药效试验柱状图。
[0048] 图2化合物I抗AP42蛋白第2次体外药效试验柱状图。
[0049] 图3化合物I抗AP42蛋白第3次体外药效试验柱状图。
[0050] 图4化合物I抗AP42蛋白3次独立重复体外药效试验均值柱状图。
【具体实施方式】
[0051] 下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，必须说 明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制，根据本发明的实质对本发明进 行的改进都属于本发明要求保护的范围。本发明所描述术语都是专业科学领域所普通应用 的科学术语，并不以任何方式局限本发明范围。
[0052] 实施例中所用的2-氯-6-甲基苯胺购自杭州达康化工有限公司，（E) -3-乙氧基丙 烯酰氯购自湖南华腾制药有限公司，4, 6-二氯-2-甲基嘧啶购自常州瑞盛化工有限公司， 1- (2-羟乙基）哌嗪购自上海海曲化工有限公司，其余试剂均购自国药集团化学试剂北京 有限公司。
[0053] 实施例I:N-(2-氯-6-甲基苯基）-2- {6- [4- (3-羟乙基）-1-哌嗪基]-2-甲 基-4-嘧啶基氨基}-5-噻唑甲酰胺（化合物I)的制备
[0055] 步骤I: (E)-N-(2-氯-6-甲基苯基）-3-乙氣基丙燔酰胺（化合物丨丨）的制备
[0056] 将2-氯-6-甲基苯胺（34. 8g，246mmol)溶于CH2Cl2(300mL)中，室温搅拌溶解， 然后加入吡啶（18. 6g，235mmol)。将反应液用冰水浴冷却至0°C，缓慢滴加（E)-3-乙氧基 丙烯酰氯（39.6g，294mm〇l)，然后反应液在冰水浴中继续搅拌反应3h。减压蒸除溶剂，将 残余物用冰水浴冷却至〇°C，搅拌加入蒸馏水（180mL)，继续搅拌30min。过滤，用蒸馏水 (180mLX2)洗涤滤饼，干燥得白色固体（E)-N-(2-氯-6-甲基苯基）_3_乙氧基丙稀酰胺 (II)55. 8g，收率 94. 6%。
[0057]熔点：170 ~172°C
[0058] 核磁共振检测：
[0059] 1HNMR(400MHz,DMS〇-d6) : 1. 27 (t, 3H), 2. 16 (s, 3H), 3. 94 (q, 2H), 5. 58 (d, 1H),7. 18 ~7. 23 (m, 2H),7. 32 (d, 1H),7. 46 (d, 1H)，9. 29 (s, 1H)〇
[0060] 步骤2 :2_氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基）-5-噻晔甲酰胺（化合物丨V)的制备
[0061] 将出)4-(2-氯-6-甲基苯基）-3-乙氧基丙烯酰胺（11)(51.68,215111111〇1) 溶于蒸馏水（240mL)和1，4_二氧六环（120mL)的混合溶液中，放入低温浴槽中冷却 至-KTC，加入N-溴代丁二酰亚胺（42. 2g，237mmol)，升温至室温后继续搅拌3h。加入硫 脲（16. 5g，217mmol)，将反应液加热至80°C后保温搅拌2h。将反应液冷却至室温后，缓 慢滴加氨水，调溶液pH值至8~9,减压浓缩至有大量固体析出，向反应液中加入蒸馏水 (200mL)，将反应液降温至0°C，抽滤，用蒸馏水（200mLX2)洗涤滤饼，干燥得黄褐色固体 2- 氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基）-5-噻唑甲酰胺（IV) 55.lg，收率95. 7 %。
[0062]熔点：207 ~209cC
[0063] 核磁共振检测：
[0064]1HNMR(400MHz,DMSO-(I6) :2. 21 (s, 3H), 7.24(m,2H), 7.36(d,1H), 7.69 (s, 2H), 7. 8 7(s，1H)，9. 66(s，1H)〇
[0065] 步骤3 :N-(2-氯-6-甲基苯基）-2-「（6-氯-2-甲基-4-嘧啶基）氨基1-5-噻晔 甲酰胺（化合物V)的制备
[0066] 将2-氨基-N_(2-氯-6-甲基苯基）-5-噻唑甲酰胺（IV) (45. 0g, 168mmol)溶于 无水四氢呋喃（450mL)中，加入4, 6-二氯-2-甲基嘧啶（32. 9g，202mmol)，用冰水浴冷却至 l〇°C以下。向反应液中缓慢加入叔丁醇钠（56. 3g，586mmol)，继续搅拌反应3h。用盐酸将 溶液pH值调至6,有结晶析出。继续搅拌I. 5h，过滤，滤饼用蒸馏水（IOOmL)洗涤，干燥得 淡黄色固体N-(2-氯-6-甲基苯基）-2-[(6_氯-2-甲基-4-嘧啶基）氨基]-5-噻唑甲酰 胺（V)59. 3g，收率 89. 5%。
[0067] 熔点：>300°C
[0068] 核磁共振检测：
[0069]1HNMR(400MHz，DMS0-d6):2. 23 (s，3H)，2. 57 (s，3H)，6. 93 (s，1H)，7. 27(m，2H)，7. 3 9 (d，1H)，8. 28 (s，1H)，10. 00 (s，1H)，12. 20 (s，1H)。
[0070] 步骤4 :N-(2-氯-6-甲基苯基）-2-16-「4-(3-羟乙基）-1-哌嗪基1-2-甲基-4-嘧 啶基氨基丨-5-噻晔甲酰胺（化合物丨）的制备
[0071] 将N-(2-氯-6-甲基苯基）-2-[(6_氯-2-甲基-4-嘧啶基）氨基]-5-噻唑 甲酰胺（V) (52. 5g, 133mmol)溶于二甲基亚砜（500mL)中，加入1-(2-轻乙基）哌嗪 (60. 9g，265mmol)和N，N-二异丙基乙胺（34. 7g，267mmol)。将反应液加热至80°C后保温 搅拌反应lh。向反应液中加入蒸馏水（1000 mL)，冰水浴冷却至15°C，缓慢搅拌析晶lh。过 滤，干燥得淡黄色固体61.2g。将该固体加入到80%乙醇水溶液（650mL)中，加热至80°C， 保温搅拌直至固体完全溶解，自然冷却至15°C，并保温搅拌lh，过滤，干燥得白色固体 N- (2-氯-6-甲基苯基）-2- {6- [4- (3-羟乙基）-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基氨基} -5-噻 唑甲酰胺（I)5〇.6g，收率75.2%。
[0072] HPLC纯度：99. 4%
[0073] 熔点：282 ~283cC
[0074] 核磁共振检测：
[0075] 1HNMR(400MHz,DMS〇-d6) : 2. 24 (s, 3H), 2. 42 (s, 3H), 2. 46 (t, 2H), 2. 50 (t, 4H), 3. 50 (m, 4H),3. 54 (q, 2H),4. 41 (t, 1H),6. 05 (s, 1H),7. 23 (t, 1H),7. 27 (d, 1H),7. 39 (d, 1H),8. 21(s, 1H), 9.85 (s, 1H), 11.43 (s, 1H)。
[0076] 实施例2 :化合物I抗Amyloid-P蛋白小鼠大脑皮层神经元毒性药效试验
[0077] 本发明测试所用的化合物JKF-027依据文献报道的方法制备得到： W〇2〇l2/l〇3282 (公开日：2〇12 年 〇8 月 〇2 日）
[0078] 1)试验目的
[0079] 利用Amyloid-P42寡聚体致胎鼠原代分离脑皮层神经元损伤，检测化合物I抗 A0 42蛋白毒性作用。
[0080] 2)试验材料
[0081] ⑴供试品基本信息
[0082]
[0083] (2)供试品配制
[0084] 配制方法：稀释化合物I和JKF-027成7个浓度。
[0085] 配制后暂存条件及有效期：现用现配。
[0086] 3)试验方法
[0087] (1)胎鼠神经元原代分离
[0088] 试验准备：消毒的手术器械、移液枪、