蛋白是聚合物形式，其中组合物中约4%至约15% (如约4%至约10%，例如约5%至约7%)的总白蛋白是二聚体形式，并且其中组合物中不 大于约0%至约10% (如约0%至约5%，例如约0%至约1%，包括约0. 4%至约0. 8%、约 0.5%至约0.7%)的总白蛋白是寡聚体形式。在一些实施方式中，提供了包括含有用人白 蛋白包被的紫杉醇的纳米颗粒的组合物（如药物组合物），其中组合物中纳米颗粒的平均 直径不大于约150纳米（例如约130nm)，其中组合物中约80%至约95%的总白蛋白是单 体形式，其中组合物中约〇%至约1. 5% (如约0%至约0. 5%，例如0% )的总白蛋白是聚 合物形式，其中组合物中约4%至约15% (如约4%至约10%，例如约5%至约7% )的总 白蛋白是二聚体形式，并且其中组合物中不大于约0%至约10% (如约0%至约5%，例如 约0%至约1%，包括约0. 4%至约0. 8%、约0. 5%至约0. 7% )的总白蛋白是寡聚体形式。 在一些实施方式中，组合物中至少约60 %的单体白蛋白具有自由的硫醇基团。在一些实施 方式中，组合物中至少约60 %的单体白蛋白具有封闭的硫醇基团。在一些实施方式中，组 合物包括不与纳米颗粒缔合的白蛋白。在一些实施方式中，组合物中白蛋白和紫杉醇的重 量比为下列中的任一个：约1:1至约18:1、约1:1至约15:1、约1:1至约12:1、约1:1至约 10:1、约1:1至约9:1、约1:1至约8:1、约1:1至约7:1、约1:1至约6:1、约1:1至约5:1、 约1:1至约4:1、约1:1至约3:1、约1:1至约2:1、约1:1至约1:1。在一些实施方式中，组 合物中白蛋白和紫杉醇的重量比为约9:1。
[0037] 白蛋白单体、二聚体和寡聚体的量可通过尺寸排阻色谱确定。在一些实施方式中， 聚合物量基于用约〇. 57至约0. 69 (如0. 57至0. 69的RRT)，例如约0. 60至约0. 65,例如约 0. 63的RRT从尺寸排阻HPLC洗脱的白蛋白种类的量。在一些实施方式中，寡聚体量基于用 约0. 70至约0. 85 (如0. 70至0. 85的RRT)，例如约0. 74至约0. 81，例如约0. 79的RRT从 尺寸排阻HPLC洗脱的白蛋白种类的量。在一些实施方式中，二聚体量基于用约0.86至约 0. 97 (如0. 86至0. 97的RRT)，例如约0. 87至约0. 91，例如约0. 88的RRT从尺寸排阻HPLC 洗脱的白蛋白种类的量。在一些实施方式中，尺寸排阻HPLC的分离范围为约10,000至约 500, 000道尔顿。在一些实施方式中，尺寸排阻HPLC利用TSKgel G3000 SWXL柱进行。在 一些实施方式中，尺寸排阻HPLC利用如下柱进行：T0S0H TSKgel G3000SWXL，7. 8X300mm， 5μηι或等同形式。在一些实施方式中，尺寸排阻HPLC利用约lmL/min的流速进行。在一 些实施方式中，尺寸排阻HPLC在环境温度下进行。在一些实施方式中，尺寸排阻HPLC在约 lmL/min的流速下在室温下利用如下柱进行：T0S0H TSKgel G3000SWXL，7. 8X300mm，5 μπι 或等同形式。在一些实施方式中，尺寸排阻HPLC在实施例1所示的条件下进行。在一些实 施方式中，尺寸排阻HPLC在实施例3所示的条件下进行。
[0038] 在一些实施方式中，用于制备纳米颗粒组合物的白蛋白是重组白蛋白。在一些实 施方式中，重组白蛋白由非动物细胞如酵母生成。从而获得的组合物（如药物组合物）因 此可基本上不含（如不含）血液组分或动物组分。在一些实施方式中，利用重组白蛋白获 得的组合物（如药物组合物）基本上不含（如不含）病毒或朊病毒。
[0039] 重组白蛋白可被以受控的方式加工和处理，从而：1)改变或消除白蛋白上的糖基 化特征；2)获得更均质的白蛋白群；3)避免天然地来自从自然来源（例如，人）获得的白蛋 白的组分；和4)避免从动物细胞纯化天然白蛋白所需的某些盐。例如，在一些实施方式中 重组白蛋白可基本上不含（如不含）脂肪酸、辛酸钠和/或色氨酸酯。重组白蛋白可基本 上不含无 C端Leu的白蛋白和/或无 N端Asp-Ala的白蛋白。本文描述的纳米颗粒组合物 中的白蛋白可具有这些性质中的一种或多种。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中的白 蛋白不具有这些性质。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中白蛋白具有所有这些性质。
[0040] 因此，例如，在一些实施方式中本申请提供包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒 (如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均 直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含脂肪酸，其中组合物 中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和 紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大 于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含辛 酸酯，其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，提供了 包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于 约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物），其中 组合物基本上不含色氨酸酯，其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一 些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫 杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物 (如药物组合物），其中组合物基本上不含无 C端Leu的白蛋白和/或无 N端Asp-Ala的白 蛋白，其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，提供了 包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于 约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物），其中组 合物中（如药物组合物）中的白蛋白具有不同于得自自然来源（例如，人）的白蛋白的糖 基化特征，其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，提 供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不 大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物）， 其中组合物中（如药物组合物）中的白蛋白不具有糖基化，其中组合物中不大于约2. 4%的 总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，组合物包括不与纳米颗粒缔合的白蛋白。在 一些实施方式中，组合物中白蛋白和紫杉醇的重量比为下列中的任一个：约1:1至约18:1、 约1:1至约15:1、约1:1至约12:1、约1:1至约10:1、约1:1至约9:1、约1:1至约8:1、约 1:1至约7:1、约1:1至约6:1、约1:1至约5:1、约1:1至约4:1、约1:1至约3:1、约1:1至 约2:1、约1:1至约1:1。在一些实施方式中，白蛋白和紫杉醇的重量比为约9:1。
[0041] 在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含脂肪酸、辛酸酯和/或色氨酸酯， 并且其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，提供了 包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于 约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物），其中 组合物基本上不含脂肪酸、辛酸酯和/或色氨酸酯，其中组合物基本上不含无 C端Leu的白 蛋白和/或无 N端Asp-Ala的白蛋白，并且其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合 物形式。在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋 白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒） 的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含脂肪酸、辛酸酯、和/或色氨酸酯，其中 组合物中（如药物组合物）中的白蛋白具有不同于得自自然来源（例如，人）的白蛋白的 糖基化特征，并且其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式 中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具 有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合 物），其中组合物基本上不含脂肪酸、辛酸酯、和/或色氨酸酯，其中组合物中（如药物组合 物）中的白蛋白不具有糖基化，其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在 一些实施方式中，组合物包括不与纳米颗粒缔合的白蛋白。在一些实施方式中，组合物中白 蛋白和紫杉醇的重量比为下列中的任一个：约1:1至约18:1、约1:1至约15:1、约1:1至约 12:1、约1:1至约10:1、约1:1至约9:1、约1:1至约8:1、约1:1至约7:1、约1:1至约6:1、 约1:1至约5:1、约1:1至约4:1、约1:1至约3:1、约1:1至约2:1、约1:1至约1:1。在一 些实施方式中，白蛋白和紫杉醇的重量比为约9:1。
[0042] 在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含无 C端Leu的白蛋白和/或无 N 端Asp-Ala的白蛋白，其中组合物中（如药物组合物）中的白蛋白具有不同于得自自然来 源（例如，人）的白蛋白的糖基化特征，并且其中组合物中不大于约2.4%的总白蛋白是聚 合物形式。在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含无 C端Leu的白蛋白和/或无 N端 Asp-Ala的白蛋白，其中组合物中（如药物组合物）中的白蛋白不具有糖基化，并且其中组 合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，组合物包括不与纳米 颗粒缔合的白蛋白。在一些实施方式中，组合物中白蛋白和紫杉醇的重量比为下列中的任 一个：约1:1至约18:1、约1:1至约15:1、约1:1至约12:1、约1:1至约10:1、约1:1至约 9:1、约1:1至约8:1、约1:1至约7:1、约1:1至约6:1、约1:1至约5:1、约1:1至约4:1、约 1:1至约3:1、约1:1至约2:1、约1:1至约1:1。在一些实施方式中，白蛋白和紫杉醇的重 量比为约9:1。
[0043] 在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物基本上不含脂肪酸、辛酸酯和/或色氨酸酯， 其中组合物基本上不含无 C端Leu的白蛋白和/或无 N端Asp-Ala的白蛋白，其中组合物 中（如药物组合物）中的白蛋白具有不同于得自自然来源（例如，人）的白蛋白的糖基化 特征，并且其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式中，提 供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不 大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物）， 其中组合物基本上不含脂肪酸、辛酸酯和/或色氨酸酯，其中组合物基本上不含无 C端Leu 的白蛋白和/或无 N端Asp-Ala的白蛋白，其中组合物中（如药物组合物）中的白蛋白不 具有糖基化，并且其中组合物中不大于约2. 4 %的总白蛋白是聚合物形式。在一些实施方式 中，组合物包括不与纳米颗粒缔合的白蛋白。在一些实施方式中，组合物中白蛋白和紫杉醇 的重量比为下列中的任一个：约1:1至约18:1、约1:1至约15:1、约1:1至约12:1、约1:1 至约10:1、约1:1至约9:1、约1:1至约8:1、约1:1至约7:1、约1:1至约6:1、约1:1至约 5:1、约1:1至约4:1、约1:1至约3:1、约1:1至约2:1、约1:1至约1:1。在一些实施方式 中，白蛋白和紫杉醇的重量比为约9:1。
[0044] 在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中在相同测定条件下组合物中的单体量比AbraxancK 中的单体量大至少约1%(如至少1.5%、2%、2.5%、3%、4%、或5%中的任一个）。在一 些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫 杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物 (如药物组合物），其中在相同测定条件下组合物中的聚合物量比Abraxanc?中的聚合物量 小至少1%(如至少1.5%、2%、2.5%、3%、4%、或5%中的任一个）。在一些实施方式中， 组合物（如药物组合物）不包括蔗糖。在一些实施方式中，组合物中白蛋白和紫杉醇的重 量比为下列中的任一个：约1:1至约18:1、约1:1至约15:1、约1:1至约12:1、约1:1至约 10:1、约1:1至约9:1、约1:1至约8:1、约1:1至约7:1、约1:1至约6:1、约1:1至约5:1、 约1:1至约4:1、约1:1至约3:1、约1:1至约2:1、约1:1至约1:1。在一些实施方式中，白 蛋白和紫杉醇的重量比为约9:1。
[0045] 在Abraxane?的储存过程中，杂质如7-表紫杉醇随时间流逝而生成。根据紫杉醇 的USP专著，在含紫杉醇的组合物中存在的7-表紫杉醇的可接受上限为0. 5%。因此杂质 生成率影响紫杉醇/白蛋白纳米颗粒组合物的保质期。类似地，紫杉醇/白蛋白纳米颗粒制 剂中的白蛋白单体在储存时具有反应或结合形成二聚体、寡聚体和聚合物的倾向。在储存 时形成的白蛋白二聚体、寡聚体和聚合物的水平增加可导致人体内不期望的响应，如疹子、 荨麻疹、过敏反应和可能地免疫应答。制剂中白蛋白二聚体、寡聚体和聚合物的水平增加还 可致使制剂容易聚集，这可影响制剂的物理稳定性。
[0046] 在一些实施方式中，本文提供的组合物（如药物组合物）与Abraxanc?相比具有 显著改善的杂质和白蛋白特征，具有减少的杂质生成和/或白蛋白聚合率。这种减少的 比率可例如在加速条件下（如在55°C下储存）评估。因此，在一些实施方式中，提供了包 括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约 200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗粒）的组合物（如药物组合物），其中组合 物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式，其中不大于约0. 45% (如不大于约0. 4%、 0.3%、或0.2%中的任一个）的总杂质在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约两周时 生成。在一些实施方式中，不大于约0. 65% (如不大于约0. 6%、0. 5%、0. 4%、或0. 3%中 的任一个）的总杂质在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约1个月时生成。
[0047] 在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式， 其中不大于约0.5% (如不大于约0.4%、0. 3%、或0.2%)的7-表紫杉醇在组合物（如药 物组合物）在55°C下储存约两周时生成。在一些实施方式中，不大于约0.7% (如不大于 约0· 6%、0· 5%、或0· 4% )的7-表紫杉醇在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约1 个月时生成。在一些实施方式中，组合物包括不与纳米颗粒缔合的白蛋白。
[0048] 在一些实施方式中，提供了包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒（如，包括用白 蛋白包被的紫杉醇和/或具有不大于约200nm，例如不大于约150nm的平均直径的纳米颗 粒）的组合物（如药物组合物），其中组合物中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式， 其中不大于约0.3% (如不大于约0.2%、0· 1 %、或0.05%)的白蛋白聚合物在组合物（如 药物组合物）在55°C下储存约两周时生成。在一些实施方式中，不大于约0.4% (如不大 于约0· 3%、0· 2%、或0· 1% )的白蛋白聚合物在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约 1个月时生成。在一些实施方式中，组合物包括不与纳米颗粒缔合的白蛋白。
[0049] 在一些实施方式中，组合物包括平均（average或mean)直径不大于约1000纳米 (_)，如不大于约 900、800、700、600、500、400、300、200、和10011111中的任一种的纳米颗粒。 在一些实施方式中，纳米颗粒的平均直径不大于约200nm。在一些实施方式中，纳米颗粒的 平均直径不大于约150nm。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均直径不大于约100nm。在一 些实施方式中，纳米颗粒的平均直径为约20至约400nm。在一些实施方式中，纳米颗粒的平 均直径为约40至约200nm。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均直径为约50-150nm。在一 些实施方式中，纳米颗粒不小于约50nm。在一些实施方式中，纳米颗粒可灭菌过滤。
[0050] 在一些实施方式中，本文描述的组合物中的纳米颗粒的平均直径不大于约200nm， 包括例如不大于约 190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、90、80、70 或 60nm 中的任 一个。在一些实施方式中，组合物中至少约50 % (例如至少约60 %、70 %、80 %、90 %、95 %、 或99%中的任一个）的纳米颗粒的直径不大于约200nm，包括例如不大于约190、180、170、 160、150、140、130、120、110、100、90、80、70或60nm中的任一个。在一些实施方式中，组合物 中至少约50% (例如至少60%、70%、80%、90%、95%、或99%中的任一个）的纳米颗粒落 入约20至约400nm的范围，包括例如约20至约200nm、约40至约200nm、约30至约180nm、 和约40至约150、约50至约120、和约60至约IOOnm中的任一个。
[0051] 在一些实施方式中，纳米颗粒包括用白蛋白包被的紫杉醇。在一些实施方式中， 组合物包括纳米颗粒和非纳米颗粒形式的紫杉醇，其中组合物中至少约50 %、60%、70 %、 80 %、90 %、95 %、或99 %中任一个的紫杉醇是纳米颗粒形式。在一些实施方式中，纳米颗粒 中的紫杉醇构成按重量计大于约50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %、或99 %中的任一个的 纳米颗粒。在一些实施方式中，纳米颗粒具有非聚合物基质。在一些实施方式中，纳米颗粒 包括紫杉醇内核，其基本上不含聚合物材料（如聚合物基质）。
[0052] 在一些实施方式中，组合物中至少约50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %或99 %中 的任一个的白蛋白处于组合物的非纳米颗粒部分。
[0053] 在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中白蛋白（如人白蛋白）和紫杉醇的重量比 为约18:1或更小，如约15:1或更小，例如约10:1或更小。在一些实施方式中，组合物中白 蛋白（如人白蛋白）和紫杉醇的重量比落入约1:1至约18:1、约2:1至约15:1、约3:1至 约13:1、约4:1至约12:1、约5:1至约10:1中的任一个的范围。在一些实施方式中，组合物 纳米颗粒部分中白蛋白和紫杉醇的重量比为约2 :1、3:1、4:1、5:1、6:1、7 :1、8:1、9:1、10:1、 15:1、或更小中的任一个。在一些实施方式中，组合物中白蛋白（如人白蛋白）和紫杉醇 的重量比为下列中的任一个：约1:1至约18:1、约1:1至约15:1、约1:1至约12:1、约1:1 至约10:1、约1:1至约9:1、约1:1至约8:1、约1:1至约7:1、约1:1至约6:1、约1:1至约 5:1、约1:1至约4:1、约1:1至约3:1、约1:1至约2:1、约1:1至约1:1。
[0054] 在一些实施方式中，纳米颗粒组合物包括上述特征中的一个或多个。
[0055] 本文描述的纳米颗粒可存在于干燥制剂（如冻干的组合物）中，或悬浮于生物相 容性介质中。适当的生物相容性介质包括但不限于水、缓冲水介质、盐水、缓冲盐水、任选地 氨基酸缓冲溶液、任选地蛋白质缓冲溶液、任选地糖缓冲溶液、任选地维生素缓冲溶液、任 选地合成聚合物缓冲溶液、含脂质乳液、及类似物。在一些实施方式中，组合物处于无菌冻 干粉末中。在一些实施方式中，组合物用缓冲剂重构。例如，组合物（如药物组合物）可在 氯化钠缓冲剂中重构，如0.9%氯化钠缓冲剂。在一些实施方式中，重构的组合物（如药物 组合物）具有约5mg/ml的紫杉醇。在一些实施方式中，组合物基本上不含（例如不含）有 机溶剂。
[0056] 本文所用的紫杉醇可得自完整植物如曼地亚红豆杉（Taxus media)，或其可以是 半合成的。在一些实施方式中，本申请的组合物（如药物组合物）包括完整植物产生的紫 杉醇。在一些实施方式中，组合物（如药物组合物）包括半合成的紫杉醇。
[0057] 组合物中的白蛋白总体上充当紫杉醇的载体，即，与不包括白蛋白的组合物相比， 组合物中的白蛋白使紫杉醇更容易悬浮在水介质中或有助于保持悬浮。这可避免使用毒性 溶剂（或表面活性剂）来增溶紫杉醇，从而可减少紫杉醇给予个体（如人）的一种或多种 副作用。因此，在一些实施方式中，本文描述的组合物基本上不含（如不含）表面活性剂， 如Cremophor (包括Cremophor E:L_? (BASF))。如果组合物中的Cremophor或表面活性剂的 量在纳米颗粒组合物注入个体时不足以引起个体的一种或多种副作用，则组合物"基本上 不含Cremoph or"或"基本上不含表面活性剂"。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物包含小 于约20%、15%、10%、7. 5%、5%、2. 5%、或1 %中的任一个的有机溶剂或表面活性剂。
[0058] 本文描述的组合物中的白蛋白量将取决于组合物中的其他组分而变化。在一些实 施方式中，组合物包括足以在水悬浮液一一例如，稳定胶体悬浮液形式（如纳米颗粒的稳定 悬浮液）一一中稳定紫