一种利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法和系统与流程

本发明属于药物和超临界
技术领域：
，具体涉及一种利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法和实现该方法的工业系统。
背景技术：
：在信号传导通路中，表皮生长因子受体络氨酸激酶(EGFR-TK)发挥着重要作用。许多癌症患者体内过度表达表皮生长因子受体(EGFR)和有关人类表皮生长因子受体(HER-2)。吉非替尼作为抗癌药，与同源配体结合后，直接抑制EGFR和HER-2。临床前研究表明，吉非替尼对各种表达EGFR的人癌细胞系有明显抗癌活性，包括肺癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌。吉非替尼为弱碱性药物，水中的溶解度在pH4-pH6之间迅速下降，pH大于7时几乎不溶。在人体内，吉非替尼吸收缓慢，生物利用度仅为60％。所以为了提高难溶性药物的生物利用度，可以提高药物的溶解性和改善溶解速度。超临界抗溶剂结晶技术(supercriticalanti-solvent，SAS)在减小粒径，提高药物生物利用度上与传统粒径减小技术相比有许多优势。研磨法、喷雾干燥法、重结晶法，气流粉碎法、冷冻干燥法等传统技术，存在产品粒径分布宽，有机溶剂残留，易变性等缺点。二氧化碳是最常用的流体，它的临界温度为31.1℃，临界压力为7.38Mpa，条件相对较温和；并且具有绿色环保、无毒、黏度低、扩散性好，以及溶解性强等优点，因而超临界CO2被广泛应用于药物超细微粒的制备。基于这些特性，超临界抗溶剂结晶技术制备的超细微粒粒径小且粒径分布窄；其次，有机溶剂残留远远低于药典规定含量，大大降低了药物毒副作用；该方法尤其适用于热敏性药物。超临界CO2在此法中同时起抗溶剂和增强喷射动力的作用。溶液和CO2经同轴喷嘴喷入充满超临界CO2的高压釜中，形成细小液滴。此时超临界CO2的强扩散能力使溶剂迅速稀释膨胀，原溶液瞬时达到过饱和状态，从而使溶质成核析出形成超细微粒。技术实现要素：本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。鉴于上述和/或现有利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法中存在的问题，提出了本发明。因此，本发明其中的一个目的是解决现有技术的不足，提供一种利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法。为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法，包括，制备吉非替尼溶液，将吉非替尼加入到有机溶剂中，超声处理后得到吉非替尼溶液；预热排气，设定结晶装置温度，预热30～50min后排净结晶装置内空气，然后升压稳定至10～16Mpa；将吉非替尼溶液和CO2通入结晶装置，反应结束后以5～7L/min继续通入CO2，0.5～1.5h后卸压，收集吉非替尼超细微粒。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述吉非替尼溶液浓度为6～14mg/ml。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述有机溶剂包括甲醇、乙醇或二氯甲烷中的一种或几种。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述有机溶剂各组分体积比为，甲醇和/或乙醇：二氯甲烷＝1：9～50。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述有机溶剂为乙醇和二氯甲烷的混合物，乙醇与二氯甲烷体积比为1:20～40。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述预热排气，其中，所述设定结晶装置温度为34～40℃。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述超声处理，其是在50～70Hz下超声处理5～10min。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述混合制备，其中，所述吉非替尼溶液，其通入流速为0.5～1.2mL/min。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述混合制备，其中，所述CO2通入结晶装置，其通入流速为2～4L/min。作为本发明所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的方法的一种优选方案，其中：所述有机溶剂为乙醇和二氯甲烷的混合物，乙醇与二氯甲烷体积比为1:35；所述设定结晶装置温度为38℃；所述超声处理，其是在70Hz下超声处理8min；所述吉非替尼溶液，其通入流速为1.0mL/min；所述CO2通入结晶装置，其通入流速为3L/min；将吉非替尼加入到乙醇和二氯甲烷的混合物中，超声处理后得到吉非替尼溶液；设定结晶装置温度，预热40min后排净结晶装置内空气，然后升压稳定至14Mpa；将吉非替尼溶液和CO2通入结晶装置，反应结束后以6L/min继续通入CO2，40min后卸压，收集吉非替尼超细微粒。本发明另一个目的是解决现有技术的不足，提供一种利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的系统。为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒的系统，其特征在于：包括，供气装置，为系统提供CO2；溶解装置，包括提供配置好的混合溶剂的供药设备和储存有吉非替尼原料的容置设备；结晶装置，分别与所述供气装置和所述溶解装置相连接，用以将吉非替尼结晶；以及，回收装置，与所述结晶装置相连，用以回收溶剂和气体。本发明所具有的有益效果：本发明制备的吉非替尼超细微粒在水中的溶解性能得到了明显改善，且回收率高。通过溶出度测试，在3h内，优选超细微粒的累计溶出率达到84％，相比于原料药提升了3倍以上，实验证明吉非替尼超细微粒对恶性细胞增殖的抑制效果更好。通过对技术环节优化，提高了传热效率，符合了低碳环保节能的理念，应用推广前景十分广阔。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1为本发明一个实施例中所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒系统的结构示意图；图2为本发明将吉非替尼原料药以及实施例5制备的吉非替尼超细微粒进行对比的DSC谱图；图3为本发明将吉非替尼原料药以及实施例3制备的吉非替尼超细微粒溶出度对比曲线图；图4为本发明将吉非替尼原料药以及实施例5制备的吉非替尼超细微粒对肺癌细胞A549的增值抑制率对比图。具体实施方式为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。本发明实验室阶段设定的完成工序为：1、配制吉非替尼溶液，将吉非替尼在室温下50～70Hz超声5～10min溶解在两种混合溶剂中。2、检查整个实验系统的气密性，开启低温恒温槽，启动CO2储罐和结晶釜的加热控制器，设定温度预热。3、预热完成后，打开CO2钢气瓶和结晶釜顶部的CO2进气阀，CO2经低温恒温槽降温，同时通过空气压缩泵压缩进入储气罐，CO2在储气罐内预热后从釜顶进入结晶釜，同时打开CO2出气阀，调节微调阀，以瓶压排除釜内空气8～15分钟。4、关闭CO2出气阀，设定CO2储罐和结晶釜内压力，CO2经同轴喷嘴外轴进入结晶釜，釜内压力不断升高至预设压力。5、压力和温度稳定后，打开高效液相泵，将1中配制的吉非替尼溶液以设定的流速经同轴喷嘴的内轴输送至结晶釜内。溶液进样完毕，停止高效液相泵，维持釜内压力30min～90min，进一步排除结晶釜内残留有机溶剂。关闭CO2进气阀，降压，待压力降为零，取出结晶釜内样品进行下一步检测并清洁整个系统。6、马尔文粒度仪测出吉非替尼微粒粒径及粒度分布，差示扫描量热法(DSC)检测制粒后吉非替尼热学性质，智能溶出仪检测超细颗粒的体外溶出度。仪器与材料实验材料见表1，实验仪器见表2。表1实验材料材料名称规格生产厂家吉非替尼≥99％湖北远成赛科技有限公司CO2≥99％南京同元气体公司乙醇分析纯南京化学试剂有限公司二氯甲烷分析纯南京化学试剂有限公司胎牛血清100ml/瓶BiologicalIndustriaes青霉素/链霉素100ml/瓶ScienCellResearchLaboratoriesDMSO分析纯Amresco公司MTT溶液5mg/mlAmresco公司表2实验仪器实施例1精确称量吉非替尼原料药400mg，于70Hz下超声8min完全溶于40ml混合溶剂(乙醇：二氯甲烷体积＝1：39(V/V))；检查确认超临界结晶装置气密性无任何问题后，开启低温恒温槽，启动CO2储罐和结晶釜的加热控制器，设定结晶温度38℃预热40min；预热完成后，打开CO2钢气瓶和结晶釜顶部的CO2进气阀，CO2从釜顶进入结晶釜，同时打开CO2出气阀，调节微调阀，以瓶压排除釜内空气15分钟；关闭CO2出气阀，升压至设置的结晶压力14MPa；待温度和压力稳定后，CO2以3L/min速率经同轴喷嘴外轴通入结晶釜，高效液相泵将配制好的吉非替尼溶液以0.8ml/min通过同轴喷嘴内轴喷入结晶釜，打开CO2出气阀及微调阀，维持结晶釜内压力在14MPa；溶液进样25ml后停止，维持CO2流量在6L/min，保持压力40min，去除残留溶剂；关闭CO2进气阀，开始降压，待结晶釜内压力降为零，打开结晶釜收集样品，进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在11～13μm。实施例2精确称量吉非替尼原料药480mg，于50Hz下超声8min完全溶于40ml混合溶剂(乙醇：二氯甲烷体积＝1：30(V/V))；检查确认超临界结晶装置气密性无任何问题后，开启低温恒温槽，启动CO2储罐和结晶釜的加热控制器，设定结晶温度36℃预热50min；预热完成后，打开CO2钢气瓶和结晶釜顶部的CO2进气阀，CO2从釜顶进入结晶釜，同时打开CO2出气阀，调节微调阀，以瓶压排除釜内空气15分钟；关闭CO2出气阀，升压至设置的结晶压力14MPa；待温度和压力稳定后，CO2以4L/min速率经同轴喷嘴外轴通入结晶釜，高效液相泵将配制好的吉非替尼溶液以1.2ml/min通过同轴喷嘴内轴喷入结晶釜，打开CO2出气阀及微调阀，维持结晶釜内压力在14MPa；溶液进样25ml后停止，维持CO2流量在6L/min，保持压力50min，去除残留溶剂；关闭CO2进气阀，开始降压，待结晶釜内压力降为零，打开结晶釜收集样品，进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在0.7～0.9μm。实施例3精确称量吉非替尼原料药400mg，于70Hz下超声8min完全溶于40ml混合溶剂(乙醇：二氯甲烷体积＝1：35(V/V))；检查确认超临界结晶装置气密性无任何问题后，开启低温恒温槽，启动CO2储罐和结晶釜的加热控制器，设定结晶温度38℃预热40min；预热完成后，打开CO2钢气瓶和结晶釜顶部的CO2进气阀，CO2从釜顶进入结晶釜，同时打开CO2出气阀，调节微调阀，以瓶压排除釜内空气15分钟；关闭CO2出气阀，升压至设置的结晶压力14MPa；待温度和压力稳定后，CO2以3L/min速率经同轴喷嘴外轴通入结晶釜，高效液相泵将配制好的吉非替尼溶液以1.0ml/min通过同轴喷嘴内轴喷入结晶釜，打开CO2出气阀及微调阀，维持结晶釜内压力在14MPa；溶液进样25ml后停止，维持CO2流量在6L/min，保持压力40min，去除残留溶剂；关闭CO2进气阀，开始降压，待结晶釜内压力降为零，打开结晶釜收集样品，进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在0.8～10μm。优选的，溶剂乙醇：二氯甲烷体积＝1：35(V/V)，吉非替尼溶液的质量浓度为10mg/mL；CO2通入结晶釜的流速为3L/min；结晶釜内温度为38℃，压力为14MPa；吉非替尼溶液的体积流量为1.0mL/min；反应结束后以6L/min继续通入CO2，40min后卸压。将实施例3制得的超细微粒和原料药分别在温度(37±0.5)℃、转速100r/min下测定吉非替尼的体外溶出度曲线。以磷酸缓冲盐溶液(pH6.8)为溶出介质，精密称取30mg样品，置于转篮中进行试验，分别在5、10、20、30、50、80、120、180min各取样2.0mL，同时补加2.0mL同等温度的溶出介质。样品经0.45μm滤膜过滤后，以磷酸缓冲盐溶液(pH6.8)为空白对照，于350nm处测定其吸光度，按标准曲线方程计算累积释放百分率，测定结果如图3所示。参见下表，随着时间的推移，相对于原料药，吉非替尼超细微粒的溶出性能有了明显提高，具体表现为，经过3h的溶出度检测，超细微粒的溶出度可达到83％，而原料药溶出度不足25％，提高近3倍以上。时间(min)51020305080120180超细微粒(％)822365368788283原料药(％)38121519222425工业化推广时各环节设计需考虑超临界CO2传热性质，以适应环境保护、节能减排的要求，通过进一步研究发现，管道内近壁处湍动能的变化对超临界CO2传热有较大影响，需考虑湍流程度的影响。同时在管壁面附近的温度梯度较大，从而导致壁面处较大的物性变化。壁面被冷却，近壁高密度梯度造成较大的浮力，核心区受浮力影响较小；在近壁区，湍流动能呈M形，是典型的混合流。传统流体湍动能在管内的分布恰恰相反，在近壁区常规流体的湍动能比较低，而在核心区则较高。通过试验证明，在反应时超临界CO2通入流速为2～4L/min时，浮力集中在粘性底层，近壁区湍动能较高，核心区较低，因此在近壁区具有较高的传热效率，对换热有利。当反应结束后需持续通入超临界CO2，为超细微粒制备需要需调高通入流速，于是，选取6L/min的超临界CO2通入流速，此时近壁区传热效率仍处于相对较高的水平。超临界CO2的相态介于气相和液相之间。与液态CO2相比，其化学性质类似，但密度略低，溶解能力稍弱。溶剂的性质，特别是分子极性，是影响超临界CO2溶解能力的重要因素。在CO2分子中，电荷分布不均匀，电子密度偏向氧原子，带负电荷的氧原子为CO2提供了较大的四极矩。溶于CO2的溶剂分子应具有弱极性、亲CO2基团，使其与CO2分子间的偶极-四极相互作用大于CO2分子间的四极-四极相互作用和溶剂分子间的相互作用。通过研究发现，含氯溶剂之间相互作用的排斥特性使溶剂-溶剂相互作用比溶剂-超临界CO2相互作用小的多，因而可以提高超临界CO2在其中的溶解度。在进一步研究中发现，通过和乙醇混合的有机溶剂能够显著提高吉非替尼的溶出度。推究其原因，乙醇中乙基电子偏向氧，减弱了其电负性；同时乙醇还具有黏性大的特性，这两种性质可辅助提高超临界CO2在溶剂中的溶解度，提高吉非替尼的溶出度。由此，如图1所示，图1示出了一个实施例中所述利用超临界CO2制备吉非替尼超细微粒系统的结构示意图。其中，该系统包括：为整个系统提供CO2的供气装置100、将吉非替尼原料配置为溶液的溶解装置200、将吉非替尼结晶的结晶装置300，以及用以回收溶剂和气体的回收装置400。在这一实施方式中，供气装置100和溶解装置200分别独立的与结晶装置300相连接，溶解装置200包括供药设备201和容置设备202，供药设备201向储存有吉非替尼原料的容置设备202内加入配置好的混合溶剂，结晶过程在结晶装置300内完成，回收装置400包括溶剂回收装置401和气体回收装置402，完成结晶后，溶剂回收装置401将结晶装置300内的混合溶剂回收，而气体回收装置402将CO2回收。在这一过程中，CO2气体和结晶装置300内温度和压力的控制由调节装置600完成，而最终制得的成品吉非替尼超细微粒由收集装置500完成收集任务。具体实施过程，参见实施例4～6。实施例4将供药设备201内已配置好的混合溶剂(乙醇：二氯甲烷体积＝1：30(V/V))泵入存储有吉非替尼原料药的容置设备202内，辅助以70Hz超声波溶解8min，配置吉非替尼溶液为6g/L；检查确认结晶装置300(一般选用结晶釜)气密性无任何问题后，开启调节装置600(可选用换热器和压力容器)，启动供气装置100和结晶装置300自身设置的加热控制器，设定结晶温度36℃预热40min；预热完成后，打开供气装置100和结晶装置300顶部的CO2进气阀，CO2从结晶装置300顶部进入，同时打开供气装置100出气阀，调节微调阀，排除结晶装置300内空气；关闭供气装置100出气阀，调节装置600调节升压至设置的结晶压力14MPa；待温度和压力稳定后，CO2以3L/min速率经同轴喷嘴外轴通入结晶装置300，将配制好的吉非替尼溶液以0.8ml/min通过同轴喷嘴内轴喷入结晶装置300，打开供气装置100出气阀及微调阀，维持结晶装置300内压力在14MPa；溶液进样250L后停止，维持CO2流量在6L/min，保持压力40min，去除残留溶剂至溶剂回收装置401；关闭CO2进气阀，开始降压，气体回收装置402回收CO2，待结晶装置300内压力降为零，通过收集装置500收集样品，进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在3.2～6.4μm。实施例5将供药设备201内已配置好的混合溶剂(乙醇：二氯甲烷体积＝1：35(V/V))泵入存储有吉非替尼原料药的容置设备202内，辅助以70Hz超声波溶解8min，配置吉非替尼溶液为10g/L；检查确认结晶装置300(一般选用结晶釜)气密性无任何问题后，开启调节装置600(可选用换热器和压力容器)，启动供气装置100和结晶装置300自身设置的加热控制器，设定结晶温度36℃预热50min；预热完成后，打开供气装置100和结晶装置300顶部的CO2进气阀，CO2从结晶装置300顶部进入，同时打开供气装置100出气阀，调节微调阀，排除结晶装置300内空气；关闭供气装置100出气阀，调节装置600调节升压至设置的结晶压力14MPa；待温度和压力稳定后，CO2以4L/min速率经同轴喷嘴外轴通入结晶装置300，将配制好的吉非替尼溶液以1.2ml/min通过同轴喷嘴内轴喷入结晶装置300，打开供气装置100出气阀及微调阀，维持结晶装置300内压力在14MPa；溶液进样250L后停止，维持CO2流量在6L/min，保持压力40min，去除残留溶剂至溶剂回收装置401；关闭CO2进气阀，开始降压，气体回收装置402回收CO2，待结晶装置300内压力降为零，通过收集装置500收集样品，进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在0.8～1.9μm。实施例6将供药设备201内已配置好的混合溶剂(乙醇：二氯甲烷体积＝1：39(V/V))泵入存储有吉非替尼原料药的容置设备202内，辅助以70Hz超声波溶解8min，配置吉非替尼溶液为14g/L；检查确认结晶装置300(一般选用结晶釜)气密性无任何问题后，开启调节装置600(可选用换热器和压力容器)，启动供气装置100和结晶装置300自身设置的加热控制器，设定结晶温度36℃预热50min；预热完成后，打开供气装置100和结晶装置300顶部的CO2进气阀，CO2从结晶装置300顶部进入，同时打开供气装置100出气阀，调节微调阀，排除结晶装置300内空气；关闭供气装置100出气阀，调节装置600调节升压至设置的结晶压力14MPa；待温度和压力稳定后，CO2以3L/min速率经同轴喷嘴外轴通入结晶装置300，将配制好的吉非替尼溶液以0.9ml/min通过同轴喷嘴内轴喷入结晶装置300，打开供气装置100出气阀及微调阀，维持结晶装置300内压力在14MPa；溶液进样250L后停止，维持CO2流量在6L/min，保持压力40min，去除残留溶剂至溶剂回收装置401；关闭CO2进气阀，开始降压，气体回收装置402回收CO2，待结晶装置300内压力降为零，通过收集装置500收集样品，进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在2.9～7.0μm。吉非替尼稳定性较差，置于-20℃条件下可保存一年。差示扫描量热法(DSC)检测吉非替尼原料药与超细微粒。精密称取5mg吉非替尼放置于坩埚中，以10℃/min速率从28℃升至280℃，检测结果如图2所示。相对于原料药，吉非替尼的超细微粒在197℃同样出现了熔点峰，其热学性质并没有发生变化，可认为此法未改变吉非替尼结构，具有实际应用意义。实施例7(对比实施例)将吉非替尼溶于丙酮和DMSO的混合溶液(丙酮：DMSO＝24:1)，配置成6mg/ml的溶液，检查系统的气密性，将吉非替尼溶液以1mL/min，由高压输液泵输入结晶釜内；启动结晶釜的加热器，带釜内外温度达到预定值后，将由低温恒温槽液化，高压泵压缩并经预热器预热后的CO2从釜内通入结晶釜内；待温度及压力稳定后，打开釜顶出口，调节微调阀至预定流速；此时含有溶剂的超临界CO2经节流阀降温降压进入分离釜，在分离釜中实现溶剂的回收，CO2则经转子流量计排出；泵完溶液后动态平衡25min以洗脱溶剂残留，最后关闭CO2进口阀，将釜内气体排空后，打开结晶釜取出微粒，进行表征。其中，结晶压力为10MPa，结晶温度为40℃，CO2排气体积流量为3L/min。进行下一步分析检测吉非替尼超细微粒在20.3～30.6μm。实施例8将人肺癌细胞A549接种于无菌培养瓶中，加入适量DMEM细胞培养液(含10％胎牛血清)，于37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中培养。待细胞生长到对数生长期，取A549细胞，0.25％胰酶消化，调整细胞浓度为2×104/ml，按每孔100μl接种于96孔板，37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中培养24h，加入5个不同浓度的实施例7制备的吉非替尼超细微粒及吉非替尼原料药(25μg/ml、20μg/ml、15μg/ml、10μg/ml、5μg/ml)100μl，每组3个复孔，同时设置不加药物组为对照组，单纯DMEM培养液组为空白组，每孔总反应体系为200μl，培养箱培养48h。每孔加5mg/mlMTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)20μl培养箱中孵育4h。吸净孔内液体，每孔加150μlDMSO(二甲基亚砜)，置微量振荡仪上振荡10min后放入酶标仪分别以检测波长570nm、参考波长650nm检测光密度(OD)值。最终每孔OD值＝OD值(570nm)-OD值(650nm)。以平行孔的平均OD值作为各组的OD值。吉非替尼对肺癌细胞A549增殖的抑制作用细胞增殖抑制率CI表现：CI(％)＝1-(OD值(实验组)-OD值(空白组))/(OD值(对照组)-OD值(空白组))。实验结果如图4所示。吉非替尼对肺癌细胞A549的增殖抑制作用呈明显剂量依赖性。吉非替尼超细微粒与原料药相比，均在25μg/ml的浓度下对细胞增殖的抑制作用最强，同时每种浓度下超细微粒的抑制作用均明显强于原料药，因此减小吉非替尼粒径有助于提高药效。但此处应说明的是，对于吉非替尼超细微粒而言，并不是微粒粒径越小药效越好。当随着粒径的减小，由重力引起的分离作用变为次要，但由于颗粒间距的减小，颗粒间的结合力(范德华力等)起重要作用，通过试验发现，当吉非替尼超细微粒小于0.5μm时，溶解时会发生微粒絮凝而造成颗粒沉降。推究其原因可能是由于颗粒的布朗运动，造成颗粒间的结合力不均，而产生絮凝和沉降。基于此，以吉非替尼微粒粒径为单因素，进行相关试验。将人肺癌细胞A549接种于无菌培养瓶中，加入适量DMEM细胞培养液(含10％胎牛血清)，于37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中培养。待细胞生长到对数生长期，取A549细胞，0.25％胰酶消化，调整细胞浓度为2×104/ml，按每孔100μl接种于96孔板，37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中培养24h，将实施例4-7所制备的吉非替尼超细微粒以及吉非替尼原料药，均配置成25μg/ml的溶液100μl，每组3个复孔，同时设置不加药物组为对照组，单纯DMEM培养液组为空白组，每孔总反应体系为200μl，培养箱培养48h。每孔加5mg/mlMTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)20μl培养箱中孵育4h。吸净孔内液体，每孔加150μlDMSO(二甲基亚砜)，置微量振荡仪上振荡10min后放入酶标仪分别以检测波长570nm、参考波长650nm检测光密度(OD)值。最终每孔OD值＝OD值(570nm)-OD值(650nm)。以平行孔的平均OD值作为各组的OD值。吉非替尼对肺癌细胞A549增殖的抑制作用细胞增殖抑制率CI表现：CI(％)＝1-(OD值(实验组)-OD值(空白组))/(OD值(对照组)-OD值(空白组))。结果为实施例5制备的吉非替尼超细微粒药效最好，对肺癌细胞A549增殖抑制率CI为0.60；实施例4制备的吉非替尼超细微粒药效次之，对肺癌细胞A549增殖抑制率CI为为0.55；接着是实施例6制备的吉非替尼超细微粒，对肺癌细胞A549增殖抑制率CI为0.52；药效再次之的是实施例7制备的吉非替尼超细微粒，对肺癌细胞A549增殖抑制率CI为0.45；药效最差的是吉非替尼原料药，对对肺癌细胞A549增殖抑制率CI为0.38。可见，减小吉非替尼粒径助于提高药效，实施例5中制备的吉非替尼超细微粒相比于传统方法(实施例7)制备的吉非替尼超细微粒药效提高15％。综上所述，药物微粒粒径并非越小越好，要视药品的特性而定，保证其粒径均匀并达到吸力与斥力的平衡，达到体系稳定示最理想的效果。由此可见，本发明制备的吉非替尼超细微粒在水中的溶解性能得到了明显改善，且回收率高。通过溶出度测试，在3h内，优选超细微粒的累计溶出率达到84％，相比于原料药提升了3倍以上，实验证明吉非替尼超细微粒对恶性细胞增殖的抑制效果更好。通过对技术环节优化，提高了传热效率，符合了低碳环保节能的理念，应用推广前景十分广阔。应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页1 2 3