： 100mg/m 2,每周，无间断；75mg/m2,每周，四周中的三周；100mg/m2,每周，四周中的三周； 125mg/m 2,每周，四周中的三周；125mg/m2,每周，三周中的两周；130mg/m2,每周，无间断； 175mg/m 2,每两周一次；260mg/m2,每两周一次；260mg/m2,每三周一次；180-300mg/m 2,每三 周；6〇-175mg/m2,每周，无间断；20-150mg/m2, 一周两次；和15〇-250mg/m2, 一周两次。治疗 过程中可基于给药医师的判断调整组合物的用药频率。
[0130] 在一些实施方式中，每三周以260mg/m2给予组合物（例如，静脉内）。在一些实 施方式中，每三周以220mg/m2给予组合物（例如，静脉内）。在一些实施方式中，每三周以 180mg/m 2给予组合物（例如，静脉内）。在一些实施方式中，每三周以200mg/m2给予组合物 (例如，静脉内）。在一些实施方式中，每三周以130mg/m 2给予组合物（例如，静脉内）。
[0131] 在一些实施方式中，每四周在第1、8和15日以150mg/m2给予组合物（例如，静脉 内）。在一些实施方式中，每四周在第1、8和15日以125mg/m 2给予组合物（例如，静脉内）。 在一些实施方式中，每四周在第1、8和15日以lOOmg/m2给予组合物（例如，静脉内）。在 一些实施方式中，每四周在第1、8和15日以75mg/m 2给予组合物（例如，静脉内）。在一些 实施方式中，每四周在第1、8和15日以50mg/m2给予组合物（例如，静脉内）。
[0132] 本文描述的组合物允许经短于约24小时的灌注时间灌注组合物至个体。例如，在 一些实施方式中，经小于约24小时、12小时、8小时、5小时、3小时、2小时、1小时、30分钟、 20分钟、或10分钟中任一个的灌注时间给予组合物。在一些实施方式中，经约30分钟的灌 注时间给予组合物。在一些实施方式中，经约30分钟至约40分钟之间的灌注时间给予组 合物。
[0133] 在一些实施方式中，本申请提供治疗个体的癌症的方法，通过胃肠外给予个体 (例如，）有效量的本文所述组合物（如药物组合物）进行。本申请还提供治疗个体的癌症 的方法，通过静脉内、动脉内、肌内、皮下、吸入、口服、腹膜内、鼻部、或气管内给予个体（例 如，人）有效量的紫杉醇纳米颗粒组合物进行。在一些实施方式中，给予途径是腹膜内。在 一些实施方式中，给予途径是静脉内、动脉内、肌内、或皮下。在不同变型中，每剂给予约5mg 至约500mg--如约30mg至约300mg或约50至约500mg--的紫杉醇。在一些实施方式 中，紫杉醇是组合物中包含的唯一的治疗癌症的药学活性剂。
[0134] 本文描述的任何组合物可通过各种途径被给予个体（如人），包括，例如，静脉内、 动脉内、腹膜内、肺内、口服、吸入、囊内、肌内、气管内、皮下、眼内、鞘内、经粘膜、经皮、瘤 内、直接注入血管壁、颅内或腔内。在一些实施方式中，可应用组合物的持续连续释放制剂。 在本文描述的一种变型中，可通过任何可接受的途径给予本发明化合物的纳米颗粒（如白 蛋白纳米颗粒），包括但不限于，口服、肌内、经皮、静脉内、通过吸入器或其他气载递送系统 及类似方式。
[0135] 在一些实施方式中，包含药物的纳米颗粒组合物可与第二治疗性化合物和/或第 二治疗一起给予。治疗过程中可基于给药医师的判断调整组合物和第二化合物的用药频 率。在一些实施方式中，第一和第二治疗被同时、相继或并行给予。在分别给予时，纳米颗 粒组合物和第二化合物可以不同的用药频率或间隔给予。例如，组合物可每周给予，而第二 化合物可以更高或更低的频率给予。在一些实施方式中，可应用包含紫杉醇的纳米颗粒和/ 或第二化合物的持续连续释放制剂。用于实现持续释放的各种制剂和装置在本领域已知。 可应用本文描述的给药配置的组合。
[0136] 节拍器式治疗方案
[0137] 本发明还提供本文描述的任何治疗方法和给药方法的节拍器式治疗方案。用于节 拍器式治疗方案的应用的示例性节拍器式治疗方案和变型在下文中被讨论，并且被公开于 2006年2月21日提交的以美国公开号2006/0263434公开的U.S.S.N. 11/359,286(如其 中第[0138]至[0157]段描述的那些），其全部内容被引入本文作为参考。在一些实施方 式中，经至少一个月的时间给予纳米颗粒组合物，其中每次给药之间的间隔不多于约一周， 并且其中每次给予的紫杉醇剂量为其按照传统用药方案的最大耐受剂量的约0. 25%至约 25%。在一些实施方式中，经至少两个月的时间给予纳米颗粒组合物，其中每次给药之间的 间隔不多于约一周，并且其中每次给予的紫杉醇剂量为其按照传统用药方案的最大耐受剂 量的约1%至约20%。在一些实施方式中，每次给予的紫杉醇剂量小于最大耐受剂量的约 25%、24%、23%、22%、20%、18%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、 5%、4%、3%、2%、或1%中的任一个。在一些实施方式中，任何纳米颗粒组合物一周给予至 少约]^、21、31、41、51、61、或71(即，每日）中的任一个。在一些实施方式中，每次给予之间 的间隔小于约6个月、3个月、1个月、20日、15日、12日、10日、9日、8日、7日、6日、5日、4 日、3日、2日、或1日中的任一个。在一些实施方式中，每次给予之间的间隔大于约1个月、 2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、8个月、或12个月中的任一个。在一些实施方式中， 经至少约 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30、36、48、60、72、或84个月中任一个的时间 给予组合物。
[0138] 示例性实施方式
[0139] 本申请在一些实施方式中提供包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒的组合物 (如药物组合物），其中组合物（如药物组合物）中不大于约2. 4%的总白蛋白是聚合物形 式。
[0140] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中至少约80%的总白蛋白是单体形式。
[0141] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中至少约92%的总白蛋白是单体形式。
[0142] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中至少约60%的单体白蛋白具有自由的硫醇基团。
[0143] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中至少约60 %的单体白蛋白具有封闭的硫醇基团。
[0144] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中不大于约10%的总白蛋白是二聚体形式。
[0145] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中不大于约3%的总白蛋白是寡聚体形式。
[0146] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）基本上不含无 C端Leu的白蛋白和无 N端Asp-Ala的白蛋白。
[0147] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中的白蛋白具有不同于得自人的天然白蛋白的糖基化特征。
[0148] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中的白蛋白不具有糖基化。
[0149] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）基本上不含脂肪酸。
[0150] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）基本上不含辛酸酯。
[0151] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）基本上不含色氨酸。
[0152] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）基本上不含血液组分。
[0153] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）基本上不含病毒和朊病毒。
[0154] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约0.5%的 7_表紫杉醇在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约两周时生成。
[0155] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约0.7%的 7_表紫杉醇在组合物（如药物组合物）在55 °C下储存约1个月时生成。
[0156] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约0.45%的 总杂质在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约两周时生成。
[0157] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约0.65%的 总杂质在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约1个月时生成。
[0158] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约1 %的另外 的白蛋白聚合物在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约两周时生成。
[0159] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约1 %的另外 的白蛋白聚合物在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约1个月时生成。
[0160] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约10%的白 蛋白单体在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约两周时消失。
[0161] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，不大于约20%的白 蛋白单体在组合物（如药物组合物）在55°C下储存约1个月时小时。
[0162] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中至少约80%的总白蛋白不与纳米颗粒缔合。
[0163] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，纳米颗粒包括用白 蛋白包被的紫杉醇。
[0164] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中的纳米颗粒基本上不含聚合物内核基质。
[0165] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中的纳米颗粒的平均直径不大于约200nm。
[0166] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物中白蛋白和 紫杉醇的重量比（如药物组合物）为约9:1至约1: 1。
[0167] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）中白蛋白和紫杉醇的重量比为约8:1至约1:1。
[0168] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）进一步包括蔗糖。
[0169] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）不包括蔗糖。
[0170] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）进一步包括依地酸盐（酯）。
[0171] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，组合物（如药物组 合物）不包括依地酸盐（酯）。
[0172] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，白蛋白是人白蛋白。
[0173] 本申请在一些实施方式中提供根据（或适于）以上实施方式中任一个的组合物 (如药物组合物）的市售商品。
[0174] 本申请在一些实施方式中提供治疗个体的疾病的方法，包括给予个体有效量的根 据（或适于）以上实施方式中任一个的组合物（如药物组合物）。
[0175] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，疾病是癌症。
[0176] 在根据（或适于）以上实施方式中任一个的一些实施方式中，个体是人。 实施例
[0177] 实施例1
[0178] 此实施例显示利用来自Novozyme的重组人白蛋白（rHA)和来自Baxter的人血清 白蛋白（HSA)制备紫杉醇/白蛋白纳米颗粒组合物。
[0179] 为制备紫杉醇/白蛋白纳米颗粒，将包含200mg/ml紫杉醇的1.6ml有机相 (90:10CHCl 3/Et0H(v/v))加入白蛋白（52mg/ml)的 28. 4ml 水相。利用 Silverson将混合物 在5500rpm下预先均质5分钟，然后转移到高压均质机（Avestin)中。在18, 000-20, OOOpsi 下进行均质化处理，同时使乳液再循环12遍。将所得系统转移到旋转蒸发仪中，并在减压 (40mm Hg)下经10-15分钟去除有机溶剂。分析所得悬浮液，确定白蛋白含量、颗粒尺寸、和 72小时等待时间（hold-time)。然后通过无菌的过滤器过滤悬浮液，装入IOml小瓶（3ml/ 瓶），并冻干。在过滤前和过滤后以及冻干后分析白蛋白含量、白蛋白分布、和颗粒尺寸。
[0180] 利用rHA和HAS制备的制剂具有相似的未过滤的和过滤后的颗粒尺寸，约140nm。 两种制剂均在工序内等待期间在72小时过程中是稳定的。两种制剂被可接受地过滤，并且 重构成相同的颗粒尺寸。两种制剂的重构悬浮液均是稳定的。
[0181] 但是，观察到在利用rHA和HAS制备的制剂之间白蛋白聚合物/寡聚体/单体特 征的差异。在尺寸排阻色谱上分析纳米颗粒组合物的白蛋白特征。尺寸排阻HPLC的条件 提出如下：
[0182] A.柱：TOSOH TSKgel G3000 SWXL，7.8X300mm，5 μπι 或等同形式
[0183] Β. Guard 柱：TOSOH TSKgel Guard SWXL，6. Ox 40臟，7 μπι 或等同形式
[0184] C.自动取样器温度：环境温度
[0185] D.柱温：环境温度
[0186] Ε.检测器波长：280nm
[0187] F.流速：L OmL/min
[0188] G.注射体积：50 μ L
[0189] Η·洗针溶剂冰
[0190] I.运行时间：22分钟
[0191] 分析结果总结在表1中。
[0192] 表 1
[0194] 实施例2
[0195] 此实施例显示利用来自Intrivia(rHSA)的重组人白蛋白和来自Baxter的人血清 白蛋白（HSA)制备紫杉醇/白蛋白组合物。
[0196] 为制备紫杉醇/白蛋白纳米颗粒，将I. 6ml有机相（90 :10CHCl3/Et0H(V/v))加 入白蛋白（52mg/ml)的28. 4ml水相。利用Silverson将混合物在5500rpm下预先均质5 分钟，然后转移到高压均质机（Avestin)中。在18, 000-20, OOOpsi下进行均质化处理，同 时使乳液再循环12遍。将所得系统转移到旋转蒸发仪中，并在40°C、减压（40mm Hg)下经 10-15分钟快速去除有机溶剂。分析所得悬浮液，确定白蛋白含量、颗粒尺寸、和72小时等 待时间。然后通过I. 2、0. 8、0. 45和0. 22 μ m注射过滤器过滤悬浮液，装入IOml小瓶（3ml/ 瓶），并冻干。在过滤前和过滤后以及冻干后分析白蛋白含量、白蛋白分布、和颗粒尺寸。
[0197] 利用HAS制备的制剂的未过滤的颗粒尺寸为156nm，而相应的利用rHSA制备的制 剂的未过滤的颗粒尺寸为173nm。两种制剂均在工序内等待期间经过72小时呈现稳定颗粒 尺寸。两种制剂被同等地过滤。两者的紫杉醇过滤回收率为约70%。两种制剂在冻干前被 重构成相同颗粒尺寸，并且两种制剂的重构悬浮液是稳定的。
[0198] 观察到利用rHA和HAS制备的制剂之间白蛋白聚合物/寡聚体/单体特征的差异。 尺寸排阻色谱法如实施例1所示进行。分析结果总结在表2中。
[0199] 表 2
[0201] 实施例3
[0202] 此实施例进一步显示不同纳米颗粒制剂的分析。用于此实施例的不同制剂在表3 中提供。rHA指代得自Novozyme的重组白蛋白。HA指代来自Grifols的人血清白蛋白。这 些制剂利用实施例1和2所述的相同高压均质法来制备。
[0203] 表3. NAB-紫杉醇制剂
[0205] 利用尺寸排阻色谱（HPLC)分析不同紫杉醇/白蛋白纳米颗粒制剂的白蛋白单体 /聚合物特征。尺寸排阻HPLC的条件提出如下：
[0206] A.柱（Guard) :T0S0H BioScience，LLC Guard SWxL，6. Omm X 40mm，7 μ m
[0207] B.柱温：环境温度
[0208] C.柱：TOSOH BioScience，LLC TSKgel G3000SWxL，7. 8mm x 300mm，5 μπι
[0209] D.检测器波长：228nm
[0210] Ε·流速：1. OmL/min
[0211] F.注射体积：10 μ L
[0212] G.洗针冰
[0213] Η.运行时间：60min(标准品制剂1、2和3为20min或更少，如果在基线没有发现 干扰，则确认标准品制剂）
[0214] 表4总结了白蛋白特征。
[0215] 表4.用于包含重组人白蛋白或人白蛋白的NAB-紫杉醇制剂的白蛋白异构体的比 较
[0218] 分析总杂质和储存过程中生成的7-表紫杉醇。结构在表5中提供。
[0219] 表5.包含重组人白蛋白或人白蛋白的NAB-紫杉醇制剂的紫杉醇杂质的比较
[0220]
[0221] 实施例5
[0222] 在此实验中，评价了在如实施例5所述利用20%来自Grifols的人血清白蛋白 (NAB-紫杉醇）和20%来自Novozyme的重组人白蛋白（NAB-紫杉醇-NFZ)制备的紫杉醇 /白蛋白纳米颗粒组合物中白蛋白/紫杉醇比（w/w)对白蛋白特征、颗粒尺寸、和重构时间 的影响。紫杉醇/白蛋白纳米颗粒制剂按照实施例1和2所述的方法制备。通过控制加入 制剂的白蛋白总量，调节最终白蛋白/紫杉醇比。
[0223] 分析白蛋白/紫杉醇比为4 :1、5 :1、6 :1、和8 :1的紫杉醇/白蛋白制剂的白蛋白 特征。结果总结在表6中。
[0224] 表6.用于包含不同的人白蛋白与紫杉醇的比的NAB-紫杉醇制剂的白蛋白异构体 的比较
[0226] 分析总杂质和储存过程中生成的7-表紫杉醇。结构在表7中提供。
[0227] 表7.包含不同的人白蛋白与紫杉醇的比的NAB-紫杉醇制剂的紫杉醇杂质的比较
[0230] 分析不同制剂的重构时间，结果总结在表8中。
[0231] 表8.包含不同的人白蛋白与紫杉醇的比的NAB-紫杉醇制剂的重构时间的比较
[0234] 分析不同制剂的颗粒尺寸，结果总结在表9中。
[0235] 表9.包含不同的人白蛋白与紫杉醇的比的NAB-紫杉醇制剂的颗粒尺寸的比较
[0237] 虽然为了清楚理解已通过示例和实例对前述发明进行了一定详细的描述，但对于 本领域技术人员显而易见的可以有某些小变化和改动。因此，描述和实例不应被解释为限 制本文描述的范围。
【主权项】
1. 药物组合物，包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒，其中所述药物组合物中不大于 约2. 4%的总白蛋白是聚合物形式。2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中至少约80 %的总白蛋白 是单体形式。3. 根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述药物组合物中至少约92%的总白蛋白 是单体形式。4. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中至少约60%的单体白蛋 白具有自由的硫醇基团。5. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中至少约60%的单体白蛋 白具有封闭的硫醇基团。6. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中不大于约10%的总白蛋 白是二聚体形式。7. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中不大于约3%的总白蛋 白是寡聚体形式。8. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上不含无C端Leu的 白蛋白和无N端Asp-Ala的白蛋白。9. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的所述白蛋白具有不同 于得自人的天然白蛋白的糖基化特征。10. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的所述白蛋白不具有 糖基化。11. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上不含脂肪酸。12. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上不含辛酸酯。13. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上不含色氨酸。14. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上不含血液组分。15. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中至少约80%的总白蛋 白不与所述纳米颗粒缔合。16. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒包括用白蛋白包被的紫杉 醇。17. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的所述纳米颗粒的平 均直径不大于约200nm。18. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物中所述白蛋白和所述紫杉醇 的重量比为约9 :1至约1 :1。19. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述白蛋白是人白蛋白。20. 根据权利要求1所述的药物组合物的市售商品。21. 治疗个体的癌症的方法，包括给予所述个体有效量的根据权利要求1所述的药物 组合物。22. 权利要求21所述的方法，其中所述个体是人。
【专利摘要】本发明提供包括含有白蛋白和紫杉醇的纳米颗粒的组合物(如药物组合物)。所述组合物具有具体的白蛋白聚合物/单体特征，并且特别适合用于治疗疾病如癌症。
【IPC分类】A61K31/337, A61P35/00, A61K9/14, A61K38/38
【公开号】CN105007912
【申请号】CN201380073926
【发明人】N·P·德赛
【申请人】阿布拉科斯生物科学有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2013年12月19日
【公告号】CA2896288A1, EP2938340A1, US20140186447, WO2014105644A1