中药复方药物组合物的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药复方药物组合物的新用途，具体地，是在制备促使干细胞向 生殖细胞分化的诱导液中的用途。
【背景技术】
[0002] 近年来，由于环境污染严重、工作压力加大、饮食习惯改变、生殖系统疾病等因素 对正常受孕造成不利影响，不孕症患者数量呈上升势头，发病率约为12. 5%~15%，且有逐 年增加趋势。因此世界卫生组织（WHO)宣布将不孕症与心血管病、肿瘤并列为当今影响人 类生活和健康的三大主要疾病。自1978年全球首例试管婴儿诞生以来，以体外授精-胚胎 移植（IVF-ET)为代表的辅助生殖技术（ART)的引入给不孕不育症的成功治疗提供了更大 的可能。助孕的相关研究对于解决不孕不育患者的实际问题具有现实的意义。
[0003] 体外受精（IVF )是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过 程的技术。获取合格的卵子和精子，是体外受精的基础，目前，体外受精包括促排卵、卵泡检 测与取卵、精子的优选与处理和体外受精步骤。诱发多个卵泡发育的促排卵是不孕治疗的 重要基础，此环节早时使用自然周期排卵，但每一自然周期一般仅有一个卵泡成熟，提供卵 子少，导致实施以后步骤困难，且妊娠率低，现已被超排卵技术所取代。然而，超排卵技术是 指应用人类促性腺激素促进更多卵泡成熟排卵的一种技术，由于此过程多个同时发育，雌 二醇增加，引起反馈性的黄体生成素（LH)峰出现，导致卵子早熟，质量差，妊娠率低，而且因 药物过度使用引起的并发症，如卵巢过度刺激综合征（0HSS)、多胎妊娠、出生缺陷和表遗传 学修饰异常等。因此，急需寻找其他方法，寻找合适的卵子和精子。
[0004]补肾中药介入辅助生殖技术，具有调经、助孕、促卵泡发育及排卵、提高卵细胞质 量以及提高卵子受精率、促进早期胚胎发育的作用，已得到证实。如，公开号=102784267的 专利申请公开了一个补肾复方，它包括熟地18-30份、山茱萸9-12份、山药8-16份、枸杞子 9-12份、菟丝子8-16份、鹿角胶8-16份，其可以促卵母细胞体外成熟，治疗不孕症，但未见 关于其影响干细胞分化为生殖细胞的相关报道。
【发明内容】
[0005]本发明的技术方案是提供了中药复方药物组合物的新用途。具体地，是在制备促 使干细胞向生殖细胞分化的诱导液中的用途。
[0006]本发明含有下述重量配比的原料药在制备促使干细胞向生殖细胞分化的诱导液 中的用途：熟地18-30份、山茱萸9-12份、山药8-16份、枸杞子9-12份、菟丝子8-16份、鹿 角胶8-16份。
[0007]其中，所述原料药的重量配比如下：熟地24份、山茱萸9-12份、山药12份、枸杞子 9-12份、菟丝子12份、鹿角胶12份。
[0008]其中，所述原料药的重量配比如下：熟地24份、山茱萸12份、山药12份、枸杞子12 份、菟丝子12份、鹿角胶12份。
[0009] 本发明促使干细胞向生殖细胞分化的诱导液，它以常用细胞培养基为基础培养 基，添加有终浓度为2~20% (v/v)的含药血清；
[0010] 所述含药血清按照如下方法制备：
[0011] (1)按照前述配比取原料药，制备成为超细粉，以5. Og/kg的剂量施用于鼠，施用 方式为口服给药；
[0012] (2)给药30min、60min、90min后，眼底静脉丛取血，分别静置、离心得上清液，混 匀，过滤除菌，即可。
[0013] 常用细胞培养基，是指包含供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质的培养基， 如，a -MEM培养基(又叫MEM培养基，Minimum Essential Medium)、DMEM-高糖培养基、 DMEM-低糖培养基、RPMI-1640培养基、DMEM/F12培养基或M-199培养基。
[0014] 优选地，所述诱导液中含药血清的终浓度为4. 5~5% (v/v)。
[0015] 其中，所述诱导液中还添加有终浓度为10~20% (v/v)的胎牛血清和/或1% (v/ v)青链霉素。
[0016] 青链霉素：即青霉素和链霉素的混合液，其中，青霉素的含量为l〇〇〇〇U/ml，链霉 素的含量为l〇mg/ml。
[0017] 所述干细胞为胚胎干细胞或间充质干细胞。
[0018] 本发明促使干细胞分化为生殖细胞的方法，步骤如下：取干细胞，置于前述的诱导 液中培养至少21天，即可。
[0019] 所述干细胞为胚胎干细胞或间充质干细胞。
[0020] 本发明补肾复方可以促进干细胞向生殖细胞分化，为生殖细胞的体外构建提供了 新方法，为试管婴儿领域开拓新思路、新途径，临床应用前景良好。
[0021] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0022] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0023] 图15%人卵泡液、5%本发明含药血清干预Id后细胞形态学变化情况；
[0024] 图25%人卵泡液、5%本发明含药血清干预21d后细胞形态学变化情况。
【具体实施方式】
[0025] 实施例1本发明药物组合物的制备
[0026] 称取原料：熟地24g、山茱萸12g、山药12g、枸杞子12g、菟丝子12g、鹿角胶12g ;
[0027] 制备方法：以上六味，除鹿角胶外，其余熟地黄等六味粉碎成细粉，过筛混匀。取鹿 角胶烊化，与上述细粉混匀，烘干密封保存，兑水服用，或每l〇〇g粉末加炼蜜l〇g与适量的 水。
[0028] 实施例2本发明药物组合物的制备
[0029] 称取原料：熟地24g、山茱萸9g、山药12g、枸杞子9g、菟丝子12g、鹿角胶12g ;
[0030] 按实施例1方法制备。
[0031] 实施例3本发明药物组合物的制备
[0032] 称取原料：熟地18g、山茱萸9g、山药8g、枸杞子9g、宽丝子8g、鹿角胶8g ;按实施 例1方法制备。
[0033] 实施例4本发明药物组合物的制备
[0034] 称取原料：熟地30g、山茱萸12g、山药16g、枸杞子12g、菟丝子16g、鹿角胶16g ;按 实施例1的方法制备。
[0035] 上述原料可以用原生药,也可以用原生药的炮制品。
[0036] 实施例5本发明诱导液的制备
[0037] 1、含药血清的制备
[0038] SD大鼠，清洁级，6~8周龄，体重220~250g，早3兼用，各15只，许可证号： SCXK(川）2004-15;四川省医学科学院实验动物研究所提供。动物饲养于清洁级动物室，温 度22±2°C，湿度40~70%，10h/14h明暗交替，每3min自动换气一次，常规全价颗粒饲料喂 养，自由饮水，早3分开饲养于不锈钢饲养笼内。
[0039] 对小鼠灌服实施例1的药物组合物，给药剂量为5. Og/kg，给药容量均为20ml/kg， 空白组大鼠灌服蒸馏水。分别于给药后30min、60min、90min眼底静脉丛取血，血液静置2 小时后，3000rpm离心10min，分离各组各不同时间段血清，将每组三个时间段的血清混匀， 过滤除菌，即得本发明含药血清。
[0040] 2、诱导液的制备
[0041] 将步骤1制得的含药血清加入a -MEM培养基中，至其终浓度为2% (v/v)，即可。
[0042] 实施例6本发明诱导液的制备
[0043]1、含药血清的制备
[0044] SD大鼠，清洁级，6~8周龄，体重220~250g，早3兼用，各15只，许可证号： SCXK(川）2004-15;四川省医学科学院实验动物研究所提供。动物饲养于清洁级动物室，温 度22±2°C，湿度40~70%，10h/14h明暗交替，每3min自动换气一次，常规全价颗粒饲料喂 养，自由饮水，早d分开饲养于不锈钢饲养笼内。
[0045] 对小鼠灌服实施例2的药物组合物，给药剂量为5. Og/kg，给药容量均为20ml/kg， 空白组大鼠灌服蒸馏水。分别于给药后30min、60min、90min眼底静脉丛取血，血液静置2 小时后，3000rpm离心10min，分离各组各不同时间段血清，将每组三个时间段的血清混匀， 过滤除菌，即得本发明含药血清。
[0046] 2、诱导液的制备
[0047] 将步骤1制得的含药血清加入DMEM高糖培养基中，至其终浓度为20% (v/v)，即 可。
[0048] 实施例7本发明诱导液的制备
[0049] 1、含药血清的制备
[0050]SD大鼠，清洁级，6~8周龄，体重220~250g，早3兼用，各15只，许可证号： SCXK(川）2004-15;四川省医学科学院实验动物研究所提供。动物饲养于清洁级动物室，温 度22±2°C，湿度40~70%，10h/14h明暗交替，每3min自动换气一次，常规全价颗粒饲料喂 养，自由饮水，早3分开饲养于不锈钢饲养笼内。
[0051] 对小鼠灌服实施例3的药物组合物，给药剂量为5. Og/kg，给药容量均为20ml/kg， 空白组大鼠灌服蒸馏水。分别于给药后30min、60min、90min眼底静脉丛取血，血液静置2 小时后，3000rpm离心10min，分离各组各不同时间段血清，将每组三个时间段的血清混匀， 过滤除菌，即得本发明含药血清。
[0052] 2、诱导液的制备
[0053] 将步骤1制得的含药血清加入DMEM低糖培养基中，至其终浓度为4. 5% (v/v)，即 可。
[0054] 实施例8本发明诱导液的制备
[0055] 1、含药血清的制备
[0056] SD大鼠，清洁级，6~8周龄，体重220~250g，早斤兼用，各15只，许可证号： SCXK(川）2004-15;四川省医学科学院实验动物研究所提供。动物饲养于清洁级动物室，温 度22±2°C，湿度40~70%，10h/14h明暗交替，每3min自动换气一次，常规全价颗粒饲料喂 养，自由饮水，早3分开饲养于不锈钢饲养笼内。
[0057] 对小鼠灌服实施例4的药物组合物，给药剂量为5. Og/kg，给药容量均为20ml/kg， 空白组大鼠灌服蒸馏水。分别于给药后30min、60min、90min眼底静脉丛取血，血液静置2 小时后，3000rpm离心10min，分离各组各不同时间段血清，将每组三个时间段的血清混匀， 过滤除菌，即得本发明含药血清。
[0058] 2、诱导液的制备
[0059] 将步骤4制得的含药血清加入RPMI-1640培养基中，至其终浓度为5% (v/v)，即 可。
[0060] 以下是通