本发明是关于盐酸阿比多尔在二型单纯胞疹病毒感染方面的应用，属于医药技术领域。
背景技术：
单纯疱疹病毒(HSV)为DNA病毒，大小约180纳米，呈球形，由核衣壳及病毒包膜组成。依据抗原性不同分为一型和二型。一型主要由口唇病灶获得，二型可从生殖器病灶分离获得，二型主要引起生殖器部位或新生儿感染，但两型病毒感染部位并无严格界限。相对而言，二型往往更难治愈。二型主要通过性接触传播，二型单纯疱疹病毒引起的疾病即生殖器疱疹是一种复发率高，难治愈的性传播疾病之一，因为这种病毒相当顽固，他可在感觉神经节中终身潜伏，当机体受到多种因素如紫外线、发热、创伤和情绪紧张、细菌或病毒感染以及使用肾上腺素等影响后，在缺少预防的状态下，约有80％的原发性病人可再次复发。所以要治愈，必须把以内的毒素彻底杀死即可不再复发。新生儿可在娩出时通过患有生殖器疱疹母亲的产道也会受染，病毒亦可由子宫颈上行而感染胎儿。所以对于二型单纯疱疹病毒引起的疾病不可小视。[New England Journal of Medicine,2000,342(12):844-850.]。
至今为止，对治疗二型单纯疱疹病毒引起的疾病仍然是一个棘手的问题。以往对单纯疱疹病毒临床上的治疗主要使用阿昔洛韦和西多福韦等药物。可效果并不佳，因为原发性感染人群有80％的概率会复发。同时，有报道指出国内外已经有实验室成功分离了阿昔洛韦的耐药株[Antiviral Research，2008，79:28]。对此，传统临床药物阿昔洛韦对二型单纯疱疹病毒可能产生耐药性，综上所述，对新药研究是十分有必要的。
盐酸阿比多尔，对多种病毒具有抗病毒广谱作用已被广泛报道[Arbidol:a broad-spectrum antiviral compound that blocks viral fusion.Curr Med Chem.2008,15(10):997-1005]。其广谱性的作用机制源于它存在膜融合抑制作用[Membrane fusion.Nature Structural&Molecular Biology.2008,15(7):658-64]。但是还未有专门针对盐酸阿比多尔对二型单纯疱疹病毒的抗病毒作用及应用的相关研究与文献报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供盐酸阿比多尔在治疗抗二型单纯疱疹病毒的药物中的应用。
具体而言，为解决上述技术问题，本发明采用了如下技术方案：
本发明提供了如结构式(1)所示的盐酸阿比多尔在制备预防和治疗抗二型单纯胞疹病毒的药物中的应用,
其中：其中HO-代表羟基，Br-代表溴。
所述的药物是以结构式(II)所示的盐酸阿比多尔作为有效成分的药物,
所述药物为盐酸阿比多尔及其药学上可接受的盐及其在药学上可接受的载体或赋形剂。
一种用于治疗抗二型单纯胞疹病毒的药物组合物，所述的药物组合物含有如式(I)所示的盐酸阿比多尔，
所述的药物组合物以式(I)所示的盐酸阿比多尔作为有效成份，
所述的药物组合物含有式(I)所示的盐酸阿比多尔及其药学上可接受的盐及其在药学上可接受的载体或赋形剂。
所述药物的剂型为丸剂、片剂、胶囊或口服液。
本发明的化合物的体外半数细胞毒性评价模型为MTT法半数细胞毒性的检测评价模型。
本发明所述的MTT法半数细胞毒性评价模型是指使用MTT染色剂能与活细胞线粒体结合，可定量检测出细胞的半数细胞毒性浓度(TC50)。
本发明化合物体外抗病毒给药模型分别是治疗给药模型和阿比多尔体外抗HSV-2作用靶点探索模型。
本发明所述的治疗给药模型是加100μL病毒滴度为100TCID50/0.1mL的病毒液到96孔板中，吸附两小时，去病毒液，换100μL的倍比稀释的药物的维持培养基，72小时后，观察细胞病变，计算IC50，评价药物治疗指数。
本发明所述的阿比多尔体外抗HSV-2作用靶点探索模型是HSV-2病毒在Vero细胞孵育2小时后，用PBS清洗2遍，用阿比多尔(有效浓度>IC50)处理，在37℃孵育分别3h，6h，24h，弃上清，PBS清洗2遍，加入新鲜培养基，37℃孵育72h后冻板，测定上清病毒滴度。
本发明通过运用三种体外抗病毒药效评价模型，评价盐酸阿比多尔对二型单纯疱疹病毒的抵制作用，首次发现盐酸阿比多尔对二型单纯疱疹病毒有抗病毒作用，可阻断二型单纯疱疹病毒感染宿主细胞，可用作治疗二型单纯疱疹病毒感染方面的疾病治疗。
具体实施方式
实施例1.药物评价原理
病毒扩增
将非洲绿猴肾细胞(VERO)按3X105个/孔，接种至96孔板中，置37℃，5％CO2培养，待长满单层。将二型单纯疱疹病毒100倍稀释接种到长满单层细胞的96孔板中,置37℃，5％CO2培养两天(含正常对照组)。
两天后，病变程度高达75％以上，置-80℃超低温冰箱，反复冻融一次，收集细胞扩增的病毒液，3000r/min离心30分钟，去沉淀物，分装小管置-80℃超低温冰箱长期保存。
二型单纯疱疹病毒半数致死滴度(TCID50)测定
将非洲绿猴肾细胞(VERO)按3X105个/孔，接种至96孔板中，置37℃，5％CO2培养，待长满单层。加入十倍倍比稀释的HSV-2病毒液，100μL/孔，37℃孵育2小时或3000转离心1小时；弃去上清，加入新鲜培养液，100μL/孔，2日后观察结果，记录CPE。并用Reed-Muench计算病毒半数致死滴度(TCID50)[Reed LJ,Muench H.A simple method of estimating fifty percent endpoints.Am J Hyg,1938,27(3):493-497]。
盐酸阿比多尔抗二型单纯疱疹病毒药效评价
96孔板单层细胞以PBS洗涤1次，加入含约100TCID50的病毒稀释液100μL/孔，37℃、5％CO2培养箱中孵育2小时，弃去病毒液，加入2倍梯度稀释的药物，每个浓度设置4个复孔，以最大无毒浓度为药物起始浓度，在34℃、5％CO2培养箱中孵育2天。记录细胞病变(Cytopathogenic Effect，CPE)。细胞出现CPE按6级标准记录。记录CPE后，用MTT染色，进行OD值测定。用Reed-Muench法计算药物半数有效浓度(IC50)，计算治疗指数(Selective Index，SI)：SI＝TC50/IC50)。[参照《药理实验方法学，徐叔云主编》，治疗指数(SI)>1表示有效]。
盐酸阿比多尔药物毒性评价
盐酸阿比多尔粉末用DMSO溶解后，加入培养液稀释至20mg/mL，DMSO终浓度为1％，经0.22μm滤膜过滤后置4℃保存；过滤后置4℃保存。按每孔约2.5×104细胞接种到96孔板，24～48h后待细胞长成单层后，弃去培养液，加入不同稀释度的药物100μL/孔，正常细胞对照孔加入100μL/孔MEM，37℃5％CO2继续培养2～5天，每孔加MTT溶液(5mg/mL)20μL，置37℃，5％CO2温箱中继续孵育4小时。吸弃培养上清液，每孔加100μL二甲基亚砜(DMSO)，低速振荡10分钟，使结晶物充分融解。选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值。按照下列公式计算抑制率，并用Reed-Muench法计算50％毒性浓度为药物半数有毒浓度(TC50)。计算抑制率＝(正常组－给药组)/正常组×100％。
阿比多尔体外抗HSV-2作用靶点探索
先用200μL病毒滴度为100TCID50/0.1mL的病毒液吸附两小时。然后去病毒孵育液。用最大无毒浓度的盐酸阿比多尔药物在长满单层的24孔板细胞板分别作用3、6、24小时。后去除药物，换200μL的倍比稀释的药物的维持培养基，72小时后，观察细胞病变，收集病毒液，测试各组的TCID50病毒滴度，评价作用时间点。通过作用时间点分析，我们可以分析出他是在吸附过程杀灭病毒还是吸附后杀灭病毒的，因为HSV-2病毒复制周期大于6小时。
实施例2.盐酸阿比多尔抗病毒模型的实验结果
盐酸阿比多尔药物毒性评价
盐酸阿比多尔以DMSO溶解后，完全溶解，无色澄清，加入培养液过滤后，有少许白色析出，震荡均匀溶液澄清。盐酸阿比多尔在非洲绿猴肾细胞(VERO)的半数有毒浓度(TC50)为(61.3±0.02)μM，最大无毒浓度为48.25μM。
二型单纯疱疹病毒半数致死滴度(TCID50)测定
通过Reed-Muench方法学，检测出扩增的二型单纯疱疹病毒为106.25TCID50/0.1mL。
盐酸阿比多尔抗二型单纯疱疹病毒药效评价
通过VERO细胞病变抑制法及MTT法对盐酸阿比多尔进行药效评价，对二型单纯疱疹的半数有效浓度IC50分别为9.49±0.33、8.99±0.29，治疗指数分别是6.46、6.82，有效。而阿昔洛韦的两种方法的治疗止损分别为5.11、5.91，见表1。
表1. VERO细胞二型单纯疱疹病毒病变抑制法及MTT法对阿比多尔进行药效评价
阿比多尔体外抗HSV-2作用时间点
先用200μL病毒滴度为100TCID50/0.1mL的病毒液吸附两小时。然后去病毒孵育液。使用VERO细胞的最大无毒浓度为48.25μM的盐酸阿比多尔药物在长满单层的24孔板细胞板分别作用3、6、24小时。作用时间点后去除药物，换200μL的维持培养基。72小时后，发现3小时和6小时药物作用下，病毒滴度差别不大，分别为4.42±0.14、4.33±0.14[单位：Lg(TCID50/0.1mL)]，而药物作用24小时，72小时候收集的病毒滴度为2.58±0.29[单位：Lg(TCID50/0.1mL)]。可见药物是在病毒吸附后产生抗病毒药效作用。具体见表2。
表2盐酸阿比多尔阻断二型单纯疱疹病毒感染活性