专利名称：长春碱类药物的热敏脂质体制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及脂质体制剂，具体涉及包含长春碱类药物的热敏脂质体制剂，及其制备方法。
背景技术：
长春碱类抗肿瘤药物是从夾竹桃科植物长春花中分离得到的具有抗癌活性的一类生物碱。属细胞周期特异性抗肿瘤药，其作用机理是通过阻滞细胞有丝分裂过程中的微管形成，使细胞分裂停止于有丝分裂中期，临床主要用于治疗恶性淋巴瘤、绒毛膜上皮癌、中晩期食管癌、晩期非小细胞肺癌和乳腺癌等。目前我国上市剂型有静脉注射液、冻干粉针，但是该药物静脉注射后，毒副作用比较大，常见神经毒性和血液毒性，静脉炎，局部皮肤坏死等症状。 美国的Inex申请专利(US2009/0041834A1)将此类药物制备成脂质体，经研究表明此种抗肿瘤药物制备成脂质体后，可以延长体内循环时间，增强靶向性，降低毒副作用。但其制备的脂质体与以前的剂型相比，并未明显地提高疗效。因此，需要研制ー种靶向性强的脂质体，可以在不増加药物剂量的情况下，延长药物的半衰期，提高药物的抗肿瘤效果，減少药物的毒副作用，增强药物的临床应用性。例如，可以根据长春碱类药物的特性设计并制备包含此类药物的热敏脂质体，以进ー步提高该类药物的临床疗效。
发明内容
长春碱类药物是ー种两性弱碱类药物，根据此性质可以考虑采用pH主动载药的方式进行制备此类药物的脂质体制剂。在本发明中，发明人根据长春碱类药物的特性，通过大量的实验摸索，制备了包含该类药物的热敏脂质体制剂，制备方法先进合理，包封率高，稳定性好，不易泄露，提高了该类药物的临床疗效。本发明的ー个方面涉及ー种长春碱类药物的热敏脂质体制剂，其包含长春碱类药物、热敏磷脂和任选的长循环材料，其中热敏磷脂和长循环材料的摩尔比为50 50 92 8，优选为70 30 92 8，更优选为80 20 92 8 ;长春碱类药物与空白脂质体的重量比为I : 10 I : 100，优选为I : 10 I : 50，更优选为I : 20 I : 30。在本发明中，所述长春碱类药物包含长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、长春氟宁、脱水长春碱、长春甘酷、长春西醇、长春罗新、长春倍酷、长春罗定。在本发明的ー个实施方案中，所述长春碱类药物为长春瑞滨。其中所述的热敏磷脂选自相变温度在35 80°C之间的磷脂酰胆碱、氢化卵磷月旨、磷脂酰こ醇胺和磷脂酰甘油中的至少ー种，获得的热敏磷脂或其组合物的相变温度在37-50°C之间，优选为在39-45°C之间。其中所述的长循环材料选自聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺、聚こニ醇、吐温、苄泽、PEG化磷脂、PEG化聚己内酷、PEG化聚こ交酯丙交酯、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆、聚氧こ烯脂肪酸酯类、聚氧こ烯脂肪酸醚和聚氧こ烯甲基蓖麻油醚中的至少ー种，优选为聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺，例如平均分子量为2000的聚こニ醇-氢化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG2000)、平均分子量为5000的聚こニ醇-氢化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG5000)或平均分子量为2000的聚こニ醇-ニ硬脂酰基磷脂酰こ醇胺(DSPE-mPEG2000)。 根据本发明的热敏脂质体制剂，其粒径分布范围是30-500nm，优选为50_200nm。
根据本发明的热敏脂质体制剂，其包封率为60. O % 99. 9 %，优选为90. O % 99. 9%。本发明的另一方面涉及ー种药物组合物，其包含本发明的热敏脂质体制剂，以及药学可接受的载体。 本发明的另一方面涉及本发明的热敏脂质体制剂的制备方法，其包括以下步骤(I)制备空白脂质体将热敏磷脂、长循环材料的混合物溶于有机溶剂中，得到磷脂溶液。蒸成薄膜。在薄膜中加入缓冲液，水化20 60min，脱气，得到多层脂质体溶液。多层脂质体溶液通过挤压过聚碳酸酯膜，得到粒径在30-500nm，优选为50_200nm的空白脂质体溶液；所述有机溶剂为选自こ醇、甲醇、三氯甲烷、ニ氯甲烷、异丙醇等易挥发的有机溶剂中的ー种或两种以上的混合溶剂；(2)制备载药脂质体在空白脂质体中加入长春碱类药物，混合均匀，25 50°C下用碱溶液调节脂质体溶液的外相PH值至6. O 8. 5，10 60min内完成载药，得到长春碱类药物的热敏脂质体制剂的溶液。其中步骤(I)中所述的缓冲液为O. IM O. 5M的柠檬酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，其PH值为3. O 6. 0，优选为O. 2M O. 3M的柠檬酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值为3. O 4. O。本发明的再一方面涉及本发明的热敏脂质体制剂在制备抗肿瘤药物中的用途。下面更进一歩地描述本发明。本发明的使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。本发明提供了一种长春碱类药物的热敏脂质体制剂，其特征在于该脂质体为含长春碱类抗肿瘤药物的、具有在适宜温度以上发生相变而可以快速释放药物的热敏特点；其包含长春碱类药物、热敏磷脂和任选的长循环材料，其中热敏磷脂和长循环材料的摩尔比为50 50 92 8，优选为70 30 92 8，更优选为80 20 92 8 ;长春碱类药物与空白脂质体的重量比为I : 10 I : 100，优选为I : 10 I : 50，更优选为I : 20 I 30。本发明的长春碱类药物的热敏脂质体，包括单纯的热敏脂质体和长循环热敏脂质体。当制剂组成中含有长循环材料时即为长循环热敏脂质体。本发明的长春碱类药物的热敏脂质体，其热敏温度(即相变温度，脂质体从凝胶态向液晶态转变的温度)范围为35-50°C，优选37-48°C，优选39_45°C，优选39_42°C。在本发明中，其中所述的热敏磷脂选自相变温度在35 80°C之间的磷脂酰胆碱、氢化卵磷脂、磷脂酰こ醇胺和磷脂酰甘油中的至少ー种，获得的热敏磷脂或其组合物的相变温度在上述热敏温度之间。所述磷脂酰胆碱选自饱和或不饱和的磷脂酰胆碱，优选为饱和的磷脂酰胆碱，例如为ニ硬脂酰基磷脂酰胆碱，ニ棕榈酰磷脂酰胆碱。所述氢化卵磷脂选自氢化的天然磷脂，例如为氢化大豆磷脂或氢化蛋黄卵磷脂。所述磷脂酰こ醇胺选自饱和或不饱和的磷脂酰こ醇胺，优选为饱和的磷脂酰こ醇胺，例如为氢化大豆磷脂酰こ醇胺，ニ硬脂酰基磷脂酰こ醇胺。所述磷脂酰甘油选自饱和或不饱和的磷脂酰甘油，优选为饱和的磷脂酰甘油，例如为ニ硬脂酰基磷脂酰甘油。在本发明中，选取热敏磷脂中的ー种或数种进行组合，使组合后的热敏磷脂组合物达到上述相变温度。在本发明的一个实施方案中，所述热敏磷脂为DPPC和MSPC ;在本发明的一个实施方案中，所述热敏磷脂为DPPC和DSPG ;在本发明的一个实施方案中，所述热敏磷脂为DPPC、DSPG和MSPC。在本发明的一个实施方案中，所述的热敏脂质体制剂包含
DPPC890重量份
DSPE-mPEG2000 80 重量份MSPC30重量份
长春瑞滨26或30重量份在本发明的一个实施方案中，所述的热敏脂质体制剂包含
DPPC770重量份
DSPE-mPEG2000200 重量份
DSPG30重量份
长春瑞滨30重量份在本发明的一个实施方案中，所述的热敏脂质体制剂包含
DPPC700重量份
DSPE-mPEG2000200 重量份
MSPC20重量份
DSPG80重量份
长春瑞滨30重量份在本发明中，由于长春碱类药物属于弱碱性药物，采用pH梯度主动载药法制备，包封率达到90. O 99. O %。发明的有益效果本发明根据长春碱类药物的特性设计并制备了热敏脂质体制剂和长循环热敏脂质体制剂，其具有以下特点(2)本发明的长循环热敏脂质体具有在体内循环时间长，靶向性好，可以在加热条件下迅速释放药物于加热部位的特性。(3)本发明采用薄膜分散和主动载药法制备脂质体，稳定性好，不易泄露，克服了现有技术中长春碱类脂质体易泄露、稳定性差的问题。(4)本发明根据长春碱类药物的特性采用pH梯度主动载药法制备，包封率高，可达到 90. O 99. 0%。实验结果表明，本发明的热敏脂质体与普通注射剂和普通脂质体相比，肿瘤抑制效果明显提高；与普通脂质体相比，靶向性更好，在加热的条件下，药物释放快且量大，具有良好的临床应用前景。
图I长春瑞滨长循环热敏脂质体的DSC2水浴温度对长春瑞滨长循环热敏脂质体释药量的影响。 图3水浴温度和加热时间对长春瑞滨长循环热敏脂质体释药量的影响。
具体实施例方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例I长春瑞滨长循环热敏脂质体制剂的制备(I)空白脂质体的制备需要的药品与试剂ニ棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、DSPE_mPEG2000、单硬酯酰磷酯酰胆碱(MSPC)，柠檬酸，柠檬酸三钠、碳酸钠、双蒸水。表I
权利要求
1.一种长春碱类药物的热敏脂质体制剂，其包含长春碱类药物、热敏磷脂和任选的长循环材料，其中热敏磷脂和长循环材料的摩尔比为50 50 92 8，优选为70 30 92 8，更优选为80 20 92 8 ;长春碱类药物与空白脂质体的重量比为I : 10 I 100，优选为I : 10 I : 50，更优选为I : 20 I : 30。
2.权利要求I的热敏脂质体制剂，其中所述长春碱类药物为长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、长春氟宁、脱水长春碱、长春甘酷、长春西醇、长春罗新、长春倍酷、长春罗定，优选为长春瑞滨。
3.权利要求I的热敏脂质体制剂，其中所述的热敏磷脂选自相变温度在35 80°C之间的磷脂酰胆碱、氢化卵磷脂、磷脂酰こ醇胺和磷脂酰甘油中的至少ー种，获得的热敏磷脂或其组合物的相变温度在37-50°C之间，优选为在39-45°C之间。
4.权利要求I的热敏脂质体制剂，其中所述的长循环材料选自聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺、聚こニ醇、吐温、苄泽、PEG化磷脂、PEG化聚己内酷、PEG化聚こ交酯丙交酷、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆、聚氧こ烯脂肪酸酯类、聚氧こ烯脂肪酸醚和聚氧こ烯甲基蓖麻油醚中的至少ー种，优选为聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺，例如平均分子量为2000的聚こニ醇-氢化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG2000)、平均分子量为5000的聚こニ醇-氢化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG5000)或平均分子量为2000的聚こニ醇-ニ硬脂酰基磷脂酰こ醇胺(DSPE-mPEG2000)。
5.权利要求1-4任一项的热敏脂质体制剂，其粒径分布范围是30-500nm，优选为50_200nmo
6.权利要求1-5任一项的热敏脂质体制剂，其包封率为60.0%-99.9%，优选为90. 0% 99. 9%。
7.药物组合物，其包含权利要求1-6任一项的热敏脂质体制剂，以及药学可接受的载体。
8.权利要求1-6任一项的热敏脂质体制剂的制备方法，其包括以下步骤 (1)制备空白脂质体将热敏磷脂、长循环材料的混合物溶于有机溶剂中，得到磷脂溶液。蒸成薄膜。在薄膜中加入缓冲液，水化20 60min，脱气，得到多层脂质体溶液。多层脂质体溶液通过挤压过聚碳酸酯膜，得到粒径在30-500nm，优选为50 200nm的空白脂质体溶液； (2)制备载药脂质体在空白脂质体中加入长春碱类药物，混合均匀，25 50°C下用碱溶液调节脂质体溶液的外相PH值至6. O 8. 5，10 60min内完成载药，得到长春碱类药物的热敏脂质体制剂的溶液。
9.权利要求8的制备方法，其中步骤(I)中所述的缓冲液为O.IM O. 5M的柠檬酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，其pH值为3. O 6. O ;优选为O. 2M O. 3M的柠檬酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，PH值为3. O 4. O。
10.权利要求1-6的热敏脂质体制剂在制备抗肿瘤药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及长春碱类药物的热敏脂质体制剂及其制备方法。所述热敏脂质体制剂包含长春碱类药物、热敏磷脂和任选的长循环材料，其中热敏磷脂和长循环材料的摩尔比为70∶30～92∶8；长春碱类药物与空白脂质体的重量比为1∶10～1∶50。本发明采用pH梯度主动载药法，包封率可达到90.0％～99％。本发明的脂质体制剂具有热敏性，在肿瘤组织局部加热时，可使该脂质体被动靶向肿瘤部位，同时释放大量药物，提高疗效，降低全身的毒副作用。
文档编号A61P35/00GK102688193SQ20111007127
公开日2012年9月26日 申请日期2011年3月24日 优先权日2011年3月24日
发明者张慧, 梅兴国 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所