专利名称：一种包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束的制备和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物制剂领域，涉及一种针对难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束的制备方法及其在口服给药方面的应用。
背景技术：
口服给药是众多给药途径中最普遍的一种给药方式，因为它服用和携带方便，容易为一般患者所接受，特别是对那些需要长期或者每天用药的患者来说，药物口服的顺应性大大优于其他给药途径。此外，为了减少毒副作用，细胞毒性剂类药物的口服比注射给药更适合长期用药，可以达到更好的疾病治疗效果。
能够口服给药的药物，其活性成分应该首先溶解在人体胃肠道的液体中，才有可能被人体吸收。然而，低水溶性却是很多活性治疗物质所固有的特质(如抗癌活性化合物中，很多为多环化合物，例如喜树碱、紫杉醇或他莫昔芬等)，近半数经过高通量筛选出的、具有良好治疗潜力的候选化合物，因为水溶性不良，而被终止了进一步的研发。聚合物胶束以其性质稳定、生物相容性好、增溶能力强等优点，受到越来越多的关注。多糖是所有生命有机体的重要组成部分，在控制细胞分裂，诱导细胞分化以及维持生命体正常代谢方面有着重要的意义。此外，由于多糖具有优良的生物相容性和生物降解性，主链结构易于化学修饰(如酯化、接枝与交联等)而改善其理化性质等优点，被越来越多的研究者修饰成两亲性多糖，用于制备成聚合物胶束。CN101791411A和CN101745119A公开了这些制备两亲性多糖偶联物的技术。将聚合物胶束开发为口服给药系统有助于减少药物对胃肠道的刺激性，增加吸收部位的药物浓度，提高药物在胃肠道中的稳定性，又由于胃肠道拥有巨大的吸收面积，溶解后的疏水性药物很容易被吸收，再加上胶束粒径较小，可以通过EPR效应和内吞作用进入细胞，从而提高了载药聚合物胶束的生物利用度。但是由于胃肠道中复杂的环境以及一些膜蛋白转运系统的作用，如P-糖蛋白外排系统和细胞色素P450酶的代谢作用，使得聚合物胶束的口服生物利用度的提高仍然受到的很大的限制。泊洛沙姆是由亲水段聚氧乙烯(PEO)和疏水段聚氧丙烯(PPO)按照ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0的结构形成的，具有较好的生物相容性，较低的毒性。泊洛沙姆聚合物胶束既可以增加难溶药物的溶解性又能够减少P-糖蛋白介导的药物外排作用，并且能够抑制细胞色素P450酶的代谢作用，从而能够提高药物的口服生物利用度。然而,泊洛沙姆胶束的包封率和载药量低，临界胶束浓度(CMC)高，使得其胶束的稳定性降低，从而使其的应用受到限制。针对以上问题，本专利制备了一种包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束，并将其应用在口服给药系统中。这种混合胶束兼具了两亲性多糖偶联物胶束和泊洛沙姆胶束的优点，弥补了这两种胶束单独应用时的缺陷，为聚合物胶束用于口服给药系统提供了新的思路。该混合胶束不仅提高了难溶性药物的溶解度，在疏水作用、立体络合作用、静电作用、氢键作用和化学交联作用下，具有良好的动力学稳定性。两亲性多糖偶联物的引入降低了泊洛沙姆的CMC，提高了混合胶束的热力学稳定性，并且大大提高了胶束的载药能力；同时，该混合物兼具两亲性多糖偶联物介导的内吞作用和泊洛沙姆介导的抑制P-糖蛋白外排系统的作用和细胞色素P450酶的代谢作用，从而能够明显提高药物的口服生物利用度，延长药物在体内的循环作用时间
发明内容
本发明的目的是提供一种包载有难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束。该混合胶束通过化学键之间的相互作用或者物理包裹作用包载难溶性药物，改善了药物的溶解性，载药量高，稳定性好，毒副作用降低，口服生物利用度提高。本发明的另一个目的是提供上述包载难溶性药物的泊洛沙姆-两亲性多糖混合胶束的制备方法。本发明的另一个目的是提供上述包载难溶性药物的泊洛沙姆-两亲性多糖混合胶束在口服给药中的应用。本发明中，两亲性多糖和泊洛沙姆对难溶性药物均有增溶作用。两亲性多糖应用于混合胶束克服了泊洛沙姆临界胶束浓度高，载药量低的问题；混合胶束中的泊洛沙姆又能够抑制P-糖蛋白的外排作用和细胞色素P450酶的代谢作用，提高了难溶性药物的口服生物利用度。所述的包载难溶性药物的泊洛沙姆-两亲性多糖混合胶束的制备方法，其特征包括如下步骤两亲性多糖偶联物与水按重量比为3 50 : 1000的比例溶解，泊洛沙姆与水按重量比为I 50 : 1000的比例溶解，得到泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束；将治疗有效量的难溶或微溶与水的药学活性或药理活性分子用药学上可接受溶剂溶解，与上述混合胶束混合后，经超声或高压均质处理，溶液用透析法或超滤法或柱分离法除去有机溶剂和小分子，冻干制得粒径为10 IOOOnm的纳米胶束。所述的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束，是指泊洛沙姆与两亲性多糖按照重量比为O. 05 10 I的比例混合。所述的泊洛沙姆，其特征为亲水链聚氧乙烯占60% 80%的泊洛沙姆。所述的两亲性多糖偶联物，选自下述亲水端和疏水端的组合，所述亲水端选自未分级肝素、低分子量肝素、脱硫酸化肝素、透明质酸、软骨素、多硫酸化软骨素、海藻酸和原本不具有羧基但引入羧基的多糖壳聚糖、羧甲基壳聚糖、琥珀酰壳聚糖、葡聚糖、真菌多糖；所述的疏水基团为选自全反式维甲酸、9-顺式维甲酸、甲氨蝶呤、氨基蝶呤、齐墩果酸、藤黄酸、甘草次酸、熊果酸、黄芩苷、2-羟基苯甲酸、2-(乙酰氧基)苯甲酸、水杨酸、吲哚美辛、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、酮洛芬、芬布芬、甲芬那酸、吡洛芬、氟比洛芬、苯丁酸氮芥、美法仑、胆烧酸、长链烧基。所述的难溶性药物，是指每Iml水中溶解度小于Img或I μ L且属于下列类别的物质紫杉醇/烷类、喜树碱类、长春碱类、阿霉素类、环孢菌素类、黄酮类、二氢吡啶类、抗生素类、维A酸类、他丁类、依托泊苷、挥发油类物质或上述物质的衍生物。所述的包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束的应用，其特征在于可应用于口服给药，剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、糖浆剂、颗粒剂、口服溶液剂。本发明所制备的混合胶束在冻干时可加入冻干保护剂，冻干保护剂可选自右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖中的一种或几种。冻干保护剂的量按照胶束溶液体积计算，每份胶束溶液优选加入O. 01-0. I % (w/v)的冻干保护剂，过滤后冷冻干燥。本发明的有益效果一、本发明将两亲性多糖偶联物与泊洛沙姆相结合制备成混合胶束，两亲性多糖降低了泊洛沙姆的临界胶束浓度，提高了载药量和胶束的稳定 性，具有良好的增溶作用，并且能够延长体内循环、减少网状内皮细胞的吞噬，增加药物的靶向性，提高安全性。二、本发明提供的包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束，泊洛沙姆能够抑制P-糖蛋白的外排作用和细胞色素P450酶的代谢作用，从而可以在胶束作用的基础上进一步提高难溶性药物的口服生物利用度。三、本发明制备的混合胶束不含有任何有机溶剂，安全性高，粒径在10 IOOOnm范围内可控，溶解性好，稳定性好，制备方法简单，工艺成熟，产率高，可制备成片剂，胶囊剂，丸剂、糖浆剂等制剂用于口服给药。
附图I :泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式维甲酸混合胶束的粒径图谱附图2 :包载紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式维甲酸混合胶束的肠吸收实验结果
具体实施例方式下面通过实施例对本发明加以进一步的说明，但下述实施例并不限制本专利的权利范围。实施例I :泊洛沙姆/两亲性多糖偶联物的CMC值测定I、临界胶束浓度(CMC):采用荧光探针法测定CMC。以芘为荧光探针，芘是一种疏水性芳香化合物，对环境极性变化极为敏感。当泊洛沙姆/两亲性多糖偶联物的浓度低于CMC时，溶液中不会形成胶束，芘溶解在极性的水中；当其浓度高于CMC时，胶束形成，芘向胶束内核的疏水部分分配，从而进入非极性环境，继而在其荧光谱中可以观察到一系列变化，如荧光强度将增强，放射光谱中振动精细结构发生变化，激光光谱中(0，0)波段红移。因此，通过以芘的发射光谱中的I1A3比(在固定的激发波长下扫描，I1, I3分别代表发射光谱中第一和第三强峰的荧光强度比)或激发光谱中1338/1333比，(激发光谱中波长分别为338nm和333nm的荧光强度比)对泊洛沙姆/两亲性多糖偶联物的浓度作图即得其表观CMC,结果见表I、表2、表3。表I泊洛沙姆F127 (A) /两亲性多糖偶联物⑶的CMC (mg/ml)A:B
0:1 0.05:1 0.25:1 0.5:1 1:1 10:1 1:0 B_
低分子量肝素-全反式维甲酸0.040 0.0420.0490.0880.3760.4850.985
硫酸软骨素-甘草次酸0.066 0.0690.0710.0970.4420.5420.985
竣甲基壳聚糖-黄芩苷0.072 0.0750.0790.1150.4970.5720.985
透明质酸-藤黄酸0.068 0.0690.0720.1080.4770.5650.985
N-辛基-N-精氨酸壳聚糖0.070 0.0730.0790.0990.4900.5690.985表2泊洛沙姆/两亲性多糖偶联物(0.25 l,w w)的CMC (mg/ml)
低分子量肝素-全硫酸软骨素-甘草葡聚糖-甲氨蝶呤真菌多糖-齐墩果竣甲基壳聚糖-黄 反式维甲酸次酸酸芩苷
F680.0550.0770.0720.0900.086
F770.0690.0540.0750.0680.077
F870.0470.0720.0650.0810.078表3泊洛沙姆/两亲性多糖偶联物(0.30 l,w w)的CMC (mg/ml)
透明质酸-藤黄酸壳聚糖-胆烷酸』m 肝素-布洛芬十六烷基壳聚糖
F880.0650.0900.0790.0970.093
F980.0800.0530.0800.0700.086
F1080.0750.0430.0690.0620.074实施例2 :包载紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式维甲酸混合胶束的制备和表征I、制备工艺(I)透析法18mg低分子量肝素-全反式维甲酸溶于3ml蒸馏水，20mg泊洛沙姆溶于Iml的蒸馏水，分别搅拌30min。低分子量肝素-全反式维甲酸溶液与不同重量比的泊洛沙姆P188混合。紫杉醇IOmg溶解在乙醇中。在混合溶液中，加入紫杉醇/乙醇溶液，室温搅拌15min后，冰浴探头超声30min,蒸懼水透析Id (MWCO = 3500),透析后产物离心3000rpm, IOmin,上清液用O. 8 μ m滤膜过滤，冷冻干燥即得包载紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式维甲酸混合胶束。(2)乳化溶剂蒸发法18mg低分子量肝素-全反式维甲酸溶于3ml蒸馏水，20mg泊洛沙姆溶于Iml的蒸馏水，分别搅拌30min。低分子量肝素-全反式维甲酸溶液与不同重量比的泊洛沙姆混合。紫杉醇IOmg溶解在二氯甲烷中。在混合溶液中，加入紫杉醇/ 二氯甲烷溶液，室温搅拌15min，冰浴探头超声30min，室温敞口搅拌过夜，使二氯甲烷挥发，离心3000rpm，15min，用O. 8 μ m滤膜过滤，冷冻干燥即得包载紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式维甲酸混合胶束。2、包载紫杉醇的低分子量肝素-全反式维甲酸混合胶束中紫杉醇的含量测定用HPLC(LC_2010C, Shimadzu, Japan)方法进行含量测定。流动相为甲醇水=75 : 25 (v/v),色谱柱为 Lichrospher C18 (150 X 4. 6 μ m),柱子粒径为 5 μ m。流速为 I. OmL/min,检测波长为 227nm(SF1D-IOA, UV detector, Shimadzu, Japan),柱温为 30°C,注射样品体积为20μ1。以公式(I)计算样品的载药量。结果见表3。
权利要求
1.一种包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束的制备和应用，其特征在于泊洛沙姆和两亲性多糖偶联物作为载体形成混合胶束，将难溶性药物包裹在疏水性内核内。
2.根据权利要求I所述的包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束的制备方法，其特征包括如下步骤两亲性多糖偶联物与水按重量比为3 50 1000的比例溶解，泊洛沙姆与水按重量比为I 50 1000的比例溶解，得到泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束；将治疗有效量的难溶或微溶与水的药学活性或药理活性分子用药学上可接受溶剂溶解，与上述混合胶束混合后，经超声或高压均质处理，溶液用透析法或超滤法或柱分离法除去有机溶剂和小分子，冻干制得粒径为10 IOOOnm的纳米胶束。
3.根据权利要求I所述的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束，泊洛沙姆与两亲性多糖按照重量比为0. 05 10 I的比例混合。
4.根据权利要求I所述的泊洛沙姆，其特征为亲水链聚氧乙烯占60% 80 %的泊洛沙姆。
5.根据权利要求I所述的两亲性多糖偶联物，选自下述亲水端和疏水端的组合，所述亲水端选自未分级肝素、低分子量肝素、脱硫酸化肝素、透明质酸、软骨素、多硫酸化软骨素、海藻酸和原本不具有羧基但引入羧基的多糖壳聚糖、羧甲基壳聚糖、琥珀酰壳聚糖、葡聚糖、真菌多糖；所述的疏水端选自全反式维甲酸、9-顺式维甲酸、甲氨蝶呤、氨基蝶呤、齐墩果酸、藤黄酸、甘草次酸、熊果酸、黄芩苷、2-羟基苯甲酸、2-(乙酰氧基)苯甲酸、水杨酸、 吲哚美辛、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、酮洛芬、芬布芬、甲芬那酸、吡洛芬、氟比洛芬、苯丁酸氮芥、美法仑、胆烷酸、长链烷基。
6.根据权利要求I所述的难溶性药物，是指每Iml水中溶解度小于Img或Iill且属于下列类别的物质紫杉醇/烷类、喜树碱类、长春碱类、阿霉素类、环孢菌素类、黄酮类、二氢吡啶类、抗生素类、维A酸类、他丁类、依托泊苷、挥发油类物质或上述物质的衍生物。
7.根据权利要求I所述的包载难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束的应用， 其特征在于可应用于口服给药，剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、糖浆剂、颗粒剂、口服溶液剂。
全文摘要
本发明公开了一种包载有难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束制剂的制备和应用。通过透析法或溶剂挥发法制备难溶性药物的泊洛沙姆/两亲性多糖混合胶束，该混合胶束临界胶束浓度低，能明显延长稳定时间，载药量高，并具有纳米胶束的长循环作用和抑制P-糖蛋白及细胞色素P450酶的代谢的双重作用，提高了口服给药的生物利用度。该混合胶束制备方法简单，工艺成熟，产率高，可制备成片剂，胶囊剂，丸剂、糖浆剂等制剂用于口服给药。
文档编号A61K47/48GK102626518SQ20121014110
公开日2012年8月8日 申请日期2012年5月9日 优先权日2012年5月9日
发明者刘宏盼, 周建平, 姚静, 杨晖, 法蒂玛 申请人:中国药科大学