3100单独及以组合形式对VCaP、MDA PCa 2b及DUCaP细胞中的IGF-1R、AR及PTEN量 以及AKT磷酸化的效果。将细胞接种于6孔培养板中且处理24小时。（A)将自经处理的 VCaP细胞制备的溶胞物与未处理的对照组及不敏感的PC-3细胞在IGF-1R、AR、PTEN及AKT 的表达及AKT-Ser473的磷酸化方面进行比较。评估未处理及经处理的MDA PCa 2b细胞 (B)及DUCaP细胞（C)的蛋白质表达及AKT磷酸化，且与VCaP细胞比较。未处理的PC-3细 胞充当对照组。
[0018] 重要的是，显示VCaP、MDA PCa 2b及DUCaP细胞表达IGF1-R、AR及PTEN，这不同 于不敏感的细胞株PC-3。MDV-3100处理稍微增加 AR蛋白质的量，此可归因于蛋白质的稳 定化。同时，在MDV-3100处理后，IGF-IR量稍微减少。两种药物的组合导致比单独的抗体 或MDV-3100处理更完全的AKT磷酸化的抑制。
[0019] 图4.在IGF mAb_l及MDV-3100的单一药物及组合处理之后的IGF信号传导路径 抑制
[0020] 图4展示以单一药物形式及以组合形式使用IGF mAb_l及MDV-3100经120小时 处理对VCaP细胞中的IGF-IR量及AKT磷酸化的效果。将VCaP细胞接种于6孔培养板中， 且用MDV-3100及IGF mAb_l以单一药物形式或以组合形式处理24、48、72、96及120小时。 比较自经处理的细胞制备的溶胞物与未处理对照组的AKT-Ser473的磷酸化。两种药物的 组合导致比单独的抗体或MDV-3100处理持续时间更长的AKT磷酸化的抑制。
[0021] 图5.在IGF mAb_l及MDV-3100的单一药物及组合处理之后的VCaP细胞的增殖 活性降低
[0022] 使用H3-胸苷并入分析来监测VCAP细胞的增殖。用10 μ M MDV-3100或1 μ M IGF mAb_l以单一药物形式处理96小时，使增殖活性降低约50%。与未处理的对照组相比，IGF mAb_l及MDV-3100的组合使胸苷并入降低超过95%。
[0023] 图6.在IGF mAb_l及MDV-3100的单一药物及组合处理之后VCaP细胞的生长速 率降低
[0024] (A)如在微观分析中所观察的以单一药物形式及以组合形式使用1 μΜ IGF mAb_l 及10 μΜ MDV-3100对细胞形态及细胞生长的效果。（B)与未处理的对照组相比，10 μΜ MDV-3100对VCaP细胞传代时间的效果。
[0025] 图7. IGF mAb_l及MDV-3100的组合处理增加对VCaP细胞中细胞凋亡的诱导
[0026] 在用10 μΜ MDV-3100及1 μΜ mAb以单一药物形式及以组合形式处理最多96小时 后，使用半胱天冬酶3(Caspase 3)活性作为诱导VCaP细胞中细胞凋亡的量度。MDV-3100 处理在96小时处理内不诱导半胱天冬酶3活性，而在用IGF mAb_l处理后观察到细胞凋亡 事件增加。两种药物的组合显示对诱导半胱天冬酶3活性的协同效应，该协同效应比对照 组增加约9倍且比IGF mAb_l处理高约2. 5倍。
[0027] 图8.用MDV-3100及IGF mAb_l处理的VCaP细胞的细胞周期概况如经由流动式 细胞测定法检测的碘化丙啶染色所测定，在用10 μΜ MDV-3100及ΙμΜ mAb以单一药物形 式及以组合形式处理24小时、48小时及72小时之后的VCaP细胞的细胞周期概况。左侧 第一群体为表示细胞凋亡细胞的sub-Gl群体，第二群体显示G1/G0峰值，浅灰色群体显示 S阶段中的细胞，且右侧群体表示细胞周期的G2/M阶段中的细胞。在用IGF mAb_l处理的 VCaP细胞中，且在用IGF mAb_l及MDV-3100的组合处理的细胞中较大程度上，细胞凋亡细 胞群体随时间增加，而在用MDV-3100处理的VCaP细胞中此群体不变化。实际上，MDV-3100 处理与未处理的对照组相比增加 G1/G0群体。
[0028] 图9.对IGF信号传导抑制之后细胞凋亡及细胞周期调控因子的蛋白质分析
[0029] 经由西方墨点分析法分析的用10 μΜ MDV-3100及1 μΜ IGF mAb_l以单一药物形 式及以组合形式处理在8小时、24小时、48小时及72小时之后对AKT磷酸化、PARP分裂、 p21、⑶K2、细胞周期调节蛋白E (Cyclin E)及PCNA量的效果。IGF mAb_l处理导致AKT磷 酸化的阻断，且经组合的IGF mAb_l及MDV-3100处理增加 PARP分裂及细胞周期调节蛋白 E量，同时减少⑶K2及PCNA量。在8及24小时时，MDV-3100处理增加 p21量。
[0030] 发明概述
[0031] 在一个方面中，本发明涉及一种胰岛素样生长因子（IGF)受体拮抗剂，其用于与 雄激素受体拮抗剂组合治疗前列腺瘤形成，包括良性前列腺增生（BPH)、前列腺癌及尤其 CRPC0
[0032] 在另一实施方式中，本发明涉及一种治疗前列腺瘤形成（包括良性前列腺增生 (BPH)、前列腺癌及尤其CRPC)的方法，其包括向有需要的患者给予治疗有效量的IGF受体 拮抗剂，及在给予该IGF受体拮抗剂的同一天、或在给予该IGF受体拮抗剂之前或之后一 天、两天、三天、四天、五天、六天或七天时向同一患者另外给予治疗有效量的雄激素受体拮 抗剂。
[0033] 发明详述
[0034] 本发明涉及前列腺瘤形成的治疗。
[0035] 就"前列腺瘤形成"而言，本发明的方面包括前列腺瘤形成为前列腺癌（包括良性 及恶性肿瘤，及尤其对去势疗法有抗性的前列腺癌）；以及良性前列腺增生的情况。
[0036] 在一个方面中，本发明涉及一种胰岛素样生长因子（IGF)受体拮抗剂，其用于治 疗前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为激素敏感性前列腺癌。在另一实施方式中，前 列腺癌为在组合雄激素阻断法（combined androgen blockade)之后的前列腺癌。在另一 实施方式中，前列腺癌为用抗血管生成疗法治疗的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌 已用化学治疗剂治疗或将用其治疗。在另一实施方式中，前列腺癌为已用放射疗法治疗或 将用其治疗的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为用骨质流失疗法（例如地诺单抗 (denosumab))及激素消融法（hormone ablation)治疗或将用其治疗的前列腺癌。
[0037] 在另一实施方式中，前列腺癌为对去势疗法有抗性的前列腺癌（CRPC)。在另一实 施方式中，对去势疗法有抗性的前列腺癌已用化学治疗剂治疗或将用其治疗。在另一实施 方式中，对去势疗法有抗性的前列腺癌已用放射疗法治疗或将用其治疗。在另一实施方式 中，前列腺癌为在使用多西他赛之前或之后的情况下的对去势疗法有抗性的前列腺癌。在 另一实施方式中，前列腺癌为卡巴他赛（cabazitaxel)治疗之后的对去势疗法有抗性的前 列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为用雄激素合成抑制剂（例如乙酸阿比特龙）治疗 之后的对去势疗法有抗性的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为用雄激素受体拮抗 剂（例如恩杂鲁胺）治疗之后的对去势疗法有抗性的前列腺癌。在另一实施方式中，前列 腺癌为用免疫调节剂（例如西普亮塞-T (Sipuleucel-T))治疗之后的对去势疗法有抗性的 前列腺癌。
[0038] 在另一方面中，本发明涉及一种胰岛素样生长因子（IGF)受体拮抗剂，其用于与 雄激素受体拮抗剂组合治疗前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为激素敏感性前列腺 癌。在另一实施方式中，前列腺癌为在合并雄激素阻断法之后的前列腺癌。在另一实施方 式中，前列腺癌为用抗血管生成疗法治疗的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌已用化 学治疗剂治疗或将用其治疗。在另一实施方式中，前列腺癌为用放射疗法治疗或将用其治 疗的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为用骨质流失疗法（例如地诺单抗）及激素 消融法治疗或将用其治疗的前列腺癌。
[0039] 在另一实施方式中，前列腺癌为对去势疗法有抗性的前列腺癌。在另一实施方式 中，对去势疗法有抗性的前列腺癌已用或将用化学治疗剂治疗。在另一实施方式中，对去势 疗法有抗性的前列腺癌已用或将用放射疗法治疗。在另一实施方式中，前列腺癌为在使用 多西他赛之前或之后情况下的对去势疗法有抗性的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺 癌为卡巴他赛治疗之后的对去势疗法有抗性的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为 用雄激素合成抑制剂（例如乙酸阿比特龙）治疗之后的对去势疗法有抗性的前列腺癌。在 另一实施方式中，前列腺癌为用雄激素受体拮抗剂（例如恩杂鲁胺）治疗之后的对去势疗 法有抗性的前列腺癌。在另一实施方式中，前列腺癌为用免疫调节剂（例如西普亮塞-T) 治疗之后的对去势疗法有抗性的前列腺癌。
[0040] 在另一方面中，本发明涉及一种胰岛素样生长因子（IGF)受体拮抗剂，其用于治 疗良性前列腺增生。在另一方面中，本发明涉及一种胰岛素样生长因子（IGF)受体拮抗剂， 其用于与雄激素受体拮抗剂组合治疗良性前列腺增生。
[0041] 在本发明上下文中的IGF受体拮抗剂为直接或间接干扰、及减少或阻断IGF受体 信号传导的化合物。优选地，IGF受体拮抗剂为减少或阻断IGF配位体与其受体的结合、或 抑制IGF受体的酪氨酸激酶活性的化合物。
[0042] 在另一实施方式中，本发明的IGF受体拮抗剂为结合至IGF配位体且因此减少或 阻止该配位体与受体的结合的抗体。在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为结合至IGF-I受 体且因此减少或阻止配位体与该受体的结合的抗体。经由阻断受体-配位体结合，经由受 体的酪氨酸激酶活性的配位体诱导的受体信号传导得以减少或阻止。所述抗体一般称为中 和抗体。在另一方面中，本发明涉及一种IGF受体拮抗剂，其中和胰岛素样生长因子（IGF-1 及IGF-2)的生长促进特性。
[0043] 术语"抗体"涵盖抗体、抗体片段、抗体样分子及与以上任一者的结合物。抗体包 括（但不限于）多克隆或单克隆抗体、嵌合抗体、人类化抗体、人类抗体、单特异性抗体、双 特异性抗体或多特异性抗体。术语"抗体"将涵盖由淋巴细胞产生且例如存在于血清中的 完整免疫球蛋白、由融合瘤细胞株分泌的单克隆抗体、由宿主细胞中的重组表达产生的多 肽（其具有免疫球蛋白或单克隆抗体的结合特异性），及已经由进一步加工而来源于所述 免疫球蛋白、单克隆抗体或多肽同时保留其结合特异性的分子。特别是，术语"抗体"包括 包含两条重链及两条轻链的完整免疫球蛋白。在另一实施方式中，该术语涵盖免疫球蛋白 的片段，如Fab片段。在另一实施方式中，术语"抗体"涵盖具有一或多个来源于免疫球蛋 白的可变域的多肽，如单链抗体（scFv)、单域抗体等等。
[0044] 在另一实施方式中，本发明的IGF受体拮抗剂为针对IGF-I的抗体、针对IGF-2的 抗体、结合IGF-I及IGF-2两者的抗体、针对IGF-I受体（IGF-IR)的抗体，或IGF-IR酪氨 酸激酶活性的抑制剂。
[0045] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID NO: I (HCDRl)、SEQ ID N0:2(HCDR2)及 SEQ ID N0:3(HCDR3)的重链互补决定区以及 SEQ ID N0:4(LCDR1)、SEQ ID N0:5(LCDR2)及SEQ ID N0:6(LCDR3)的轻链决定区的IGF配位体抗体。
[0046] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID N0:11(HCDR1)、SEQ ID N0:12(HCDR2)及 SEQ ID N0:13(HCDR3)的重链互补决定区以及 SEQ ID N0:14(LCDR1)、SEQ ID NO: 15 (LCDR2)及SEQ ID NO: 16 (LCDR3)的轻链决定区的IGF配位体抗体。
[0047] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID N0:21(HCDR1)、SEQ ID N0:22(HCDR2)及 SEQ ID N0:23(HCDR3)的重链互补决定区以及 SEQ ID N0:24(LCDR1)、SEQ ID NO: 25 (LCDR2)及SEQ ID NO: 26 (LCDR3)的轻链决定区的IGF配位体抗体。
[0048] 在另一优选实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID NO:31 (HCDRl)、SEQ ID N0:32(HCDR2)及 SEQ ID N0:33(HCDR3)的重链互补决定区以及 SEQ ID N0:34(LCDR1)、SEQ ID NO: 35 (LCDR2)及SEQ ID NO: 36 (LCDR3)的轻链决定区的IGF配位体抗体。本文中指定 含有这些互补决定区的抗体的一个实例为IGF mAb_l。
[0049] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID NO: 7的重链可变区及SEQ ID N0:8的轻链可变区的IGF配位体抗体。
[0050] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID NO: 17的重链可变区及SEQ ID NO: 18的轻链可变区的IGF配位体抗体。
[0051] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID NO: 27的重链可变区及SEQ ID NO: 28的轻链可变区的IGF配位体抗体。
[0052] 在另一优选实施方式中，IGF受体拮抗剂为具有SEQ ID N0:37的重链可变区及SEQ ID N0:38的轻链可变区的IGF配位体抗体。本文中指定含有这些可变区的抗体的一个实例 为 IGF mAb_l。
[0053] 在另一实施方式中，IGF受体拮抗剂