一种去甲异波尔定壳聚糖微球及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于壳聚糖微球的制备领域，具体涉及一种去甲异波尔定壳聚糖微球及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 去甲异波尔定是从樟科山胡椒属植物乌药a辟?rebate(Sims)Kosterm. 的干燥块根中分离得到，含量高达1%。近年来对乌药的抗炎镇痛的研究发现，乌药总生物 碱能够显著抑制佐剂性关节炎大鼠继发性足肿胀，对原发性足肿胀也有抑制趋势。同时乌 药总生物碱还能够减轻小鼠胶原关节炎的严重程度，减少血清中抗胶原抗体，保护骨关节 的损坏，其作用机制是通过阻止脂多糖诱导的RAW264. 7细胞的NF-kB激活和MAPKs磷酸 化而发挥作用。而去甲异波尔定作为乌药总碱中的主要活性成分(在乌药总碱中的含量为 37. 8%)，具有与乌药总碱相似的药理作用。去甲异波尔定通过下调MAPKs信号通路的活性 抑制巨噬细胞的活化和致炎因子的释放，从而显著减少RAW264. 7巨噬细胞释放一氧化氮、 肿瘤坏死因子和白细胞介素-10。但药动学研究表明，去甲异波尔定的生物利用度仅有 2. 7%，而代谢产物去甲异波尔定-9-0-a-葡萄醛酸苷的血药浓度大大高于其原型药物，且 在体内停留时间也超过原形药。去甲异波尔定的动物实验表明能够显著减少关节炎小鼠 (CIA)的疾病严重程度，保护关节受损，减少血清中抗胶原蛋白抗体的含量等，药理作用明 确且毒副作用小，但由于其自身微溶于水，体内代谢迅速、血药浓度生物利用度低等极大地 限制了它在临床上的应用。
[0003] 因此如何通过改变剂型来提高去甲异波尔定的生物利用度，减少代谢作用，提高 去甲异波尔定的应用价值成了目前的主要问题。
[0004] 壳聚糖作为一种资源丰富的天然高分子化合物，因其不仅具有良好的生物相容 性、生物黏附性、低毒性、易降解吸收，而且还具有消炎、抗菌、止血、抑制癌细胞转移等大多 数聚合物所不具有的功能，成为了药物控释剂的新热点。壳聚糖中大量的-0H和-NH2，使其 具有较强的吸附性，易进行化学修饰。通过醛氨缩合反应可以使壳聚糖形成网状聚合物，从 而降低氨基被质子化的几率，防止壳聚糖使用时的损耗及流失，提高其应用特性，因此壳聚 糖常用于制备微球。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于针对去甲异波尔定的生物利用度低的问题，提供一种去甲异波 尔定壳聚糖微球及其制备方法。将去甲异波尔定制成壳聚糖微球，能显著提高去甲异波尔 定的生物利用度、改善口服吸收、延长药物释放时间，为去甲异波尔定新剂型的研究和开发 提供了新的思路。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种去甲异波尔定壳聚糖微球的制备方法，包括以下步骤： 1)先将去甲异波尔定溶于醋酸溶液，然后加入壳聚糖溶胀后超声脱气，配制成去甲异 波尔定壳聚糖醋酸溶液； 2) 在圆底烧瓶中加入液体石蜡和乳化剂，搅拌下逐滴加入步骤1)制得的去甲异波尔定 壳聚糖醋酸溶液，40 °C下搅拌乳化0.5h; 3) 逐滴加入交联剂，升温至60°C后，反应5小时；然后用石油醚冲洗干净，离心分离弃 去上清液，并于30 °C干燥3h得去甲异波尔定壳聚糖微球。
[0007] 步骤1)中醋酸溶液的体积分数为2%，去甲异波尔定壳聚糖醋酸溶液中壳聚糖的 浓度为10g/L，去甲异波尔定与壳聚糖的质量比为1:20-3:1。
[0008] 步骤2 )所述的乳化剂为Span-80，乳化剂用量为液体石蜡体积的4%。
[0009] 步骤2)中液体石蜡与去甲异波尔定壳聚糖醋酸溶液的体积比为8:1。
[0010] 步骤2)中搅拌速度为1000-1500r/min。
[0011] 步骤3)中所述的交联剂为50%戊二醛，交联剂与去甲异波尔定壳聚糖醋酸溶液的 体积比为1:60。
[0012] -种如上所述的制备方法制得的去甲异波尔定壳聚糖微球，当采用以上最优参数 时，去甲异波尔定的包封率达到69. 27%。
[0013] 包封率的计算 微球包封率是指被包裹物质（如去甲异波尔定)在微球中占药物总量的百分量。本文包 封率按照以下公式计算： 包封率=微球中药物含量/投入的药物总量X100% ; 微球中药物含量=供试品峰面积/对照品峰面积X对照品浓度X容量瓶体积。
[0014] 本发明的有益效果在于： 1) 去甲异波尔定是乌药中的一种异喹啉生物碱，将其制成壳聚糖微球，克服了去甲异 波尔定在水溶液中的难溶性问题，增加去甲异波尔定的吸收，提高其生物利用度，为进一步 新药开发奠定重要基础； 2) 本发明通过对去甲异波尔定壳聚糖微球的制备工艺进行优化，所测得的去甲异波尔 定的包封率69. 27%，比优化前的处方制备的微球的包封率提高了 27. 97% ; 3) 本发明将去甲异波尔定制成壳聚糖微球，极大提高了去甲异波尔定的生物利用度， 延长了药物释放时间，减少临床给药频次，减少给药量，降低不良反应。此去甲异波尔定壳 聚糖微球的制备方法操作简单，易重复，可控性好，具有很好的应用前景。
【附图说明】
[0015] 图1实施例1制得的去甲异波尔定壳聚糖微球的电镜图；A为0. 25mg/mL的微球 电镜图；B为0. 5mg/mL的微球电镜图；C为1.Omg/mL的微球电镜图； 图2A为实施例1制得的去甲异波尔定壳聚糖微球的液相色谱图；B为对照品的液相 色谱图。
【具体实施方式】
[0016] 本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实 施例。
[0017] 实施例1 实验原料： 去甲异波尔定（由上海中药标准化研究中心提供，纯度> 98%);壳聚糖(上海伯奥生物 科技有限公司，批号130204,脱乙酰度多90.0%，粘度<lOOcps);乙腈、甲酸（默克公司，色 谱纯);乙酸（国药集团化学试剂有限公司，分析纯）;液体石蜡（国药集团化学试剂有限公司， 分析纯)、乙酸乙酯、石油醚(天津恒兴化学试剂制造有限公司，分析纯);司盘-80、吐温-20、 吐温_80(国药集团化学试剂有限公司，化学纯);戊二醛(阿拉丁工业公司，质量分数为50%， 化学纯）；水为超纯水。
[0018] 主要仪器： 美国WatersAlliance高效液相色谱仪；Waters2998PAD检测器；HITACH公司H7650 型透射电镜（TEM) ;SIS公司400万像素(XD;DF-101S集热式磁力搅拌器(杭州明远仪器有 限公司）;纳米粒度仪（NIC0MP? 380ZLSZetapotential/particlesizer);BSA系列十万分 之一分析天平(德国塞多利斯科学仪器有限公司）;Mi11i-Q超纯水仪（Millipore，Bedford， MA,USA)〇
[0019] 微球的制备： 1) 先将去甲异波尔定溶于体积分数为2%的醋酸溶液中，然后加入壳聚糖溶胀后超声 脱气，配制成去甲异波尔定壳聚糖醋酸溶液；其中壳聚糖的浓度为l〇g/L; 2) 在50mL圆底烧瓶中加入24mL液体石錯，乳化剂0. 96mL，搅拌下逐滴加入去甲异波 尔定壳聚糖醋酸溶液3mL，40°C下搅拌乳化0. 5h; 3) 逐滴加入交联剂50%戊二醛0. 05mL，升温至60°C后，继续反应5h后；用石油醚反 复冲洗干净，离心分离弃去上清液，并于30 °C干燥3h得去甲异波尔定壳聚糖微球。
[0020] 对照品制备 精密称取去甲异波尔定对照品8. 42mg，用甲醇-稀盐酸（0. 5%，v/v)的混合液（2:1) 溶解后，定量转移至10mL的容量瓶中，并用甲醇-稀盐酸（0. 5%，v/v)的混合液（2:1)定 容，过0. 22ym微孔滤膜，得到0. 842mg?mL1的对照品储备液。
[0021] 供试品制备 将壳聚糖微球研细，精确称取一定量加入到50mL圆底烧瓶中，加入甲醇-稀盐酸 (0.5%，￥八）的混合液（2:1)3〇!^，超声3〇1^11，90°(：水浴回流4 11，冷却转移至5〇1^容 量瓶，并用甲醇-稀盐酸（〇. 5%，v/v)的混合液（2:1)定容，摇匀，静置，取上清液过0. 22ym 微孔滤膜即得。
[0022] 为了使微球的包封率达到最佳，本发明对各条件参数进行了优化研究。
[0023] 1、醋酸浓度的优化 用体积分数分别为1%，2%，3%的醋酸溶液制得质量浓度为10g/L的壳聚糖醋酸溶液， 其他条件不变，进行未载药微球的制备，由表1可见，2%醋酸浓度制备的壳聚糖微球粒径分 散度为〇. 457,分布最均匀，且经纳米粒径仪测量发现，2%醋酸溶液得到的微球形态良好， 大小适中，分散均匀；因此，选用2%醋酸浓度来制备微球。
[0024] 表1不同的醋酸浓度制得的壳聚糖微球对比表
2、 壳聚糖醋酸浓度的优化 使用体积分数2%的醋酸水溶液来配制质量浓度分别为5g/L，10g/L，15g/L的壳聚糖 醋酸溶液，其他条件不变，制备未载药壳聚糖微球；经纳米粒径仪测量发现，10g/L的壳聚 糖醋酸溶液制备的微球形态良好，大小适中，分散均匀；由表2可知，当壳聚糖醋酸浓度为 5g/L时，制得的微球粒径偏小，且分散也不够均匀