中药复方药物组合物的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药复方药物组合物的新用途。
【背景技术】
[0002] 祖国医学认为"肾藏精"、"肾主生殖"，肾与女性生殖功能关系密切。补肾中药和 方剂对女性生殖功能的调控在临床上有明显的作用。据文献报道，临床上补肾中药有促进 卵泡成熟、增加卵泡数量和改善卵巢储备功能的作用[1，2-6]。近年实验室研宄发现，含补 肾中药鼠血清加入卵细胞体外培养基中，可促进小鼠未成熟卵细胞生长发育，主要是促进 卵细胞核成熟，并且不增加成熟卵细胞细胞骨架的异常率。并发现其作用机制与增强卵细 胞成熟促进因子调节亚基CyclinBl的表达有关。
[0003] 在临床治疗中，为保持接受化疗、放疗或对性腺实施手术患者的生育能力，需进行 卵母细胞、胚胎或卵巢组织的冷冻储存。但是成熟卵细胞对温度变化敏感以及修复细胞内 损伤的能力较低，且在冰晶的形成过程中会导致纺垂体损伤或减数分裂期出现异常，因此， 临床很少采用卵子冷冻。胚胎的冷冻效果相对较好，但所需时间较长，会耽误患者的治疗， 且只适用于那些已经结婚或同意接受供精的患者，不适于青春前期的儿童，因而对癌症患 者的临床应用也有一定局限性。而将卵巢组织冷冻是将数百个不成熟卵泡保存起来，既不 需要卵巢刺激，也不会耽误癌症治疗，因而在保存妇女生育能力方面具有较大潜力。
[0004] 但是，卵巢组织经冷冻后再复苏过程必定对生殖细胞的功能有一定损伤。
【发明内容】
[0005] 为了解决上述问题，本发明的技术方案是提供了一种中药复方药物组合物的新用 途。具体地，是在制备治疗或治疗卵巢损伤和/或者卵巢衰退的药物或者培养液中的用途。
[0006] 本发明含有下述重量配比的原料药在制备预防和/或治疗卵巢损伤和/或者卵巢 衰退的药物或者培养液中的用途：熟地18-30份、山茱萸9-12份、山药8-16份、枸杞子9-12 份、菟丝子8-16份、鹿角胶8-16份、杜仲1-16份、肉桂1-9份、当归1-16份、制附子1-16 份。
[0007] 优选地，所述原料药的重量配比如下：熟地24份、山茱萸9-12份、山药12份、枸杞 子9-12份、菟丝子12份、鹿角胶12份、杜仲12份、肉桂6份、当归9份、制附子6份。进一 步优选地，所述原料药的重量配比如下：熟地24份、山茱萸12份、山药12份、枸杞子12份、 菟丝子12份、鹿角胶12份、杜仲12份、肉桂6份、当归9份、制附子6份。
[0008] 其中，所述卵巢损伤是冻融引起的卵巢损伤。
[0009] 本发明还提供了一种卵巢组织的培养液，它以常用细胞培养基为基础培养基，添 加有2~20% (v/v)的含药血清；
[0010] 所述含药血清按照如下方法制备：
[0011] (1)按照前述配比取原料药，制备成为超细粉，以5.Og/kg的剂量施用于鼠，施用 方式为口服给药；
[0012] (2)给药30min、60min、90min后，眼底静脉丛取血，分别静置、离心得上清液，混 匀，即为含药血清。
[0013] 所述常用细胞培养基为a-MEM培养基、DMEM-高糖培养基、DMEM-低糖培养基、 RPMI-1640培养基、DMEM/F12培养基或M-199培养基。
[0014] 所述含药血清的浓度为3~5 % (v/v)。
[0015] 所述诱导液中还添加有10~20% (v/v)的FBS、0. 5~1. 5 %的青链霉素和/或 50 ~150IU/L的HMG。
[0016] 所述FBS的添加量为10% (v/v);青链霉素的添加量为1 %;HMG的添加量为 100IU/L。
[0017] 本发明还提供了一种离体卵巢组织的冻存液，它是添加有1.5mol/L乙二醇、 0.lmol/L蔗糖以及10%~15%的含药血清的PBS溶液；所述含药血清按照如下方法制备：
[0018] (1)按照权利要求1~3任意一项所述配比取原料药，制成口服液，按照生药量 5. 2g/kg/d的剂量施用于鼠，施用方式为口服给药，连续施用5周；
[0019] (2)股动脉取血，静置、离心得上清液，即为含药血清。
[0020] 综上，本发明右归丸可以有效预防和治疗卵巢组织损伤/衰退，尤其是对冻融导 致的卵巢组织损伤/衰退的防和治疗效果确切，可以制备成为预防和治疗卵巢组织损伤/ 衰退的药物、培养液和冻存液，使得癌症患者的卵巢移植成为可能，应用前景非常优良。
[0021] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0022] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0023] 图1.各组卵细胞第一极体出现的代表性图片，A、空白组成熟卵母细胞（第一极 体）；B、空白血清组成熟卵母细胞（第一极体）C、FSH组成熟卵母细胞（第一极体）D、 右归丸血清组成熟卵母细胞（第一极体）（程序化冻存）
[0024] 图2各组培养基中E2浓度比较图，注：※与Blank组相比，P= 0.002;▲与Blank 组相比，P= 〇? 〇〇〇 ;★与BlankSerum组相比，P= 0? 021 ; * 与Blank组相比，P= 0? 002〇
【具体实施方式】
[0025] 实施例1本发明药物组合物的制备（右归丸）
[0026] 称取原料：熟地24g、山药12g、山茱萸9g、枸杞子12g、英丝子12g、鹿角胶12g、杜 仲12g、肉桂6g、当归9g、制附子6g。
[0027] 制备方法：将熟地蒸烂杵膏，余为细末，烘干密封保存，兑水服用，或加炼蜜为丸， 如弹子大。每嚼服二三丸（6~9g)，以滚白汤送下。
[0028] 实施例2本发明药物组合物的制备
[0029] 称取原料：熟地30g、山茱萸12g、山药16g、枸杞子12g、英丝子16g、鹿角胶16g、杜 仲lg、肉桂lg、当归lg、制附子lg。
[0030] 制备方法：将熟地蒸烂杵膏，余为细末，烘干密封保存，兑水服用，或加炼蜜为丸， 如弹子大。每嚼服二三丸（6~9g)，以滚白汤送下。
[0031] 实施例3本发明药物组合物的制备
[0032] 称取原料：熟地18g、山茱萸9g、山药8g、枸杞子9g、英丝子8g、鹿角胶8g、杜仲 16g、肉桂9g、当归16g、制附子16g。
[0033] 制备方法：将熟地蒸烂杵膏，余为细末，烘干密封保存，兑水服用，或加炼蜜为丸， 如弹子大。每嚼服二三丸（6~9g)，以滚白汤送下。
[0034] 上述原料可以用原生药，也可以用原生药的炮制品。
[0035] 以下是通过药效实验及临床实验证明本发明的有益效果。
[0036] 试验例1右归丸预防卵巢组织损伤/衰退
[0037] 1材料与方法
[0038] I. 1试验药物
[0039] 右归丸：熟地、山茱萸、山药、枸杞子、菟丝子、鹿角胶、杜仲、当归、肉桂、制附子按 8:3:4:4:4:4:4:3:2:2比例称取，除鹿角胶烊化其余均水煎，水煎方法：浸泡30min后水煎， 分别煎煮20min、40min、60min后将三次的药液混合，鹿角胶加温熔于其中，制成1:1的水溶 液，4°C保存。
[0040] 选取大鼠32只，雌雄各半，体重（243.8±18.2)g，右归丸组各16只。按成