啶镥盐氧化成通式(IV)化合物，其中113为酯，R4=R5=H。另一 个同系化程序为通式(V)化合物或其酯经还原成相应的醇，通过例如甲 苯磺酰化(甲苯磺酰基=对甲苯磺酰基)将醇转化为离去基团，然后通过 氰化物经替换反应得通式(VII)的腈，可以采用常规方法将该腈水解和酯 化。实施例7对该方法进行了说明。
<formula>complex formula see original document page 16</formula>(V) (VI) (VII)
通式(V)化合物，其中W是氪，环A是二环[2.2.2]辛烷-l,4-二基， 可以采用N.B Chapman, S.Sotheeswaran和KJ. Toyne J.Org. Chem., 1970, 35， (4), 917中描述的方法进行制备，按照方案1中所示的反应顺序， 然后酯水解方案1
二酯二环-辛烷(Vm)可以采用多种方法进行制备，例如根据J. Org. Chem., 1970， 35, (4), 917 (参加方案2)中描述的方法,或根据Synthes 是1996, 71页(参见方案3)中描述的方法进行制备。
方案3
或者，通式(V)化合物，其中W是氢，可以采用方案4所述的方法 进行制备，或者釆用与之类似的方法(例如，改变方案4中列出的条件， 如换成氢化催化剂(如钯碳)或其它试剂以引入triflate(基三氟曱磺酸盐) 基团(如三氯甲烷磺酸酐)。<formula>complex formula see original document page 18</formula>
方案4。 或者，通式(V)化合物，其中W是氢，氯或氟，可以根据方案5中 所示的方法制备成其酯衍生物，或其类似物。
方案5
通式(V)化合物，其中环A为是除二环[2.2.2]辛烷-l，4-二基外的其它 基团，可以直接由类似方法进行制备。制备这样化合物的合适方法也公
开在随附的实施中。
对于上述方法中使用的必要起始物质，如果无法商业购得，则可以 选择现有常规有机化学方法进行制备，釆用与已知的合成类似的方法， 选择结构相似化合物，选择在上述给出的参考文件中都有公开或描述的
方法，或者选择与上述方法类似的方法，或选择在实施例中公开的方法。
读者可以进一步参考Advanced Organic Chemistry (《高等有机化学》)， 第5版，Jerry March和Michael Smith, John Wiley & Sons 2001出版， 来选择反应条件和试剂。
可以理解的是，通式(I)化合物的某些中间体可具有新颖性，这些化 合物也是本发明的发明内容。特别地，通式(II)化合物为本发明的另一方 面。本发明另一方面提供通式(IV)的化合物。与该发明内容相关的一个 实施方案中公开了(4-苯基二环[2.2.2]辛-l-基)乙酸曱基酯。
也可以理解的是，本发明提到的某些反应需要/必须对化合物中的任 何敏感基团进行保护。本领域技术人员知道什么情况下需要或必须进行 保护，同样也知道采用什么样的方法来保护。常用的保护基可按照常规 操作进行保护(为了说明，请参见T.W.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley和Sons, 1991》
可以采用文献中或本领域已知的和适合除去目标保护基的常规方 法来去保护基，选择这样的方法的标准是其能有效除去保护基团，同时 对分子中的其它基团产生最小的影响。
因此，如果反应物中含有例如氨基，羧基或羟基的基团，则需要对 本发明提到的某些反应中的这些基团进行保护。
针对羟基的合适的保护基团实例为例如酰基，如烷酰基如乙酰、芳 酰基如苯甲酰基、曱硅烷基如三甲基曱硅烷基或芳基曱基如苯甲基。针
因此，例如酰基基团如烷酰基或芳酰基可以通过例如用合适的碱如碱金 属的氢氧化物(如氢氧化锂或氬氧化钠)水解而除去。或者，可以通过 例如用氟化物或酸的水溶液除去曱硅烷基如三曱基甲硅烷基或SEM;或 者可以通过例如在催化剂(如钯碳催化剂)的存在下的氢化反应除去芳 曱基基团如苯甲基基团。
合适的氨基保护基团有例如酰基如烷酰基如乙酰基；烷氧基羰基如 曱氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基；芳基曱氧基羰基如苯甲氧基
羰基，或芳酰基如苯甲酰基。针对上述保护基团的脱保护条件需要根据 所选保护基团的不同而变化。因此，例如酰基如烷酰基或烷氧基羧基或 芳酰基可以通过例如用合适的碱如碱金属的氢氧化物(如氢氧化锂或氬 氧化钠)水解而除去。或者，可以通过例如用合适的酸如盐酸、硫酸、 磷酸或三氟乙酸处理来除去酰基如叔丁氧基羰基，而且可以通过例如在
催化剂(如钯碳催化剂)的作用下的氢化反应，或者通过用Lewis酸如 三(三氟醋酸)硼(boron tris(trifluoroacetate))处理而除去芳基甲氧基 羰基如苯曱氧基羰基。针对伯氨基的合适的选择性保护基团有，如邻苯 二曱酰基，该基团可以通过用烷基胺如二曱基氨基丙胺或2-羟基乙胺或 肼处理而除去。
针对羧基的合适的保护基团有，例如酯化基团例如甲基或乙基基 团，其可例如通过用碱如氬氧化钠水解除去，或者例如叔丁基，其可通 过例如用酸如有机酸(如三氟乙酸)处理除去，或者例如苯曱基，其可 通过例如在催化剂(如钯碳催化剂)的作用下的氬化反应除去。
树脂可以用作保护基团。
上述保护基团可以在合成过程中任何方便的阶段用化学领域内公 知的常规技术除去，或者在后续的某一反应步骤或者后处理中除去。 熟练的有机化学工作者能够使用或采用上述参考文献中包含和引
口口 o
除去任何保护基团和制备药学上可接受的盐都是普通有机化学工 作者用标准的技术能完成的工作。而且，这些步骤的细节均在上文中公开。
当需要本发明所述化合物的光学活性形式时，可通过使用光学活性 原料(例如，通过合适的反应步骤经非对称诱导制得)实施上述方法来 获得，或通过使用标准步骤拆分所述化合物或中间体的外消旋体获得， 或通过非对称异构体(在已制得时)的色谱分离来获得。酶技术也可用 于制备所述具有光学活性的化合物和/或中间体。
类似地，当需要本发明所述化合物的纯结构异构体(regioisomer) 时，可将纯结构异构体作为原料，通过实施上述方法的一种来获取，或 通过标准步骤拆分所述位置异构体或中间体的混合物来获取。
本发明的另一方面涉及通过上文所述或在实施例中描述的方法获
得的通式(I)所示化合物。
本发明另一方面涉及一种药物组合物，该组合物包含上文所述的通 式(I)化合物或其药学上可接受的盐，并与药学上可接受的赋形剂或载体 结合。
本发明所述的组合物可以是适合口服的形式(例如片剂、锭剂、硬 或软胶嚢、水性或油性悬浮液、乳剂、可分散粉末或微粒、糖浆或酏剂)、 适合局部使用的形式(例如霜剂、药膏、凝胶、或者水性或油性溶液或 悬浮液)、适合吸入给药的形式(例如作为细粉末或液体气雾剂)、适 合吹入给药的形式(例如作为细粉末)或适合肠胃外给药的形式(例如 静脉滴注、皮下、肌肉或肌肉定量给药的无菌水或油溶液或直肠定量给 药的栓剂)。通常，优选釆用口服给药的组合物。
本发明所述化合物可以使用本领域公知的、常规的制药学上可接受 的赋形剂，通过常规的步骤制得。因此，以口服使用为目的的组合物可 以包含，例如， 一种或多种色素、甜^^木剂、调，朱剂和/或防腐剂。
对于片剂，合适的药学上可接受的赋形剂包括，例如惰性稀释剂如 乳糖、碳酸钠、磷酸钓或碳酸钙，粒化剂或崩解剂如玉米淀粉或海藻酸
(algenic acid);粘合剂如淀粉；润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石； 防腐剂如乙基或丙基对-羟基苯曱酸酯，及抗氧化剂如抗坏血酸。片剂可 以是未包衣的或可以是包衣的，以改善片剂在消化道内的分解及后续的 活性成分的吸收或改善片剂的稳定性和/或外观，后一种情况，使用本领 域内公知的常规包衣剂和常规方法进行包衣。
口服使用的组合物可以是硬明胶胶嚢形式，其中所述活性成分与惰 性固体稀释剂混合，所述惰性固体稀释剂为如碳酸钙、磷酸钓或高岭土； 也可以是软明胶胶嚢形式，其中所述的活性成分与水或油混合，所述油 如花生油、液体石蜡或橄榄油。
水悬浮液通常包含细粉末状(如微米或亚微米颗粒)的活性成分及 一种或多种悬浮剂如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、 藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、西黄蓍胶或阿拉伯胶；分散剂或润湿剂如 卵磷脂或某种环氧烷烃与脂肪的缩合产物酸(例如聚氧乙烯基硬脂酸 酯)，或环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合产物，例如十七环氧乙烷十六 烷醇(heptadecaethyleneoxycetanol),或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇 衍生出的偏酯(partial ester)如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯的缩合产物，
或环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合产物，例如十七环氧乙烷十六烷醇， 或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生出的偏酯如聚氧乙烯山梨醇单油 酸酯的缩合产物，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生出的偏酯如聚 氧乙烯山梨糖醇单油酸酯的缩合产物。所述水悬浮溶液也可以包含一种 或多种防腐剂(如乙基或丙基对-羟基苯甲酸酯)、抗氧化剂(如抗坏血 酸)、着色剂、香味剂和/或甜味剂(如蔗糖、糖精或阿斯巴甜)。
油性悬浮剂可通过将活性成分悬浮在植物油(如花生油、橄榄油、 芝麻油或椰子油)中或悬浮在矿物油(如液体石蜡)中制得。上述油性 悬浮剂也可以包含增稠剂如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇。可加入如前面提 到的甜味剂以及香味剂以得到较好口感的口服制剂。这些组合物可通过 加入抗氧化剂如抗坏血酸来防止腐坏。
适合通过加入水制备成水悬浮液的可分散的粉末或微粒通常包含 所述活性成分及分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。合适的 分散剂或润湿剂及悬浮剂如上文中给出的示例。还可以加入如甜味剂、 香味剂和着色剂等添加剂。
本发明所述的药物组合物也可以是水包油型乳液形式。油相可以是 植物油如橄榄油或花生油，或矿物油如液体石蜡，或任何这些油的混合 物。合适的乳化剂可以是，例如，天然树胶如阿拉伯胶或黄芪胶，天然 磷脂如大豆、卵磷脂，由脂肪酸与己糖醇酐衍生出的酯或偏酯(如山梨 糖醇单油酸酯)及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯基山梨糖
醇单油酸酯。该乳化剂也可以包含甜味剂、香味剂和防腐剂。
可以通过加入甜P未剂如甘油、丙二醇、山梨糖醇、阿斯巴甜或蔗糖 来配制糖浆或酏剂，该糖浆或酏剂也可以包含緩和剂、防腐剂、香味剂 和/或着色剂。
所述药物组合物还可以是无菌可注射的水或油悬浮液形式，其可以 釆用已知的方法、使用上文提及的一种或多种适合的分散剂或润湿剂和 悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是在无毒非肠道可接受的稀释剂
或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。
可通过吸入给药的组合物可以是常规压缩气雾剂形式，该气雾剂被 布置为以包含细颗粒固体或液体小滴的方式释放活性成分。可以使用常 规的气雾推进剂如挥发性的氟化烃或烃，而气雾装置通常能释放定量的 活性成分。关于配制的进一步信息，读者可参见Pergamon Press于1990年出 版的Comprehensive Medicinal Chemistry(Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board)的第5巻，25.2章。
与 一种或多种赋形剂组合制备单剂型的活性成分的量需要根据要 进行治疗的病体和特定的给药方式而变化。例如，用于人类口服给药的 制剂通常包含，例如，0.5mg至2g活性成分，该活性成分与适当的、合 宜剂量的赋形剂混合，赋形剂的量占总组合物重量的大约5至大约98%。 单位剂量形式通常包含大约lmg至大约500mg的活性成分。关于给药 途径和剂量方案的进一步信息，读者可参见Pergamon Press于1990年 出版的Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board)的第5巻，25.3章。
本发明进一步涉及前述通式(I)化合物或其药学上可接受的盐，用于 通过治疗手段处理人类或动物的方法。
我们已发现本发明所述化合物抑制DGAT1活性，因此对它们的降 血糖作用感兴趣。
本发明的进一方面特征是通式(I)化合物或其药学上可接受的盐作 为药物的用途。
合宜地，本发明涉及通式(I)化合物，或其药学上可接受的盐用作抑 制温血动物如人类的DGAT1活性的药物。
特别地，本发明涉及通式(I)化合物，或其药学上可接受的盐用作治 疗温血动物如人类糖尿病和/或肥胖的药物。
因此，本发明的进一方面涉及通式(I)化合物或其药学上可接受的盐 在制备用于抑制温血动物如人类DGAT1活性的药物中的用途。
因此，本发明的进一方面涉及通式(I)化合物或其药学上可接受的盐 在制备用于治疗温血动物如人类糖尿病和/或肥胖的药物中的用途。
本发明的进一方面涉及包含前述通式(I)化合物或其药学上可接受 的盐及药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物，该组合物用于抑制 温血动物如人类的DGAT1活性。
本发明的进一方面涉及包含前述通式(I)化合物或其药学上可接受 的盐及药学上可接受的赋形剂或载体的药学组合物，该组合物用于治疗 温血动物如人类的糖尿病和/或l巴胖。
本发明的进一方面涉及抑制需要治疗的温血动物如人类的DGAT1活性的方法，该方法包含对所述动物施用有效剂量的前述通式(I)化合物 或其药学上可接受的盐。
本发明的进 一 方面涉及治疗需要治疗的温血动物如人类的糖尿病 和/或肥胖的方法，该方法包含对所述动物施用有效剂量的前述通式(I) 化合物或其药学上可接受的盐。
如前所述，对于治疗性或预防性治疗某种特定疾病状态所需剂量的 大小需要根据所治疗的病体、给药途径及所治疗疾病的严重程度而变
化。例如，可釆用的每日剂量的范围在l-50mg/kg。然而，日剂量需要 根据所治疗的病体、特定的给药途径及所治疗疾病的严重程度而变化。 因此，最佳剂量可由治疗某特定病人的治疗者决定。
如前所述，本发明所述的化合物因其能抑制DGAT1活性而引起人 们的关注。本发明所述的化合物因此可用于预防、延迟或治疗多种疾病 状态包括糖尿病、更为具体地为II型糖尿病(T2DM)及由其引起的并发 症(如视网膜病、神经病和肾病)、糖耐量受损(IGT)、空腹血糖异常症、 代谢性酸中毒、酮症、代谢异常综合征、关节炎、骨质疏松症、肥胖症 及肥胖相关疾病，(包括外周血管疾病，(包括间歇性跛行)，心力衰 竭和某些心肌疾病、心肌缺血、大脑缺血和再灌注、高血脂病、动脉硬 化症、不孕症和多嚢卵巢综合征)；本发明所述的化合物也可以用于肌 肉萎缩、皮肤疾病如痤疮、阿尔茨海默病、各种免疫调节疾病(如银翘 病)、HIV感染、炎性肠道综合征和炎性肠道疾病如克罗恩氏病和溃疡 性结肠炎。
特别地，本发明所述的化合物对预防、延緩或治疗糖尿病和/或肥胖 症和/或肥胖相关疾病有重要作用。 一方面，本发明所述的化合物用于预 防、延緩和治疗糖尿病。另一方面，本发明所述的化合物用于预防、延 緩和治疗肥胖症。另一方面，本发明所述的化合物用于预防、延緩和治 疗月巴胖相关疾病。
本发明所述的对DGAT1活性的抑制可作为单独的治疗施用，也可 以针对要治疗的病症与 一种或多种其它物质和/或治疗方法组合施用。这 种结合治疗方法可以同时、相继或分开施用该治疗采用的各单独组分。 同时治疗方式可以以单独片剂或分开的多片剂方式给药。例如，这种结 合治疗方式有益于代谢性综合征的治疗[定义为腹部肥胖症(通过人种和 性别具体界定点对应的腰围来测量)附加如下情况的任意两种高甘油三酯血症(〉150mg/dl; 1.7mmol/l );低HDLc(男性<40mg/dl或 <1.03mmol/l,女性〈50mg/dl或1.29mmol/l)或对低HDL (高密度脂蛋白) 的治疗；高血压(SBP^130mmHg DBP^85mmHg)或对高血压的治疗；及 高血糖病(空腹血糖^100mg/dl或5.6mmol/l或糖耐量受损或预先存在的 糖尿病)-国际糖尿病联盟&从IAS/NCEP录入]。 上述结合治疗方法可以包括如下主要类别
1) 抗肥胖症治疗如通过影响食物摄取、营养吸收或能量消耗而导 致体重减轻，如奥利司他、西布曲明及类似物；
2) 胰岛素分泌促进剂包括磺脲(如格列本脲、格列吡嗪)，餐时 血糖调节剂(如瑞格列奈、那格列奈)；
3 )改善肠促胰岛素作用的药剂(如二肽酰肽酶IV抑制剂和GLP-I 激动剂)；
4) 胰岛素增敏剂包括过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR) y激 动剂(如吡格列酮和罗格列酮)，和具有PPARa和Y联合活性的药剂；
5) 调节肝脏血糖平衡的药物(如二甲双胍、果糖l, 6二磷酸酯抑 制剂、糖原合成激酶抑制剂、糖原合成酶激酶抑制剂、葡萄糖激酶激活 剂)；
6) 用于降低小肠吸收血糖的药剂(如阿卡波糖)；
7) 防止血糖经肾脏再吸收的药剂(SGLT抑制剂)；
8) 治疗长期高血糖并发症的药剂(如醛糖还原酶抑制剂)；
9) 抗血脂异常药剂如HMG-CoA还原酶抑制剂(如他汀类药物)； PPARa-激动剂(贝特类药，如吉非罗齐)；胆酸螯合树脂(考来烯胺)； 胆固醇吸收抑制剂(植物固醇酯，合成抑制剂)；胆酸吸收抑制剂(IBATi) 及尼克酸和类似物(烟酸和緩释配方)；
10) 抗高血压药如p-阻断剂(如阿替洛尔，普萘洛尔)；ACE抑制剂 (如赖诺普利)；钓拮抗剂(如硝苯地平)；血管紧张素受体拮抗剂(如
坎地沙坦)，a-拮抗剂和利尿剂(如呋塞米，卡噻嗪)；
11) 止血调节剂如抗血栓形成剂、纤维蛋白溶解活化剂和抗血小板 药剂；凝血酶拮抗剂；Xa因子抑制剂；Vila因子抑制剂；抗血小板剂
(如阿司匹林，氯吡格雷)；抗凝血剂(肝磷脂及低分子量类似物，水 蛭素)及华法林；
12) 拮抗胰高血糖素活性的药剂；以及13)抗炎活性剂，如非类固醇抗炎活性药物(如阿司匹林)和类固 醇抗炎活性剂(如可的松)。
通式(I)化合物及其药学上可接受的盐除用在治疗性药物中，也可 以在体外和体内测试系统的开发和标准化中用作药理学工具，用于评估 DGAT1活性抑制剂对实验动物体的效果，作为开发新型治疗药物研究 的一部分，所述实验动物如猫、狗、兔、猴、大鼠和小鼠。
如前所示，所有的化合物及它们相应的药学上可接受的盐可用于抑 制DGAT1。通过下面的酶实验对通式(I)所示化合物及相应的药学上 可接受的酸加成盐在抑制DGAT1上的能力的说明
人酶实验
鉴别DGAT1抑制剂的体外实验使用在昆虫细胞膜中表达的人 DGAT1作为酶源(Proc. Natl. Acad. Sci. 1998, 95， 13018-13023 )。简单 地讲，用含人DGAT1编码序列的重组杆状病毒感染sf9细胞，48小时 后收集。细胞经匀浆溶解，在4。C在0.25M蔗糖、10mMTrisHCl(三(羟 甲基)氨基曱烷盐酸盐)、lmMEDTA (乙二胺四乙酸)中以100,000g 离心1小时分离出细胞膜。收集含有膜组分的团块(pellet)，在緩冲液 中重悬浮，并保存在-8(TC。
DGAT1活性通过对Coleman纟会出的方法(Methods in Enzymology 1992， 209, 98-102)进行改进来测试。将l-10pM的化合物在总测试体 积为200|iiL的0.8pg膜蛋白质、5mM的氯化镁和lOOpM 1,2-二油酰-311-甘油的混合物中培养。加入14C油酰辅酶A (最终浓度为30|iM)使反 应开始，并在室温下孵化30分钟。加入200nL2-丙醇:庚烷(7:1 )混合 物使反应停止。加入300)iL庚烷和pH值为9.5的100iLiL0.1M碳酸盐緩 冲液将放射性甘油三酯分离至有机相中。利用液体闪烁照相法通过计算 上层庚烷层的可分量部分(aliquot)来量化DGAT1活性。
用该实鸟全方法，所述化合物通常表现出IC5o<l(HiM的活性，如 <l|iM,特别是〈100nM,更为特别是〈50nM。实施例1表现出19nM的 IC50,实施例4表现出40nM的IC5o活性。
本发明所述的化合物，特别是实施例1,可能具有前述的优异药动 学特性。这可以通过测量化合物在诸如大鼠(如Han Wistar大鼠)之类 的动物体内的半衰期来证明。化合物通过口服给药，单独地或者作为包 含高达5种化合物的贮片盒(cassette)的一个成分。典型的剂量为2.5
至5mg/kg(5ml/kg剂量体积)，采用在羟丙基甲基纤维素 (HPMC)/Tween(表面活性剂)中的悬浮液形式。给药后，在0.25、 0.5、 1、 2、 3、 6、 12和24小时测量化合物的血浆水平，并通过HPLC/质谱进行 分析。
例如，在该测试中，实施例1具有9.8小时的半衰期。 通式(I)化合物及它们相应的药学上可接受的酸的盐对DGAT1的 抑制能力可进一步通过实施如下全细胞实验1 )和2)来说明 1 ) 3T3细胞中甘油三酯合成的测定。
将小鼠脂细胞3T3细胞在置于含有介质的新生小牛血清中的6孔板 中培养融合。通过在含有10%胎牛血清、lpg/mL的胰岛素、0.25pM地 塞米松和0.5mM异丁基甲基黄噤呤的介质中培养来分化细胞。48小时 后，将细胞在含有10%胎牛血清和lpg/mL的胰岛素的介质中继续培养 4-6天。对于该实验，将介质换成不含血清的介质，并用溶解在DMSO 中的化合物(最终浓度为0.1。/。)预培养所述细胞30分钟。通过向每个 孔中加入0.25mM乙酸钠加上liiCi/mLMC乙酸钠继续培养两小时来测量 脂肪的从头生成(J. Biol. Chem., 1976， 251, 6462-6464)。在石粦酸盐緩冲 的盐水中洗涤所述细胞，并溶在1%的十二烷基硫酸钠中。取出一等份 试样，利用基于Lowry提出的方法(J. Biol. Chem.， 1951， 193, 265-275 ) 得到的蛋白质测定试剂盒(Perbio)测定蛋白质。使用庚烷:2-丙醇:水
(80:20:2 )的混合物将脂质萃取到有机相中，然后根据Coleman的方法 (Methods in Enzymology， 1992, 209， 98-104)等分水和庚烷。收集有机 相，在氮气保护下蒸掉溶剂。将萃取物溶于异己烷:乙酸(99:1)中，根 据Silversand和Haux (1997年)提出的方法通过常规高效液相色谱
(HPLC)将脂质分离，高效液相色谱采用的条件为使用Lichrospher diol誦5、 4x250mm柱，梯度溶剂系统:异己烷:乙酸(99:1 )和异己烷:丙誦2國 醇乙酸(85:15:1 )，流速为lmL/分钟。将放射性标记加到甘油三酸酯 级分中，用连接到HPLC机器的放射性Flo-one检测仪对该级分进行分 析。
2) MCF7细胞中甘油三酯合成的测量
将人乳腺上皮(MCF7)细胞在置于含有介质的胎牛血清中的6孔 板上培养融合。对于该实验，将介质换成不含血清的介质，并用溶解在 DMSO中的化合物(最终浓度为0.1%)预培养所述细胞30分钟。通过
向每个孔中加入50^M乙酸钠加上3nCi/mL"C-乙酸钠继续培养3小时 来测量脂肪的从头生成(J. Biol. Chem.， 1976, 251， 6462-6464)。在磷酸 盐緩冲的盐水中洗涤所述细胞，并溶在1%的十二烷基硫酸钠中。取出 一等份试样，利用基于Lowry提出的方法(J. Biol. Chem., 1951, 193, 265-275 )得到的蛋白质测定试剂盒(Perbio)测定蛋白质。使用庚烷:2-丙醇:水(80:20:2 )的混合物将脂质萃取到有机相中，然后根据Coleman 的方法(Methods inEnzymology, 1992， 209， 98-104)等分水和庚烷。收 集有机相，在氮气保护下蒸掉溶剂。将萃取物溶于异己烷:乙酸(99:1 ) 中，根据Silversand和Haux (1997年)提出的方法通过常规高效液相色谱 (HPLC)将油脂分离，高效液相色谱釆用的条件为:使用Lichrospher diol-5、 4x250mm柱，梯度溶剂系统异己烷乙酸(99:1 )和异己烷: 丙-2-醇乙酸(85:15:1),流速为lmL/分钟。将放射性标记加到甘油三 酸酯组分中，用连接到HPLC机器的放射Flo-one检测仪(Packard)对 该组分进行分析。
在以上的其它药物组合物、过程、方法、用途和药物制备特征中， 也适用本发明化合物的备选和优选实施方案。
实施例
本发明将通过如下的实施例来进行说明，其中，如非特别说明则定 义如下
(i) 温度通常以摄氏度(。C)给出；操作在室境下进行，即温度范 围在18-25。C,而且在惰性气体如氩气下进行；
(ii) 有机溶剂在无水硫酸镁中干燥；减压(600-4000帕斯卡； 4.5-30mmHg)旋转蒸出溶剂，浴温最高为60°C;
(iii) 色谱纯化通常是指快速柱色语法，如非特别说明在硅胶上进 行。柱色谱通常使用预先包装的硅胶管(从4g最大至400g )如Redisep
(例如Presearch Ltd, Hitchin, Herts, UK出售的)或Biotage(Biotage UK Ltd, Hertford, Herts, UK),使用泵和级分收集系统来洗脱。或者，使 用ISOLUTE预先包装的硅胶管(10g至50g)(例如1ST，Dyffryn Business Park出售)进行色谱纯化，这种情况下洗脱和级分收集均人工进行；
(iv) 通常，反应过程由TLC跟踪，反应时间仅用于举例说明；
(v) 给出的收率仅用于说明，并不一定是指通过改进后的步骤得到的；如需更多材料，则重复制备过程；
(vi) 通式(I)最终产品的结构由核(通常为质子)磁共振(NMR) 和质谱技术确认，核磁共振场强度(对于质子)为300MHz (通常使用 Varian Gemini 2000 )或400MHz (通常使用Bruker Avance DPX400 ), 除非另有指明；氬质子核磁共振中化学位移的值在S标度上测定，峰个 数如下所示s,单峰；d，双峰；t,三重峰；m，多重峰；br，宽峰；q， 四重峰,quin,五重峰；
使用全氘代二甲基亚砜(DMSO-dJ作为溶剂，除非另有说明；
(vii) 化学符号具有通常意义；使用SI单位和符号；
(viii) 溶剂比例以体积:体积(v/v)给出；
(ix) 质谱(MS)数据(除非另有说明)通常在LCMS系统上产生， 其中，HPLC (高效液相色谱)部分通常包含Agilent 1100或Waters Alliance HT (2790 & 2795)设备，并在Phemonenex Gemini C 18 5pm, 50 x2mm柱(或类似物)上进行洗脱，该洗脱使用酸性洗脱液(例如，佳_ 用梯度为0-95%的水/乙腈，其具有5%的在水:乙腈为50:50 (v/v)的混 合物中的1%蚁酸；或使用相同的溶剂系统，但是用甲醇代替乙腈)或 使用碱性洗脱液(例如，使用梯度为0-95%水/乙腈，其具有5°/。的在乙 腈混合物中的0.1% 880氨水)；而且该MS组件通常包含Waters ZQ分 光计。产生了电喷雾的色谱图(ESI)正和负基峰强度，和220-300nm的 UV全吸收色谱图，并且给出了m/z的值；通常，只给出指明原始峰的 离子，除非另有说明，否则给出的值为(M+H)+;
(x)GC-MS通过下述方法中的一种测得a)i), a)ii)， b)i)或b)ii): a) i)利用电子轰击电离(EI)的Waters GCT高分辨(Premier) 气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法
气相色谱-质谱分析是在与HP6890GC温箱(oven)相连的Waters GCT高分辨GC-MS系统上进行，其中HP6890GC安装有Agilent 7683B 自动取样器。GC柱是长度为30m, 0.25mm内径的DB-5MS,且膜厚为 0.25pm (J &W Scientific, Folsom, CA， USA)。将样品溶解在甲醇中， 浓度为 lmg/ml，且以分流比30:1注射lpl。氦载体气体的流速设定为 l.Oml/min 。设定以下温度GC注入器温度为250°C，起始温箱温度为 50°C，质谱界面250。C,离子源温度为200。C。在分析期间，GC温箱温 度在50。C维持4分钟，然后将温度以25。C/分钟升高到280°C，然后以 5(TC/min.的速度升高到320°C,最后在该温度保持2min。质谱利用了电 子轰击电离(70eV),在0.2秒内扫描质量范围40-800 amu。
ii)利用正化学电离(+CI)的Waters GCT高分辨气相色谱-质谱 (GC-MS)分析方法
气相色谱-质谱分析是在与HP6890GC温箱相连的Waters GCT高分 辨GC-MS系统上进行，其中HP6890GC安装有Agilent 7683B自动取 样器。GC柱是长度为30m, 0.25mm内径的DB-5MS,且膜厚为0.25pm (J & W Scientific, Folsom， CA, USA)。将样品溶解在曱醇中，浓度为 lmg/ml，且以分流比30:1注射1^1。氦载体气体的流速设定为 l.Oml/min 。设定如下温度GC注射器温度为250°C ，起始温箱温度为 50°C,质谱界面温度250。C,离子源温度为200。C。在分析期间，GC温 箱温度在5(TC维持2分钟，然后将温度以25。C/分钟升高到280°C,然 后以50。C/min.的速度升高到320°C,最后在该温度保持4min。利用甲烷 CI气体在2.7 x 10—3Pa的压力产生正离子化学电离(CI)。质谱在0.2 秒内扫描质量范围40-800 amu。
b) i)利用电子轰击电离(EI)的气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法 GP-2010:
气相色谱-质谱分析是在安装有AOC 20i自动取样器的QP-2010 GC-MS系统上进行的，由'GCMS方案，软件控制，2.0版本(Shimadzu, Milton Keynes, MK12 5RE, UK)。 GC柱长度为25m, 0.32mm内径， 且膜厚为0.52|im (J &W Scientific, Folsom, CA， USA)。将样品溶解在 曱醇中，浓度为 lmg/ml，且以分流比10:1注射lpl。氦载体气体的流 速设定为1.8ml/min。设定如下温度GC注射器温度为250°C,起始温 箱温度为50°C，质谱界面温度320。C,离子源温度为20(TC。在分析期 间，GC温箱温度在50。C维持4分钟，然后将温度以25。C/分钟升高到 280°C,然后以50。C/min.的速度升高到320°C,最后在该温度保持4min。 质谱采用电子轰击电离(70eV),以扫描速度1250 amu/sec扫描50-600 amu范围。
ii)利用正化学电离(+CI)的气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法 气相色谱-质谱分析是在安装有AOC 20i自动取样器的QP-2010 GC-MS系统上进行的，由'GCMS方案，软件控制，2.0版本(Shimadzu, Milton Keynes， MK12 5RE， UK)。 GC柱长度为25m, 0.32mm内径，
且膜厚为0.52pm (J &W Scientific, Folsom, CA, USA)。将样品溶解在 甲醇中，浓度为 lmg/ml，且以分流比20:1注射lpl。氦载体气体的流 速设定为1.9ml/min。设定如下温度GC注射器温度为250°C ，起始温 箱温度为50°C,质谱界面温度320。C,离子源温度为200°C。在分析期 间，GC温箱温度在5(TC维持4分钟，然后将温度以25。C/分钟升高到 280°C，然后以50。C/min.的速度升高到320°C，最后在该温度保持4min。 利用甲烷CI气体在2.7x 10，a的压力产生正离子化学电离(CI)。质 谱以扫描速度1250 amu/sec扫描50-600 amu范围。
(xi) 固体探针(Solid Probe)质镨分析使用电子轰击电离(EI) QP-2010 才艮据如下方法实施
质谱分析在QP-2010设备上利用软件，2.0版本(Shimadzu, Milton Keynes, MK12 5RE， UK)进行。将样品溶解于甲醇中，浓度 lmg/ml; 离子源为200°C。用固体探针将样品加到质谱仪中；探针温度为 50-350°C。
(xii) 合适的微波反应器包括"史密斯反应器(Smith Creator )"， "CEM 4果测器(CEM Explorer) ，，， "Biotage Initiator sixty，，和"Biotage Initiator eight"。
(xiii) 下述简写可能在本发明的后续或前述章节中使用 Et2O/醚 乙醚
DMF 二甲基曱酰胺 二氯甲烷 甲醇 乙醇 水
四氬p夫喃 二曱基亚砜 乙酸乙酯
聚合物承载的羰基二咪唑
DCM MeOH EtOH H20 THF DMSO EtOAc PS陽CDI HC1 TFA DME MeCN
三氟乙酸
二曱氧基乙烷
乙腈n-BuLi 正丁基锂
MTBE 甲基叔丁基醚
Eq 摩尔当量
v/w 体积/重量比
实施例1: H-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]-恶。秦-6-曱 基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-曱基}乙酸
向{4-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]哺嗪-6-基)苯基]二 环[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯(122mg， 0.28mmol)的MeOH (lOmL)和 THF(5mL)溶液中加入2M氬氧化钠(0.7mL)。将反应混合物在室温下搅 拌过夜，然后再加入2M氢氧化钠(0.7mL),将反应混合物加热至50°C, 保持5小时。将反应混合物冷却，减压除去溶剂，用2MHC1将残留物 酸化至pH为2，过滤所得悬浮液并干燥。将产物在碱性反相制备HPLC 系统中纯化，该系统中装有NMP( 2mL)、水( 2mL)和1-2滴0.88氨水， 并用13-40%水(+1%NH3) -MeCN洗脱，得到题述化合物固体，40mg (0.0952mmo1， 34%)。
iHNMR 5 1.61 (s, 6H), 1.62 - 1.65 (m, 6H)， 1.77 - 1.80 (m, 6H), 1.94 (s, 2H), 6.90(s， 2H), 7.39 (d, 2H)， 7.64 (d, 2H), 7.95 (s, 1H); C02g未见；MSm/eMH+421。
实施例1也可以:換如下方式制备
向(4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4F恶嗪-6-基)苯基]二 环[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯(中间体10; 601mg， 1.38mmol)的MeOH (40mL) 和THF(40mL)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(3.5mL, 6.9mmo1)。将反应 混合物在60。C搅拌过夜，浓缩有机溶剂并将残留物用2MHC1酸化至pH 2。过滤所得悬浮液，将所得固体通过反相色谱纯化，该色谱装有 DMSO/MeCN/H20(7:2:l)及几滴浓氨水溶液，并用5-95%水(+0.5% NH3) -MeCN洗脱。分离得题述化合物的白色固体(302mg, 0.717mmo1, 52 % )。
将实施例1所得化合物(141mg)悬浮于水(7mL)中，并在室温下搅拌过夜，从而将其从水中结晶出来。将悬浮液过滤，并在5(TC真空 干燥，得白色固体状的晶体化合物(127mg)。该晶体被为是未水合的 形式。该晶体非水合物的x射线粉末衍射图如图l所示。
还可以按照下述方法将实施例l化合物以乙酸溶剂合物形式分离出 来将在水醋酸(3mL)中的{4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并 [4,5-b][l,4r恶。秦-6-基)苯基]二环[2,2.2]辛-l-基)乙酸(400mg)在135。C加 热(未得到完全溶液)。过滤混合物并冷却滤液。过滤得沉淀物并在50°C 真空干燥，得白色固体状的题述化合物U25mg) 。 ^NMR 1.61 - 1.65 (m, 6H), 1.61 Cs, 6H); 1.79 - 1.83 Cm, 6H), 1.92 0, 3H), 2.06 (s, 2H)， 6.90 (s, 1H), 7.40 (d, 2H), 7.64 (d， 2H), 7.95 (s, 1H), 11.91 (s, 1H)。该晶体溶剂合物[包含与化合物比率大约为1: 1的乙酸]的X射线 粉末衍射图如图2所示。
中间体1: M-『4-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并『4、5七1「1,41喏、嗪-6-基)苯基1二环「2.2.21辛-1-基}乙酸甲酯
向4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-曱酸曱酯(利用N.B Chapman, S.Sotheeswaran和K丄Toyne J.Org. Chem., 1970, 35, (4), 917中描述 的过程制得)(785mg, 3.21mmol)的甲醇(60mL)和THF (15mL) 溶液中加入2M氬氧化钠((8.0mL， 16.06mmol)。将反应混合物在室 温下搅拌过夜，蒸去曱醇并将残留物用2MHCl酸化至pH值2，然后用 EtOAc(2x250mL)萃取。用盐水(50mL)洗涤有机相，分离、干燥(MgS04) 并浓缩得浅红色固体682mg (2.96mmol, 92%)。
丄H丽R 5 1.86 (s, 12H), 7.19 - 7.23 (m， 1H), 7.31 - 7.39 (m, 4H); MS m/e固-229。
ii) (4-苯基二环[2.2.2]辛-1-基)乙酸曱酯
向水水冷却的4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-羧酸(479mg, 2.07mmol)的 DCM(20mL)溶液中加入DMF(2-3滴)，然后再加入草酰氯(0.20mL, 2.14mmo1)。将反应混合物升温至室温，过夜，减压蒸出溶剂，留下粗 制4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-碳酰氯，其可直接用于下一步骤。将该粗制
i) 4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-羧酸
产物再次溶解到MeCN和THF(10mL) 1:1比例的溶液中，然后将其逐滴 加入到冰水冷却的2M三甲基硅烷基重氮曱烷(1.5mL, 3.0mmol)和三乙 胺(0.40mL， 2.60mmol)在MeCN和THF(20mL) ( 1:1)的溶液中。将所 得黄色反应混合物在0。C搅拌6小时，然后在室温下静置过夜。减压除 去溶剂，将残留物再次溶解于EtOAc(100mL)中，用水(50mL)、 NaHCO3(50mL)及盐水(50mL)洗涤。将有机相干燥(MgS04),留下棕红色 胶状物。将所得物用12g 二氧化硅Crawford硅胶柱纯化，使用Isco Companion 0-10%-20%EtOAc洗脱，得浅黄色胶状的2-重氮-l-(4-苯基二 环[2.2.2]辛-l-基)乙酮(238mg; 0.933mmol， 45%),其静置后变为乳状固 体；^NMRCCDCW^.SS- 1.91 (m, 12H), 5.38 (s, 1H), 7.15 - 7.21 (m 2H), 7.29 - 7.31 (m, 4H); MS m/e固+ 255。
将重氮酮(0.238mg, 0.933mmol)溶解在甲醇(10mL)中，然后放置在 超声浴中。逐滴加入苯曱酸银(43mg, 0.186mmol， 0.2当量)的三乙胺 (0.52mL, 3.73mmol, 4当量)溶液，再将反应混合物超声1小时。减压 蒸出甲醇，将残留物溶解于EtOAc( 50mL)中，并用NaHC03 (40mL)、柠 檬酸(2M; 40mL)、盐水(40mL)洗涤然后干燥(MgSO4)，浓缩得黄色油 (277mg),其通过静置緩慢变成固体；MS GC-MS EI m/e MH+258。该原 料直接用在下一阶段中。
iii) {4-[4-(2-溴-2-曱基丙酰基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-基}乙酸曱酯<formula>complex formula see original document page 35</formula>向水水冷却的(4-苯基二环[2.2.2]辛-l-基)乙酸甲酯(536mg ， 2.07mmol)的DCM(30mL)溶液中加入氯化锂(830mg， 6.22mmo1),然后 逐滴加入2-溴异丁酰溴(0.25mL， 2.07mmo1)。反应混合物在~ 0。C搅拌1 小时，然后倒于水水( 20mL)中。分离有机相，水相用DCM(3xl50mL) 洗涤，将有机相合并后用(MgS04)干燥，浓缩得黄色胶状物。该胶状物 在12g silicyle硅胶柱上纯化，DCM载样，0-10%-20%的异己烷-EtOAc 洗脱，得红色固体的题述化合物648mg(1.59mmo1， 77%); ^ NMR (CDC13) S 1.65 - 1.69 (m, 6H), 1.84 - 1.88 (m, 6H), 2.03 (s， 6H), 2.18(s, 2H)，
3.66 (s, 3H), 7.36 (d, 2H)， 8.09 (d, 2H); MS m/e固+ 377 (M隱OMe)。 iv) (4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r恶嗪-6-基)苯基]
二环[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯
向{4_[4_(2-溴_2-甲基丙酰基)苯基]二环[2.2,2]辛-1-基}乙酸甲酯
(648mg， 1.59mmol)的无水EtOH (15mL)溶液中加入5,6-二氨基嘧啶-4画 醇(221mg， 1.75mmo1)，然后加入1M HCl(1.75mL)。反应混合物回流加 热过夜后冷却至室温，蒸干。残留物用2M氢氧化钠处理，调节pH值 至ll，将混合物用EtOAc(4x50mL)萃取。合并有机相，干燥(MgS04), 浓缩得粗制酯产物。用2MHC1将水相酸化，再次用EtOAc(2 x 100mL) 萃取，合并有机萃取物，干燥(MgS04)，浓缩得一定量相应的酸{4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7^嘧啶并[4，5-13][1,4]嗜嗪-6-基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-基〉乙酸(40mg, 0.095mmol, 6%)。将所得酯干燥载样在硅藻土中，用 12g 二氧化硅redisep硅胶柱，采用Isco Companion经DCM-MeOH 0-2%-5%洗脱，得题述化合物固体122mg(0.281mmo1, 17.6%);
iHNMRS 1.58 - 1.63 (m, 14H), 1.78國1.83 (m, 7H), 2.16 (s, 2H): 3.59 (s, 3H), 6.90 (brs, 2H), 7.39 (d, 2H), 7.64 (d, 2H)， 7.95 (s, 1H); MS m/e固+ 435。
中间体2:2-氧代-6-苯基-2H-吡喃-3-曱酸乙酯
参见A. vonKreisler等，德国专利DE 1812906。
向乙醇钠(21%乙醇溶液；116mL, 358.33mmol)的无水DME(300mL) 溶液中加入(乙氧基亚曱基)丙二酸二乙酯(66mL, 325.75mmo1)。将反 应混合物加热至回流，然后逐滴加入l-苯基乙酮(38mL, 325.75mmo1), 加热保持l小时。将反应混合物冷却至室温，加入到5MHCl(500mL)的 搅拌溶液中，将所得黄色溶液用醚(3 x500mL)萃取。合并有机萃取物， 用盐水(300mL)洗涤，干燥(MgS04)并浓缩得红色油。加入乙酰氯(60mL) 后加入DMF( 2mL),将反应混合物加热至7(TC两小时，冷却并浓缩得 深色残留物，其通过静置成结晶固体。将该晶体固体再次用无水EtOH(50mL)重结晶，得黄色固体状的题述化合物(49.16g, 201.2mmo1, 62%); !H NMR (CDC13) S 1,39 (3H, t), 4.39 (2H， q)， 6.77 (1H, d), 7.47 - 7.53 (3H, m), 7.90(2H, d)， 8.29 (1H, d); GC隱MS EI m/e M+244。 中间体3; 4-苯基二环[2.2.2]辛-2-烯-1-曱酸乙酯<formula>complex formula see original document page 37</formula>
将2-氧代-6-苯基-2H-吡喃-3-羧酸乙基酯(中间体2; 49.1g, 201.2mmo1)溶解到曱苯中，在75巴压力于200。C加热15小时。浓缩溶 剂得浅黄色胶状物(49g)。将该物质分成每份~ 10g的几份，用330g Crawford硅胶管纯化，载样，用5%醚-95%异己烷洗脱，得无色油状题 述化合物(26.4g, 103mmo1, 51%);
iHNMR(CDCl3) S 1.31 (3H, t), 1.58 - 1.61 (4H, m), 1.90國2.05 (4H, m), 4.23 (2H， q), 6.42 (1H, d), 6.59 (1H, d), 7.20 - 7.25 (1H, m), 7.32 - 7.40 (4H, m); GC画MS CI m/e固+ 257。
中间体4:4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-曱酸乙酯<formula>complex formula see original document page 37</formula>
将4隱苯基二环[2.2.2]辛國2画烯画l-曱酸乙酉旨(中间体3; 26.3g, 102.5mmol)的无水乙醇(600mL)溶液和10%Pt碳(2.4mg)在氬气球中室温 条件下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂，得无色油，该油4艮 快变成白色固体(22.179g, 85.96mmo1, 84%); ^ NMR (CDC13) S 1.25 (3H, t), 1.83 - 1.96 (12H, m), 4.12 (2H, q), 7.15画7.20 (1H, m), 7.28 - 7.31 (4H， m); GC画MS EI m/e M+ 258。
中间体5: N-甲氧基-N-曱基-l-苯基二环[2,2,2]辛烷-4-甲酰胺 向冷却至-20。C的l-苯基二环[2.2.2]辛烷-4-甲酸乙酯(中间体4; 15g, 58.06mmol)和N,0-二曱基羟基胺盐酸盐(8.87g, 89.99mmol)混合物 的无水THF(130mL)溶液中逐滴加入异丙基氯化镁(2m THF溶液； 87mL)， 30分钟内加入，保持内部温度为-10。C。将混合物在-10。C搅拌1 小时，然后加入20%氯化铵溶液淬灭反应。将混合物用EtOAc(2x200mL) 萃取，有机相分离、干燥并蒸干得白色固体。将得到的固体在330g Crawford硅胶管上纯化，用DCM装柱，20-40。/。EtOAc-异己烷洗脱，得 到白色固体的题述化合物(8.66g， 31.67mmo1, 55%); & NMR (CDC13) S 1.75 - 1.90 (6H, m), 2.01 - 2.06 (6H, m), 3.19 (3H, s), 3.70 (3H, s), 7.15 - 7.20 (1H, m), 7.28 - 7.36 (4H， m); GC画MS EI+ m/e 243 (M-CH20), MH+未见。
中间体6:l-苯基二环[2.2.2]辛烷-4-曱醛
氮气下，向水水冷却的1^-曱氧基-^曱基-1-苯基二环[2,2,2]辛烷-4-甲酰胺(中间体5; 8.49g, 31.05mmol)的无水THF(100mL)溶液中逐滴加 入氬化锂铝(1M THF溶液，62mL),将反应混合物在0。C搅拌1小时。 向其中小心加入水(25mL),然后加入EtOAc( 100mL)，再将混合物用C 盐垫过滤，用EtOAc(50mL)洗涤。用盐水(150mL)洗涤滤液，有机相分 离，干燥(MgS04)并浓缩，得无色油状的题述化合物，其通过静置变成 固体(6.92g, 32.28mmo1, 100%); ^NMR(CDCl3) 5 1.72 - 1.83 (6H, m), 1.87 - 1.94 (6H, m), 7.17画7.22 (1H, m)， 7.31画7.33 (4H, m)， 9.53 (1H: s); GC國MS Elm/e M+214。
中间体7:4-[2-曱氧基乙烯基]-l-苯基-二环[2.2.2]辛烷
<formula>complex formula see original document page 39</formula>氮气下，向水水冷却的、搅拌的(曱氧基曱基)三苯基氯化辚(17g, 49.57mmol)的无水THF(100mL)悬浮液中加入双(三曱基甲硅烷基)氨 基化锂(1MTHF溶液；50mL， 50mmo1),将反应混合在0。C搅拌30分钟。 逐滴加入l-苯基二环[2.2.2]辛烷-4-曱醛(中间体6; 10.52g, 49.08mmo1) 的THF(20mL)溶液，将反应混合物在0。C搅拌1小时，然后在室温下搅 拌过夜。加入水(100mL)，且反应混合物在EtOAc(200mL)和盐水(100mL) 间分配，有机相再次经100mL盐水洗涤后分离，干燥(MgS04)并浓缩得 浅黄色胶状物。将残留物在330gPresearch硅胶管上纯化，异己烷/DCM 载样，用0-20°/。EtOAc-异己烷洗脱，得浅黄色油状的题述化合物(12.6g, 50.19mmo1， 100%),其为E:Z异构体1:2的混合物。
E异构体:111 NMR (CDC13) S 1.60 - 1.65 (2H, m)， 1.82 - 1.88 (10H, m), 3.49 (3H, s), 4.74 (1H, d), 6.18 (1H, d), 7.12 - 7.18 (1H, m), 7.25 - 7.34 (4H, m); Z异构体！H NMR (CDC13) S 1.60曙1.65 (2H, m)， 1.82 - 1.88 (10H, m), 3.54(3H, s), 4.09 (1H, d), 5.71 (1H, d)， 7.12-7.18 (1H, m), 7.25 - 7.34 (4H, m); MS (两种异构体相同):GC画MS EI+ m/e 242 (M+)。
中间体8:2-(1-苯基-4-二环[2.2.2]辛基)乙酸甲酯
向搅拌的4-[2-曱氧基乙基]-l-苯基-二环[2.2.2]辛烷(中间体7; 12.6g， 51.99mmol)的DCM(200mL)溶液中逐份加入氯铬酸吡啶镜(33.6g， 155.97mmo1),并将反应混合物在室温下搅拌2小时。再次加入氯铬酸 吡咬镭(12g, 55.99mmo1),继续搅拌1小时。过滤反应混合物，将滤液 减压浓缩，加入醚(200mL)，有机相用水洗涤(200mL)。向过滤所 得的固体中加入水(200mL)和醚(2x200mL),然后将混合物用C盐 垫过滤。合并有机萃取物，干燥(MgS04)并浓缩得棕色胶状物。所得的胶状物在330g Crawford硅胶管上纯化，DCM载样，用5-10-20%EtOAc-异己烷洗脱，得霜乳状固体的题述化合物(7.89 g, 30.53 mmol, 59%); ]H NMR (CDC13) 5 1.63 - 1.71 (6H, m), 1.83 - 1.93 (6H, m), 2.17 (2H, s), 3.67 (3H, s), 7.14 - 7.19 (1H, m), 7.29 - 7,32 (4H, m); GC-MS EI m/e M+258。
中间体9: {4-[4-(2-溴-2-曱基丙酰基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-基}乙酸
曱酯<formula>complex formula see original document page 40</formula>向水水冷却的(4-苯基-二环[2.2.2]辛基-l-基)乙酸曱酯(中间体8; 3.88g , 15.02mmol)的DCM(150mL)溶液中力。入氯化铝(6.01g , 45.05mmol)，然后逐滴加入2-溴异丁酰溴(1.86mL， 15.02mmol)。将反 应混合物在~ 0。C搅拌30分钟，然后倒于水水中(20mL)。分离出有机相， 用DCM(2xl50mL)洗涤水相，合并有才几洗涤物，干燥(MgS04)并浓缩后 得黄色胶状物。将所得的胶状物在120g Crawford硅胶管上纯化，DCM 载样，用0-10-20o/o异己烷-EtOAc洗脱，得白色固体产品(5.18g, 12.72 mmol, 85%).丄HNMR(CDCl3) S 1.64 - 1.69 (6H, m), 1.83 - 1.88 (6H, m), 2.03 (6H, s), 2.18(2H, s), 3.66 (3H， s)， 7.36 (2H, d), 8.10 (2H, d); 固体^罙4十MS m/e M+ 407。
中间体10: {4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-71^嘧啶并[4，5-13][1,4]18恶嗪-6-基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯
注中间体10与中间体1为相同的化合物<formula>complex formula see original document page 40</formula>向5,6-二氨基嘧啶-4-醇(280mg, 2.2mmol)的水(8mL)、无水乙醇 (25mL)和1MHCl(2.2mL, 2.2mmol)溶液中加入(4-[4-(2-溴-2-曱基丙酰基) 苯基]二环[2.2.2]辛-l-基)乙酸曱酉旨(中间体9; 877mg， 2.15mmol)的无水
EtOH(80mL)溶液。将溶液加热至IO(TC过夜，然后冷却至室温，蒸干， 将残留物用2M氢氧化钠处理，调整pH值至10。将所得悬浮液过滤得 黄色固体，该固体在12gpresearch硅胶管上纯化，干燥载样在硅石(2g) 中，用0-2.5-5% MeOH-DCM洗脱，得白色固体状的题述化合物(601 mg, 1.38 mmol, 64%) &丽R S 1.59 - 1.63 (12H, m), 1.79 - 1.83 (6H, m), 2.16 (2H, s), 3.59 (3H, s)， 6.91 (2H, s), 7.39 (2H, d), 7.64 (2H, d), 7.95 (1H, s); MS m/e固+ 435。
实施例2: f3-r4-"-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并K5-bin.41喝嗪-6-基) 苯基-l-金刚烷基l乙酸
根据实施例1描述的步骤(第一制备)，使用{3-[4-(4-氨基-7,7-二 曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r恶嗪-6-曱基)苯基]-l-金刚烷基)乙酸甲酉旨(中 间体13)制备得题述化合物，收率58%; ^NMR 5 1.67 (s, 6H), 1.69 (s, 6H), 1.78 (s, 2H), 1.88 (s, 4H), 2.12 (s, 2H), 2.20 (s, 2H), 6.96 (s, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.73 (d, 2H), 8.01 (s, 1H); MS m/e固+ 447。
中间体11: (3-苯基-l-金刚烷基)乙酸甲酯
向水水冷却的3-苯基金刚烷-l-羧酸(735mg, 2.87mmol)的 DCM(50mL)溶液中加入DMF(2-3滴)，然后加入草酰氯(0.25mL)。将反 应混合物在0。C搅拌6小时，将溶剂减压蒸干得粗制酰氯，该酰氯直接 使用。将所得物再次溶解于1:1比例的MeCN和THF(10mL)混合物中，
然后逐滴加入到水水冷却的三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2M; 2.0mL)和三 乙胺(0.50mL， 3.58mmol)混合物的MeCN和THF(20mL) ( 1:1)溶液中。 将所得黄色反应混合物升温至室温过夜。减压除去溶剂，将残留物再次 溶解于EtOAc(50mL)中，并用水(50mL)、 NaHCO3(50mL)和盐水(50mL) 洗涤。将有机相干燥(MgS04)，浓缩得棕红色胶状物(344mg)。将所得物 在12g Crawford硅胶管上纯化，DCM载样，用0-20%EtOAc洗脱。分 离得到黄色胶状的2-重氮-l-(3-苯基-l-金刚烷基)乙酮(ethanone )(699 mg: 2.49 mmol， 87%)。 & NMR (CDC13) 3 1.74 (s， 2H), 1.83 (s， 4H)， 1.91 -1.94 (m, 6H), 2,27(s, 2H), 5.43 (s, 1H), 7.18 - 7,22 (m, 2H), 7.31 -7.38 (m, 4H); GC國MS CI m/e固+ 281 。
将重氮酮(699mg, 2.49mmol)溶解到甲醇(25mL)中，并静置于超声 浴中。向其中逐滴加入苯甲酸银(114mg， 0.498mmol)的三乙胺(1.4mL, 9.96mmo1, 4当量)溶液，将混合物超声1小时。蒸去甲醇后将残留物溶 解于EtOAc(50mL),用NaHC03 (40mL)、柠檬酸(2M， 40mL)、盐水(40mL) 洗涤，干燥(MgS04),浓缩得黄色油。将所得物在12g硅胶管纯化，DCM 载样，用10-20Q/。EtOAc-异己烷洗脱，得浅黄色胶状的题述化合物 (421mg, 1.48mmol;从重氮酮计算的收率为59%); ^NMR (CDC13) S 1.64 -1,70 (m, 5H), 1.76 (s, 2H), 1.86 - 1.96 (m, 5H), 2.17 (s, 2H), 2.18腸 2.19 (m, 2H)，3.65(s, 3H), 7.15國7.20 (m, 1H)， 7.29画7.37 (m, 4H); GC國MS EI m/e M+284。
中间体12: {3-「4-(2-溴-2-甲基丙酰基〗苯基1-1-金刚坑基1乙酸甲酯<formula>complex formula see original document page 42</formula>
根据前述制备中间体9的步骤，采用(3-苯基-l-金刚烷基)乙酸甲酉旨， 分离出题述化合物，收率为35%: ^NMR(CDCl3)S 1.66(d, 4H)， 1.71 (s, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.87 (s, 4H), 2.04 (s, 6H), 2.18 (s, 2H), 2.20 -2.22 (m, 2H), 3.65 (s, 3H)， 7.41 (d, 2H)， 8.12 (d, 2H); GC画MS CI m/e固+ 433。
中间体13:〖3-r4-(4-氨基-7.7-二曱基-7H-嘧啶并r4.5-bl「1.41哺嗪-6-基) 苯基l -1 -金刚烷基}乙酸甲酯
根据前述制备中间体l(iv)的步骤，使用{3-[4-(2-溴-2-甲基丙酰基) 苯基]-1-金刚烷基}乙酸曱酯(中间体12)制备，分离出题述化合物，收 率44%: & NMR 5 1.62 (s, 6H), 1.65 - 1.69 (m, 6H), 1.71 (s, 2H), 1.83 (s, 4H), 2.15(s, 2H), 2,17 (s, 2H), 3.58 (s， 3H), 6,92 (s, 2H), 7.42 (d, 2H), 7.68(d, 2H)， 7.96 (s, 1H); MS m/e画+461 。
实施例3: 3-「4-"-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并K5-bl「l,4r恶嗪-6-基) 苯基l金刚烷-l-甲酸
根据前述制备实施例l(第一制备)，使用3-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l，4]嗜嗪-6-基)苯基]金刚烷-l-甲酸曱酯(中间体15)制备， 得题述化合物，收率25%: ^NMR^ 1.62 (s, 6H), 1.70 - 1.72 (m, 2H), 1.83 - 1.88 (m, 7H), 2.16 - 2.19 (m, 2H), 6.92 (s, 2H), 7.45 (d, 2H), 7.68 (d, 2H)， 7.96 (s, 1H); MS m/e顧+ 433。 中间体14: 3-「4-(2-溴-2-甲基丙酰基)苯基l金刚烷-l-甲酸曱酯
根据前述制备中间体l(iii)的过程，使用3-苯基金刚烷-l-曱酸甲酯 制备(CAS编号27011陽58國l,Stepanov，F. N.; Dovgan,N. L. Kiev. Politekh. Inst.， Kiev, USSR. Zhurnal Organicheskoi Khimii (1970)， 6(8)， 1623-7. 或Danilenko， G. L; Krayushkin, M.m.; Sevost'yanova， V. V. Inst. Org. Khim. im. Zelinskogo, Moscow, USSR. Izvestiya Akademii Nauk SSSR， SeriyaKhimicheskaya (1970), (2), 444-5)。分离出题述化合物，收率89%: H NMR (CDC13) 5 1.91國1.93 (m, 8H), 2.04 (s, 6H)， 2.23國2.27 (m, 6H), 4.52 (s, 3H), 7.42 (d, 2H), 8.13 (d, 2H); GC-MS CI m/e固+ 421。
中间体15: 3-r4-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并r4.5-bin.4r恶嗪-6-基) 苯基l金刚烷-l-羧基甲酯
根据前述制备中间体l(iv)的过程制备，使用3-[4-(2-溴-2-甲基丙酰 基)苯基]金刚烷-l-羧基甲酯，分离出题述化合物，收率44%;所得化合 物在下一阶段直接使用而不需要进行表征；MS m/e MH+ 447。
实施例4: 244-「4-(4-氨基-7,7-二甲基-7^嘧啶并「4.5-1)1「1.41^嗪-6-基)苯基1二环『2.2.21辛-1-基1丙酸
将2-{4-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]嗜嗪-6-基)苯基] 二环[2.2,2]辛-1-基}丙酸甲酯(中间体18; 220mg, 0.49mmo1)和三甲 基甲娃烷酸钟(potassium trimethylsilanolate ) (315mg, 2.45mmol)混合 物的THF(5mL)溶液在100°C的微波环境下加热35分钟，然后在室温下 搅拌2天。减压除去溶剂，残留物在2M HCl(20mL)和EtOAc(50mL)之 间分配，用EtOAc(50mL)进一步萃取水相。合并有机萃取物，干燥(MgS04) 并浓缩得胶状物。将所得胶状物溶解于DMSO/MeCN/H20(7:2:l)并用反 相色谱分离，用5-95%水-乙腈0.2%TFA洗脱，得白色固体状的题述化 合物(45 mg, 0.104 mmol, 21%);H NMR S 1.01 (d, 3H)， 1.49画1.55 (m, 3H), 1.62 (s, 6H), 1.64國1,69 (m, 3H), 1.78 - 1.81 (m, 6H), 2.12 (q, 1H)， 7.05 (s， 1H), 7.40 (d, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.99 (s, 1H); MS m/e MH+ 435。
中间体16: 2-(4-笨基二环「2.2.21辛-l-基)丙酸曱酯
向冷却至-78。C(CO2/丙酮)的二异丙基胺(0.9mL， 6.39mmol)的无水 THF(10mL)溶液中加入nBuLi(2M环己烷溶液；3.2mL, 6,4mmo1),将反 应混合物在-78。C搅拌5分钟。向混合物中加入(4-苯基二环[2.2.2]辛-1-基)乙酸曱酉旨(中间体l(ii); 1.5g， 5.81mmol)的无水THF(2mL)溶液，混 合物立刻变成深棕/黑色。将混合物在-78。C搅拌~ 30分钟，然后加入碘 甲烷(0.4mL, 6.39mmo1)，反应混合物在4小时内升温至室温。向混合物 中加入饱和氯化铵水溶液(50mL)，用EtOAc(2xl50mL)萃取混合物， 合并有机相，干燥(MgS04)，浓缩得粗制产物，该产物为题述化合物与 初始原料不可分的混合物，该产物^皮直接用于下一阶段而未经表征。
中间体17: M-「4-(2-溴-2-甲基丙酰基)苯基l二环r2.2.21辛-l-基)乙酸
甲酯
向水水冷却的粗制(4-苯基二环[2.2.2]辛-1-基)乙酸曱酯(中间体16; 961mg， 3.53mmol)的DCM(10mL)溶液中加入氯化铝(1.4g, 10.58mmo1)， 然后逐滴加入2-溴异丁酰溴(0.45mL， 3.53mmo1)。将反应混合物在 0。C 搅拌 40分钟，然后倒于冰水(~ 100mL)中。分离出有机相，用 DCM(3x50mL)洗涤水相，将有机洗涤物混合，干燥(MgS04)并浓缩得黄 色胶状物。该胶状物在120gsilicyle硅胶柱上纯化，DCM载样， 0-10%-20%异己烷-EtOAc洗脱，产物用10%EtOAc洗脱。合并混合的 级分，再根据前述方法用120g硅胶管纯化，得白色固体状题述化合物 (705 mgl.67mmol，470/0)。 & NMR (CDC13) S 1.09 (d, 3H), 1.50- 1.57 (m, 3H), 1.67 - 1.74 (m, 3H), 1.82 - 1.86 (m, 6H)， 2.03 (s, 6H), 2.27 (q, 1H), 3.67 (s, 3H), 7.37 (d, 2H), 8.11 (d, 2H); GC画MS CI m/e MH+ 421。
中间体18: 244-「4-(4-氨基-7,7-二甲基-71"1-嘧啶并[4,5-1)1「1.4118恶嗪-6-基1苯基)二环「2.2.21辛-1-基}丙酸甲酯
通过将4,5-二氨基-6-羟基嘧啶半硫酸盐(semisulfate)( 5g)悬浮于 DMF(600mL)和MeCN (100mL)的混合溶液中、加入聚合物承载的碳酸 盐并将混合物于室温静置24小时(偶尔搅拌)而将其转化为游离碱。过滤 悬浮液，将滤液浓缩得桔黄色固体(1.76g)。将所得游离碱加入到{4-[4-(2-溴-2-曱基丙酰基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-基}乙酸曱酯(中间体H; 705mg, 1.67mmol)的无水EtOH(20mL)溶液中，然后向其中加入1MHCl(2.0mL)。将悬浮液在轻微回流下加热过夜。将混合物冷却至室温， 蒸干，用2MNaOH处理残留物，将pH值调整至 10。过滤悬浮液得黄 色固体，用EtOAc(2xl00mL)萃取滤液，分离出有机萃取物，干燥(MgS04) 并浓缩得浅黄色胶状物。将合并的产物在12g Crawford硅胶管纯化，将 样品干燥载样于无活性二氧化硅中，用Isco companion的0-5% DCM-MeOH洗脱，得霜乳状固体的题述化合物(220mg, 0.491mmo1, 29%); iHNMRS 1.02 (d,3H), 1.44 - 1.52 (m, 3H), 1.61 - 1.67 (m, 9H), 1.77- 1.79 Cm, 6H), 2.24(q， 1H), 3.60 (s， 3H), 6.89 (s， 2H)， 7.39 (d, 2H), 7.64 (d, 2H), 7.95 (s, 1H); MS m/e固+ 449。
实施例5: f5-「4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并「4.5-bin.4卩恶嗪-6-基) 苯基1二环「3.2.21壬-1-基}乙酸
向(5-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]哺嗪-6-基)苯基]二 环[3.2.2]壬-1-基}乙酸曱酯(中间体25; 55mg， 0.12mmol)的MeOH (5mL)溶液中加入2M氢氧化钠(0.3mL)，将反应混合物在室温下搅拌过 夜，然后再50。C搅拌8小时，再在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂，用 2MHCl酸化残留物至pH2，将滤液用EtOAc(2x50mL)萃取，合并有 机萃取物，干燥(MgS04)并浓缩得黄色胶状物。将该产物通过反相制备 HPLC纯化，将样品载样于DMSO/MeCN/H20 (7:2:1)中，用每一相均用 含有0.2%TFA的5-95水-MeCN溶液洗脱，得浅黄色固体状题述化合物 (31mg， 0.0714mmoL 59%);力N證S 1.34 - 1,56 (14H, m), 1.63 (6H, s)， 1.95 (2H, s), 7.15(2H, d), 7.63 - 7.66 (2H, m)， 8.02 (1H, s); MS m/e顧+ 435。
中间体19: 二环「3.2.21壬烷-l,5-二羧酸单曱基酯向搅拌的二环[3.2.2]壬烷-l,5-二羧酸二曱酯(2.02g， 8.41mmol)的曱 醇(20mL)和水(4mL)溶液中加入八水合氬氧化钡(1.33g, 4.20mmo1)。将 反应混合物室温下剧烈搅拌过夜。将反应混合物室温下剧烈搅拌过夜。 将反应混合物用水(20mL)稀释，用异己烷(2 x 100mL)洗涤，然后用2M HCl酸化水相至pH2，萃取至EtOAc(2 x 100mL)中。合并有机相，干 燥(MgS04)并浓缩得透明无色胶状的题述化合物(931mg， 4.11mmo1， 49%),该产物緩慢变成白色固体；iHNMR(CDCl3)S 1.72 - 1.75 (m,2H), 1.87 - 1.92 (m, 12H), 3.65 (s, 3H); GC-MS EI m/e M+ 226。
中间体20: 5-溴二环「3.2.21壬烷-l-羧酸甲基酯
向搅拌的(中间体19; 3.43g， 15.16mmol)在丙酮(25mL)的悬浮液中 加入1M氢氧化钠(16mL),将所得清澈的浅黄色溶液在室温下搅拌10 分钟。向溶液中加入硝酸银(2.73g, 16.07mmol)的水(4mL)溶液，立刻形 成深棕色悬浮液，将其在室温下搅拌60分钟。过滤悬浮液，用水(1 OOmL)、 丙酮(100mL)和醚(100mL)的混合物洗涤。将该悬浮液在45。C真空环境中 干燥过夜得棕色固体(4.42g)。
氮气下，向该银盐(4.24g, 12.73mmol)的40-60石油醚(50mL)悬浮液 中逐滴加入溴(0.65mL, 12.73mmo1)。将所得桔黄色悬浮液在室温下搅拌 30分钟，然后在60。C搅拌40分钟。接着将反应混合物冷却至室温，过 滤悬浮液，固体用醚(3 x 100mL)洗涤后再用1M碳酸钾(3 x 150mL)洗涤。 分离出有机相，用盐水(100mL)洗涤，干燥(MgS04),浓缩得浅黄色油状 题述化合物(1.22g， 4.67mmo1， 37%); !HNMR (CDC13) 5 1.69 - 1.75 (m, 2H), 1.83國2.00 (m, 6H), 2.43國2.50 (m, 6H), 3.65 (s, 3H); GC-MS CI m/e画+ 261。
中间体21: 5-苯基二环「3.2.21壬烷-l-羧酸
氮气下，向5-溴二环[3.2.2]壬烷-l-曱酸甲酉旨(中间体20; 1.22g,
4.67mmol)的无水苯(5mL)溶液逐滴加入水水冷却的氯化铝(2.3g, 17.28mmol)苯(5mL)悬浮液。将所得反应混合物在水浴中搅拌 30分钟， 然后从冷水浴上移出，温热并搅拌至室温过夜。将混合物在60。C加热4 小时，然后冷却至室温，小心地将该混合物倒于水(30g)和浓HCl(5mL) 的混合物中。用醚(4 x lOOmL)萃取混合物，将萃取物合并，用盐水(50mL) 洗涤，干燥(MgS04)得桔棕色胶状物(821mg)。将粗制材料再次溶解于 MeOH(20mL)和2MNaOH(8mL)的混合物中，在室温下搅拌过夜。将溶 剂除去，残留物在氢氧化钠和醚之间分配，然后将水相酸化并用EtOAc 萃取。将有机萃取物干燥、浓缩后得棕色胶状的题述化合物(534mg， 2.18mmo1, 47%); & NMR S 1.34 - 1.38 (m, 6H), 1.61画1.65 (m, 6H), 2.40 (s, 2H), 7.07 (d, 2H)， 7.16 - 7.20 (m, 1H), 7.24 - 7.28 (m, 2H), 11.87 (s, 1H); GC-MS EI m/e M+ 244 。
中间体22: 2-重氮-l-(4-苯基二环「3.2.21壬-l-基)乙酮
向5-苯基二环[3.2.2]壬烷-l-羧酸(中间体21; 534mg， 2.19mmol)的 DCM(10mL)溶液中加入DMF(2滴)，然后加入草酰氯(0.3mL, 3.28mmo1)。 将反应混合物在室温下搅拌过夜，减压条件下将溶剂蒸出，得粗制酰氯， 该物质可直接使用。
将所得粗制产物再次溶解于1:1比例的MeCN和THF(10mL)溶液 中，并逐滴加入到水水冷却的(三甲基曱硅烷基)重氮甲烷(2M; 1.5mL, 3.0mmol)和三乙胺(0.4mL, 2.73mmol)在MeCN和THF(20mL) ( 1:1 )混 合物的溶液中。将反应混合物在0。C搅拌1小时，然后再在室温下搅拌 5小时后将其静置整个周末。减压除去溶剂，将残留物再次溶解于 EtOAc(250mL)中，用水(100mL)、饱和NaHC03水溶液(150mL)和盐水 (150mL)洗涤。将有机相干燥(MgS04),浓缩得棕色胶状物。该胶状物在 40g Crawford硅胶管中纯化，DCM载样，用0-10% EtOAc-异己烷洗脱， 得桔黄色胶状的题述化合物(252mg， 0.940mmo1， 43%); !HNMR(CDCl3) S 1.24 - 1.29 (1H, m), 1.43 - 1.47 (6H, m), 1.61 - 1.67 (6H, m), 5.28 (1H, s)， 7.05 - 7.24 (5H， m)。
中间体23: (5-笨基二环[3.2.21壬-l-基)乙酸甲酯
将2-重氮-l-(4-苯基二环[3.2.2]壬-l-基)乙酮(中间体22; 252mg, 0.94mmol)溶解于甲醇(10mL)中，逐滴加入苯酸银(44mg, 0.19mmol)的 三乙胺(0.52mL， 3.76mmol)溶液，再将所得混合物在超声浴中超声1小 时。蒸去曱醇，将残留物溶解于EtOAc(20mL)中，经C盐垫过滤并用 NaHC03 (10mL)、 4宁檬酸水溶液(2M, 10mL)、盐水(10mL)洗涤，然后干 燥(MgS04),浓缩得棕色胶状物229mg,未作进一步表征直接用于下一 阶段。
中间体24: {5-「4-〖2-溴-2-曱基丙酰基〗苯基1二环「3.2.21壬-1-基}乙酸
甲酯
向水水冷却的(5-苯基二环[3.2.2]壬-l-基)乙酸甲酯(中间体23; 229mg， 0.79mmol)的DCM(10mL)溶液中加入氯化铝(318mg, 2.38mmo1), 然后逐滴加入2-溴异丁酰溴(O.lOmL, 0.79mmo1)。反应混合物在0。C搅 拌40分钟后倒于水水(100mL)中。分离有机相，用DCM(3 x 50mL)洗涤 水相，合并有机洗涤物，干燥(MgS04),浓缩得黄色胶状物。该所得物 在12gCmwford硅胶管上纯化，DCM载样，用0-10%-20°/。异己烷-EtOAc 洗脱，得浅黄色胶状的题述化合物(85mg, 0.202mmo1， 26%); ^NMR (CDC13) S 1.09 (d, 3H), 1.50 - 1.57 (m, 3H), 1.67画1.74 (m, 3H), 1.82 曙1.86 (m， 6H), 2,03 (s, 6H), 2.27 (q, 1H), 3.67 (s, 3H), 7.37 (d, 2H)， 8.11 (d, 2H); GC-MS CI m/e固+ 421 。 中间体25: {5-「4-(4-氨基-7.7-二甲基-7!1-嘧啶并[4.5-1)1『1.41-恶嗪-6-基)苯基1二环「3.2.21壬-1-基}乙酸曱酯
通过将4,5-二氨基-6-羟基嘧啶半硫酸盐( 5g)悬浮于DMF(600mL)和 MeCN (100mL)的混合物中、加入聚合物承载的碳酸盐并将混合物于室 温下静置24小时(偶尔搅拌)而将其转化为游离碱。过滤悬浮液，将滤液 浓缩得桔黄色固体(1.76g)。
向{5_[4-(2-溴-2-甲基丙酰基)苯基]二环[3.2.2]壬-1-基}乙酸曱酯(中 间体24; 80mg, 0.19mmol)的无水EtOH (20mL)溶液中加入5，6- 二氨基 嘧"定-4-醇(30mg， 0.21mmo1),然后再加入1M HC1 (0.21mL)。将悬浮液 在轻微回流下加热(80°C )过夜，然后冷却，除去溶剂后用2M NaOH (2mL) 处理残留物。用EtOAc萃取水相(3 x 50mL)，合并有机萃取物，干燥 (MgS04),浓缩得浅黄色胶状物。将该胶状物在12g Crawford硅胶管中 纯化，DCM载样，用0-5-10%MeOH-DCM洗脱，得浅黄色胶状的题述 化合物(55mg, 0.123mmol， 65%); !HNMR(CDCl3) 1.41画1.61 (14H, m), 1.71 (6H, s), 2.07 (2H, s), 3.61 (3H, s)， 7.11 (2H, d), 7.51 (2H, d), 8.14 (1H, s); MS m/e固+ 449。
实施例6: 444-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并「4,5-bl「l,4r恶嗪-6-基) 苯基l二环「2.2.21辛烷-l-甲酸<formula>complex formula see original document page 51</formula>向4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4，5-b][l,4r恶嗪-6-基)苯基二 环[2.2.2]辛烷-1國甲酸曱酯(中间体27; 140mg, 0.33mmol)的MeOH (10mL)溶液中加入2MNaOH(0.82mL, 1.66mmo1)。将反应混物在室温下搅拌过夜，然后加入EtOH ( 5mL)和1M NaOH (2mL),再将反应混合 物在50。C加热5.5小时。减压蒸馏除去有机溶剂，用2M HC1酸化残留 物至pH 2。向其中加入EtOAc,过滤所得悬浮液，干燥得题述化合物 (97mg，2,39mmol，72%); !HNMRS 1.60 (s， 6H), 1.82 (s, 12H), 6.97 (s, 1H) 7.40 (d, 2H), 7.65 (d, 2H)， 7.95 (s， 1H), NH^未见；MS m/e固+ 407。
中间体26: 4-「4-(2-溴-2-甲基丙酰基)苯基1二环「2.2.21辛烷-1-曱酸甲
酯
向水/IPA冷却的4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-甲酸甲酯(按照N.B Chapman, S.Sotheeswaran和KJ. Toyne在J. Org. Chem.， 1970, 35, (4), 917描述的步骤得到)(412mg， 1.69mmol)的DCM(20mL)溶液中加入氯化 铝(680mg, 5.06mmo1),然后逐滴加入2-溴异丁酰溴(0.21mL, 1.69mmo1)。将反应混合物在0。C下搅拌30分钟，然后倒于水水(~ 50mL) 中。将水混合物用DCM(3 x 100mL)萃取，合并有机萃取物，用盐水 (100mL)洗涤，干燥(MgS04)并浓缩得粗制产物。该产物在12g Redisep 硅胶管上纯化，样品用DCM载样，用醚/异己烷(1 :9)洗脱，得桔色固体 状题述化合物507mg (1.29mmo1,76%); ^ NMR (CDC13) 5 1.87 - 1.95 (m, 12H), 2,04 (s, 6H), 3.68(s, 3H)， 7.38 (d, 2H), 8.11 (d, 2H); GC-MS CI m/e顧+407。
中间体27: 4-「4-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并r4.5-bin,4r恶嗪-6-基) 苯基l二环「2.2.21辛烷-1-甲酸甲酯
向4-[4-(2-溴-2-曱基丙酰基)苯基]二环[2.2.2]辛烷-l-甲酸曱酯(中间 体26; 507 mg, 1.29 mmol)的无水EtOH (10mL)溶液中加入5,6-二氨基嘧啶-4-醇(179mg, 1.42mmol)，然后加入1M HCl(1.4mL)。将悬浮液在 回流下加热过夜，再将反应混合物冷却至室温，蒸干。残留物用2M碳 酸钾溶液处理，调整pH值至10,然后用EtOAc(4x50mL)萃取混合物。 合并有机萃取物，干燥(MgS04)，浓缩得黄色胶状题述化合物，将所得 化合物在12g Redisep硅胶管上提纯，将样品干燥载样在Merck 二氧化 硅(去活性，-lg)中，用DCM-MeOHO-2。/o-5。/o洗脱，得题述化合物150mg (0,357 mmol, 27%); & NMR S 1.61 (s, 6H), 1.84 (s, 12H)， 3.61 (s, 3H), 6.98 (s, 2H), 7,41 (d, 2H), 7.66 (d, 2H), 7.95 (s, 1H); MS m/e MH+ 421。
实施例7:通过乙醇，对曱苯石黄酸盐和腈同系化 (4-苯基二环「2.2.21辛-l-基)甲醇
氮气下，向搅拌的氢化锂铝(20g， 527mmol)的THF(1.25L)溶液中加 入4-苯基二环[2.2.2]辛烷-l-甲酸乙酯(207g, 801mmo1)的THF(850mL) 溶液，用水/水浴将温度保持在20-25。C。搅拌反应混合物3小时，静置 过夜，然后通过加入水(900mL)和水(300g)混合物将反应淬灭。将混合物 用浓盐酸酸化至pH值1-2,然后用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。将合并的有 机物干燥(MgS04)，蒸干得棕色固体状的题述化合物(176g; 100Q/Q)。 & NMR (CDC13) 1.35 (1H, brd s), 1.40 - 1.52 (6H, m), 1.71 - 1.85 (6H, m), 3.25 (2H, s), 7.05 - 7.13 (1H, m), 7.17 - 7.30 4H, m)。
4-苯基二环「2.2.21辛-l-基曱基甲苯-4-磺酸酯 向搅拌的(4-苯基二环[2.2.2]辛-l-基)曱醇(7.0g, 32.36mmol)的
DCM(70mL)溶液中加入嘧啶(4mL),然后再加入曱苯-4-磺酰氯(7.4g,
38.81mmol)的无水DCM(30mL)溶液，整个过程保持温度在0-5。C。将反
应混合物在0。C搅拌过夜，回流2小时，然后冷却至35。C。再次向混合物
中加入嘧咬(2mL)和甲苯-4-磺酰氯(3.9g)的DCM(10mL)溶液，将所得混合
物在回流下搅拌2小时。因还保留有一些初始原料，所以向混合物中加
入催化量的4-二甲基氨基吡啶，将混合物在回流下搅拌过夜。将混合物
冷却，用DCM(200mL)稀释，然后用水(100mL)、盐酸(2M; 150mL)、水
(50mL)、饱和NaHC03水溶液(100mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将溶液干燥(MgS04)后，浓缩得粗制产物，该产物用二氧化硅柱色谱纯
化(二氧化硅40-63微米)，用己烷:乙酸乙酯(19:1至4:1)洗脱，得浅黄
色固体状的题述化合物(10.7 g, 89%)。
& NMR (CDC1》1.38 - 1.50 (6H, m), 1.68 - 1.79 (6H, m), 2.38 (3H, s)， 3.62 (2H, s), 7.05 - 7.13 (1H, m)， 7.15 - 7.25 (4H, m), 7.27 (2H, d), 7.73 (2H, d)。
(4-苯基二环「2.2.21辛-l-基)乙腈
氮气下，将搅拌的4-苯基二环[2.2.2]辛-l-基曱基甲苯-4-磺酸酯 (2.5g， 6.75mmol)和氰化钠(0.5g, 10.20mmol)混合物的DMSO (20mL)溶 液在IO(TC加热5小时。在冷却过夜后，将混合物倒入水(100mL)中，然 后用DCM(2 x 100mL)萃取，再用曱基叔丁基醚(3 x 100mL)萃取。DCM 和曱基叔丁基醚相各自合并，用水(50mL)洗涤，干燥(MgS04)。然后合 并有机相，将溶剂蒸出得粗制产物，该产物用二氧化硅柱色谱纯化(二氧 化硅40-63微米)，用己烷:乙酸乙酯(19:1)洗脱，得白色固体状的题 述化合物(1.4g; 93%)。
& NMR (CDC13) 1.58 - 1.69 (6H， m), 1.79 - 1.89 (6H, m)， 2.11 (2H, s), 7.07 - 7.13 (1H, m), 7.19 - 7.28 (4H, m)。 (4-笨基二环『2.2.21辛-l-基)乙酸
将KOH (l.Og， 17.52mmol)的水(1.0mL)溶液加入到(4-苯基二环[2.2.2] 辛-l-基)乙腈(0.5g)的乙二醇(10mL)悬浮液中，将混合物在165。C搅拌 6小时，冷却，然后倒入至水(100mL)中。将混合物用浓盐酸( 0.5mL) 酸化至pH为1,然后用乙酸乙酯(100mL,然后30mL)萃取。用水(2 x 50mL) 洗涤合并的萃取物，干燥(MgS04),浓缩得霜乳固体状的题述化合物(0.5 g; 93%)。
& NMR (CDC13) 1.57 - 1.69 (6H， m), 1.75 - 1.85 (6H, m), 2.12 (2H， s), 7.07 - 7.14 (1H, m), 7.19 - 7.28 (4H, m)。 (4-苯基二环「2.2.21辛-l-基)乙酸甲酯 使用氯化钙保护管，将新制备的盐酸曱醇( 3M; 2mL, 6mmo1)
溶液加入到(4-苯基二环[2.2.2]辛-l-基)乙酸(0.3g)的曱醇(3mL)溶液中，将
混合物搅拌4小时。蒸出溶剂得白色固体状的题述化合物(0.25 g; 78%)。
& NMR (CDC13) 1.50 — 1.65 (6H， m), 1.71 — 1.83 (6H, m), 2.10 (2H,
s)， 3.58 (3H, s)， 7.03 - 7.12 (1H， m), 7.17 - 7.28 (4H, m)。
实施例8:中间体4， 4-苯基二环「2.2.21辛烷-l-甲酸乙酯的另一种合 成方法
步骤1: 4-甲氧基-2-氧代-二环「2.2.21辛烷-l-甲酸乙酯<formula>complex formula see original document page 55</formula>所有摩尔当量和体积均由起始原料计算得出。<formula>complex formula see original document page 55</formula>
氮气下，在30分钟内向搅拌的3-氧代丁酸乙酯(1当量)和Triton-B (水中的40wt0/()溶液，0.02当量)的叔丁醇(1.2 v/w)溶液中逐滴加入丙 烯酸叔丁基酯(2.00当量)；观察到稳定持续的放热，其用水/水冷却控制。 一旦放热减轻，将溶液在室温搅拌过夜。
反应混合物在水(4.0 v/w)和MTBE (12.0 v/w)之间分配。分离出的水 相进一步用MTBE(8.0 v/w)萃取，将合并的有机相经MgS04干燥，过滤 并真空浓缩得浅黄色油状产物。
歩骤2: 4-乙酰基-4-乙氣基羰基庚二酸
氮气下，在0。C于两小时内向搅拌的步骤1所得产物(l当量)的 DCM(2.6 v/w)溶液中加入TFA (2.6 v/w)的DCM(2.6 v/w)溶液，使温度保 持在0。C。加入一结束，就将反应混合物温热至2(TC，并搅拌过夜。
将反应混合物真空浓缩，用曱苯(3 x0.6 v/w)净化以确保除去残存的 TFA。得霜乳状固体产物。
歩骤3: l-乙酰基-4-氧代环己烷甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 55</formula>
氮气下，向搅拌的步骤2产物(1当量)在乙酸酐(2.5 v/w)的悬浮液中 加入乙酸钾(0.02当量)。将反应混合物加热至回流温度(145°C )并在 该温度搅拌2小时。将所得溶液真空浓缩，用曱苯净化得棕色油。
将该棕色油滴入含有加热至250。C沙的排空烧瓶中(压力大约在 10mmHg);加入的速度与热解物(pyrolysate)收集的速度相等。 一旦 加入过程结束，立即将真空抽至大约3mmHg的压力，继续保持高温热 解30分钟。
将所得热解物在106-110°C、 0.5mmHg下再次蒸馏，得无色油状产物。
歩骤4: 4-甲氣基-2-氧代-二环「2.2.21辛烷-l-甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 56</formula>在5。C下，在2小时内向搅拌的步骤3所得产物(l当量)和三甲基 原曱酸酯(4.00当量)的MeOH (9.4 v/w)溶液中鼓泡加入HCl气体(大约 5当量)，保持槽罐温度为5。C。 一旦过程结束，立即在氮气下将反应混 合物加热至回流并在回流下搅拌30分钟。
将所得紫色溶液冷却至大约30。C并真空浓缩。残留物在饱和 NaHC03 (20 v/w)水溶液和MTBE (8 v/w)之间分配，进一步用MTBE (3 x 8v/w)萃取分离出的水层。合并的有机相用盐水(12 v/w)洗涤，MgS04干 燥，过滤并真空浓缩得琥珀色油状产物，该产物在静置时部分结晶。
歩骤5: 4-甲氣基-2-三氟甲磺酰氣基二环『2.2.21辛-2-烯-l-甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 56</formula>
氮气下，向搅拌的无水二异丙基胺(l.ll当量)的无水THF(16.3 v/w) 溶液中加入2.5M丁基锂(1.10当量)，将所得溶液搅拌30分钟，整个过 程一直保持内部温度《7(TC 。
将步骤4所得产物(l当量)的无水THF(6.3 v/w)溶液在反应温度<-70匸条件下加入到容器中，将该批料在-70。C至-75。C温度下再搅拌30 分钟。
向反应混合物中加入三氟甲磺酸酐(1.10当量)的无水DCM(2.0 v/w) 溶液，将其在氮气下搅拌1小时，保持槽罐温度<-70",然后升温至20°C 后进一步搅拌60分钟。
向其中加入EtOAc(37 v/w)，将所得稀释溶液用1M HC1 (2 x 7.1 v/w), 1MNaOH(2x7.1 v/w)和盐水(3.6v/w)洗涤。将分离出的有机相 用MgS04干燥，过滤并真空浓缩得粗制产物。后者用薄垫色镨纯化(粗 制产物用5 w/w二氧化硅载样)，2°/。—5%的EtOAc己烷溶液洗脱。合 并只包含纯产物的级分，真空浓缩得所需的无色油状产物。
歩骤6: 4-曱氧基-2-氧代二环「2.2.21辛烷-1-甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 57</formula>向氮气吹扫的压力氢化容器中加入甲醇(10 v/w)、悬浮在甲醇(4 v/w)中的10%Pd/C催化剂(0.3 w/w)和溶解于曱醇(4v/w)中的步骤5所 得产物(l当量)。将反应器密封，用氮气吹扫(x5),由氢气吹扫(x3), 并用氢气加压至2巴。在25-30。C剧烈搅拌反应混合物2小时。
将反应器排空并用氮气吹扫。取出内容物，并用C盐过滤。用曱醇 (10 v/w)洗涤滤^f,合并滤液，将洗涤物真空浓缩。
水溶液洗;。将合并的水相用DCM(4 v/w)回萃，用MgS04干燥合并的 有机相，真空过滤、浓缩得粗制产物。将所得产物用快速色谱纯化(产物 用8w/w硅石载样)，用5%—10%EtOAc的己烷溶液洗脱。将含产物的 级分合并，真空条件下浓缩得黄色油状的甲基和乙基酯(NMR)的混合物。
<formula>complex formula see original document page 57</formula>
氮气下，在7。C温度向搅拌的A1C13(3.74当量)苯(4v/w)悬浮液中加 入步骤6所得产物(1当量)的苯(1.8 v/w)溶液，保持内部温度在7。C。 一 旦加入过程结束，将反应混合物在7。C温度下搅拌40分钟，然后升温至 20 °C并在室温下搅拌过夜。
将该批料加热至60。C，并在该温度下搅拌4小时，冷却至室温后倒 于水(12 w/w)中。用EtOAc(l x 12 v/w和2 x 20 v/w)萃取两相混合物， 将合并的有机相用MgS04干燥，真空条件下过滤并浓缩得棕色糊状的所 述产物酯的混合物(与起始原料的比例相同)。


图1:实施例1晶体的X射线衍射图(非水合物)
<image>complex image see original document page 59</image>图2:作为乙酸溶剂合物的实施例1的晶体X射线衍射图
<image>complex image see original document page 59</image>
权利要求
1.通式(I)的化合物或其盐其中R1选自氢，甲基和三氟甲基；R2为氢，氯或氟；环A是(7-10C)二环烷二基或(8-12C)三环烷二基；R3是羧基或羧酸类似物或生物电子等排体；R4和R5各自独立地为氢或甲基；n为0或1。
2. 根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中W是羧基。
3. 根据权利要求1或权利要求2所迷的化合物或其盐，其中W和 W均为氬。
4. 根据权利要求1-3的任何一项所述的化合物或其盐，其中的环A 是二环辛烷二基，二环壬烷二基或金刚烷基。
5. 根据权利要求1至4中任何一项所述的化合物或其盐，其中的环 A是二环辛烷二基。
6. 根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中 W为氢；R2为氢；环A是(8-9C)二环烷二基或金刚烷基；W为羧基；R4为氢或甲基；R5为氢；n为0或1。
7. 根据权利要求l、 2或3所述的化合物或其盐，其为选自如下的一种或多种{4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]恶嗪-6-基)苯基]二环 [2.2.2]辛-1-基}乙酸;和/或{3-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-1)][1,4]恶嗪-6-基苯基]-1-金刚烷基}乙酸；3- [4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]恶嗪-6-基)苯基]金刚烷-l-羧酸；2- {4-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b] [ 1,4]恶嗪-6-基)苯基]二环[2.2.2]辛-1-基}丙酸；{5-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]恶嗪-6-基)苯基]二环 [3.2.2]壬-1-基}乙酸；和4- [4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]恶嗪-6-基)苯基]二环 [2.2.2]辛烷-1-羧酸。
8. 根据权利要求1至7中任何一项所述的化合物或其药学可接受的 盐，用作药物。
9. 根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，用作治疗 温血动物如人类的糖尿病和/或肥胖的药物。
10. 根据权利要求1至7中任何一项所述的化合物或其药学上可接 受的盐，用在通过治疗处理人类或动物的方法中。
11. 根据权利要求IO所述的化合物或其药学上可接受的盐，用在通 过治疗处理人类或动物体糖尿病和/或肥胖的方法中。
12. 根据权利要求1至7中任何一项所述化合物或其药学上可接受 的盐在生产用于在温血动物如人类中产生DGAT1活性抑制的药物中的 用途。
13. 根据权利要求12所述的通式(I)化合物或药学上可接受的盐的 用途，用来生产用于治疗温血动物如人类的糖尿病和/或肥胖的药物。
14. 药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任何一项所述的通 式(I)化合物或其药学上可接受的盐，结合药学上可接受的赋形剂或载 体。
15. 用于制备根据权利要求1所述化合物的方法，该方法包含下述 步骤a)(其中所有关于通式(I)化合物的变量如权利要求1所定义，除非另 有说明) a)通式(II)化合物与通式(III)化合物或其盐反应，其中W是酯基团， 如曱氧基羰基；<formula>see original document page 4</formula>(III)其中L是离去基团如溴基，而且如有必要后继如下步骤:i) 将所述酯RS水解成相应的羧酸；和/或ii) 形成盐。16.化合物(4-苯基二环[2.2.2]辛-1-基)乙酸甲酯。
全文摘要
本发明涉及通式(I)化合物或其盐，其中A¹，和R¹-R⁵如说明书所定义，该化合物为DGAT-1抑制剂，因此，该化合物可用于治疗例如肥胖。本发明还涉及制备通式(I)化合物的方法。
文档编号A61K31/5383GK101346387SQ200680048727
公开日2009年1月14日 申请日期2006年12月19日 优先权日2005年12月22日
发明者A·M·伯克, P·D·克米特 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司