专利名称：鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法
技术领域：
本发明属于生物药物的制备技术，特别涉及一种鸡白细胞介素-2长效剂 型的制备方法。
背景技术：
目前，鸡白细胞介素-2作为一种免疫调节剂，已广泛用于临床。鸡白细 胞介素-2是一种天然免疫增强剂。它具有激活T细胞，促进和维持T细胞长期 存活；促进B细胞分化及产生抗体、诱导干扰素产生等功能。重组鸡白细胞介 素2用于鸡，对疫苗具有良好的免疫增强效果。它能克服了其它常规佐剂所引 起的毒性大、难吸收的缺点，而且还可以克服某些疾病引起的免疫抑制状态， 减少养禽业中由于病原感染后引起的免疫抑制所导致的重大经济损失。
近年来，免疫抑制病大面积流行已经成了畜禽养殖业的主要威胁之一。 因此，鸡白细胞介素-2等免疫调节因子受到了国内外学者的广泛关注。在兽 医临床试验中，鸡白细胞介素-2在动物疫病防治方面也取得了满意的效果。
鸡白细胞介素-2都是以注射的途径给药有较好的治疗效果，多者每天需 要注射1一2次，连用2-5天，给养殖业主的使用带来很多不便，因此将其制成 长效剂型便成为人们追求的目标。已有的鸡白细胞介素-2存在需要长期频繁 注射、使用不便、生物利用度低以及药物使用量大等缺陷。
因此，提供一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，有效预防和治疗 各种鸡疾病，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容
本发明的目的是为克服己有技术的不足之处，提供一种制备简单、应用 方便、效果显著的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法。
一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤
(1) 将一定量的鸡白细胞介素-2溶解在含有稳定剂的PBS缓冲溶液，制 成水相溶液(Wl)，鸡白细胞介素-2的含量为0.5 — 50毫克/毫升；
(2) 将丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲垸溶解制成油相溶液(0)，丙交 脂/乙交脂共聚物的含量为0. l—O. 5克/毫升；将上述含鸡白细胞介素-2的 水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)与水相溶液(Wl) 的比例为20 : l至2 : 1，使这两种溶液在温度5 — 30。C下搅拌混合均匀，制成 初乳W1/0，在4一10。C下保存；(3) 将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量浓 度为0.5-50%;将上述初乳W1 / 0加入到水相溶液(W2)搅拌均匀，初乳W1/0 与水相溶液(W2)的比例为l : 50至1 : 200，制成复乳Wl/0/W2，在4—10°C 下保存；
(4) 将复乳W1/0/W2转移到NaCl水溶液中，搅拌均匀，使有机溶剂挥
发，然后离心收集微球；
(5) 所述步骤(2)中的搅拌温度为5 — 30。C，搅拌速度为500 — 8000 转/分，搅拌时间为0.02—0.2小时；
(6) 所述步骤(3)中的搅拌温度为5 —30°C，搅拌速度为100 — 3000 转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；
(7) 所述步骤(4)中的搅拌温度为5 — 3(TC，搅拌速度为500—3000 转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；
(8) 为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所 述制备步骤(1)溶液中。
所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。
所述稳定剂的加入量为最终溶液的O. 1% — 10%。所述鸡白细胞介素-2为重组鸡白细胞介素-2和鸡天然白细胞介素-2。
本发明方法的有益效果是该注射用鸡白细胞介素-2长效剂型能够减少 鸡白细胞介素-2用药次数，是一种理想的鸡白细胞介素-2长效剂型。具有制 备工艺简单，容易实现，应用方便，所需成本低等特点，该方法采用毒性小， 注射安全的分散剂及油相等材料，使鸡白细胞介素-2均勾的分散溶解到油相 中，最终成为一种鸡白细胞介素-2的长效剂型。采用该方法制成的鸡白细胞 介素-2的长效剂型体外实验表明，用鸡扰素为包裹对象，所制得的鸡白细胞 介素-2微球形态圆整，粒度分布均匀，粒径分布在40微米以下，载药量可达 6.0%以上，包封率在30.0%以上，体外缓释可以达4周释药，符合长效制剂 特征。 一次注射后能够在较长时间内发挥抗病毒药效。将鸡白细胞介素-2做 成微球制剂，可以延长药物作用时间，大大提高药物疗效和经济效益。
具体实施例方式
以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式
详述如下 实施例l
一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如
下
(1)将60毫克鸡基因工程白细胞介素-2溶解在1毫升含有2%的海藻糖的 PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);(2) 将1000毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于4毫升二氯甲垸制成油相 溶液(0);
(3) 将上述含鸡白细胞介素-2的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0) 中，使这两种溶液在温度15。C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05 小时，搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一1(TC下保存；
(4) 将上述初乳W1 / 0在1500转/分搅拌情况下加入到300毫升2%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5 — 30。C，搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4 —IO'C下保存；
(5) 将复乳Wl/0/W2加入到3倍复乳体积的l。/。NaCl水溶液中，通过1500 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后2000转/分，离心15分钟，收集微球，存放 于冰箱中冷藏。
所制得的鸡白细胞介素-2微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在18.2 微米，载药量可达7.9%，包封率在47.9%，体外释放实验表明，缓释可以达 4周，符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型白细胞介素-2除具有白细胞 介素-2的抗鸡病毒作用外，其在体内的半衰期是普通鸡白细胞介素-2的3倍， 从而延长了其在体内的作用时间。
实施例2
一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如
下
(1) 将IOO. 0毫克鸡天然白细胞介素-2溶解在1. 5毫升含有2%的牛血清白 蛋白的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 将1200毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于4毫升二氯甲垸制成油相 溶液(0);
(3) 将上述含鸡白细胞介素-2的水相溶液(wr)加入到油相溶液(0)
中，使这两种溶液在温度15"C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05 小时，搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一10'C下保存；
(4) 将上述初乳W1 / 0在2000转/分搅拌情况下加入到400毫升3%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5—30'C，搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；
(5) 将复乳Wl/0/W2加入到2倍复乳体积的P認aCl水溶液中，通过1000 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后1300转/分离心20分钟，收集微球，存放于 冰箱中冷藏。
所制得的鸡白细胞介素-2微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在19.6 微米，载药量可达7.9%，包封率在35.6%，体外释放实验表明，缓释可以达3周，符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型白细胞介素-2除具有白细胞 介素-2的抗鸡病毒作用外，其在体内的半衰期是普通鸡白细胞介素-2的4.2 倍，从而延长了其在体内的作用时间。 实施例3
一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如
下
(1) 将35.0毫克鸡白细胞介素-2溶解在0.5毫升含有2%的聚乙二醇4000 的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 将800毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于2毫升二氯甲垸制成油相溶 液(0);
(3) 将上述含鸡白细胞介素-2的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0) 中，使这两种溶液在温度15"C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05 小时，搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一10'C下保存；
(4) 将上述初乳W1 /0在2000转/分搅拌情况下加入到400毫升3%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5 — 30'C，搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；
(5) 将复乳Wl/0/W2加入到3倍复乳体积的2y。NaCl水溶液中，通过800 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后1800转/分离心10分钟，收集微球，存放于 冰箱中冷藏。
所制得的鸡白细胞介素-2微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在20.4 微米，载药量可达8.2%，包封率在31.8%，体外释放实验表明，缓释可以达 3周，符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型白细胞介素-2除具有白细胞 介素-2的抗鸡病毒作用外，其在体内的半衰期是普通鸡白细胞介素-2的5.6 倍，从而延长了其在体内的作用时间。
上述参照实施例对该鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法进行的详细描 述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例， 因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
权利要求
1、一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)将一定量的鸡白细胞介素-2溶解在含有稳定剂的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(W1)，鸡白细胞介素-2的含量为0.5—50毫克/毫升；(2)将丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0)，丙交脂/乙交脂共聚物的含量为0.1—0.5克/毫升；将上述含鸡白细胞介素-2的水相溶液(W1)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)与水相溶液(W1)的比例为20∶1至2∶1，使这两种溶液在温度5—30℃下搅拌混合均匀，制成初乳W1/0，在4—10℃下保存；(3)将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量浓度为0.5-50％；将上述初乳W1/0加入到水相溶液(W2)搅拌均匀，初乳W1/0与水相溶液(W2)的比例为1∶50至1∶200，制成复乳W1/0/W2，在4—10℃下保存；(4)将复乳W1/0/W2转移到1-5％的NaCl水溶液中，搅拌均匀，使有机溶剂挥发，然后离心收集微球；(5)所述步骤(2)中的搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为500—8000转/分，搅拌时间为0.02—0.2小时；(6)所述步骤(3)中的搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为100—3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；(7)所述步骤(4)中的搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为500—3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；(8)为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所述制备步骤(1)溶液中。
2、 根据权利要求1所述的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征 在于所述丙交脂/乙交脂共聚物分子量为2000-5000Da。
3、 根据权利要求l所述的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征 在于所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。
4、 根据权利要求l所述的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征 在于所述稳定剂的加入量为最终溶液的O. 1% — 10%。
5、 根据权利要求1所述的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征 在于所述鸡白细胞介素-2为重组鸡基因工程白细胞介素-2和鸡天然白细胞介 素-2。
全文摘要
本发明公开了一种可每周肌肉注射一次的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于采用复乳-溶剂挥发法制备，丙交脂/乙交脂共聚物为微球载体，用鸡白细胞介素-2为包裹对象，制成的鸡白细胞介素-2长效剂型体外释药性能符合长效制剂特征。本发明有益效果是该注射用鸡白细胞介素-2长效剂型克服了已有的鸡白细胞介素-2注射针剂需要长期频繁注射、使用不便以及生物利用度低和药物使用量大的缺陷，一次注射后能够在较长时间内发挥抗病毒药效，是理想的鸡白细胞介素-2的长效剂型。本发明制备简单，应用简便，且易吸收，更好的发挥治疗鸡疾病的效果。
文档编号A61K47/42GK101411867SQ200810053408
公开日2009年4月22日 申请日期2008年6月3日 优先权日2008年6月3日
发明者王连民, 田杏芳 申请人:天津生机集团股份有限公司