角蛋白结合多肽的制作方法

专利名称：角蛋白结合多肽的制作方法
现有技术脊椎动物细胞包含纤丝，即一类由角蛋白组成的物质。这些角蛋白也存在于毛发、皮肤和指甲之中，并且特异性的蛋白质如桥粒斑蛋白通过称之为角蛋白结合结构域的特殊序列基序与之结合(Fontao L，Favre B，RiouS，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L.，Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1(BP230)and desmoplakinwith intermediate filaments is mediated by distinct sequences within theirCOOH terminus，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92，2003年1月26日电子公开；Hopkinson SB，Jones JC.，The N terminus of thetransmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain ofBP230，thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cellsurface at the site of the hemidesmosome，Mol Biol Cell.2000年1月；11(1)277-86)。
发明目的本发明的一个目的在于提供对角蛋白或含角蛋白物如皮肤或毛发具有高亲和力的新的多肽。这样的多肽适合用于含角蛋白结构(特别是毛发和皮肤)的化妆及药物处理。

发明内容
本发明涉及用于处理含角蛋白物的化妆组合物，包含化妆相容介质中的至少一种角蛋白结合多肽序列(i)。
多肽序列(i)多肽序列(i)对角蛋白具有结合亲和力。多肽序列(i)与角蛋白的结合可在实施例8、9和10中所述的条件下分析。
尤为适宜的角蛋白结合多肽是存在于人桥粒斑蛋白中的序列，或通过修饰人桥粒斑蛋白多肽序列例如氨基酸插入、取代或缺失而由之衍生的序列。
人桥粒斑蛋白的多肽序列如SEQ ID NO1所示。合适的角蛋白结合结构域(结构域B)是多肽序列SEQ ID NO1的第2193至2481位及其功能等价物。另外的角蛋白结合结构域(结构域C)是多肽序列SEQ ID NO1第2606至2871位及其功能等价物。
角蛋白结合结构域示于

图1。
优选的多肽序列(i)包括如SEQ ID NO1所示的氨基酸序列。
根据本发明，同样还包括所述具体公开多肽序列(i)的“功能等价物”及其在本发明方法中的用途。
为本发明的目的计，所述具体公开多肽(i)的“功能等价物”或类似物是与之不同且额外具有期望的生物活性例如角蛋白结合活性的多肽。从而，举例来说，“功能等价物”是指这样的多肽序列，其在实施例9或10所述结合测定法之一中显示出如下的结合(活性)，即实施例9或10所述结合测定中具有SEQ ID NO1的结构域B或结构域C的多肽所示结合(活性)的至少10％，优选至少50％，尤其优选75％，极其优选90％。
合适的氨基酸取代的实例可见下表原始残基 取代实例Ala SerArg LysAsn Gln；HisAsp GluCys Ser
Gln AsnGlu AspGly ProHis Asn；GlnIle Leu；ValLeu Ile；ValLys Arg；Gln；GluMet Leu；IlePhe Met；Leu；TyrSer ThrThr SerTrp TyrTyr Trp；PheVal Ile；Leu例如，众所周知，天然存在于SEQ ID NO1第2849位的丝氨酸可被替换为甘氨酸，以避免该位置上的磷酸化(Fontao L，Favre B，Riou S，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L.，Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1(BP230)and desmoplakinwith intermediate filaments is mediated by distinct sequences within theirCOOH terminus，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92，2003年1月26日电子公开)。
根据本发明，“功能等价物”还特别意味着在上述氨基酸序列的至少一个序列位置上具有不同于具体提及的氨基酸、但仍然具有上述生物活性之一的突变蛋白质。因此，“功能等价物”包括可通过一个或多个氨基酸添加、取代、缺失和/或倒置而得到的突变蛋白质，其中所述修饰有可能存在于任何序列位置上，只要能得到具有本发明性质类型的突变蛋白质即可。
上述含义的“功能等价物”也包括所述多肽的“前体”、多肽的“功能衍生物”及“盐”。
就此而言，“前体”为有或没有期望生物活性的天然或合成的多肽前体。
术语“盐”指本发明蛋白质分子的羧基盐和氨基酸式加成盐。羧基盐可根据其自身已知的方式制备，且包括无机盐例如钠盐、钙盐、铵盐、铁盐和锌盐，以及有机碱盐，例如胺，如三乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、哌啶，等等。本发明同样涉及酸式加成盐，例如无机酸盐，如盐酸盐或硫酸盐，以及有机酸盐，如乙酸盐和草酸盐。
本发明多肽的“功能衍生物”同样可通过已知技术在功能性氨基酸侧链基团或在其N末端或C末端上制备。例如，这样的衍生物包括羧基酯或硫酯、羧基酰胺(可通过与氨或伯胺或仲胺反应获得)；游离氨基的N-酰基衍生物(通过与酰化剂反应制备)；游离氨基的N-烷基衍生物(通过与烷化剂反应制备)；游离硫醇的S-酰基衍生物(通过与酰化剂反应制备)；游离硫醇的硫醚(通过烷化剂反应制备)；二硫化物(通过游离硫醇与例如硫醇的反应)；游离羟基的O-酰基衍生物(通过与酰化剂反应制备)；或醚(通过游离羟基与烷化剂的反应)。
“功能等价物”自然也包括从其它生物体获得的多肽以及天然存在的变体。例如，有可能通过序列比较建立同源序列区范围，并基于本发明的具体要求来确定等价酶。
例如，“功能等价物”同样包括具有期望生物功能的本发明多肽的片段，优选单个结构域或序列基序。
另外，“功能等价物”可以是融合蛋白，包含上述多肽序列之一或由其衍生的功能等价物，以及至少另一与之功能上不同的异源序列，所述异源序列与之呈功能性N末端或C末端连接(即，对融合蛋白部分具有忽略不计的相互功能损伤)。例如，这样的异源序列的非限制性实例有信号肽或酶。
同样囊括在本发明中的“功能等价物”是所述具体公开蛋白质的同系物。根据Pearson和Lipman算法(Proc.Natl.Acad，Sci.(USA)85(8)，1988，2444-2448)的计算，这些同系物与所述具体公开的氨基酸序列具有至少50％，优选至少75％，特别是至少85％，例如90％、95％或99％的同源性。本发明同源性多肽的同源性百分比特别地是指基于本文具体描述的氨基酸序列之一的全长的氨基酸残基的同一性百分比。
就可能的蛋白质糖基化作用而言，本发明的“功能等价物”包括上文定义的去糖基化或糖基化形式的蛋白质类型，以及通过改变糖基化作用模式而获得的修饰形式。
就可能的蛋白质磷酸化作用而言，本发明的“功能等价物”包括上文定义的去磷酸化或磷酸化形式的蛋白质类型，以及通过改变磷酸化作用模式而获得的修饰形式。
本发明多肽(i)的同系物可通过诱变产生，如点突变或蛋白质截短。
本发明多肽的同系物可通过筛选突变体例如截短突变体的组合文库鉴定。例如，蛋白质变体文库可通过在核酸水平上组合诱变制备，例如酶促连接合成的寡核苷酸混合物。有很多方法可用于从简并寡核苷酸序列制备潜在的同系物文库。在自动DNA合成仪中可进行简并基因序列的化学合成，然后将合成基因连接到合适的表达载体中。使用一组简并基因，有可能在一种混合物中提供可编码一组期望的潜在蛋白质序列的所有序列。用于合成简并寡核苷酸的方法是技术人员所熟知的(如Narang，S.A.(1983)Fetrahedron 393；Itakura等，(1984)Annu.Rev.Biochem.53323；Itakura等，(1984)Science 1981056；Ike等，(1983)Nucleic Acids Res.11477)。
本领域已知若干方法可用于在通过点突变或截短所制备的组合文库中筛选基因产物，以及在cDNA文库筛选具有所选性质的基因产物。这些技术可适于快速筛选通过本发明同系物的组合诱变而产生的基因文库。用于筛选待进行高通量分析的大量基因文库的最常使用的技术，包括将基因文库克隆到复制型表达载体中，用所得的载体文库转化合适的细胞，并在这样的条件下表达组合基因，其中在所述条件下期望活性的检测能促进载体的分离，而所述载体编码所述检测产物的基因。递归系综诱变(REM)，一种提高文库中功能性突变体频率的技术，可与筛选试验联合用于鉴定同系物(Arkin和Yourvan(1992)PNAS 897811-7815；Delgrave等，(1993)Protein Engineering 6(3)327-331)。
本发明特别有利的实施方案是包括至少一种下列多肽序列的多肽序列(i)a)SEQ ID NO1中第2193至248位的多肽序列(结构域B)；b)SEQ ID NO1中第2606至2871位的多肽序列(结构域C)；c)与(a)相比，上至60％的氨基酸被修饰的多肽序列；d)与(b)相比，上至50％的氨基酸被修饰的多肽序列；条件是多肽序列(c)或(d)的角蛋白结合达到在实施例9或10的测试中所测的多肽序列(a)或(b)所示值的至少10％。就此而论，结构域B或C指上述人桥粒斑蛋白(SEQ ID NO1)的角蛋白结合结构域。由此，氨基酸修饰指氨基酸取代、插入和缺失或这三种可能的任意组合。
优选使用的多肽序列(i)是对期望的生物体具有高特异性亲和力的序列。相应地，对于皮肤化妆品应用，优选采用的多肽序列(i)是对人皮肤角蛋白具有特别高亲和力的序列。对于毛发化妆品应用，优选的多肽序列是对人发角蛋白具有特别高亲和力的序列。
相应地，对于宠物方面的应用，除所述的多肽序列(SEQ ID NO1)之外，优选的多肽序列(i)是对相应的角蛋白(例如犬科动物角蛋白或猫科动物角蛋白)具有特别高亲和力的序列。
然而，在本发明的效应分子中，也有可能使用一种以上的多肽序列(i)，例如对人皮肤角蛋白具有高结合亲和力的序列(i)，连同对人发角蛋白具有高亲和力的序列(i)。例如，也有可能序贯连接多拷贝的同一多肽序列(i)以实现更高的结合。
合适的角蛋白结合多肽序列(i)是已知的。例如，包含角蛋白结合结构域的桥粒斑蛋白和网蛋白(Fontao L，Favre B，Riou S，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L，Interaction of thebullous pemphigoid antigen 1(BP230)and desmoplakin with intermediatefilaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92.2003年1月26日电子公开；Hopkinson SB，Jones JC.，The N terminus of the transmembrane proteinBP180 interacts with the N-terminal domain of BP230，thereby mediatingkeratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of thehemidesmosome，Mol Biol Cell.2000年1月；11(1)277-86)。
例如，使用计算机程序如由InforMax Inc提供的Vector NTI 8 (2002年9月25日的版本)，通过比对这类已知的蛋白质序列，有可能对这样的区域进行绘图和鉴定。
对人角蛋白具有良好结合的其它合适多肽序列(i)是在比对中显示高同源性或序列同一性的序列区域，并可视为角蛋白结合结构域的共有序列。
特别优选下列序列区域结构域B(KBD-B)多肽序列SEQ ID NO1中第2193至2448位；结构域B(KBD-B)多肽序列SEQ ID NO1中第2209至2448位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2606至2871位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2616至2871位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2616至2811位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2606至2871位。
例如，已知天然存在于SEQ ID NO1中第2849位的丝氨酸可被替换为甘氨酸，以避免该位置上的磷酸化作用，从而确保结构域C结合至相应的角蛋白(Fontao L，Favre B，Riou S，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L.，Interaction of the bullouspemphigoid antigen 1(BP230)and desmoplakin with intermediatefilaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92，2003年1月26日电子公开)。
如果期望多肽序列(i)对来自于非人生物体的角蛋白具有特别良好的结合，所选的合适的序列基序优选是来自角蛋白结合蛋白质(如合适生物体的桥粒斑蛋白或网蛋白)的序列。
图2显示了角蛋白结合分子的比对。
如果期望，还可再次从角蛋白中容易地分离根据本发明的角蛋白结合多肽(i)。出于该目的，有可能采用的是例如，洗涤角蛋白，藉此将角蛋白结合多肽(i)从其与角蛋白的既有结合中置换出来，并用洗涤液中的角蛋白进行饱和。或者，用高含量洗涤剂(如SDS)洗涤也有可能用于洗掉角蛋白结合多肽(i)。
根据本发明的角蛋白结合多肽(i)在人化妆品(特别是皮肤、指甲和毛发护理)、动物护理、皮革护理以及皮革加工中具有广泛的应用领域。
根据本发明的角蛋白结合多肽(i)优选用于皮肤化妆品。它们允许皮肤护理或皮肤保护效应物的高浓度和长效作用时间。
用于生产毛发化妆制品、指甲化妆制品或皮肤化妆制品的合适辅剂和添加剂是本领域技术人员熟知的，并可参见化妆品手册，例如Schrader，Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika[化妆品的基本原理及配制]，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，ISBN 3-7785-1491-1。
根据本发明的化妆组合物可以是皮肤化妆组合物、指甲化妆组合物、毛发化妆组合物、皮肤病组合物、卫生组合物或药物组合物。
优选地，根据本发明的组合物是凝胶剂、泡沫剂、喷雾剂、膏剂、霜剂、乳剂、混悬剂、洗剂、乳液或糊剂的形式。如果期望，还可使用脂质体或微球体。
根据本发明的化妆或药物活性组合物可额外包含化妆和/或皮肤病活性成分和辅剂。
优选地，根据本发明的化妆品组合物包含至少一种如上文所定义的角蛋白结合多肽序列(i)以及至少一种与之不同的组分，其中所述组分选自化妆活性成分、乳化剂、表面活性剂、防腐剂、芳香油、增稠剂、毛发聚合物、毛发和皮肤调节剂、接枝聚合物、含水溶性或分散性硅树脂的聚合物、光防护剂、增白剂、成胶剂、护理剂、着色剂、染色剂、鞣剂、染料、颜料、浓度调节剂、增湿剂、加脂剂(re-fatting agents)、胶原、蛋白水解物、脂质、抗氧化剂、防沫剂、抗静电剂、润肤剂和软化剂。角蛋白结合多肽活性成分也可以以胶囊剂型存在于化妆制品中。
抗氧化剂最好选自氨基酸(如甘氨酸、组氨酸、酪氨酸、色氨酸)及其衍生物，咪唑(如尿刊酸)及其衍生物，肽如D，L-肌肽、D-肌肽、L-肌肽以及它们的衍生物(如鹅肌肽)，类胡萝卜素、胡萝卜素(如β-胡萝卜素、番茄红素)以及它们的衍生物，绿原酸及其衍生物，硫辛酸及其衍生物(如二氢硫辛酸)，硫代葡萄糖金、丙基硫氧嘧啶和其它硫醇(如硫氧还蛋白、谷胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸、胱胺及其糖基酯、N-乙酰酯、甲酯、乙酯、丙酯、戊酯、丁酯和月桂酯、棕榈酰酯、油酯、γ-亚油酰酯、胆甾烯基酯和甘油酯)以及它们的盐，硫代二丙酸二月桂酯、硫代二丙酸二硬脂酰酯、硫代二丙酸以及它们的衍生物(酯、醚、肽、脂质、核苷酸、核苷及盐)，以及极低耐受剂量(如pmol至μmol/kg)的亚砜胺(sulfoximine)化合物(如丁硫氨酸亚砜胺、高半胱氨酸亚砜胺、丁硫氨酸砜、五硫堇亚砜胺、六硫堇亚砜胺、七硫堇亚砜胺)，还有(金属)螯合剂(如α-羟基脂肪酸、棕榈酸、植酸、乳铁传递蛋白)、α-羟酸(如柠檬酸、乳酸、苹果酸)、腐殖酸、胆汁酸、胆汁提取物、胆红素、胆绿素、EDTA以及它们的衍生物、不饱和脂肪酸及其衍生物(如γ-亚麻酸、亚油酸、油酸)、叶酸及其衍生物、泛醌和泛醇以及它们的衍生物、维生素C及其衍生物(如抗坏血酸钠、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸醋酸酯)、生育酚及其衍生物(如维生素E醋酸酯、生育三烯酚)、维生素A及其衍生物(维生素A棕榈酸酯)、以及安息香树脂的苯甲酸松柏酯、芸香亭酸以及它们的衍生物、a-糖基芸香苷、阿魏酸、亚糠基葡萄糖醇、肌肽、丁羟甲苯、丁基羟基茴香醚、去甲二氢愈创木酚酸、去甲二氢愈创木酸、三羟基苯丁酮、尿酸及其衍生物、甘露糖及其衍生物、锌及其衍生物(如ZnO、ZnSO4)、硒及其衍生物(如硒代甲硫氨酸)、芪及其衍生物(如芪氧化物、反芪氧化物)。
在这样的制剂中，通常的增稠剂是交联的聚丙烯酸及其衍生物，多糖及其衍生物，如黄原胶、琼脂、藻酸盐或甲基纤维素，纤维素衍生物，如羧甲基纤维素或羟基羧甲基纤维素，脂肪醇，单酸甘油酯和脂肪酸，聚乙烯醇以及聚乙烯吡咯烷酮。优选使用非离子型增稠剂。
例如，合适的化妆性和/或皮肤病活性成分是着色活性成分、皮肤毛发颜料剂、染色剂、鞣剂、增白剂、角蛋白硬化物质、抗微生物活性成分、滤光剂(photofilter)活性成分、驱避剂活性成分、具有充血效果的物质、具有角质层分离和角膜成形效果的物质、祛屑剂活性成分、消炎剂、具有角质化效果的物质、具有抗氧化或清除自由基的效果的活性成分、增加皮肤水分或保持皮肤湿润的物质、加脂活性成分、抗红斑或抗变应性活性成分、支链脂肪酸如18-甲基二十烷酸，以及它们的混合物。
例如，人工晒黑皮肤并且适于不必用紫外射线自然或人工照射而晒黑皮肤的活性成分有二羟丙酮、四氧嘧啶和胡桃壳提取物。合适的角蛋白硬化物质通常是也可用作为止汗剂的活性成分，例如硫酸铝钾、羟基氯化铝、乳酸铝等等。
抗微生物活性成分用于消灭微生物或抑制其生长，从而既可用作防腐剂也可用作减少体臭形成或强度的除臭物质。例如，它们包括本领域技术人员公知的常规防腐剂，例如对羟基苯甲酯、咪唑啉基尿素、甲醛、山梨酸、安息香酸、水杨酸等等。例如，这样的除臭物质有蓖麻醇酸锌、三氯生(triclosan)、十一碳烯烷基醇酰胺(undecylenic alkylolamides)、柠檬酸三乙酯、双氯苯双胍己烷等等下表列出根据本发明最好使用的合适的防腐剂及其E编码。


根据本发明同样适用的有通常用于化妆品的防腐剂或防腐剂辅剂，例如二溴二氰基丁烷(2-溴基-2-溴甲基戊二腈)、3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯、2-溴-2-硝基丙烷-1，3二醇、咪唑啉基尿素、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-氯乙酰胺、氯化苯甲烃胺和苯甲醇+甲醛供体。
同样适于作为防腐剂的有苯基羟烷基醚，特别是因为对许多微生物的杀细菌和杀真菌效果而闻名的称之为苯氧乙醇的化合物。
其它抗微生物剂同样适于掺入到根据本发明的制品中。例如，有益的物质有2，4，4’-三氯-2’-羟基联苯醚(玉洁新)、1，6-二(4-氯苯双胍)己烷(双氯苯双胍己烷)、3，4，4’-三氯碳酰苯胺、季铵化合物、丁香油、薄荷油、百里香油、柠檬酸三乙酯、金合欢醇(3，7，11-三甲基-2，6，10-十二碳三烯-1-醇)，以及在下列专利公开说明书中描述的活性成分或活性成分组合DE-37 40186、DE-39 38 140、DE-42 04 321、DE-42 29 707、DE-43 093 72、DE-4411 664、DE-195 41 967、DE-195 43 695、DE-195 43 696、DE-195 47 160、DE-196 02 108、DE-196 02 110、DE-196 02 111、DE-196 31 003、DE-196 31004和DE-196 34 019，以及专利说明书DE-42 29 737、DE-42 37 081、DE-4324 219、DE-44 29 467、DE-44 23 410和DE-195 16 705。也是最好使用碳酸氢钠。同样地也可使用抗微生物多肽。
合适的滤光剂活性成分是吸收紫外线B和/或紫外线A区中的紫外射线的物质。例如，合适的紫外线滤光剂是2，4，6-三芳基-1，3，5-三嗪，其中在任一情况下芳基可携带至少一个取代基，优选取代基选自羟基，烷氧基，特别是甲氧基，烷氧羰基，特别是甲氧羰基和乙氧甲酰以及它们的混合物。同样合适的有对氨基苯甲酸酯、肉桂酸酯、二苯酮、樟脑衍生物，以及可阻止紫外射线的颜料，例如二氧化钛、滑石和锌氧化物。
合适的紫外线滤光物质是任何紫外线A及紫外线B滤光物质。可提及的有下列实例



根据本发明的化妆和皮肤病制品可以最好额外含有阻止紫外线的基于不溶或略微溶于水的金属氧化物和/或其它金属化合物的无机颜料，并可选自锌氧化物(ZnO)、钛氧化物(TiO2)、铁氧化物(如Fe2O3)、锆氧化物(ZrO2)、硅氧化物(SiO2)、锰氧化物(如MnO)、铝氧化物(Al2O3)、铈氧化物(如Ce2O3)、相应金属的混合氧化物以及这类氧化物的混合物。
本文的无机颜料可以是涂层形式，即经表面处理。例如，这种表面处理可包括以其本身已知的方法在颜料上形成疏水薄层，如DE-A-33 14 742所述合适的驱避剂活性成分是能够从人体驱除或赶走某些动物特别是昆虫的化合物。例如，这些包括2-乙基-1，3-己二醇，N，N-二乙基间甲苯甲酰胺，等等。刺激血液通过皮肤流动的合适充血物质有例如香精油，例如中欧山松提取物、熏衣草提取物、迷迭香提取物、杜松提取物、七叶树提取物、桦木叶提取物、干草花提取物、乙酸乙酯、樟脑、薄荷醇、薄荷油、迷迭香提取物、桉树油，等等。例如，合适的角质层分离和角膜成形的物质有水杨酸、硫醇乙酸钙、硫醇乙酸及其盐、硫，等等。例如，合适的祛屑剂活性成分有硫、硫化聚乙二醇山梨醇酐单油酸酯、硫化蓖麻醇聚乙氧基化物、羟基吡啶硫酮锌、羟基吡啶硫酮铝，等等。例如，减少皮肤刺激的合适消炎剂有尿囊素、甜没药萜醇、红没药醇、甘菊提取物、泛醇，等等。
根据本发明的化妆组合物可含有作为化妆和/或药物活性成分的(并且也如果合适的话也作为辅剂的)至少一种化妆或药学上可接受的聚合物，其中所述聚合物不同于可生成本发明所用的聚电解质络合物的聚合物。通常地，这些包括阳离子、两性及中性聚合物。
例如，合适的聚合物有INCI命名的聚季铵盐阳离子聚合物，如乙烯吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑盐的共聚物(Luviquat FC，Luviquat HM，LuviquatMS，Luviquat & commat，Care)、用硫酸二乙酯季铵化的N-乙烯吡咯烷酮/二甲基氨乙基甲基丙烯酸酯共聚物(Luviquat PQ 11)、N-乙烯己内酰胺/N-乙烯吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑盐共聚物(Luviquat E Hold)、阳离子纤维素衍生物(聚季铵盐-4和聚季铵盐-10)、丙烯酰胺共聚物(聚季铵盐-7)以及脱乙酰壳多糖。
合适的阳离子聚合物(季铵化的)还有Merquat(基于二甲基二烯丙基铵氯化物的聚合物)、Gafquat(通过聚乙烯吡咯烷酮与季铵化合物反应而产生的四元聚合物)、聚合物JR(具有阳离子基团的羟乙基纤维素)，以及基于植物的阳离子聚合物，如瓜尔胶聚合物，例如来自Rhodia(罗地亚)的Jaguar等级系列的瓜尔胶聚合物。
其它合适的聚合物还有中性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮，N-乙烯基吡咯烷酮与乙酸乙烯酯和/或丙酸乙烯酯的共聚物、聚硅氧烷、聚乙烯己内酰胺和其它具有N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物、聚乙烯亚胺及其盐、聚乙烯胺及其盐、纤维素衍生物、聚天冬氨酸盐以及衍生物。例如，这些包括Luviflex 0 Swing(聚醋酸乙烯酯和聚乙二醇部分皂化的共聚物，BASF)。
合适的聚合物还有非离子型水溶性或水可分散性的聚合物或寡聚物，例如聚乙烯己内酰胺(如Luviskol 0 Plus(BASF))，或聚乙烯吡咯烷酮及其共聚物，特别是具有乙烯酯的共聚物，例如乙酸乙烯酯(Luviskol 0 VA 37(BASF))，以及例如基于甲叉丁二酸和脂族二胺的聚酰胺，例如，如DE-A-4333238中所述的那样。
合适的聚合物还有两性或两性离子聚合物，例如可以商品名Amphomer(National Starch)获得的辛基丙烯酰胺/甲基丙烯酸甲酯/叔丁基氨乙基甲基丙烯酸酯/甲基丙烯酸羟丙酯共聚物，以及在德国专利申请DE39 29 973、DE21 50 557、DE28 17 369和DE37 08 451中公开的两性离子聚合物。丙烯酰胺基丙基三甲基氯化铵/丙烯酸或甲基丙烯酸共聚物及其碱金属盐和铵盐是优选的两性离子聚合物。其它合适的两性离子聚合物有可以商品名Amersette(AMERCHOL)商业上获得的甲基丙烯基乙基内铵酯(methacroylethylbetaine)/甲基丙烯酸酯共聚物，以及羟乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸N，N-二甲氨基乙酯和丙烯酸的共聚物(Jordapon(D))。
合适的聚合物还有非离子型含有硅氧烷的水溶性或水可分散性聚合物，如聚醚硅氧烷，例如Tegopren 0 (Goldschmidt)或Besi & commat(Wacker)。
根据本发明的药物组合物的配制基质优选包含药学上可接受的辅剂。药学上可接受的辅剂是因在药学领域、食品工艺学以及相关领域中使用而众所周知的辅剂，特别是在有关药典(如DAB Ph.Eur.BP NF)中所列的那些辅剂，以及其性质不妨碍生理学应用的辅剂。
合适的辅剂可以是润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、抗刺激剂、螯合剂、乳液稳定剂、成膜剂、成胶剂、气味掩蔽剂、树脂、水胶体、溶剂、增溶剂、中和剂、渗透促进剂、颜料剂、季铵化合物、加脂剂和富脂剂、膏剂、霜剂或油性物质、硅酮衍生物、稳定剂、杀菌剂、推进剂、干燥剂、遮光剂、增稠剂、蜡、软化剂、白油。在这方面，配方以专家知识为基准，例如，如Fiedler，H.P(Lexikon der Hilfsstoffe fürPharmazie，Kosmetik und angrenzende Gebiete[药学、化妆及相关领域的辅剂词典]，第4版，AulendorfECV-Editio-Kantor-Verlag，1996)中所提供的知识。
为了制备根据本发明的皮肤病组合物，可用合适的辅剂(赋形剂)混合或稀释活性成分。赋形剂可以是可作为活性成分的载体、运载体或介质的固体、半固体或液体原料。如果期望，可以以本领域技术人员已知的方式加入其它辅剂。另外，在制药中聚合物和分散体适于作为辅剂，优选作为或用于固体药物剂型的包衣中或粘合剂。它们还可以用于霜剂以及作为片剂包衣和片剂粘合剂。
根据优选的实施方案，本发明的组合物是皮肤清洁组合物。
优选的皮肤清洁组合物是胶状浓度的液体肥皂，例如透明皂、高档香皂、除臭皂、乳霜皂、婴儿皂、护肤皂、擦洗皂和合成洗涤剂、糊状皂(pastysoaps)、软皂和洗涤膏、去角质皂(exfoliation soaps)、保湿擦纸、液体洗涤物、淋浴和洗浴制品，例如洗液、淋浴露、沐浴胶、沐浴液、油浴和洗刷制品、剃须泡沫胶、洗液和霜剂。
根据另一优选实施方案，本发明的组合物是护理和保护皮肤毛发的化妆组合物、指甲护理组合物或用于装饰性化妆的制品。
例如，合适的皮肤化妆组合物是面部爽肤水(tonic)、面膜、除臭剂和其它化妆水。例如，用于装饰性化妆品的组合物包含遮瑕膏(concealingstick)、舞台化妆品(stage makeup)、睫毛膏和眼影膏、口红、化妆笔、眼线笔、胭脂、扑粉和眉笔。
此外，多肽序列(i)可用于毛孔清洁鼻贴、抗粉刺组合物、驱避剂、剃须组合物、剃须前后的护理组合物、日晒后护理组合物、脱毛组合物、染发剂、私处护理组合物、足部护理组合物、婴儿护理组合物之中。
具体地，根据本发明的护肤组合物是油包水型或水包油型护肤霜、日霜和夜霜、眼霜、面霜、防皱霜、防晒霜、保湿霜、增白霜、自助美黑霜、维生素霜、护肤液、护理液和保湿液。
基于上述的聚电解质络合物的皮肤化妆和皮肤病组合物显示出优越的效果。其中，聚合物有利于保湿和调理皮肤，并改善皮肤手感。聚合物也可作为制剂的增稠剂。通过加入根据本发明的聚合物，在某些制剂中可实现皮肤适应性可观的改善。
皮肤化妆和皮肤病组合物优选包含至少一种基于组合物总重量的以重量计约0.001％至30％、优选以重量计约0.01％至20％、极其优选以重量计约0.1％至12％重量的多肽序列(i)。
特别地，与常规的辅剂如聚乙烯吡咯烷酮相比，基于多肽序列(i)的光防护组合物具有提高紫外吸收成分的滞留时间的性能。
根据使用领域，根据本发明的组合物以适于护肤的形式进行使用，例如，作为霜剂、泡沫剂、凝胶剂、棒剂(stick)、摩丝、乳液、雾状体(喷雾泵或含推进剂的喷雾剂)或洗剂。
除多肽序列(i)和合适的载体之外，皮肤化妆制品还可包含如上所述的皮肤化妆品中的其它活性成分和常规辅剂。它们优选包括乳化剂、防腐剂、芳香油、化妆活性成分(例如植烷三醇、维生素A、维生素E和维生素C、视黄醇、甜没药萜醇、泛醇)、光防护剂、增白剂、着色剂、染色剂、鞣剂、胶原、蛋白质水解物、稳定剂、pH调节剂、染料、盐、增稠剂、成胶剂、浓度调节剂、硅酮、增湿剂、加脂剂和其它常规的添加剂。
皮肤化妆和皮肤病组合物优选的油脂成分是上述的矿物油和合成油，例如石蜡、硅酮油和多于8个碳原子的脂肪族烃；动植物油，例如向日葵油、椰油油、鳄梨油、橄榄油、羊毛脂或蜡；脂肪酸或脂肪酸酯，例如C6-C30脂肪酸的三酸甘油酯，蜡酯，例如希蒙得木油、脂肪醇、凡士林、氢化羊毛脂和乙酰化羊毛脂，以及它们的混合物。
如果要创建特殊的性能，根据本发明的多肽序列(i)还可与常规聚合物进行混合。
为了创建某些性能，例如改善触感、铺展性能、以及活性成分和辅剂(例如色素)的抗水性和/或结合，所述皮肤化妆和皮肤制品可另外还包含基于硅酮化合物的调理物质。
例如，合适的硅酮化合物有聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚芳基烷基硅氧烷、聚硅氧烷醚或硅酮树脂。
化妆或皮肤病制品可根据本领域技术人员已知的常规方法来制备。
优选地，化妆和皮肤病组合物是乳剂形式，特别是油包水型(W/O)或水包油型(O/W)乳剂。
不过，还可以选择其它剂型，例如凝胶剂、油剂、油凝胶，多重乳剂例如W/O/W或O/W/O型乳剂的形式、无水膏剂或膏剂基质，等等。无乳化剂的剂型也是优越的实施方案，例如水分散剂(hydrodispersion)、水凝胶或Pickering乳剂。
乳剂通过已知方法制备。除至少一种多肽序列(i)之外，乳剂通常包含常规的组分，例如脂肪醇、脂肪酸酯特别是脂肪酸三酸甘油酯、脂肪酸、羊毛脂及其衍生物、天然或合成的油或蜡，以及存在于水之中的乳化剂。例如，Schrader，Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika[化妆品的基本原理及配制]，Hüthig Buch Verlag，Heidelberg，第二版，1989年，第三部分，特此明确并入作为参考)描述了特异于乳剂种类的添加剂以及合适乳剂的制备。
作为油包水型乳剂(如护肤霜等)的合适乳剂通常包含通过合适的乳化剂系统在油相或脂肪相中进行乳化的水相。为了提供水相，可使用聚电解质络合物。
存在于乳剂脂肪相之中的脂肪成分优选有碳氢化合物油剂，例如石蜡油、purcellin油、全氢化角鲨烯以及这些油中的微晶蜡溶液；动物或植物油，例如甜杏仁油、鳄梨油、海棠(calophylum)油、羊毛脂及其衍生物、蓖麻油、芝麻油、橄榄油、希蒙得木油、乳油木果(karité)油、胸棘鲷(hoplostethus)油；常压下蒸馏起点约250℃并且蒸馏终点是410℃的矿物油，例如凡士林油；饱和或不饱和脂肪酸酯，例如烷基肉豆蔻酸酯，如肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯或肉豆蔻酸鲸蜡醇酯，十六烷基硬脂酸酯、棕榈酸乙酯或棕榈酸异丙酯，辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯以及十六烷基蓖麻醇酸酯。
脂肪相还可包括溶于其它油的硅酮油，例如二甲聚硅氧烷、甲苯聚硅氧烷和硅酮乙二醇共聚物、脂肪酸和脂肪醇。
除多肽序列(i)之外，也有可能使用蜡，例如巴西棕榈蜡、小烛树蜡、蜂蜡、微晶蜡、地蜡，以及Ca、Mg和Al的油酸盐、肉豆蔻酸盐、亚油酸盐和硬脂酸盐。
另外，根据本发明的乳剂可以是水包油型乳剂形式。这样的乳剂通常包含油相、使油相在水相中稳定的乳化剂以及水相，其通常以浓稠形态存在。合适的乳化剂优选是水包油型乳化剂，例如聚甘油酯、山梨聚糖酯或部分酯化的甘油酯。
根据另一优选实施方案，本发明的组合物是淋浴露、洗发制剂或浴用制品。
这样的制剂包含至少一种多肽序列(i)和作为基础表面活性剂的常规阴离子表面活性剂以及作为辅助表面活性剂的两性和/或非离子型表面活性剂。其它合适的活性成分和/或辅剂通常选自脂质、芳香油、染料、有机酸、防腐剂和抗氧化剂、以及增稠剂/成胶剂、皮肤调理剂和增湿剂。
这些制剂优选包含基于制剂总重的以重量计约2％至50％、优选以重量计约5％至40％、特别优选以重量计约8％至30％的表面活性剂。
在洗涤、淋浴以及洗浴制品中，有可能使用通常用于清洁身体的组合物之中的所有阴离子、中性、两性或阳离子表面活性剂。
例如，合适的阴离子表面活性剂有烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、N-烷氧基肌氨酸盐、酰基牛磺酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基醚羧酸盐、α-烯烃磺酸盐，特别是碱金属盐和碱土金属盐，如钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铵盐以及三乙醇胺盐。烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚羧酸盐在分子中可具有1至10个环氧乙烷或环氧丙烷单位，优选1至3个环氧乙烷单位。
例如，这些包括十二烷基硫酸钠、牛磺酰硫酸铵、十二烷基乙醚硫酸钠、十二烷基醚硫酸铵、十二烷基肌氨酸钠、油烯琥珀酸钠、十二烷基磺基琥珀酸铵、十二烷基苯磺酸钠、三乙醇胺十二烷基苯磺酸钠。
例如，合适的两性表面活性剂有烷基甜菜碱、烷基氨基丙基甜菜碱、烷基磺基甜菜碱、烷基氨基乙酸盐、烷基羧基氨基乙酸盐、烷基两性醋酸盐或两性丙酸盐、烷基两性二乙酸盐或两性二丙酸盐。
例如，可使用椰油二甲基磺基丙基甜菜碱(cocodimethylsulfopropylbetaine)、十二烷基甜菜碱、椰油酰胺基丙基甜菜碱(cocamidopropylbetaine)或椰油两性丙酸钠(sodiumcocamphopropionate)。
例如，合适的非离子型表面活性剂是在直链或支链烃链中具有6至20个碳原子的脂族醇或烷基酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的反应产物。环氧烷烃的量为每摩尔醇约6至60摩尔。另外，烷基胺氧化物、一烷基烷醇胺或二烷基烷醇胺、聚乙二醇的脂肪酸酯、乙氧基化脂肪酸酰胺、烷基聚糖苷或山梨聚糖醚酯是适合的。
此外，洗涤、淋浴和洗浴制品可包含常规的阳离子表面活性剂，例如季铵化合物，如十六烷基三甲基氯化铵。
另外，淋浴露/洗发制剂可包含增稠剂，例如氯化钠、PEG-55、丙二醇油酸酯、PEG-120、甲基葡萄糖二油酸酯等，以及防腐剂、其它活性成分及辅剂和水。
根据另一优选实施方案，本发明的组合物是毛发处理组合物。
根据本发明的毛发处理组合物优选包含至少一种基于组合物总重量以重量计约0.01％至30％、优选以重量计约0.5％至20％的量的多肽序列(i)。
优选地，根据本发明的毛发处理组合物是以下的形态定型泡沫胶、发用摩丝、发胶、洗发香波、喷发剂、发用泡沫胶、喷液剂(spitzenfluid)，用于持久烫发的中和剂、染发剂以及增白剂或热油处理剂。根据使用领域，毛发化妆制品可作为(气雾剂)喷雾剂、(气雾剂)泡沫胶、发胶、发胶喷雾剂、护发膏、护发素或发蜡施用。本文的喷发剂包括气雾剂喷雾剂和无推进气体的泵式喷雾剂。发用泡沫胶包括气雾剂泡沫胶和无推进气体的泵式泡沫胶。喷发剂和发用泡沫胶优选突出地或独有地包含水溶性或水可分散性成分。如果用于剂和发用泡沫胶的本发明的化合物是水可分散性的，它们通常以粒径为1至350nm、优选1至250nm的水微分散体的形态进行使用。本文中这些制品的固形物含量通常在以重量计约0.5％至20％的范围中。通常这些微分散体不需要乳化剂或表面活性剂对其加以稳定化。
在优选的实施方案中，根据本发明的毛发化妆制剂包括a)以重量计为0.01％至30％的至少一种多肽序列(i)；b)以重量计为20％至99.95％的水和/或醇；c)以重量计为0至50％的至少一种气体推进剂；d)以重量计为0至5％的至少一种乳化剂；e)以重量计为0至3％的至少一种增稠剂；和以重量计上至25％的其它组分。
醇指的是化妆品中所有常规的醇，如乙醇、异丙醇、正丙醇。
其它组分指的是化妆品中常规的添加剂，例如推进剂、消泡剂、界面活性化合物即表面活性剂、乳化剂、成泡剂和增溶剂。使用的界面活性化合物可以是阴离子、阳离子、两性或中性化合物。例如，其它常规组分也可以是防腐剂，芳香油，遮光剂，活性成分，紫外线滤光剂，护理物质，例如泛醇、胶原、维生素、蛋白质水解物、α和β羟基羧酸，稳定剂，pH调节剂，染料，粘度调节剂，成胶剂，盐，增湿剂，加脂剂，络合剂以及其它常规的添加剂。
如果要创建极为特殊的性能，这些也包括可与本发明的多肽序列(i)联合使用的在化妆品领域中所有已知的发型和调理剂聚合物。
例如，合适的常规毛发化妆聚合物是上述的阳离子聚合物、阴离子聚合物、中性聚合物、非离子聚合物和两性聚合物，在此将其并入作为参考。
为了创建某些性能，制品还可另外包括基于硅酮化合物的调理物质。例如，合适的硅酮化合物有聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚芳基烷基硅氧烷、聚醚硅氧烷、硅酮树脂或二甲基硅氧烷共聚醇(CTFA)以及氨基官能团硅酮化合物，例如氨基聚二甲基硅氧烷(CTFA)。
根据本发明的聚合物特别适合作为发型制品中的定型剂，特别是喷发剂(气雾剂喷雾剂和无推进气体的泵式喷雾剂)和发用泡沫胶(气雾剂泡沫胶和无推进气体的泵式泡沫胶)。
在优选的实施方案中，喷雾剂制品包括a)以重量计为0.01％至30％的至少一种多肽序列(i)；b)以重量计为20％至99.9％的水和/或醇；c)以重量计为0至70％的至少一种推进剂；d)以重量计为0至20％的其它成分。
推进剂是通常用于喷发剂或气雾剂泡沫胶的推进剂。优选是丙烷/丁烷混合物、戊烷、二甲醚、1，1-二氟乙烷(HFC-152a)、二氧化碳、氮气或压缩空气。
用于本发明气雾剂发用泡沫胶的制剂优选包括a)以重量计为0.01％至30％的至少一种多肽序列(i)；b)以重量计为55％至99.8％的水和/或醇；c)以重量计为5％至20％的推进剂；d)以重量计为0.1％至5％的乳化剂；e)以重量计为0至10％的其它组分。
所使用的乳化剂是所有通常用于发用泡沫胶的乳化剂。合适的乳化剂是非离子、阳离子或阴离子或两性乳化剂。
非离子乳化剂(INCI命名)的实例有月桂醇醚(laureth)，如月桂醇醚-4；鲸蜡醇醚(ceteth)，如鲸蜡醇醚-1；聚乙二醇十六烷基醚，鲸蜡硬脂醇醚(ceteareth)，如鲸蜡硬脂醇醚-25；聚乙二醇脂肪酸甘油酯，羟基化卵磷脂，脂肪酸乳酰酯，烷基聚糖苷。
阳离子乳化剂的实例有鲸蜡基二甲基-2-羟乙基磷酸二氢铵、鲸蜡基三甲基氯化铵、鲸蜡基三甲基溴化铵、椰油三甲基硫酸甲酯铵、季铵盐-1至x(INCI)。
例如，阴离子乳化剂可选自烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、N-烷氧基肌氨酸盐、酰基牛磺酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基醚羧酸盐、α-烯烃磺酸盐，特别是碱金属盐和碱土金属盐，如钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铵盐以及三乙醇胺盐。烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚羧酸盐在分子中可具有1至10个环氧乙烷或环氧丙烷单位，优选1至3个环氧乙烷单位。
例如，适用于发型胶的本发明合适的制品可以具有下列组合物a)以重量计为0.01％至30％的至少一种多肽序列(i)；b)以重量计为80％至99.85％的水和/或醇；c)以重量计为0至3％、优选以重量计为0.05％至2％的成胶剂；d)以重量计为0至20％的其它组分。
通常，根据本发明使用的多肽序列(i)已具有“自动增稠”效果，意味着当制备凝胶剂时，在多数情况下可免除成胶剂的使用。然而，为了创建凝胶剂的特殊流变性或其它应用性能，成胶剂的使用可能是最好的。可用的成胶剂有化妆品中所有常规的成胶剂。这些包括轻度交联的聚丙烯酸，例如卡波姆(INCI)，纤维素衍生物，如羟丙基纤维素，羟乙基纤维素，阳离子修饰的纤维素，多糖如黄原胶、辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物、聚季铵盐-32(与)石蜡油(INCI)、丙烯酸钠共聚物(与)石蜡油(与)PPG-1聚氧乙烯十三烷基-6(PPG-1trideceth-6)、丙烯酰胺基丙基三甲基氯化铵/丙烯酰胺共聚物、硬脂醇醚-10(steareth)、烯丙醚、丙烯酸共聚物、聚季铵盐-37(与)石蜡油(与)PPG-1聚氧乙烯十三烷基醚-6、聚季铵盐37(与)丙二醇二癸酸酯/二辛酸酯(与)PPG-1聚氧乙烯十三烷基醚-6、聚季铵盐-7、聚季铵盐-44。
根据本发明的多肽序列(i)可作为化妆制品中的调理剂。
包含本发明的多肽序列(i)的制品优选作为定型剂和/或调理剂用于洗发香波制剂之中。优选的洗发香波制剂包含a)以重量计为0.01％至30％的至少一种多肽序列(i)；b)以重量计为20％至94.95％的水；c)以重量计为5％至50％的表面活性剂；c)以重量计为0至5％的其它调理剂；d)以重量计为0至10％的其它化妆组分。
在洗发香波制剂中，有可能使用通常用于洗发香波的所有阴离子、中性、两性或阳离子表面活性剂。
例如，合适的阴离子表面活性剂有烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、N-烷氧基肌氨酸盐、酰基牛磺酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基醚羧酸盐、α-烯烃磺酸盐，特别是碱金属盐和碱土金属盐，如钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铵盐以及三乙醇胺盐。烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚羧酸盐在分子中可具有1至10个环氧乙烷或环氧丙烷单位，优选1至3个环氧乙烷单位例如，适合的有十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸铵、十二烷基乙醚硫酸钠、十二烷基醚硫酸铵、十二烷基肌氨酸钠、油烯琥珀酸钠、十二烷基磺基琥珀酸铵、十二烷基苯磺酸钠、三乙醇胺十二烷基苯磺酸钠。
例如，合适的两性表面活性剂有烷基甜菜碱、烷基氨基丙基甜菜碱、烷基磺基甜菜碱、烷基氨基乙酸盐、烷基羧基氨基乙酸盐、烷基两性醋酸盐或两性丙酸盐、烷基两性二乙酸盐或两性二丙酸盐。
例如，可使用椰油二甲基磺基丙基甜菜碱、十二烷基甜菜碱、椰油酰胺基丙基甜菜碱或椰油两性丙酸钠。
例如，合适的非离子型表面活性剂是在直链或支链烃链中具有6至20个碳原子的脂族醇或烷基酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的反应产物。环氧烷烃的量为每摩尔醇约6至60摩尔。另外，烷基胺氧化物、一烷基烷醇胺或二烷基烷醇胺、聚乙二醇的脂肪酸酯、烷基聚糖苷或山梨聚糖醚酯是适合的。
此外，洗发香波制剂可包含常规的阳离子表面活性剂，例如季铵化合物，如十六烷基三甲基氯化铵。
在洗发香波制剂中，常规调理剂可与多肽序列(i)联合使用，以实现某些效果。
例如，这些包括上述具有INCI命名的聚季铵盐的阳离子聚合物，特别是乙烯吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑盐的共聚物(Luviquat FC，Luviquat HM，Luviquat MS，Luviquat &commat，Care)、用硫酸二乙酯季铵化的N-乙烯吡咯烷酮/二甲基氨乙基甲基丙烯酸酯共聚物(Luviquat D PQ 11)、N-乙烯己内酰胺/N-乙烯吡咯烷酮/N-乙烯基咪唑盐共聚物(Luviquat D Hold)、阳离子纤维素衍生物(聚季铵盐-4和-10)、丙烯酰胺共聚物(聚季铵盐-7)。另外，可使用蛋白质水解物和基于硅酮化合物的调节物质，例如聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚芳基烷基硅氧烷、聚醚硅氧烷或硅酮树脂。其它合适的硅酮化合物有二甲基硅氧烷共聚醇(CTFA)以及氨基官能团硅酮化合物，例如氨基聚二甲基硅氧烷(CTFA)。另外，可使用阳离子瓜尔胶衍生物，例如瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵(INCI)。
本发明还涉及角蛋白结合效应分子，包括(i)至少一种对角蛋白具有结合亲和力的多肽序列，(ii)与多肽序列(i)并非天然连接的效应分子。
合适的多肽序列(i)如上所述。
本发明特别有利的实施方案是包含至少一种下列多肽序列的多肽序列(i)i.多肽序列(结构域B)ii.多肽序列(结构域C)iii.与(a)相比，上至70％的氨基酸被修饰的多肽序列。
iv.与(b)相比，上至70％的氨基酸被修饰的多肽序列。
条件是多肽序列(c)或(d)的角蛋白结合达到在实施例9或10的测试中所测的多肽序列(a)或(b)所示值的至少10％。就此而论，结构域B或C指上述人桥粒斑蛋白(SEQ ID NO1)的角蛋白结合结构域。由此，氨基酸修饰指氨基酸取代、插入和缺失或这三种可能的任意组合。
优选使用的多肽序列(i)是对期望的生物体具有高特异性亲和力的序列。相应地，对于皮肤化妆品应用，优选采用的多肽序列(i)是对人皮肤角蛋白具有特别高亲和力的序列。对于毛发化妆品应用，优选的多肽序列是对人发角蛋白具有特别高亲和力的序列。
相应地，对于宠物方面的应用，优选的多肽序列(i)是对相应的角蛋白(例如犬科动物角蛋白或猫科动物角蛋白)具有特别高亲和力的序列。
然而，在本发明的效应分子中，也有可能使用一种以上的多肽序列(i)，例如对人皮肤角蛋白具有高结合亲和力的序列(i)，连同对人发角蛋白具有高亲和力的序列(i)。例如，也有可能序贯连接多拷贝的同一多肽序列(i)以实现更高的结合。
合适的角蛋白结合多肽序列(i)是已知的。例如，包含角蛋白结合结构域的桥粒斑蛋白和网蛋白(Fontao L，Favre B，Riou S，Geerts D，Jaunin F，Saurat JH，Green KJ，Sonnenberg A，Borradori L.，Interaction of thebullous pemphigoid antigen 1(BP230)and desmoplakin with intermediatefilaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus，Mol Biol Cell.2003年5月；14(5)1978-92.2003年1月26日电子公开；Hopkinson SB，Jones JC.，The N terminus of the transmembrane proteinBP180interacts with the N-terminal domain of BP230，thereby mediatingkeratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of thehemidesmosome，Mol Biol Cell.2000年1月；11(1)277-86)。
例如，使用计算机程序如由InforMax Inc提供的Vector NTI 8(2002年9月25日的版本)，通过比对这类已知的蛋白质序列，有可能对这样的区域进行绘图和鉴定。
对人角蛋白具有良好结合的其它合适多肽序列(i)是在比对中显示高同源性或序列同一性的序列区域，并可视为角蛋白结合结构域的共有序列。
特别优选下列序列区域结构域B(KBD-B)多肽序列SEQ ID NO1中第2193至2448位；结构域B(KBD-B)多肽序列SEQ ID NO1中第2209至2448位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2606至2871位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2616至2871位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2616至2811位；结构域C(KBD-C)多肽序列SEQ ID NO1中第2606至2871位。
如果期望多肽序列(i)对来自于非人生物体的角蛋白具有特别良好的结合，所选的合适的序列基序优选是来自角蛋白结合蛋白质(如合适生物体的桥粒斑蛋白或网蛋白)的序列。
图2显示了角蛋白结合分子的比对。
效应分子(ii)效应分子(ii)在下文中是指具有特定的可预测效果的分子。它们可以是蛋白质分子如酶，或者也可以是非蛋白原性的分子如染料、遮光剂、维生素、维生素原、抗氧化剂和脂肪酸、调理剂或者含金属离子的化合物。
在蛋白质效应分子之中，优选的当属酶和抗体。
在酶之中，优选下列作为效应分子(ii)氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、葡聚糖酶、突变酶、酪氨酸酶、漆酶、金属结合酶、乳过氧化物酶、溶菌酶、淀粉糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物歧化酶、光裂合酶、T4核酸内切酶、过氧化氢酶、硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶。
下列是优选作为效应分子(ii)的无酶活性蛋白质效应分子(ii)抗菌肽、丝蛋白质、疏水蛋白、胶原(collaten)、类胡萝卜素结合蛋白、重金属结合蛋白、气味结合蛋白。
同样非常适合作为蛋白质效应分子(ii)的是植物和动物来源的蛋白质水解物，例如海产来源的蛋白质水解物或丝水解物。
在非蛋白质效应分子(ii)之中，优选的当属染料，例如食用色素、非永久性染料或反应性染料或氧化染料。就氧化染料而言，优选将作为效应分子(ii)的一种组分与角蛋白结合多肽序列(i)偶联，随后在作用位点上(如在结合到毛发上之后)与第二染料组分氧化偶联。还优选在连接到多肽序列(i)之前，通过氧化染料来实施色素组分的偶联。
还可优选将反应性染料作为效应分子(ii)的一种组分连接到角蛋白结合多肽序列(i)上，随后使其结合到毛发上。另外，有可能在装饰性化妆品中通过结合于指甲或皮肤而使用作为效应分子(ii)连接到角蛋白结合多肽序列(i)上的这样的染料。
用于本发明的分子的合适染料是所有常规的毛发染料。根据化妆品手册，合适的染料对于技术人员是公知的，例如Schrader，Grundlagen undRezepturen“der Kosmetika，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，ISBN3-7785-1491-1”。
特别有利的染料是在下表中列出的染料。颜色索引号(CIN)选自“RoweColour Index，第3版，Society of Dyers and Colourists，Bradford，England，1971”。







食用色素同样非常适合作为毛发染料。
上述染料还可以用作为结合多肽序列(i)的效应分子(ii)，对(例如在纹身中)皮肤或指甲着色。
如果期望，也可以很容易从皮肤、毛发或指甲中的角蛋白中再次分离连接于角蛋白结合多肽序列(i)的效应分子(ii)。出于该目的，有可能采用的是例如，洗涤角蛋白，藉此将连接于角蛋白结合多肽(i)的效应分子(ii)从其与角蛋白的既有结合中置换出来，并用洗涤液中的角蛋白进行饱和。或者，用高含量洗涤剂(如SDS)洗涤也有可能用于洗掉效应分子(ii)。
其它优选的效应分子(ii)是脂肪酸，特别是具有烷基支链的饱和脂肪酸，特别优选支链花生酸，例如18-甲基二十烷酸。
其它优选的效应分子(ii)是类胡萝卜素。根据本发明，类胡萝卜素应理解为是指下列单个的或作为混合物的化合物及其酯化或糖基化衍生物β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、虾青素、玉米黄质、隐黄质、柠黄质(citranaxanthin)、角黄素、胭脂树橙、β-阿朴-4-胡萝卜醛、β-阿朴-8-胡萝卜醛、β-阿朴-8-胡萝卜酯、链孢红素、海胆酮、adonirubin、紫黄质、圆酵母素(torulene)、红酵母红素。优选使用的类胡萝卜素有β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、虾青素、玉米黄质、柠黄质和角黄素。
其它优选的效应分子(ii)是维生素，特别是维生素A及其酯。
出于本发明目的，类视黄醇指维生素A醇(视黄醇)及其衍生物，例如维生素A醛(视黄醛)、维生素A酸(视黄酸)以及维生素A酯(如醋酸视黄酯、丙酸视黄酯以及棕榈酸视黄酯)。就此而言，术语视黄酸包括所有反式视黄酸和13-顺式视黄酸。术语视黄醇和视黄醛优选包括所有的反式化合物。优选用于本发明混悬液的类视黄醇为全反式视黄醇，下文称之为视黄醇。
其它优选的效应分子(ii)有来自A、C、E和F族的维生素、维生素原和维生素前体物，特别是3，4-双脱氢视黄醇，β-胡萝卜素(维生素A的维生素原)；抗坏血酸(维生素C)，和抗坏血酸的棕榈酸酯或糖苷或磷酸盐；生育酚，特别是α-生育酚及其酯，如醋酸酯、烟酸酯、磷酸酯和琥珀酸酯；另外还有属于必需脂肪酸的维生素F，特别是亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸。
根据本发明优选使用的B族维生素的维生素、维生素原或维生素前体或其衍生物，以及2-呋喃酮衍生物，包括维生素B1，俗名硫胺素，化学名3-[(4’-氨基-2’-甲基-5’嘧啶基)甲基]-5-(2-羟乙基)-4-甲基噻唑鎓盐酸盐；维生素B2，俗名核黄素，化学名7，8-二甲基-10-(1-D-核糖醇基)-苯并[g]蝶啶-2，4(3H，10H)-二酮。例如，核黄素以游离形态存在于乳清中，并且可从细菌和酵母中分离其它核横素衍生物。同样适合于本发明的核黄素立体异构体是来苏黄素(lyxoflavin)，其可以从鱼粉或肝脏中分离并具有取代D-核糖醇基的D-阿拉伯糖醇基。
维生素B3，化合物烟酸和烟酰胺(尼克酰胺)经常如此命名。根据本发明，优选烟酰胺。
维生素B5(泛酸和泛醇)。优选采用泛醇。特别地，根据本发明可采用的泛醇衍生物是泛醇的酯和醚，以及泛醇的阳离子衍生物。在本发明另一优选的实施方案中，除泛酸或泛醇之外，还有可能采用2-呋喃酮衍生物。特别优选的衍生物是商业上可获得的物质，如二氢-3-羟基-4，4-二甲基-2(3H)-呋喃酮，俗名泛酸内酯(pantolactone)(Merck)，4-羟甲基-γ-丁内酯(Merck)，3，3-二甲基-2-羟基-γ-丁内酯(Aldrich)和2，5-二氢-5-甲氧基-2-呋喃酮(Merck)，其中特别包括所有的立体异构体。
这些化合物对本发明的角蛋白结合效应分子可有利地赋予保湿和皮肤润滑的性能。
维生素B6不是一样物质，而是指5-羟甲基-2-甲基吡啶-3-醇衍生物，其因俗名吡哆醇、吡哆胺和吡哆醛而著名。
维生素B7(生物素)，也称之为维生素H或“皮肤维生素”。生物素是(3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢噻吩[3，4-d]咪唑-4-戊酸。
根据本发明，极其优选泛醇、泛酸内酯、烟酰胺和生物素。
根据本发明，有可能使用合适的衍生物(盐、酯、糖、核苷酸、核苷、肽和脂质)。该族中优选的亲脂性油溶性抗氧化剂是生育酚及其衍生物，镓酯(gallic ester)，类黄酮和类胡萝卜素，以及丁基化的羟基甲苯/茴香醚。优选的水溶性抗氧化剂是氨基酸，如酪氨酸和半胱氨酸以及它们的衍生物，以及丹宁酸特别是植物来源的丹宁酸。
三萜类化合物，特别是三萜酸，例如乌苏酸、迷迭香酸、桦木酸、乳香酸以及泻根酸。
其它优选的效应分子是硫辛酸及其合适的衍生物(盐、酯、糖、核苷酸、核苷、肽和脂质)。
其它优选的效应分子(ii)是紫外线滤光剂，是指能够吸收紫外线并能以长波辐射(如热辐射)的形式再次放射所吸收的能量的有机物质。有机物质可以是油溶性的或水溶性的。
可以使用的油溶性紫外线B滤光剂的实例有下列物质3-亚苄基樟脑及其衍生物，如3-(4-甲基亚苄基)樟脑；4-氨基苯甲酸衍生物，优选4-(二甲基氨基)苯甲酸2-乙基己酯、4-(二甲基氨基)苯甲酸2-辛酯以及4-(二甲氨基)苯甲酸戊酯；肉桂酸酯，优选4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸丙酯、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、2-氰-3-苯基肉桂酸2-乙基己酯(丙烯酸辛酯)；水杨酸酯，优选2-乙基己基水杨酸酯，4-异丙基苯基水杨酸酯、3，5，5-三甲基环己醇水杨酸酯(homomenthyl salicylate)；二苯甲酮的衍生物，优选2-羟基-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4’-甲基二苯甲酮、2，2’-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮；苄叉丙二酸酯，优选4-甲氧基苄叉丙二酸2-乙基己酯；三嗪衍生物，例如2，4，6-三苯胺基-(对羰-2’-乙基-1’-己氧基)-1，3，5-三嗪(辛基三嗪酮)以及二辛基丁氨三嗪酮(UvasorbHEB)丙烷-1，3-二酮，例如1-(4-叔丁苯)-3-(4′-甲氧基苯基)丙烷-1，3-二酮。
合适的水溶性物质有2-苯基苯并咪唑-5-磺酸以及碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、烷基铵盐、烷醇铵盐和谷氨酸铵盐。
二苯甲酮磺酸衍生物，优选2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸及其盐；3-亚苄基樟脑磺酸衍生物，例如4-(2-氧代-3-冰片二烯甲基)苯磺酸和2-甲基-5-(2-氧代-3-冰片二烯)磺酸及其盐。
特别优选使用肉桂酸酯，优选4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、2-氰-3-苯基肉桂酸-2乙基己酯(丙烯酸辛酯)；还优选使用二苯甲酮衍生物，特别是2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4’-甲基二苯甲酮、2，2’-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮；以及使用丙烷-1，3-二酮，例如1-(4-叔丁苯)-3-(4’-甲氧苯基)丙烷-1，3-二酮。
合适的典型紫外线A滤光剂有苯甲酰甲烷衍生物，例如1-(4’-叔丁苯)-3-(4’-甲氧基苯基)丙烷-1，3-二酮、4-叔丁基-4’-甲氧基二苯甲酰甲烷或1-苯基-3-(4’-异丙基苯基)丙烷-1，3-二酮；二苯甲酮的氨基羟基取代衍生物，例如N，N-二乙基氨基羟基苯甲酰-正己基苯甲酸酯。
当然也可采用紫外线A和紫外线B滤光剂的混合物。
下表给出其它合适的紫外滤光剂材料。



除上述的两类主要的光防护物质之外，还有可能采用抗氧化剂型的二级遮光剂，所述遮光剂可中断当紫外线贯穿皮肤时而诱导的链式光化学反应。其典型实例有过氧化物歧化酶、过氧化氢酶、生育酚(维生素E)和抗坏血酸(维生素C)。
其它类有对紫外线损害的皮肤具有抗炎作用的抗刺激剂。这类物质的实例是甜没药萜醇、植醇和植烷三醇。
效应分子(ii)与角蛋白结合多肽序列(i)的连接将效应分子(ii)连接在具有角蛋白结合亲和力的多肽序列(i)上。(i)和(ii)之间的连接既可以是共价键，也可以是基于离子或范德华力的相互作用。
优选共价键。例如，这可以通过多肽序列(i)的侧链进行，特别是通过氨基官能团或羟基官能团或羧酸酯官能团或硫醇官能团。优选通过一个或多个赖氨酸残基的氨基官能团、通过一个或多个半胱氨酸残基的硫醇或通过多肽(i)的N末端或C末端官能团连接。除了存在于多肽序列(i)中的氨基酸官能团以外，还有可能将具有合适官能团的氨基酸(如半胱氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸)连接于多肽序列(i)，或将多肽序列(i)的氨基酸由这样的氨基酸官能团进行取代。
可直接进行效应分子(ii)与多肽序列(i)的连接，即作为早已存在于(i)和(ii)之中的两种化学官能团的共价连接，例如将(i)的氨基官能团连接于(ii)的羧酸酯官能团以产生酰胺。不过，也可通过所谓的接头(即至少为双官能的分子)来进行连接，所述接头通过一种官能团与(i)进行连接，并且通过一种或多种其它官能团连接于(ii)。
如果效应分子(ii)同样由多肽序列组成，则(i)和(ii)可通过所谓的融合蛋白的方式进行连接，即由两部分(i)和(ii)的序列组成的连续多肽序列。
还有可能将所谓的间隔元件插入在(i)和(ii)之间，例如具有蛋白酶、脂肪酶、酯酶、磷酸酶、水解酶的潜在裂解位点的多肽序列，或者使得融合蛋白容易纯化的寡肽序列或多肽序列，例如所谓的组氨酸标签，即寡聚组氨酸残基。
间隔元件可另外由烷基链、乙二醇和聚乙二醇组成。
特别优选地，接头和/或间隔元件具有蛋白酶、脂肪酶、酯酶、磷酸酶、水解酶的潜在裂解位点，即是酶可裂解的。
例如，WO98/01406中公开了可用于本发明分子的酶可裂解的接头的实例，在此明确将其全部内容引用作为参考。
特别优选的接头和间隔物是热可裂解的、光可裂解的。
相应的化学结构是本领域技术人员公知的，并可整合在分子部分(i)和(ii)之间。
在非蛋白质效应分子与多肽序列(i)连接的情况下，优选通过多肽(i)上可功能团化的残基(侧链基团、C或N末端)进行，将其共价连接于效应分子的化学官能团。
在这种情况下，优选通过多肽(i)的氨基、硫醇或羟基官能团进行连接，例如，在合适的情况下，它们经活化后，可与效应分子(ii)的羧基官能团进行相应的酰胺、硫酯或酯连接。
其它优选的多肽序列(i)与效应分子(ii)的连接在于的定制(tailored)接头的使用。这样的接头具有两个或两个以上所谓的锚定基团，其可将多肽序列(i)与一个或多个效应分子(ii)连接起来。例如，用于多肽序列(i)的锚定基团可以是硫醇官能团，借助于此硫醇，接头与多肽(i)的半胱氨酸残基进行二硫键连接。例如，用于效应分子(ii)的锚定基团可以是羧基官能团，借助于此羧基，接头可与效应分子(ii)的羟基官能团进行酯键连接。
使用这样的定制接头，使得连接可准确地匹配期望的效应分子。由此，另外还有可能将大量的效应分子以规定的方式连接到多肽序列(i)上。
所用的接头取决于待偶联的官能团。例如，合适的实例有通过如下的巯基反应基与多肽(i)偶联马来酰亚胺、吡啶基二硫化物、α-卤代乙酰、乙烯砜、硫酸根合烷基砜(优选硫酸根合乙基砜)，并且通过下列基团与效应分子(ii)偶联的分子-巯基反应基(如马来酰亚胺、吡啶基二硫化物、a-卤代乙酰、乙烯砜、硫酸根合烷基砜(优选硫酸根合乙基砜)；-胺反应基(如琥珀酰亚胺酯、碳二亚胺、羟甲基膦、亚氨酸酯、PFP酯等等)；-糖或氧化糖反应基(如酰肼等等)；-羧基反应基(如碳二亚胺等等)；-羟基反应基(如异氰酸酯等等)；-胸腺嘧啶反应基(如补骨脂素等等)；-无选择性基团(如芳基叠氮化物等等)；-光反应活性基团(如全氟代苯叠氮化物等等)；-金属络合基团(如EDTA、六组氨酸(hexahis)、铁蛋白)；-抗体及其片段(如单链抗体、抗体的F(ab)片段、催化抗体)。
可供选择的可能性是在活性物质/效应分子和角蛋白结合结构域之间进行直接缀合，如通过碳二亚胺、戊二醛、上述交联剂或其它为技术人员公知的交联剂。
如果期望，也可以很容易从角蛋白中再次分离本发明的角蛋白结合效应分子。出于该目的，有可能采用的是例如，洗涤角蛋白，藉此将角蛋白结合效应分子从其与角蛋白的既有结合中置换出来，并用洗涤液中的角蛋白进行饱和。因此，有可能进行大量效应分子对角蛋白的可逆附着。或者，用高含量洗涤剂(如SDS)洗涤也有可能用于洗掉效应分子。
根据本发明的角蛋白结合效应分子在人化妆品特别是皮肤和毛发护理、动物护理、皮革护理以及皮革加工中具有广泛的应用范围。
本发明的角蛋白结合效应分子优选用于皮肤、指甲以及毛发化妆品。它们允许皮肤、指甲以及头发护理或皮肤、指甲以及头发保护效应物的高浓度和长效作用时间。
用于生产毛发化妆或皮肤化妆制品的合适辅剂是本领域技术人员熟知的，并可参见化妆手册，例如Schrader，Grundlagen und Rezepturen，derKosmetika，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，ISBN 3-7785-1491-1。
在另一实施方案中，所述毛发化妆或皮肤化妆制品用来护理或保护皮肤或毛发，并可以是下列形态乳剂，分散体，混悬液，水性表面活性剂制品，乳液，洗剂，霜剂，香脂，膏剂，凝胶，粒剂，扑粉，棒剂产品例如口红，泡沫胶，气溶胶或喷雾剂。这样的剂型非常适合于局部制品。合适的乳剂是水包油型乳剂和油包水型乳剂或微乳剂。
头发化妆或皮肤化妆制品通常施用于皮肤(局部)或毛发。就此而言，局部制品指适于将活性物质精细分布到皮肤上、并优选为可透过皮肤吸收形式的制品。适于该目的的实例有水性及醇水溶液、喷雾剂、泡沫胶、泡沫气雾剂、膏剂、水性凝胶剂、水包油或油包水型乳剂、微乳剂或化妆棒产品。
在本发明化妆组合物的优选实施方案中，组合物包含运载体。优选的运载体是水、气体、基于水的液体、油、凝胶、乳剂或微乳剂、分散体或它们的混合物。所述载体为皮肤良好耐受。特别好的局部制品是水凝胶剂、乳剂或微乳剂。
可使用的乳化剂是非离子型表面活性剂、两性离子表面活性剂、两性表面活性剂或阴离子乳化剂。乳化剂基于组合物以重量计为0.1％到10％、优选1％到5％的量存在于本发明的组合物之中。
例如，可以使用选自下列的至少一种表面活性剂来作为非离子型表面活性剂2至30mol环氧乙烷和/或0至5mol环氧丙烷与具有8至22个C原子的直链脂肪醇、与具有12至22个C原子的脂肪酸以及在烷基中具有8至15个C原子的烷基酚的加合物；
1至30mol环氧乙烷与丙三醇的加合物的C12/8脂肪酸单酯和二酯；具有6至22个碳原子的饱和及不饱和脂肪酸及其环氧乙烷加成物的丙三醇单酯及二酯和山梨聚糖单酯及二酯；在烷基中具有8至22碳原子的烷基单糖苷和寡糖苷及其乙氧基化类似物；15至60mol环氧乙烷与蓖麻油和/或硬化蓖麻油的加合物；多元醇酯，特别是聚甘油酯，例如聚丙三醇聚蓖麻醇酸酯、聚丙三醇聚12-羟基硬脂酸酯或聚丙三醇二聚体。来自大量这类物质的化合物混合物同样也是合适的；2至15mol环氧乙烷与蓖麻油和/或硬化蓖麻油的加合物；以直链或支链不饱和或饱和的C6/22脂肪酸、蓖麻醇酸和12-羟基硬脂酸和丙三醇、聚丙三醇、季戊四醇、二季戊四醇、糖醇(如山梨糖醇)、烷基糖苷(如甲基糖苷、丁基糖苷、十二烷基糖苷)以及多聚糖苷(如纤维素)为基础的偏酯。
磷酸单烷基酯、磷酸二烷基酯和磷酸三烷基酯以及PEG-磷酸单烷基酯、PEG-磷酸二烷基酯和/或PEG-磷酸三烷基酯以及它们的盐；羊毛蜡醇；聚硅氧烷-聚烷聚醚共聚物以及相应的衍生物；如DE1165574中所公开的季戊四醇、脂肪酸、柠檬酸以及脂肪醇的混合酯，和/或具有6至22个碳原子的脂肪酸、甲基葡萄糖以及多元醇，优选丙三醇或聚丙三醇的混合酯，以及聚二醇；甜菜碱。
还可使用两性离子表面活性剂作为乳化剂。被称之为两性离子表面活性剂的表面活性剂是在分子中具有至少一个季铵基和至少一个羧酸酯或一个磺酸酯基的表面活性剂。特别合适的两性离子表面活性剂是所谓的甜菜碱，如N-烷基-N，N-二甲基甘氨酸铵，例如椰油烷基二甲基甘氨酸铵，N-酰胺基丙基-N，N-二甲基甘氨酸铵，例如在烷基或酰基中分别具有8至18个碳原子的椰油酰胺基丙基二甲基甘氨酸铵和2-烷基-3-羧甲基-3-羟乙基咪唑啉，以及椰油酰胺基乙基羟乙基羧甲基甘氨酸盐。特别优选的脂肪酰胺衍生物以CTFA命名椰油酰胺基丙基甜菜碱而闻名的衍生物。
同样合适的乳化剂是两性表面活性剂。两性表面活性剂指除了C8，18烷基或酰基以外，在分子中包含至少一个游离氨基和至少一个COOH或SO3H基团并能形成内盐的表面活性化合物。合适的两性表面活性剂的实例是在烷基中分别具有大约8至18个碳原子的N-烷基甘氨酸盐、N-烷基丙酸盐、N-烷基氨基丁酸盐、N-烷基亚氨丙二酸盐、N-羟乙基-N-烷基氨基丙基甘氨酸盐、N-烷基牛磺酸盐、N-烷基肌氨酸盐、2-烷基氨基丙酸盐以及烷基甘氨酸盐。
特别优选的两性表面活性剂是N-椰油烷基氨基丙酸盐、椰油酰胺乙基氨基丙酸盐以及C12/18-酰基肌氨酸盐。除两性乳化剂之外，同样合适的乳化剂还有四元乳化剂，特别优选四酯类型的乳化剂，优选四甲基化的二脂肪酸三乙醇胺酯盐。还可使用的阴离子乳化剂是烷基醚硫酸酯、硫酸甘油一酯、脂肪酸硫酸酯、磺基琥珀酸酯和/或羧酸醚。
合适的油性物质是基于具有6-18个、优选8-10个碳原子的脂肪醇的Guerbet醇，直链C6-C22脂肪酸与直链C6-C22脂肪醇的酯，支链C6-C13羧酸与直链C6-C22脂肪醇的酯，直链C6-C22脂肪酸与支链醇(特别是2-乙基己醇)的酯，直链和/或支链脂肪酸与多羟基醇(例如丙二醇、二聚物二醇或三聚物三醇)的酯和/或guerbet醇，基于C6-C10脂肪酸的甘油三酯，基于C6-C18脂肪酸的液态甘油单酯/二酯、三酯混合物，C6-C22脂肪醇和/或guerbet醇与芳族羧酸(特别是苯甲酸)的酯，C2-C12二羧酸与具有1至22个碳原子的直链或支链醇的酯、或与具有2至10个碳原子以及2至6个羟基的多元醇的酯，植物油，支链伯醇，取代的环己烷，直链C6-C22脂肪醇碳酸酯，guerbet碳酸酯，苯甲酸与直链和/或支链C6-C22醇(如FinsoIvTN)的酯，二烃基醚，环氧化脂肪酸酯与多元醇的开环产物，硅酮油和/或脂族或环烷烃。可采用的其它油性物质是硅酮化合物，例如二甲聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、环硅酮，以及氨基、脂肪酸、醇、聚醚、环氧基、氟、烷基和/或糖苷修饰的硅酮化合物，所述修饰的硅酮化合物在室温下既可以是液态也可以是树脂形式。油性物质基于组合物以重量计为1％至90％、优选5％至80％、并且特别优选10％至50％的量存在于本发明的组合物之中。
通过将合适的化合物偶联到角蛋白结合多肽(i)上可显著地延长对皮肤的持续作用。如上所述进行偶联，并通过本领域技术人员已知的方法进行配制和应用。特别适于作除臭剂的效应分子(ii)是芳香油、环糊精、离子交换剂、蓖麻醇酸锌、抗菌/抑菌化合物(如DCMX、Irgasan DP 300，FCC)。
适用于止汗剂的是丹宁酸和锌/铝盐。
本发明物质的另一应用领域是某些皮肤和粘膜病症的治疗或预防用途。用于治疗/预防的活性物质最好通过角蛋白结合结构域更强和更长时间地结合在特别是在口腔、咽部和鼻隔膜中。其具体的应用范围是-病毒性疾病(如疱疹、柯萨奇病毒、水痘带状疱疹、巨细胞病毒等)；-细菌性疾病(如结核病、梅毒病等)；-真菌性疾病(如念珠菌属病、隐球酵母属病、组织胞浆菌病、曲霉病、毛霉菌病等)；-肿瘤性疾病(如黑素瘤、腺瘤等)；-自身免疫性疾病(如慢性天疱疮、大疱类天疱疮、全身性红斑狼疮等)；-晒伤；-寄生虫感染(如壁虱、螨、跳蚤等)；-昆虫接触(如血液吸啜式昆虫，例如疟蚊等)。
可借助于上述接头(根据待偶联的官能团进行优化的接头)将适于治疗或预防的物质(如类皮质激素、免疫抑制剂化合物、抗生素、抗霉物质、抗病毒化合物、昆虫驱避剂等等)偶联到角蛋白结合多肽(i)上。
实施例1表达载体和生产株对多种表达载体进行表达角蛋白结合结构域(KBD)的测试。出于该目的，可使用多种启动子(如IPTG诱导型、鼠李糖诱导型、阿拉伯糖诱导型、甲醇诱导型、组成型启动子，等等)。同样测试KBD作为融合蛋白(如与硫氧还蛋白、或eGFP或YaaD的融合[B.subtilis，SWISS-PROTP37527，PDX1])进行表达的构建体。本文中，使用多种表达系统来表达所述的KBD-B(角蛋白结合结构域B)和KBD-C(角蛋白结合结构域C)以及这两种结构域KBD-BC的组合。提到的载体构建体对于权利要求书并非限制性的。
作为举例说明是IPTG诱导型载体pQE30-KBD-B(图3)、甲醇诱导型载体pLib15(图4)和pLib16(图5)、以及诱导型载体pLib19(图6)的载体图谱。用于KBD-C的方法也可类似于所述载体的构建和表达。
例如，为了表达KBD，使用多种生产宿主，例如大肠杆菌(E.coli)菌株(参见实施例2；如XL10-Gold[Stratagene]，BL21-CodonPlus[Stratagene]，等等)。不过，也可使用其它细菌生产宿主，例如巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)或枯草杆菌(Bacillus subtilis)。就巨大芽孢杆菌中的表达而言，方法类似于Barg，H.，Malten，M.和Jahn，D.(2005).Proteinand vitamin production in Bacillus megaterium.In Methods inBiotechnology-Microbial Products and Biotransformations(Barredo，J.-L.编辑)。
使用的真菌生产株是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)(参见实施例3；如GS115和KM71[两者均来自Invitrogen]；等等)和构巢曲霉(Aspergillusnidulans)(参见实施例4；如RMS011[Stringer，MA，Dean，RA，Sewall，TC，Timberlake，WE(1991)，Rodletless，a new Aspergillus developmentalmutant induced by direct gene activation.Genes Dev 51161-1171]和SRF200[Karos，M，Fischer，R(1999)，Molecular characterization ofHymA，an evolutionarily highly conserved and highly expressed protein ofAspergillus nidulans.Mol Genet Genomics 260510-521]，等等)。不过，也有可能使用其它的真菌生产宿主，例如用于KBD表达的黑曲霉(Aspergillus niger)(KBD表达类似于EP0635574A1和/或WO98/46772)。
实施例2通过IPTG诱导型启动子如表达质粒pQE30-KBD-B在大肠杆菌中表达KBD为了表达，使用多种生产宿主，例如多种大肠杆菌株(如XL10-Gold[Stratagene]，BL21-CodonPlus[Stratagene]，等等)、巨大芽孢杆菌、枯草杆菌等等。
作为举例说明，文中描述的是通过用pQE30-KBD-B转化大肠杆菌克隆和表达KBD-BpQE30-KBD-B的克隆-从人角化细胞cDNA文库制备λ-MaxiDNA(λDNA Maxi试剂盒，Qiagen)(BD Bioscience，C1ontech，人角化细胞cDNA，包皮，对数期的原代培养物，载体λgt11)。
PCR使用下列寡核苷酸进行Bag 43(5′-GGTCAGTTACGTGCAGCTGAAGG-3’)和Bag 44(5′GCTGAGGCTGCCGGATCG-3’)。
-从琼脂糖凝胶中切下所得到的大小约1102bp的PCR产物，并进行纯化。
-使用纯化的PCR产物作为模板，然后进行第二次PCR使用如下寡核苷酸Bag 53(5′-CGCGCCTCGAGCCACATACTGGTCTGC-3’)和Bag 51(5′-GCTTAGCTGAGGCTGCCGGATCG-3’)。
-从琼脂糖凝胶切下所得到的大小约1073bp的PCR产物，纯化并克隆到下列载体中pCR2.1-TOPO(Invitrogen)。
-然后用得到的载体pCR2.1-TOPO+KBD-B(5027bp)转化大肠杆菌并进行扩增，然后用XhoI和EcoRI酶切，并将得到的KBD-B片段克隆到pBAD/HisA(Invitrogen；同样用XhoI和EcoRI酶切)中。
-用SacI和StuI再次酶切新形成的载体pBAD/HisA+KBD-B(5171bp)，并将得到的KBD-B片段克隆到pQE30(Qiagen；用SacI和SmaI酶切)中。将得到的表达载体pQE30-KBD-B(4321bp；见图3)用于下列的KBD-B表达。
通过载体pQE30-KBD-B在大肠杆菌中表达的KBD-B，除多肽序列SEQ ID NO1中第2193-2481位之外，另外包括N末端的氨基酸MRGSHHHHHHGSACEL和C末端的氨基酸GVDLQPSLIS。通过pQE30-KBD-B在大肠杆菌中表达KBD-B-从被pQE30-KBD-B转化的大肠杆菌株(如XL10-Gold[Stratagene])的平皿或甘油培养物接种预培养物。根据主培养物的大小，用LB培养基(约1∶100)在试管或小烧瓶中进行接种。
-根据所用的菌株使用抗生素(对于pQE30-KBD-B，氨苄青霉素为100μg/ml)。
-在250rpm和37℃进行温育。
-用预培养物以约1∶100接种主培养物(主培养物∶含相应抗生素的LB培养基或适宜的基本培养基)。于250rpm和37℃进行温育。
-在OD(600nm)值超过0.5时，用1mMIPTG进行诱导。
-诱导4h后，离心细胞。
在发酵罐中方法是类似的，虽说有可能在更高OD值时进行诱导，从而大量提高细胞和蛋白质产量。
实施例3使用甲醇诱导型启动子，如表达质粒pLib15和pLib16，通过巴斯德毕赤酵母菌株进行KBD的细胞内表达和分泌表达(摇瓶)为了KBD的表达，使用多种巴斯德毕赤酵母株，例如GS115和KM71(Pichia Expression试剂盒，Version M；Invitrogen LifeTechnologies)。
作为举例说明，文中描述的是用pLib15(细胞内表达，载体见图4)或pLib16(分泌表达，载体见图5)转化的巴斯德毕赤酵母来表达KBD-B。
-为了构建pLib15，以载体pQE30-KBD-B(实施例2，图3)作为模板，使用如下寡核苷酸通过PCR来扩增大小约930bp的编码KBD-B的DNA片段Lib148(5′-GCTAAGGAATTCACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3′)和Lib149(5′-GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3′)。本文中，在PCR产物的两端均引入了EcoRI限制性酶切位点。
-为了构建pLib16，以载体pQE30-KBD-B(实施例2，图3)作为模板，使用如下寡核苷酸通过PCR来扩增大小约930bp的编码KBD-B的DNA片段Lib149(5′-GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3′)和Lib150(5′-GCTAAGGAATTCCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3′)。本文中，在PCR产物的两端均引入了EcoRI限制性酶切位点。
-用寡核苷酸Lib148/Lib149扩增的PCR产物通过EcoRI进行消化，并连接到EcoRI酶切的载体pPIC3.5(Pichia Expression试剂盒，Version M，InVitrogen)中。通过对连接得到的载体pLib15(图4)进行测序，来验证正确的KBD-B扩增。
-用寡核苷酸Lib149/Lib150扩增的PCR产物通过EcoRI进行消化，并连接到EcoRI酶切的载体pPIC9(Pichia Expression试剂盒，Version M，Invitrogen)中。通过对连接得到的载体plib16(图5)进行测序，来验证正确的KBD-B扩增。
-用环状以及StuI线性化的载体pLib15和pLib16转化巴斯德毕赤酵母的电穿孔感受态细胞及原生质球。
-通过PCR以及使用染色体DNA进行Southern印迹分析转化子。
-对于预培养物，从平板或甘油培养物中接种表达KBD-B的巴斯德毕赤酵母转化子。根据主培养物的大小，在试管或小烧瓶中用MGY、BMG或BMGY培养基(约1∶100)(Pichia-Expression-试剂盒，Version M，Invitrogen)进行接种。
-将培养物于250-300rpm和30℃温育直至OD600＝2-6。
-在室温下通过1500-3000×g离心5分钟来收集细胞。
-对于主培养物，将收集的细胞沉淀以OD600＝1分散在含甲醇的mM、BMM或BMMY培养基(Pichia-Expression-试剂盒，Version M，Invitrogen)中，以便诱导表达。
-将主培养物于250-300rpm和30℃温育1-96h。
-通过每24h添加100％甲醇直至0.5％的甲醇终浓度来维持诱导。
-在细胞内表达的情况下，在主培养结束之后，通过Menton-Gaulin法进行收集和破碎细胞。
-在分泌表达的情况下，收集培养物上清，并直接从中纯化KBD-B。
-除多肽序列SEQ ID NO1中第2193-2481位之外，在巴斯德毕赤酵母(pLib15)中细胞内表达的KBD-B另外包括N末端的氨基酸MHHHHHH和C末端的氨基酸GVDLQPSLIS。
-除多肽序列SEQ ID NO1中第2193-2481位之外，在巴斯德毕赤酵母(pLib16)中分泌表达的KBD-B另外包括N末端的氨基酸MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAYVEFHHHHHH和C末端的氨基酸GVDLQPSLIS。
除多肽序列SEQ ID NO1中第2193-2481位之外，通过巴斯德毕赤酵母(pLib16)加工和分泌的KBD-B另外包括N末端的氨基酸YVEFHHHHHH和C末端的氨基酸GVDLQPSLIS。
实施例4使用诱导型alcA启动子，如表达质粒pLib19，通过构巢曲霉菌株表达KBD(摇瓶)为了表达，使用构巢曲霉野生型菌株，例如RMS011或SRF200。作为举例说明，本文中描述的是用pLib19(图6)转化的构巢曲霉来表达KBD-B。
-为了构建pLib19，以载体pQE30-KBD-B(实施例2，图3)作为模板，使用如下寡核苷酸通过PCR来扩增大小约900bp的编码KBD-B的DNA片段Lib151(5′-CACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3′)和Lib152(5′-GCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3′)。降PCR产物连到载体pENTR/D(pENTRTMDirectional TOPOCloning试剂盒，Version E，Invitrogen)中。通过测序来验证正确的KBD-B扩增物。
-使用“Gateway LR clonaseTM enzyme mix”(Invitrogen)，将编码KBD-B的DNA片段重组到载体pMT-OvE中(Toews MW，Warmbold J，Konzack S，Rischitor P，Veith D，Vienken K，Vinuesa C，Wei H，Fischer R；Establishment of mRFP1 as a fluorescent marker in Aspergillus nidulansand construction of expression vectors for high-throughput protein taggingusing recombination in Vitro (GATEWAY).(2004) Curr Genet 45383-389)。这可制备载体pLib19(图6)。
-用环状载体pLib19转化构巢曲霉野生型菌株的原生质体。通过PCR和使用染色体DNA进行Southern印迹分析转化子。
-为进行表达KBD-B的构巢曲霉转化子的预培养，在500ml烧瓶中，用106-107孢子接种100ml基本培养基(0.6％NaNO3、0.152％KH2PO4、0.052％KCl[pH6.5]、0.8％葡萄糖、0.05％MgSO4、1ml痕量元素溶液[1g/lFeSO4×7H2O、8.8g/l ZnSO4×7H2O、0.4g/l CuSO4×5H2O、0.15g/l MnSO4×4H2O、0.1g/l Na2B4O7×10H2O、0.05g/l(NH4)6Mo7O24×4H2O]+菌株特异性的补充物)或100ml完全培养基(2％麦芽精、0.1％蛋白胨、2％葡萄糖+菌株特异性的补充物)，并于200-250rpm和37℃温育16-24h。
-在预培养之后，通过过滤收集真菌菌丝体，用蒸馏水洗涤并转入含有100-500ml新鲜基本培养基的烧瓶中。在该主培养基中，使用0.1％果糖代替葡萄糖来作为碳源。为了诱导KBD表达，另外向培养基中添加乙醇(1％终浓度)或甘油(50mM)或醋酸钠(50mM)或乙胺或苏氨酸。提到的用于诱导表达的添加剂并非限制权利要求。将主培养物于200-250rpm和37℃另外温育5-48h。
-在培养结束后，室温下通过1500-3000×g离心5分钟收集真菌菌丝体，并通过Menton-Gaulin进行破碎。
-除多肽序列SEQID NO1中第2193-2481位之外，在构巢曲霉(pLib19)中表达的KBD-B另外包括N末端的氨基酸MHHHHHH和C末端的氨基酸KGGRADPAFLYKVVMIRLLTKPERKLLEGGPGTQLLFPLVRVNCALGVIMVIAVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKV。
实施例5细胞破碎和包涵体纯化(pQE30-KBD-B)可溶性表达的KBD纯化后可直接使用所。非可溶性表达的KBD(如在包涵体中)如下纯化-离心发酵物质，将沉淀悬浮在20mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)中，并通过Menton-Gaulin进行破碎。
-再次离心破碎的细胞(15 000g)，用20mm磷酸盐、500mm NaCl以及8M尿素处理从中所得的沉淀，并进行搅拌。
(包涵体的溶解)-调节上清pH至7.5。
-然后再次进行离心，并将上清施加到Ni螯合的琼脂糖凝胶柱上。实施例6角蛋白结合结构域B在Ni螯合的琼脂糖凝胶柱上的纯化通过Ni柱上对His标签的吸附，可色谱纯化KBD。
柱填充材料高性能的Ni-琼脂糖凝胶，Amersham Biosciences定购号No.17-5268-02将材料填入柱(如直径2.6cm、高度10cm)中，并用缓冲液A+4％缓冲液B(相当于20mM咪唑)进行平衡。
使用Superloop(KTA系统)(流速约5ml/min)，在pH7.5时将蛋白质提取物(参见细胞破碎和包涵体纯化)加到柱上。
加柱后，用缓冲液A+20mM咪唑进行洗涤。用缓冲液B(500mM咪唑的缓冲液A)进行洗脱。
使用馏分收集器，收集级分中的洗脱液。
缓冲液A20mM磷酸二氢钠500mM NaCl8M尿素pH＝7.40缓冲液B20mM磷酸二氢钠500mM NaCl8M尿素500mM 咪唑pH＝7.40实施例7角蛋白结合结构域B的复性。
如下所示，复性并活化非可溶性表达的角蛋白结合结构域(如来自包涵体)方法1间歇透析在8M尿素(Ni螯合洗脱液，HiTrap)中，将6.5ml Cellytic IB(Sigma，定购号No.C5236)和5mM DTT加入到6.5ml KBD-B包涵体中。然后将待复性的溶液倒入透析管(SpectrumSpectra Por MWCO12-14kD)中。
在4℃，通过小心搅拌，以1L的6M尿素溶液进行透析约12小时。
然后加入500ml的25mM Tris/HCl(pH＝7.50)，并在4℃像这样进行透析9小时。随后加入另外的250ml Tris缓冲液(见上文)，并另外透析12小时。
然后再次加入500ml 25mM的Tris/HCl(pH＝7.50)，并在4℃像这样进行透析9小时。随后加入另外的250ml Tris缓冲液(见上文)，并另外透析12小时。
然后再次加入500ml 25mM的Tris/HCl(pH＝7.50)，并在4℃像这样进行透析9小时。然后将包含透析液的透析管放入2L的25mM Tris+150mMNaCl(pH＝7.50)中。然后在4℃再次进行透析12小时。
然后取出透析管中的内含物。
方法2连续透析在8M尿素溶液(Ni螯合洗脱液，HiTrap)中，用10ml Cellytic IB(Sigma，定购号No.C5236)和5mM DTT处理20ml KBD-B包涵体。然后将溶液倒入透析室Slide-A-Lyzer Dialyses Cassette PIERCE，MWCO10kD。定购号No.66830。
然后在4℃用1L的6M尿素溶液进行透析约1小时。
然后，在48h期间内，通过蠕动泵连续计量2L如下缓冲液25mMTris/HCl(pH＝7.5)。
然后向含有透析液的透析管中加入2L终止缓冲液25mM Tris+150mM NaCl(pH＝7.50)，并在4℃进行透析约12小时。
然后取出透析管中的内含物。
实施例8与皮肤的结合1(定性)开发了可视的定性试验以研究KBD是否结合皮肤。
所用的溶液封闭液DIG洗液+稀释在TBS中的缓冲液系列1585762 BoehringerMA(10×溶液)。
TBS20mM Tris；150mM NaCl，pH7.5TTBSTBS+0.05％Tween20第一步是将皮肤的外层角蛋白转移到稳定的支持物上。出于该目的，将透明胶带牢固地粘到脱毛的人皮肤上，并再次取下。可直接在透明胶带上进行测试，或者利用新的粘附力将粘附的角蛋白层转到载玻片上。如下验证结合
-为了用多种试剂进行温育，转入Falcon管；-如果适用，加入乙醇进行脱脂，除去乙醇并干燥载玻片；-室温下与封闭缓冲液一起温育1h；-用TTBS洗涤2次，每次5分钟；-用TBS洗涤1次5分钟；-在TBS/0.05％Tween 20中与待测KBD(偶联于标签，如His6、HA等)或对照蛋白质于室温温育2-4h；-除去上清；-用TBS洗涤3次；-与在TBS+0.01％封闭液中按1∶2000稀释的单克隆抗聚组氨酸(或特异性的兔KBD)抗体于室温温育1h；-用TTBS洗涤2次，每次5分钟；-用TBS洗涤1次5分钟；-与在TBS+0.01％封闭液中按1∶5000稀释的抗小鼠IgG碱性磷酸酶缀合物于室温温育1h；-用TTBS洗涤2次，每次5分钟；-用TBS洗涤1次5分钟；-加入磷酸酶底物(NBT-BCIP；Boehringer MA 1片/40ml水，反应2.5分钟；用水终止反应)-用肉眼或使用显微镜光学检测有色沉淀物。蓝色沉淀物表示KBD已结合于皮肤。
实施例9与皮肤的结合2(定量)开发了定量试验，可用之比较非特异性蛋白质以及KBD对毛发/皮肤的结合强度，。
使用5mm打孔器在解冻的、无毛发的皮肤(人或猪)干碎片上钻出切片(或就表面测试而言，将皮肤切片插入Falcon载片中)。然后将皮肤样品处理成2-3mm厚，以除去任何存在的组织。然后将皮肤样品转入Eppendorf管(蛋白质弱结合)以进行结合验证(参见图7)-用PBS/0.05％Tween 20洗涤2次；-加入1ml 1％BSA的PBS溶液，并于室温轻柔转动(900rpm)温育1h。
-除去上清。
-在具有0.05％Tween 20的PBS中，加入100μg KBD；室温温育2h并轻柔转动(900rpm)。
-除去上清-用PBS/0.05％Tween 20洗涤3次。
-与1ml单克隆小鼠抗标签(His6或HA或特异性KBD)抗体的过氧化物酶缀合物(1∶2000溶于具有0.05％Tween 20的PBS)[在小鼠中制备的单克隆抗聚组氨酸过氧化物酶缀合物冻干粉，Sigma]于室温温育2-4h，轻柔转动(900rpm)。
-用PBS/0.05％Tween 20洗涤3次。
-加入过氧化物酶底物(1ml/Eppendorf管；组成参见下文)。
-允许反应进行到蓝色显色为止(约90秒)。
-用100μl 2M H2SO4终止反应。
-在450nm测量光吸收值。
过氧化物酶底物(预先新制备)0.1ml TMB溶液(42mM TMB的DMSO液)+10ml底物缓冲液(0.1M乙酸钠，pH4.9)+14.7μl H2O2，浓度为3％实施例10与毛发的结合(定量)为了能证明KBD对毛发的结合强度也与其它蛋白相关，开发了定量测定法(参见图7)。在该测试中，首先将毛发与KBD一起温育，并洗去过量的KBD。然后通过KBD的His标签与抗体-过氧化物酶缀合物偶联。再次洗去未结合的抗体-过氧化物酶缀合物。结合的抗体-过氧化物酶缀合物[单克隆抗聚组氨酸过氧化物酶缀合物，在小鼠中制备的冻干粉，Sigma]可将无色底物(TMB)转化为可在405nm处进行光度法测量的有色产物。吸光强度表示结合的KBD或对照蛋白质的量。例如，对照蛋白质选自枯草杆菌的YaaD，其同样具有[为该测试所必需的]用于检测的His标签。还可使用其它特异性抗体的过氧化物酶缀合物来代替His标签。
将5mg毛发(人)切成5mm长的切片，并转入Eppendorf管(蛋白弱结合)以便进行结合验证-加入用于脱脂的1ml乙醇；-离心，除去乙醇并用H2O洗涤；-加入1ml 1％BSA的PBS溶液，并在室温轻柔转动温育1h；-离心、除去上清；-在1ml的PBS/0.05％Tween 20中加入待测的角蛋白结合结构域(偶联于标签，如His6、HA等等)或对照蛋白质；在4℃轻柔转动以温育16h(或室温温育至少2h)；-离心、除去上清；-用PBS/0.05％Tween 20洗涤3次；-将1ml单克隆小鼠抗标签(His6或HA或特异性KBD)抗体的过氧化物酶缀合物(1∶2000溶于PBS/0.05％Tween 20)[在小鼠中制备的单克隆抗聚组氨酸的过氧化物酶缀合物冻干粉，Sigma]一起轻柔转动于室温温育2-4h；-用PBS/0.05％Tween 30洗涤3次；-加入过氧化物酶底物(1ml/Eppendorf管)；-允许反应进行到蓝色显色为止(约2分钟)；-用100μl的2M H2SO4终止反应。
-在450nm测量光吸收值。
过氧化物酶底物(预先新制备)
0.1ml TMB溶液(42mM TMB的DMSO液)；+10ml底物缓冲液(0.1M乙酸钠，pH4.9)；+14.7μl H2O2，浓度为3％。
BSA＝牛血清白蛋白；PBS＝磷酸盐缓冲盐溶液；Tween 20＝聚氧乙烯单月桂酸山梨聚糖酯，n约20；TMB＝3，5，3′，5′-N四甲联苯胺。
在毛发上进行的以KBD-B为例的结合测试，证明与对照蛋白质YaaD的显著弱的结合相比，KBD-B对毛发的结合具有相当的优势

表1毛发的KBD定量活性测试1)缓冲液；2)对照蛋白质YaaD；3)变性的KBD-B；4)复性的KBD-B。该表显示了在405nm所测的吸收值。实施例10a染料与KBD-B的偶联为了将荧光染料(Alexa Fluor 532，Molecular Probes/Invitrogen)与KBD-B蛋白偶联，根据下列方法通过半胱氨酸硫醇基的马来酸二酰亚胺接头来偶联染料。反应如图8中所示。
-将1mg Alexa Fluor 532溶于150μl PBS缓冲液(pH＝7.0)之中；随后短暂离心以除去任何不溶组分；-将10μl溶解的染料加入100μg KBD-B(1mg/ml)中；-用铝箔覆盖混合物，并在振荡器上以450pm于24℃温育1小时；-加入10μl的1M DTT来失活未反应的Alexa Fluor 532的马来酸二酰亚胺官能团；-然后在450pm和24℃温育(用铝箔覆盖)30分钟。
通过活性测试(参见实施例9和10)，测定到偶联有Alexa Fluor 532的KBD-B与皮肤/毛发的偶联。类似于实施例9或10结合在皮肤或毛发上的KBD-B-Alexa Fluor 532偶联，可很容易地用荧光显微镜在毛发上(于吸收532nm/发射590nm处检测，见图9)或用肉眼在漂白的毛发上进行检测。
实施例11KBD在水包油型日护理乳剂中的作用AI 1％％ 成分(INCI)A 1.7 鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇0.7 鲸蜡硬脂醇醚-252.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯2.0 PEG-14二甲基硅油3.6 鲸蜡硬脂醇6.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 己二酸二丁酯B 5.0 甘油0.2 乙二胺四乙酸钠1.0 泛醇适量 防腐剂67.8 水C 4.0 辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物D 0.2 维生素C磷酸钠1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇1.0 辛酸/癸酸甘油三酯、抗坏血酸钠、生育酚、视黄醇
1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液E 适量氢氧化钠AI 5％％ 成分(INCI)A 1.7 鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇0.7 鲸蜡硬脂醇醚-252.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯2.0 PEG-14-二甲基硅油3.6 鲸蜡硬脂醇6.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 己二酸二丁酯B 5.0 甘油0.2 乙二胺四乙酸钠1.0 泛醇适量防腐剂63.8水C 4.0 辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物D 0.2 维生素C磷酸钠1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇1.0 辛酸/癸酸甘油三酯、抗坏血酸钠、生育酚、视黄醇5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液E 适量氢氧化钠配制彼此单独加热A相和B相至约80℃。将B相边搅拌边倒入A相中，并搅匀。将C相边搅拌边混合入A与B的混合相中，并再次搅匀。搅拌冷却至约40℃，加入D相，用E相调节pH至约6.5，搅匀，并搅拌冷却至室温。
注意制备制剂无需保护气。必须在不透氧的包装中进行灌装，如铝管。
实施例12KBD在水包油型保护性日霜中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 1.7 鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇0.7 鲸蜡硬脂醇醚-252.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯2.0 PEG-14甲基硅油3.6 鲸蜡硬脂醇6.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 己二酸二丁酯B 5.0 甘油0.2 乙二胺四乙酸钠1.0 泛醇适量防腐剂68.6水C 4.0 辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物D 1.0 维生素C磷酸钠1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液E 适量氢氧化钠AI 5％％ 成分(INCI)
A 1.7鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇0.7鲸蜡硬脂醇醚-252.0二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯2.0PEG-14二甲基硅油3.6鲸蜡硬脂醇6.0乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0己二酸二丁酯B 5.0甘油0.2乙二胺四乙酸钠1.0泛醇适量 防腐剂64.6 水C 4.0辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物D 1.0维生素C磷酸钠1.0醋酸生育酚0.2甜没药萜醇5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液E 适量 氢氧化钠配制彼此单独加热A相和B相至约80℃。将B相边搅拌边倒入A相中，并搅匀。将C相倒入A与B的混合相中，并搅匀。搅拌冷却至约40℃。加入D相，用E相调节pH至约6.5并搅匀。搅拌冷却至室温。
实施例13KBD在水包油型洁面洗剂中的用途AI 1％％成分(INCI)A 10.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯10.0 辛酸/癸酸甘油三酯
1.5 环戊硅氧烷、环己硅氧烷2.0 PEG-40氢化蓖麻油B 3.5 辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物C 1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇适量 防腐剂适量 芳香油D 3.0 聚季铵盐-440.5 椰油三甲基硫酸甲酯铵0.5 鲸蜡硬脂醇醚-252.0 泛醇、丙二醇4.0 丙二醇0.1 乙二胺四乙酸钠1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液60.7 水AI 5％％ 成分(INCI)A 10.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯10.0 辛酸/癸酸甘油三酯1.5 环戊硅氧烷、环己硅氧烷2.0 PEG-40氢化蓖麻油B 3.5 辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸钠共聚物C 1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇适量 防腐剂适量 芳香油D 3.0 聚季铵盐-44
0.5 椰油三甲基硫酸甲酯铵0.5 鲸蜡硬脂醇醚-252.0 泛醇、丙二醇4.0 丙二醇0.1 乙二胺四乙酸钠5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液56.7 水配制溶解A相。将B相边搅拌边倒入A相中。将C相倒入A与B的混合相中。溶解D相，边搅拌边倒入A、B和C的混合相中，并搅匀。之后搅拌15分钟。
实施例14KBD在日常护理身体喷雾剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 3.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯1.0 聚季铵盐-443.0 丙二醇2.0 泛醇、丙二醇1.0 环戊硅氧烷、环己硅氧烷10.0 辛基十二醇0.5 PVP10.0 辛酸/癸酸甘油三酯3.0 C12-15烷基苯甲酸酯3.0 甘油1.0 醋酸生育酚0.3 甜没药萜醇
1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液59.2 醇AI 5％％ 成分(INCI)A 3.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯1.0 聚季铵盐-443.0 丙二醇2.0 泛醇、丙二醇1.0 环戊硅氧烷、环己硅氧烷10.0 辛基十二醇0.5 PVP10.0 辛酸/癸酸甘油三酯3.0 C12-15烷基苯甲酸酯3.0 甘油1.0 醋酸生育酚0.3 甜没药萜醇5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液55.2 醇配制称重并溶解A相组分直至澄清。
实施例15KBD在皮肤护理凝胶剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 3.6 PEG-40氢化蓖麻油15.0 醇
0.1 甜没药萜醇0.5 醋酸生育酚适量 芳香油B 3.0 泛醇0.6 卡波姆1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液75.4 水C 0.8 三乙醇胺AI 5％％ 成分(INCI)A 3.6 PEG-40氢化蓖麻油15.0 醇0.1 甜没药萜醇0.5 醋酸生育酚适量 芳香油B 3.0 泛醇0.6 卡波姆5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液71.4 水C 0.8 三乙醇胺配制溶解A相直到澄清。使得B相膨胀并用C相中和。将A相边搅拌边倒入均匀的B相中，并搅匀。
实施例16KBD在剃须后修护液中的用途AI 1％％ 成分(INCI)
A 10.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0醋酸生育酚1.0甜没药萜醇0.1芳香油0.3丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物B 15.0 醇1.0泛醇3.0甘油1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.1三乙醇胺63.5 水AI 5％％成分(INCI)A 10.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0醋酸生育酚1.0甜没药萜醇0.1芳香油0.3丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物B 15.0 醇1.0泛醇3.0甘油5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.1三乙醇胺59.5 水配制混合A相的组分。溶解B相，掺入到A相中并搅匀。
实施例17KBD在日晒后洗剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 0.4 丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物15.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯0.2 甜没药萜醇1.0 醋酸生育酚适量 芳香油B 1.0 泛醇15.0 醇3.0 甘油1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液63.2 水C 0.2 三乙醇胺AI 5％％ 成分(INCI)A 0.4 丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物15.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯0.2 甜没药萜醇1.0 醋酸生育酚适量 芳香油B 1.0 泛醇15.0 醇3.0 甘油5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液59.2 水C 0.2 三乙醇胺配制混合A相的组分。将B相边搅拌边倒入A相中。用C相中和并再次搅匀。
实施例18KBD在遮光洗剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 4.5 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯3.0 丙烯酸辛酯2.5 二C12-13烷基苹果酸酯0.5 醋酸生育酚4.0 聚甘油-3甲基葡萄糖二硬脂酸酯B 3.5 异壬酸鲸蜡硬脂酯1.0 VP/二十碳烷共聚物5.0 异十六烷2.5 二C12-13烷基苹果酸酯3.0 二氧化钛、三甲氧辛酰硅烷C 5.0 甘油1.0 鲸蜡硬脂硫酸钠0.5 黄原胶59.7 水D 1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0 苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯0.3 甜没药萜醇AI 5％
％ 成分(INCI)A 4.5 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 二乙基基氨羟基苯甲酰己基苯甲酸酯3.0 丙烯酸辛酯2.5 二C12-13烷基苹果酸酯0.5 醋酸生育酚4.0 聚甘油-3甲基葡萄糖二硬脂酸酯B 3.5 异壬酸鲸蜡硬脂酯1.0 VP/二十碳烷共聚物5.0 异十六烷2.5 二C12-13烷基苹果酸3.0 二氧化钛、三甲氧辛酰硅烷C 5.0 甘油1.0 鲸蜡硬脂硫酸钠0.5 黄原胶55.7 水D 5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0 苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯0.3 甜没药萜醇配制彼此单独加热A相和B相的组分至约80℃。将B相边搅拌边倒入A相中，并搅匀。将C相加热至约80℃，搅拌倒入A和B的混合相并搅匀。搅拌冷却至约40℃，加入D相并再次搅匀。
实施例19KBD在水包油型遮光洗剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)
A 2.0 鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇2.0 鲸蜡硬脂醇醚-253.0 山萮酸甲酯2.0 鲸蜡硬脂醇2.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯1.0 乙基己基三嗪酮1.0 VP/二十碳烷共聚物7.0 肉豆蔻酸异丙酯B 5.0 锌氧化物、三乙氧基辛酸硅烷C 0.2 黄原胶0.5 羟乙基丙烯酸酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、角鲨烷、聚山梨酸酯600.2 乙二胺四乙酸钠5.0 丙二醇0.5 泛醇60.9 水D 1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇AI 5％％成分(INCI)A 2.0 鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇2.0 鲸蜡硬脂醇醚-253.0 山萮酸甲酯
2.0 鲸蜡硬脂醇2.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0 乙基己基甲氧基肉桂酸酯1.0 乙基己基三嗪酮1.0 VP/二十碳烷共聚物7.0 肉豆蔻酸异丙酯B 5.0 锌氧化物、三乙氧基辛酸硅烷C 0.2 黄原胶0.5 羟乙基丙烯酸酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、角鲨烷、聚山梨酸酯600.2 乙二胺四乙酸钠5.0 丙二醇0.5 泛醇56.9 水D 5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇配制加热A相至约80℃，搅拌倒入B相并搅匀3分钟。同样地加热C相至80℃，搅拌倒入A和B混合相中并搅匀。冷却至约40℃，搅拌倒入D相并再次搅匀实施例20KBD在水包油型遮光洗剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 3.5 鲸蜡硬脂醇醚-6，十八醇
1.5 鲸蜡硬脂醇醚-257.5 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯2.0 环戊硅氧烷、环己硅氧烷0.5 蜂蜡3.0 鲸蜡硬脂醇10.0 辛酸/癸酸甘油三酯B 5.0 二氧化钛、硅石、甲基硅油、矾土C 3.0 甘油0.2 乙二胺四乙酸钠0.3 黄原胶1.0 癸基糖苷2.0 泛醇、丙二醇56.3 水D 1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇适量 芳香油适量 防腐剂AI 5％％ 成分(INCI)A 3.5 鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇1.5 鲸蜡硬脂醇醚-257.5 乙基己基甲氧基肉桂酸酯2.0 二乙基氨基羟基苯甲酰己基苯甲酸酯2.0 环戊硅氧烷、环己硅氧烷0.5 蜂蜡
3.0 鲸蜡硬脂醇10.0 辛酸/癸酸甘油三酯B 5.0 二氧化钛、硅石、甲基硅油、矾土C 3.0 甘油0.2 乙二胺四乙酸钠0.3 黄原胶1.0 癸基糖苷2.0 泛醇、丙二醇52.3 水D 5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0 醋酸生育酚0.2 甜没药萜醇适量 芳香油适量 防腐剂配制加热A相至约80℃，搅拌倒入B相并搅匀3分钟。同样地，加热C相至80℃，搅拌倒入A和B的混合相中并搅匀。冷却至约40℃，搅拌倒入D相并再次搅匀。
实施例21KBD在足部香膏中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 2.0 鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇2.0 鲸蜡硬脂醇醚-255.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯4.0 鲸蜡醇4.0 硬脂酸甘油酯5.0 矿物油
0.2 薄荷醇0.5 樟脑B 69.3 水适量 防腐剂C 1.0 甜没药萜醇1.0 醋酸生育酚D 1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液5.0 金缕梅提取物AI 5％％ 成分(INCI)A 2.0 鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇2.0 鲸蜡硬脂醇醚-255.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯4.0 鲸蜡醇4.0 硬脂酸甘油酯5.0 矿物油0.2 薄荷醇0.5 樟脑B 65.3 水适量 防腐剂C 1.0 甜没药萜醇1.0 醋酸生育酚D 5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液5.0 金缕梅提取物配制彼此单独加热A相和B相的组分至约80℃。将B相搅拌倒入A相中。搅拌冷却至约40℃，短暂搅匀后加入C相和D相。搅拌冷却至室温。
实施例22KBD在具有甜没药萜醇的油包水型乳剂中的用途AI 1％％ 成分(INCI)A 6.0 PEG-7氢化蓖麻油8.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0 肉豆蔻酸异丙酯15.0 矿物油0.3 硬脂酸镁0.3 硬脂酸铝2.0 PEG-45/十二烷基乙二醇共聚物B 5.0 甘油0.7 硫酸镁55.6 水C 1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 醋酸生育酚0.6 甜没药萜醇AI 5％％ 成分(INCI)A 6.0 PEG-7氢化蓖麻油8.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0 肉豆蔻酸异丙酯15.0 矿物油0.3 硬脂酸镁0.3 硬脂酸铝2.0 PEG-45/十二烷基乙二醇共聚物
B 5.0 甘油0.7 硫酸镁51.6 水C 5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 醋酸生育酚配制彼此单独加热A相和B相至约85℃。将B相搅拌倒A相中，并搅匀。搅拌冷却至约40℃，加入C相并再次短暂搅匀。搅拌冷却至室温。
用于专利角蛋白结合结构域的制剂列表-护发实施例23具有定型剂的泡沫胶调理剂AI 1％％ 成分(INCI)A 10.0 PVP/VA共聚物0.2 羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵0.2 鲸蜡硬脂醇醚-250.5 二甲基硅油共聚醇适量 芳香油10.0 醇1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液68.1 水10.0 丙烷/丁烷AI 5％％ 成分(INCI)A 10.0 PVP/VA共聚物0.2 羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵0.2 鲸蜡硬脂醇醚-25
0.5 二甲基硅油共聚醇适量 芳香油10.0 醇5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液64.1 水10.0 丙烷/丁烷配制一起称重A相的组分，搅拌直至所有成分溶解并灌装。
实施例24泡沫胶调理剂AI 1％％ 成分(INCI)A 1.0 聚季铵盐-40.5 羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 芳香油适量 防腐剂91.5 水6.0 丙烷/丁烷AI 5％％ 成分(INCI)A 1.0 聚季铵盐-40.5 羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 芳香油适量 防腐剂87.5 水
6.0 丙烷/丁烷配制一起称重A相的组分，搅拌直至所有成分溶解产生清液并灌装。
实施例25泡沫胶调理剂AI 1％％ 成分(INCI)A 1.0 聚季铵盐-110.5 羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 芳香油适量 防腐剂91.5 水6.0 丙烷/丁烷AI 5％％ 成分(INCI)A 1.0 聚季铵盐-110.5 羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 芳香油适量 防腐剂87.5 水6.0 丙烷/丁烷配制一起称重A相的组分，搅拌直至所有成分溶解产生清液并灌装。
实施例26发型泡沫胶
AI 1％％ 成分(INCI)A 0.5 月桂醇醚-4适量 芳香油B 77.3 水10.0 聚季铵盐-281.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 二甲基硅油共聚醇0.2 鲸蜡硬脂醇醚-250.2 泛醇0.1 PEG-25PABA0.2 羟乙基纤维素C 10.0 HFC 152AAI 5％％ 成分(INCI)A 0.5 月桂醇醚-4适量 芳香油B 73.3 水10.0 聚季铵盐-285.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 二甲基硅油共聚醇0.2 鲸蜡硬脂醇醚-250.2 泛醇0.1 PEG-25PABA0.2 羟乙基纤维素C 10.0 HFC 152A
配制混合A相的组分。逐个加入B相的组分并溶解。与C相一起灌装。
实施例27发型泡沫胶AI 1％％ 成分(INCI)A 2.0 椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 78.5 水6.7 丙烯酸酯共聚物0.6 AMP1.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 二甲基硅油共聚醇0.2 鲸蜡硬脂醇醚-250.2 泛醇0.1 PEG-25PABA0.2 羟乙基纤维素C 10.0 HFC 152AAI 5％％ 成分(INCI)A 2.0 椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 74.5 水6.7 丙烯酸酯共聚物0.6 AMP5.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5 二甲基硅油共聚醇
0.2 鲸蜡硬脂醇醚-250.2 泛醇0.1 PEG-25PABA0.2 羟乙基纤维素C 10.0 HFC 152A配制混合A相的组分。逐个加入B相的组分并溶解。与C相一起灌装。
实施例28发型泡沫胶AI 1％％ 成分(INCI)A 2，0 椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 7.70 聚季铵盐-441.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 防腐剂79.3 水C 10.0 丙烷/丁烷AI 5％％ 成分(INCI)A 2.0 椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 7.70 聚季铵盐-445.0 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 防腐剂75.3 水
C 10.0 丙烷/丁烷配制混合A相的组分。溶解B相组分直至澄清，然后将B相搅拌倒入A相。调节pH至6-7，与C相一起灌装。
实施例29发型泡沫胶AI 1％％成分(INCI)A 2.00 椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 72.32 水2.00 VP/丙烯酸酯/甲基丙烯酸十二酯共聚物0.53 AMP1.00 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.20 鲸蜡硬脂醇醚-250.50 泛醇0.05 二苯甲酮-40.20 氨基二甲基硅油、十六烷基三甲基氯化铵、十三烷基聚氧乙烯醚-1215.00 醇C 0.20 羟乙基纤维素D 6.00 丙烷/丁烷AI 5％％成分(INCI)A 2.00 椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 68.32 水
2.00 VP/丙烯酸酯/甲基丙烯酸十二酯共聚物0.53 AMP5.00 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.20 鲸蜡硬脂醇醚-250.50 泛醇0.05 二苯甲酮-40.20 氨基二甲基硅油、十六烷基三甲基氯化铵、十三烷基聚氧乙烯醚-1215.00 醇C 0.20 羟乙基纤维素D 6.00 丙烷/丁烷配制混合A相的组分。逐个加入B相的组分并溶解。将C相溶于A和B混合相中，然后调节pH至6-7。与D相一起灌装。
实施例30发型泡沫胶AI 1％％成分(INCI)A 2.00 十六烷基三甲基氯化铵适量 芳香油B 67.85 水7.00 聚季铵盐-461.00 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.20 鲸蜡硬脂醇醚-250.50 泛醇0.05 二苯甲酮-40.20 氨基二甲基硅油、十六烷基三甲基氯化铵、十三烷基聚氧乙烯醚-12
15.00 醇C 0.20 羟乙基纤维素D 6.00 丙烷/丁烷AI 5％％成分(INCI)A 2.00 十六烷基三甲基氯化铵适量 芳香油B 63.85 水7.00 聚季铵盐-465.00 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.20 鲸蜡硬脂醇醚-250.50 泛醇0.05 二苯甲酮-40.20 氨基二甲基硅油、十六烷基三甲基氯化铵、十三烷基聚氧乙烯醚-1215.00 醇C 0.20 羟乙基纤维素D 6.00 丙烷/丁烷配制混合A相的组分。逐个加入B相的组分并溶解。将C相溶于A和B混合相中，然后调节pH至6-7。与D相一起灌装。
实施例31发型泡沫胶AI 1％％成分(INCI)A 适量 PEG-40氢化蓖麻油适量 芳香油
85.5 水B 7.0聚苯乙烯磺酸钠1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5十六烷基三甲基溴化铵适量 防腐剂C 6.0丙烷/丁烷发型泡沫胶AI 5％％成分(INCI)A 适量 PEG-40氢化蓖麻油适量 芳香油81.5 水B 7.0聚苯乙烯磺酸钠5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5十六烷基三甲基溴化铵适量 防腐剂C 6.0丙烷/丁烷配制溶解A相。称取B相加入A相中，并溶解直至澄清。调节pH至6-7，与C相一起灌装。
实施例32发型泡沫胶AI 1％％成分(INCI)A 适量 PEG-40氢化蓖麻油适量 芳香油92.0 水
B 0.5聚季铵盐-101.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5十六烷基三甲基溴化铵适量 防腐剂C 6.0丙烷/丁烷AI 5％％成分(INCI)A 适量 PEG-40氢化蓖麻油适量 芳香油88.0 水B 0.5聚季铵盐-105.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5十六烷基三甲基溴化铵适量 防腐剂C 6.0丙烷/丁烷配制溶解A相。称取B相加入A相中，并溶解直至澄清。调节pH至6-7，与C相一起灌装。
实施例32发型泡沫胶AI 1％％成分(INCI)A 适量 PEG-40氢化蓖麻油适量 芳香油82.5 水B 10.0 聚季铵盐-161.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液
0.5羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵适量 防腐剂C 6.0丙烷/丁烷AI 5％％成分(INCI)A 适量 PEG-40氢化蓖麻油适量 芳香油78.5 水B 10.0 聚季铵盐-165.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5羟乙基鲸蜡二甲基磷酸铵适量 防腐剂C 6.0丙烷/丁烷配制溶解A相。称取B相加入A相中，并溶解直至澄清。调节pH至6-7，与C相一起灌装。
实施例33发型泡沫胶AI 1％％成分(INCI)A 2.0椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 84.0 水2.0壳聚糖1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5二甲基硅油共聚醇0.2鲸蜡硬脂醇醚-25
0.2泛醇0.1PEG-25PABAC 10.0 HFC 152AAI 5％％成分(INCI)A 2.0椰油三甲基硫酸甲酯铵适量 芳香油B 80.0 水2.0壳聚糖5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.5二甲基硅油共聚醇0.2鲸蜡硬脂醇醚-250.2泛醇0.1PEG-25PABAC 10.0 HFC 152A配制混合A相的组分。逐个加入B相的组分并溶解。与C相一起灌装。
实施例34护理洗发香波AI 1％％成分(INCI)A 30.0 月桂醇醚硫酸钠6.0椰油酰两性基乙酸钠6.0椰油酰氨基丙基甜菜碱3.0月桂醇醚硫酸钠、乙二醇二硬脂酸酯、椰油酰胺MEA、月桂醇醚-10
1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液7.7聚季铵盐-442.0氨基二甲基硅油适量 芳香油适量 防腐剂1.0氯化钠43.3 水B 适量 柠檬酸AI 5％％成分(INCI)A 30.0 月桂醇醚硫酸钠6.0椰油酰两性基乙酸钠6.0椰油酰氨基丙基甜菜碱3.0月桂醇醚硫酸钠、乙二醇二硬脂酸酯、椰油酰胺MEA、月桂醇醚-105.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液7.7聚季铵盐-442.0氨基二甲基硅油适量 芳香油适量 防腐剂1.0氯化钠39.3 水B 适量 柠檬酸配制混合A相的组分并溶解。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例35淋浴露
AI 1％％成分(INCI)A 40.0 月桂醇醚硫酸钠5.0癸基糖苷5.0椰油酰氨基丙基甜菜碱1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0泛醇适量 芳香油适量 防腐剂2.0氯化钠46.0 水B 适量 柠檬酸AI 5％％成分(INCI)A 40.0 月桂醇醚硫酸钠5.0癸基糖苷5.0椰油酰氨基丙基甜菜碱5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0泛醇适量 芳香油适量 防腐剂2.0氯化钠42.0 水B 适量 柠檬酸配制混合A相的组分。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例36洗发香波AI 1％％成分(INCI)A 40.0 月桂醇醚硫酸钠5.0C12-15棕榈油醚-15磺酸钠5.0癸基糖苷适量 芳香油0.1植烷三醇44.6 水1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.3聚季铵盐-101.0泛醇适量 防腐剂1.0月桂醇醚-32.0氯化钠AI 5％％成分(INCI)A 40.0 月桂醇醚硫酸钠5.0C12-15棕榈油醚-15磺酸钠5.0癸基糖苷适量 芳香油0.1植烷三醇40.6 水5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.3聚季铵盐-101.0泛醇适量 防腐剂
1.0月桂醇醚-32.0氯化钠配制混合A相的组分。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例37洗发香波AI 1％％成分(INCI)A 15.00 椰油酰氨基丙基甜菜碱10.00 椰油两性二醋酸二钠5.00 多聚山醇酯205.00 癸基糖苷适量 芳香油适量 防腐剂1.00 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.15 瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵2.00 月桂醇醚-358.00 水适量 柠檬酸B 3.00 PEG-150二硬脂酸酯A 15％％成分(INCI)A 15.00 椰油酰氨基丙基甜菜碱10.00 椰油两性二醋酸二钠5.00 多聚山醇酯205.00 癸基糖苷适量 芳香油适量 防腐剂5.00 具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液0.15 瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵2.00 月桂醇醚-354.00 水适量 柠檬酸B 3.00 PEG-150二硬脂酸酯配制称重并溶解A相的组分。调节pH至6-7。加入B相并加热至约50℃。搅拌冷却至室温。
实施例38护体保湿霜AI 1％％成分(INCI)A 2.0鲸蜡硬脂醇醚-252.0鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇3.0鲸蜡硬脂基乙基己酸酯1.0二甲基硅油4.0鲸蜡硬脂醇3.0硬脂酸甘油酯SE5.0矿物油4.0希蒙得木籽油3.0矿物油，羊毛脂醇B 5.0丙二醇1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0泛醇0.5硅酸镁铝适量 防腐剂
65.5 水C 适量 芳香油D 适量 柠檬酸AI 5％％成分(INCI)A 2.0鲸蜡硬脂醇醚-252.0鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇3.0鲸蜡硬脂基乙基己酸酯1.0二甲基硅油4.0鲸蜡硬脂醇3.0硬脂酸甘油酯SE5.0矿物油4.0希蒙得木籽油3.0矿物油，羊毛脂醇B 5.0丙二醇5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液1.0泛醇0.5硅酸镁铝适量 防腐剂61.5 水C 适量 芳香油D 适量 柠檬酸配制单独加热A相和B相至约80℃。短暂预搅匀B相，然后搅拌B相倒入A相并再次搅匀。冷却至约40℃，加入C相并再次彻底搅匀。用柠檬酸调节pH至6-7。
实施例39护体保湿霜AI 1％％成分(INCI)A 6.0PEG-7氢化蓖麻油10.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0肉豆蔻酸异丙酯7.0矿物油0.5牛油树脂(牛油树)0.5硬脂酸铝0.5硬脂酸镁0.2甜没药萜醇0.7季铵盐-18-水辉石B 5.0二丙二醇0.7硫酸镁适量 防腐剂62.9 水C 适量 芳香油1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液AI 5％％成分(INCI)A 6.0PEG-7氢化蓖麻油10.0 鲸蜡硬脂基乙基己酸酯5.0肉豆蔻酸异丙酯7.0矿物油0.5牛油树脂(牛油树)0.5硬脂酸铝0.5硬脂酸镁
0.2甜没药萜醇0.7季铵盐-18-水辉石B 5.0二丙二醇0.7硫酸镁适量 防腐剂58.9 水C 适量 芳香油5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液配制单独地加热A相和B相至约80℃。将B相搅拌倒入A相中，并搅匀。搅拌冷却至约40℃，加入C相并再次搅匀。搅拌冷却至室温。
实施例40水包油型的液体化妆品AI 1％％成分(INCI)A 2.0鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇2.0鲸蜡硬脂醇醚-256.0硬脂酸甘油酯1.0鲸蜡醇8.0矿物油7.0鲸蜡硬脂基乙基己酸酯0.2二甲基硅油B 3.0丙二醇1.0泛醇适量 防腐剂61.9 水C 0.1甜没药萜醇1.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 芳香油D 5.7C.I.77 891，二氧化钛1.1铁氧化物AI 5％％成分(INCI)A 2.0鲸蜡硬脂醇醚-6，泛醇2.0鲸蜡硬脂醇醚-256.0硬脂酸甘油酯1.0鲸蜡醇8.0矿物油7.0鲸蜡硬脂基乙基己酸酯0.2二甲基硅油B 3.0丙二醇1.0泛醇适量 防腐剂57.9 水C 0.1甜没药萜醇5.0具有约5％角蛋白结合结构域活性成分的水性溶液适量 芳香油D 5.7C.I.77 891，二氧化钛1.1铁氧化物配制单独地加热A相和B相至约80℃。将B相搅拌倒入A相中，并搅匀。搅拌冷却至约40℃，加入C相和D相并再次彻底搅匀。搅拌冷却至室温。
实施例41
在下列例示性的制剂中，采用的活性成分以重量计为角蛋白结合结构域水溶液或角蛋白结合效应分子水溶液的5％。以下数据是重量比份。
清洁香波

香波


清洁调理香波

水包油型泡沫乳剂


具有珍珠粉的调理香波

调节pH至6.0清洁调理香波


调节pH至6.0具有强度效应的清洁调理香波

调节pH至6.0凝胶霜剂


水包油型遮光制剂



水分散体


水包油型遮光乳剂


棒剂


PIT乳化剂



凝胶霜剂


水包油型自助美黑制剂



水包油型化妆品


自助美黑水分散体



日晒后水分散体


油包水型乳剂


固体稳定乳剂(Pickering乳剂)



棒剂


自助美黑PIT乳剂


油凝胶剂


序列表<110>巴斯福股份公司<120>角蛋白结合多肽<130>AE20040313<140>PF55618<141>2005-05-24<160>1<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>2871<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>1Met Ser Cys Asn Gly Gly Ser His Pro Arg Ile Asn Thr Leu Gly Arg1 5 10 15Met Ile Arg Ala Glu Ser Gly Pro Asp Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ser20 25 30Gly Gly Gly Gly Thr Ser Arg Met Tyr Tyr Ser Arg Arg Gly Val Ile35 40 45
Thr Asp Gln Asn Ser Asp Gly Tyr Cys Gln Thr Gly Thr Met Ser Arg50 55 60His Gln Asn Gln Asn Thr Ile Gln Glu Leu Leu Gln Asn Cys Ser Asp65 70 75 80Cys Leu Met Arg Ala Glu Leu Ile Val Gln Pro Glu Leu Lys Tyr Gly85 90 95Asp Gly Ile Gln Leu Thr Arg Ser Arg Glu Leu Asp Glu Cys Phe Ala100 105 110Gln Ala Asn Asp Gln Met Glu Ile Leu Asp Ser Leu Ile Arg Glu Met115 120 125Arg Gln Met Gly Gln Pro Cys Asp Ala Tyr Gln Lys Arg Leu Leu Gln130 135 140Leu Gln Glu Gln Met Arg Ala Leu Tyr Lys Ala Ile Ser Val Pro Arg145 150 155 160Val Arg Arg Ala Ser Ser Lys Gly Gly Gly Gly Tyr Thr Cys Gln Ser165 170 175Gly Ser Gly Trp Asp Glu Phe Thr Lys His Val Thr Ser Glu Cys Leu180 185 190Gly Trp Met Arg Gln Gln Arg Ala Glu Met Asp Met Val Ala Trp Gly195 200 205
Val Asp Leu Ala Ser Val Glu Gln His Ile Asn Ser His Arg Gly Ile210 215 220His Asn Ser Ile Gly Asp Tyr Arg Trp Gln Leu Asp Lys Ile Lys Ala225 230 235 240Asp Leu Arg Glu Lys Ser Ala Ile Tyr Gln Leu Glu Glu Glu Tyr Glu245 250 255Asn Leu Leu Lys Ala Ser Phe Glu Arg Met Asp His Leu Arg Gln Leu260 265 270Gln Asn Ile Ile Gln Ala Thr Ser Arg Glu Ile Met Trp Ile Asn Asp275 280 285Cys Glu Glu Glu Glu Leu Leu Tyr Asp Trp Ser Asp Lys Asn Thr Asn290 295 300Ile Ala Gln Lys Gln Glu Ala Phe Ser Ile Arg Met Ser Gln Leu Glu305 310 315 320Val Lys Glu Lys Glu Leu Asn Lys Leu Lys Gln Glu Ser Asp Gln Leu325 330 335Val Leu Asn Gln His Pro Ala Ser Asp Lys Ile Glu Ala Tyr Met Asp340 345 350Thr Leu Gln Thr Gln Trp Ser Trp Ile Leu Gln Ile Thr Lys Cys Ile355 360 365
Asp Val His Leu Lys Glu Asn Ala Ala Tyr Phe Gln Phe Phe Glu Glu370 375 380Ala Gln Ser Thr Glu Ala Tyr Leu Lys Gly Leu Gln Asp Ser Ile Arg385 390 395 400Lys Lys Tyr Pro Cys Asp Lys Asn Met Pro Leu Gln His Leu Leu Glu405 410 415Gln Ile Lys Glu Leu Glu Lys Glu Arg Glu Lys Ile Leu Glu Tyr Lys420 425 430Arg Gln Val Gln Asn Leu Val Asn Lys Ser Lys Lys Ile Val Gln Leu435 440 445Lys Pro Arg Asn Pro Asp Tyr Arg Ser Asn Lys Pro Ile Ile Leu Arg450 455 460Ala Leu Cys Asp Tyr Lys Gln Asp Gln Lys Ile Val His Lys Gly Asp465 470 475 480Glu Cys Ile Leu Lys Asp Asn Asn Glu Arg Ser Lys Trp Tyr Val Thr485 490 495Gly Pro Gly Gly Val Asp Met Leu Val Pro Ser Val Gly Leu Ile Ile500 505 510Pro Pro Pro Asn Pro Leu Ala Val Asp Leu Ser Cys Lys Ile Glu Gln515 520 525
Tyr Tyr Glu Ala Ile Leu Ala Leu Trp Asn Gln Leu Tyr Ile Asn Met530 535 540Lys Ser Leu Val Ser Trp His Tyr Cys Met Ile Asp Ile Glu Lys Ile545 550 555 560Arg Ala Met Thr Ile Ala Lys Leu Lys Thr Met Arg Gln Glu Asp Tyr565 570 575Met Lys Thr Ile Ala Asp Leu Glu Leu His Tyr Gln Glu Phe Ile Arg580 585 590Asn Ser Gln Gly Ser Glu Met Phe Gly Asp Asp Asp Lys Arg Lys Ile595 600 605Gln Ser Gln Phe Thr Asp Ala Gln Lys His Tyr Gln Thr Leu Val Ile610 615 620Gln Leu Pro Gly Tyr Pro Gln His Gln Thr Val Thr Thr Thr Glu Ile625 630 635 640Thr His His Gly Thr Cys Gln Asp Val Asn His Asn Lys Val Ile Glu645 650 655Thr Asn Arg Glu Asn Asp Lys Gln Glu Thr Trp Met Leu Met Glu Leu660 665 670Gln Lys Ile Arg Arg Gln Ile Glu His Cys Glu Gly Arg Met Thr Leu675 680 685
Lys Asn Leu Pro Leu Ala Asp Gln Gly Ser Ser His His Ile Thr Val690 695 700Lys Ile Asn Glu Leu Lys Ser Val Gln Asn Asp Ser Gln Ala Ile Ala705 710 715 720Glu Val Leu Asn Gln Leu Lys Asp Met Leu Ala Asn Phe Arg Gly Ser725 730 735Glu Lys Tyr Cys Tyr Leu Gln Asn Glu Val Phe Gly Leu Phe Gln Lys740 745 750Leu Glu Asn Ile Asn Gly Val Thr Asp Gly Tyr Leu Asn Ser Leu Cys755 760 765Thr Val Arg Ala Leu Leu Gln Ala Ile Leu Gln Thr Glu Asp Met Leu770 775 780Lys Val Tyr Glu Ala Arg Leu Thr Glu Glu Glu Thr Val Cys Leu Asp785 790 795 800Leu Asp Lys Val Glu Ala Tyr Arg Cys Gly Leu Lys Lys Ile Lys Asn805 810 815Asp Leu Asn Leu Lys Lys Ser Leu Leu Ala Thr Met Lys Thr Glu Leu820 825 830Gln Lys Ala Gln Gln Ile His Ser Gln Thr Ser Gln Gln Tyr Pro Leu835 840 845
Tyr Asp Leu Asp Leu Gly Lys Phe Gly Glu Lys Val Thr Gln Leu Thr850 855 860Asp Arg Trp Gln Arg Ile Asp Lys Gln Ile Asp Phe Arg Leu Trp Asp865 870 875 880Leu Glu Lys Gln Ile Lys Gln Leu Arg Asn Tyr Arg Asp Asn Tyr Gln885 890 895Ala Phe Cys Lys Trp Leu Tyr Asp Arg Lys Arg Arg Gln Asp Ser Leu900 905 910Glu Ser Met Lys Phe Gly Asp Ser Asn Thr Val Met Arg Phe Leu Asn915 920 925Glu Gln Lys Asn Leu His Ser Glu Ile Ser Gly Lys Arg Asp Lys Ser930 935 940Glu Glu Val Gln Lys Ile Ala Glu Leu Cys Ala Asn Ser Ile Lys Asp945 950 955 960Tyr Glu Leu Gln Leu Ala Ser Tyr Thr Ser Gly Leu Glu Thr Leu Leu965 970 975Asn Ile Pro Ile Lys Arg Thr Met Ile Gln Ser Pro Ser Gly Val Ile980 985 990Leu Gln Glu Ala Ala Asp Val His Ala Arg Tyr Ile Glu Leu Leu Thr995 10001005
Arg Ser Gly Asp Tyr Tyr Arg Phe Leu Ser Glu Met Leu Lys Ser101010151020Leu Glu Asp Leu Lys Leu Lys Asn Thr Lys Ile Glu Val Leu Glu102510301035Glu Glu Leu Arg Leu Ala Arg Asp Ala Asn Ser Glu Asn Cys Asn104010451050Lys Asn Lys Phe Leu Asp Gln Asn Leu Gln Lys Tyr Gln Ala Glu105510601065Cys Ser Gln Phe Lys Ala Lys Leu Ala Ser Leu Glu Glu Leu Lys107010751080Arg Gln Ala Glu Leu Asp Gly Lys Ser Ala Lys Gln Asn Leu Asp108510901095Lys Cys Tyr Gly Gln Ile Lys Glu Leu Asn Glu Lys Ile Thr Arg110011051110Leu Thr Tyr Glu Ile Glu Asp Glu Lys Arg Arg Arg Lys Ser Val111511201125Glu Asp Arg Phe Asp Gln Gln Lys Asn Asp Tyr Asp Gln Leu Gln113011351140Lys Ala Arg Gln Cys Glu Lys Glu Asn Leu Gly Trp Gln Lys Leu114511501155
Glu Ser Glu Lys Ala Ile Lys Glu Lys Glu Tyr Glu Ile Glu Arg116011651170Leu Arg Val Leu Leu Gln Glu Glu Gly Thr Arg Lys Arg Glu Tyr117511801185Glu Asn Glu Leu Ala Lys Val Arg Asn His Tyr Asn Glu Glu Met119011951200Ser Asn Leu Arg Asn Lys Tyr Glu Thr Glu Ile Asn Ile Thr Lys120512101215Thr Thr Ile Lys Glu Ile Ser Met Gln Lys Glu Asp Asp Ser Lys122012251230Asn Leu Arg Asn Gln Leu Asp Arg Leu Ser Arg Glu Asn Arg Asp123512401245Leu Lys Asp Glu Ile Val Arg Leu Asn Asp Ser Ile Leu Gln Ala12501255l260Thr Glu Gln Arg Arg Arg Ala Glu Glu Asn Ala Leu Gln Gln Lys126512701275Ala Cys Gly Ser Glu Ile Met Gln Lys Lys Gln His Leu Glu Ile128012851290Glu Leu Lys Gln Val Met Gln Gln Arg Ser Glu Asp Asn Ala Arg129513001305
His Lys Gln Ser Leu Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ile Gln Asp Lys131013151320Asn Lys Glu Ile Glu Arg Leu Lys Ala Glu Phe Gln Glu Glu Ala132513301335Lys Arg Arg Trp Glu Tyr Glu Asn Glu Leu Ser Lys Val Arg Asn134013451350Asn Tyr Asp Glu Glu Ile Ile Ser Leu Lys Asn Gln Phe Glu Thr135513601365Glu Ile Asn Ile Thr Lys Thr Thr Ile His Gln Leu Thr Met Gln137013751380Lys Glu Glu Asp Thr Ser Gly Tyr Arg Ala Gln Ile Asp Asn Leu138513901395Thr Arg Glu Asn Arg Ser Leu Ser Glu Glu Ile Lys Arg Leu Lys140014051410Asn Thr Leu Thr Gln Thr Thr Glu Asn Leu Arg Arg Val Glu Glu141514201425Asp Ile Gln Gln Gln Lys Ala Thr Gly Ser Glu Val Ser Gln Arg143014351440Lys Gln Gln Leu Glu Val Glu Leu Arg Gln Val Thr Gln Met Arg144514501455
Thr Glu Glu Ser Val Arg Tyr Lys Gln Ser Leu Asp Asp Ala Ala146014651470Lys Thr Ile Gln Asp Lys Asn Lys Glu Ile Glu Arg Leu Lys Gln147514801485Leu Ile Asp Lys Glu Thr Asn Asp Arg Lys Cys Leu Glu Asp Glu149014951500Asn Ala Arg Leu Gln Arg Val Gln Tyr Asp Leu Gln Lys Ala Asn150515101515Ser Ser Ala Thr Glu Thr Ile Asn Lys Leu Lys Val Gln Glu Gln152015251530Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ile Asp Tyr Glu Arg Val Ser Gln Glu153515401545Arg Thr Val Lys Asp Gln Asp Ile Thr Arg Phe Gln Asn Ser Leu155015551560Lys Glu Leu Gln Leu Gln Lys Gln Lys Val Glu Glu Glu Leu Asn156515701575Arg Leu Lys Arg Thr Ala Ser Glu Asp Ser Cys Lys Arg Lys Lys158015851590Leu Glu Glu Glu Leu Glu Gly Met Arg Arg Ser Leu Lys Glu Gln159516001605
Ala Ile Lys Ile Thr Asn Leu Thr Gln Gln Leu Glu Gln Ala Ser161016151620Ile Val Lys Lys Arg Ser Glu Asp Asp Leu Arg Gln Gln Arg Asp162516301635Val Leu Asp Gly His Leu Arg Glu Lys Gln Arg Thr Gln Glu Glu164016451650Leu Arg Arg Leu Ser Ser Glu Val Glu Ala Leu Arg Arg Gln Leu165516601665Leu Gln Glu Gln Glu Ser Val Lys Gln Ala His Leu Arg Asn Glu167016751680His Phe Gln Lys Ala Ile Glu Asp Lys Ser Arg Ser Leu Asn Glu168516901695Ser Lys Ile Glu Ile Glu Arg Leu Gln Ser Leu Thr Glu Asn Leu170017051710Thr Lys Glu His Leu Met Leu Glu Glu Glu Leu Arg Asn Leu Arg171517201725Leu Glu Tyr Asp Asp Leu Arg Arg Gly Arg Ser Glu Ala Asp Ser173017351740Asp Lys Asn Ala Thr Ile Leu Glu Leu Arg Ser Gln Leu Gln Ile174517501755
Ser Asn Asn Arg Thr Leu Glu Leu Gln Gly Leu Ile Asn Asp Leu176017651770Gln Arg Glu Arg Glu Asn Leu Arg Gln Glu Ile Glu Lys Phe Gln177517801785Lys Gln Ala Leu Glu Ala Ser Asn Arg Ile Gln Glu Ser Lys Asn179017951800Gln Cys Thr Gln Val Val Gln Glu Arg Glu Ser Leu Leu Val Lys180518101815Ile Lys Val Leu Glu Gln Asp Lys Ala Arg Leu Gln Arg Leu Glu182018251830Asp Glu Leu Asn Arg Ala Lys Ser Thr Leu Glu Ala Glu Thr Arg183518401845Val Lys Gln Arg Leu Glu Cys Glu Lys Gln Gln Ile Gln Asn Asp185018551860Leu Asn Gln Trp Lys Thr Gln Tyr Ser Arg Lys Glu Glu Ala Ile186518701875Arg Lys Ile Glu Ser Glu Arg Glu Lys Ser Glu Arg Glu Lys Asn188018851890Ser Leu Arg Ser Glu Ile Glu Arg Leu Gln Ala Glu Ile Lys Arg189519001905
Ile Glu Glu Arg Cys Arg Arg Lys Leu Glu Asp Ser Thr Arg Glu191019151920Thr Gln Ser Gln Leu Glu Thr Glu Arg Ser Arg Tyr Gln Arg Glu192519301935Ile Asp Lys Leu Arg Gln Arg Pro Tyr Gly Ser His Arg Glu Thr194019451950Gln Thr Glu Cys Glu Trp Thr Val Asp Thr Ser Lys Leu Val Phe195519601965Asp Gly Leu Arg Lys Lys Val Thr Ala Met Gln Leu Tyr Glu Cys197019751980Gln Leu Ile Asp Lys Thr Thr Leu Asp Lys Leu Leu Lys Gly Lys198519901995Lys Ser Val Glu Glu Val Ala Ser Glu Ile Gln Pro Phe Leu Arg200020052010Gly Ala Gly Ser Ile Ala Gly Ala Ser Ala Ser Pro Lys Glu Lys201520202025Tyr Ser Leu Val Glu Ala Lys Arg Lys Lys Leu Ile Ser Pro Glu203020352040Ser Thr Val Met Leu Leu Glu Ala Gln Ala Ala Thr Gly Gly Ile204520502055
Ile Asp Pro His Arg Asn Glu Lys Leu Thr Val Asp Ser Ala Ile206020652070Ala Arg Asp Leu Ile Asp Phe Asp Asp Arg Gln Gln Ile Tyr Ala207520802085Ala Glu Lys Ala Ile Thr Gly Phe Asp Asp Pro Phe Ser Gly Lys209020952100Thr Val Ser Val Ser Glu Ala Ile Lys Lys Asn Leu Ile Asp Arg210521102115Glu Thr Gly Met Arg Leu Leu Glu Ala Gln Ile Ala Ser Gly Gly212021252130Val Val Asp Pro Val Asn Ser Val Phe Leu Pro Lys Asp Val Ala213521402145Leu Ala Arg Gly Leu Ile Asp Arg Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Asn215021552160Asp Pro Arg Asp Ser Gln Lys Asn Phe Val Asp Pro Val Thr Lys216521702175Lys Lys Val Ser Tyr Val Gln Leu Lys Glu Arg Cys Arg Ile Glu218021852190Pro His Thr Gly Leu Leu Leu Leu Ser Val Gln Lys Arg Ser Met219522002205
Ser Phe Gln Gly Ile Arg Gln Pro Val Thr Val Thr Glu Leu yal221022152220Asp Ser Gly Ile Leu Arg Pro Ser Thr Val Asn Glu Leu Glu Ser222522302235Gly Gln Ile Ser Tyr Asp Glu Val Gly Glu Arg Ile Lys Asp Phe224022452250Leu Gln Gly Ser Ser Cys Ile Ala Gly Ile Tyr Asn Glu Thr Thr225522602265Lys Gln Lys Leu Gly Ile Tyr Glu Ala Met Lys Ile Gly Leu Val227022752280Arg Pro Gly Thr Ala Leu Glu Leu Leu Glu Ala Gln Ala Ala Thr228522902295Gly Phe Ile Val Asp Pro Val Ser Asn Leu Arg Leu Pro Val Glu230023052310Glu Ala Tyr Lys Arg Gly Leu Val Gly Ile Glu Phe Lys Glu Lys231523202325Leu Leu Ser Ala Glu Arg Ala Val Thr Gly Tyr Asn Asp Pro Glu233023352340Thr Gly Asn Ile Ile Ser Leu Phe Gln Ala Met Asn Lys Glu Leu234523502355
Ile Glu Lys Gly His Gly Ile Arg Leu Leu Glu Ala Gln Ile Ala236023652370Thr Gly Gly Ile Ile Asp Pro Lys Glu Ser His Arg Leu Pro Val237523802385Asp Ile Ala Tyr Lys Arg Gly Tyr Phe Asn Glu Glu Leu Ser Glu239023952400Ile Leu Ser Asp Pro Ser Asp Asp Thr Lys Gly Phe Phe Asp Pro240524102415Asn Thr Glu Glu Asn Leu Thr Tyr Leu Gln Leu Lys Glu Arg Cys242024252430Ile Lys Asp Glu Glu Thr Gly Leu Cys Leu Leu Pro Leu Lys Glu243524402445Lys Lys Lys Gln Val Gln Thr Ser Gln Lys Asn Thr Leu Arg Lys245024552460Arg Arg Val Val Ile Val Asp Pro Glu Thr Asn Lys Glu Met Ser246524702475Val Gln Glu Ala Tyr Lys Lys Gly Leu Ile Asp Tyr Glu Thr Phe248024852490Lys Glu Leu Cys Glu Gln Glu Cys Glu Trp Glu Glu Ile Thr Ile249525002505
Thr Gly Ser Asp Gly Ser Thr Arg Val Val Leu Val Asp Arg Lys251025152520Thr Gly Ser Gln Tyr Asp Ile Gln Asp Ala Ile Asp Lys Gly Leu252525302535Val Asp Arg Lys Phe Phe Asp Gln Tyr Arg Ser Gly Ser Leu Ser254025452550Leu Thr Gln Phe Ala Asp Met Ile Ser Leu Lys Asn Gly Val Gly255525602565Thr Ser Ser Ser Met Gly Ser Gly Val Ser Asp Asp Val Phe Ser257025752580Ser Ser Arg His Glu Ser Val Ser Lys Ile Ser Thr Ile Ser Ser258525902595Val Arg Asn Leu Thr Ile Arg Ser Ser Ser Phe Ser Asp Thr Leu260026052610Glu Glu Ser Ser Pro Ile Ala Ala Ile Phe Asp Thr Glu Asn Leu261526202625Glu Lys Ile Ser Ile Thr Glu Gly Ile Glu Arg Gly Ile Val Asp263026352640Ser Ile Thr Gly Gln Arg Leu Leu Glu Ala Gln Ala Cys Thr Gly264526502655
Gly Ile Ile His Pro Thr Thr Gly Gln Lys Leu Ser Leu Gln Asp266026652670Ala Val Ser Gln Gly Val Ile Asp Gln Asp Met Ala Thr Ser Val267526802685Lys Pro Ala Gln Lys Ala Phe Ile Gly Phe Glu Gly Val Lys Gly269026952700Lys Lys Lys Met Ser Ala Ala Glu Ala Val Lys Glu Lys Trp Leu270527102715Pro Tyr Glu Ala Gly Gln Arg Phe Leu Glu Phe Gln Tyr Leu Thr272027252730Gly Gly Leu Val Asp Pro Glu Val His Gly Arg Ile Ser Thr Glu273527402745Glu Ala Ile Arg Lys Gly Phe Ile Asp Gly Arg Ala Ala Gln Arg275027552760Leu Gln Asp Thr Ser Ser Tyr Ala Lys Ile Leu Thr Cys Pro Lys276527702775Thr Lys Leu Lys Ile Ser Tyr Lys Asp Ala Ile Asn Arg Ser Met278027852790Val Glu Asp Ile Thr Gly Leu Arg Leu Leu Glu Ala Ala Ser Val279528002805
Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Pro Tyr Asn Met Ser Ser Ala Pro281028152820Gly Ser Arg Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Arg282528302835Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Arg Arg Gly Ser Phe Asp Ala Thr284028452850Gly Asn Ser Ser Tyr Ser Tyr Ser Tyr Ser Phe Ser Ser Ser Ser28552860 2865Ile Gly His2870
权利要求
1.用于处理含角蛋白物的化妆组合物，包含化妆相容介质中的至少一种角蛋白结合多肽序列(i)。
2.根据权利要求1所述的化妆组合物，其中多肽序列(i)对人发角蛋白、指甲角蛋白或皮肤角蛋白具有结合亲和力。
3.根据权利要求1所述的化妆组合物，其中多肽序列(i)包含至少一种下列多肽序列(a)多肽序列SEQ ID NO1的第2193至2481位，(b)多肽序列SEQ ID NO1的第2606至2871位，(c)与(a)相比，上至60％的氨基酸被修饰的多肽序列，(d)与(b)相比，上至50％的氨基酸被修饰的多肽序列，条件是多肽序列(c)或(d)的角蛋白结合达到在实施例9或10的测试中所测的多肽序列(a)或(b)所示值的至少10％。
4.根据权利要求1所述的化妆组合物，包含以重量计为0.01％至30％量的多肽序列(i)。
5.根据权利要求1所述的化妆组合物，其中除多肽序列(i)之外，还包含至少一种化妆活性成分。
6.根据权利要求5所述的化妆组合物，其中化妆活性成分选自天然的或合成的聚合物、颜料、增湿剂、油、蜡、酶、矿物、维生素、遮光剂、染料、香料、抗氧化剂和防腐剂。
7.权利要求1-5中任一项所述化妆组合物在改进毛发梳理性中的用途。
8.权利要求1-5中任一项所述化妆组合物在改进毛发定型中的用途。
9.权利要求1-5中任一项所述化妆组合物在调节皮肤效果中的用途。
10.权利要求1-5中任一项所述化妆组合物在制备皮肤、指甲和毛发化妆组合物中的用途。
11.用于处理含角蛋白物的药物组合物，包含药物相容介质中的至少一种角蛋白结合多肽序列(i)。
12.角蛋白结合效应分子，包括(i)至少一种对角蛋白具有结合亲和力的多肽序列，(ii)与多肽序列(i)并非天然连接的效应分子。
13.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中多肽序列(i)对人发、指甲或皮肤的角蛋白具有结合亲和力。
14.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中多肽序列(i)包括至少一种下列多肽序列(a)多肽序列SEQ ID NO1的第2269至2508位，(b)多肽序列SEQ ID NO1的第2606至2871位，(c)与(a)相比，上至70％的氨基酸被修饰的多肽序列，(d)与(b)相比，上至70％的氨基酸被修饰的多肽序列，条件是多肽序列(c)或(d)结合的角蛋白等于在实施例9或10所述测试中所测的多肽序列(a)或(b)所示值的至少10％。
15.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)包括多肽序列。
16.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)具有酶活性。
17.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)是染料或染料组分。
18.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)是紫外线滤光剂。
19.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)是抗氧化剂。
20.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)是类胡萝卜素。
21.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)是杀真菌剂、杀虫剂或杀生物剂。
22.根据权利要求12所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)是维生素或维生素原。
23.权利要求12所述角蛋白结合效应分子在制备皮肤、指甲和毛发化妆组合物中的用途。
24.根据权利要求12至14所述的角蛋白结合效应分子，其中效应分子(ii)通过共价键连接于多肽序列(i)。
25.根据权利要求12至14或24所述的角蛋白结合效应分子，其中利用多肽(i)和效应分子(ii)中早已存在的两种化学官能团，将效应分子(ii)共价连接于多肽(i)的侧链官能团、C末端或N末端。
26.根据权利要求12至14或24所述的角蛋白结合效应分子，其中通过至少双官能团的接头将一个或多个效应分子(ii)共价连接于多肽(i)的侧链官能团、C末端或N末端。
27.根据权利要求12至14、22或26所述的角蛋白结合效应分子，其中在效应分子(ii)和多肽(i)之间掺入间隔元件。
28.根据权利要求26或27所述的角蛋白结合效应分子，其在效应分子(ii)和多肽(i)之间具有蛋白酶、脂肪酶、酯酶、磷酸酶或水解酶的潜在切割位点。
29.根据权利要求26、27或28所述的角蛋白结合效应分子，其在效应分子(ii)和多肽(i)之间具有允许易于纯化融合蛋白的另一多肽序列。
30.用于制备权利要求3所述角蛋白结合多肽序列(i)的方法。
31.用于制备权利要求14所述角蛋白结合效应分子的方法。
全文摘要
本发明涉及新的角蛋白结合蛋白质活性成分及其制品和用途。
文档编号A61Q3/00GK1960699SQ200580016727
公开日2007年5月9日 申请日期2005年5月24日 优先权日2004年5月24日
发明者H·巴尔格, T·萨布科夫斯基, H-G·勒迈尔, C·博尔施韦勒, A·普托克 申请人:巴斯福股份公司