一种蛋白多肽疫苗载药系统及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种以聚乳酸包覆蛋白多肽疫苗、鱼精蛋白包覆聚乳酸的纳米囊用作蛋白多肽疫苗载药系统，以及该载药系统的制备方法。本发明以鸡卵清白蛋白(OVA)为模型蛋白多肽疫苗，通过探头超声方法将OVA溶液分散于含聚乳酸(PLA)的二氯甲烷有机相中，形成初乳。初乳加入含有聚乙烯醇外水相中，探头超声形成复乳。搅拌至二氯甲烷有机相完全挥发得到固化的OVA/PLA纳米囊。在OVA/PLA纳米囊混悬液中加入鱼精蛋白(PS)搅拌得到OVA/PLA/PS纳米囊。本发明的OVA/PLA/PS纳米囊具有稳定的纳米级粒径与分散系数，和适合转染细胞的表面电位；可以有效提高小鼠源性树突状细胞(BMDC)对OVA/PLA/PS纳米囊的摄取水平；显著提高BMDC表面分子MHCI、MHCII、CD83、CD86的表达，增加BMDC极化因子IL-12p70的分泌量。
【专利说明】一种蛋白多肽疫苗载药系统及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种蛋白多肽疫苗载药系统及其制备方法，属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减 毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原 微生物刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系 统便会产生一定的保护物质，如特异性抗体、免疫激素、活性生理物质等；当动物再次接触 到这种病原微生物时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来 阻止病原微生物的伤害。疫苗是人类预防和治疗疾病最有效的方式之一。
[0003] 从研制技术上疫苗分为传统疫苗和新型疫苗。传统疫苗包括灭活疫苗、减毒活疫 苗和用天然微生物的某些成分制成的亚单位疫苗等。新型疫苗包括蛋白质多肽（亚单位） 疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗等。蛋白质蛋白多肽疫苗的安全性较好，但免疫效果略 差。增强其免疫原性的方法主要有：调整基因组合使之表达成颗粒性结构；在体外加以聚 团化，包入脂质体或胶囊微球；加入有免疫增强作用的化合物作为佐剂。
[0004] 聚乳酸（PLA)通常由乳酸的二聚物--丙交酯通过开环聚合而成。PLA结构式如 下所示：
[0005]
【权利要求】
1. 一种蛋白多肽疫苗载药系统，为聚乳酸包覆蛋白多肽疫苗、鱼精蛋白包覆聚乳酸的 水包油包水结构的阳离子纳米囊。
2. 根据权利要求1所述的蛋白多肽疫苗载药系统，其特征在于，所述的蛋白多肽疫苗 为卵清蛋白或人乙型肝炎病毒表面抗原。
3. 根据权利要求1所述的蛋白多肽疫苗载药系统，其特征在于，所述的蛋白多肽疫苗 载药系统粒径为20(Γ300纳米，表面电位为1(Γ20毫伏，分散系数不大于0. 1。
4. 权利要求1所述的蛋白多肽疫苗载药系统的制备方法，包括以下步骤： 步骤一：称取适量蛋白多肽疫苗溶于pH7.0、0.01mol/L的磷酸缓冲水溶液中，浓度为 12~100mg/ml，作为内水相；称取聚乳酸溶于二氯甲烷中，浓度为8~40mg/ml，作为有机相； 步骤二：向有机相中逐滴加入内水相，内水相与有机相体积之比为1:3~1:10,搅拌成 悬浮液，并用超声波细胞破碎仪制得初乳，超声功率200W、超声时间3秒、间隔时间5秒，共 超声7次； 步骤三：称取聚乙烯醇溶于PH7. 0,0. Olmol/L的PBS中，质量体积浓度为广3%，作为外 水相； 步骤四：向外水相中逐滴加入步骤二中制备的初乳，控制有机相与外水相体积之比为 1:2~1:6,搅拌成悬浮液，并用超声波细胞破碎仪制得复乳，超声功率200W、超声时间3秒、 间隔时间5秒，共超声7次； 步骤五：称取鱼精蛋白溶于pH7.0,0.01mol/L的PBS中，浓度为2?15mg/ml ; 步骤六：取步骤五制备的PS溶液，加入步骤四制备的复乳中，采用磁力搅拌器，室温下 lOOrpm搅拌2小时，制备得到含有PLA包覆0VA、PS包覆PLA的0VA/PLA/PS纳米囊悬浮液， 4°C下将悬浮液离心去上清，得到0VA/PLA/PS的W/0/W结构的阳离子纳米囊即为蛋白多肽 疫苗载药系统。
【文档编号】A61K38/16GK104189900SQ201410470267
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月15日 优先权日:2014年9月15日
【发明者】朱俊铭, 杨萍, 韩淑贤 申请人:武汉生物技术研究院, 华中科技大学