为其自身的对照。
[0086] 行为评估以测量游戏动力：
[0087] 两个用墙围住的畜栏（各测量为：100cm W X 100cm L X 75cm Η ;昆城聚合物 (Quenn City polymers)，代顿，俄亥俄州），一个分类为开始箱，另一个为目标箱，每个都有 在中心含有lcm直径孔的有机玻璃（plexi-glass)屋顶，将两个箱子放置得彼此靠近，并通 过回转门（23cm W X 18cm H)连接。回转门由1/16"有机玻璃构成，并与门框的顶部连接。 门与猫在其集体起居室中习惯使用的类型相似。为了评估游戏动力，回转门制作成通过增 加放置在门底部的槽的重量而渐渐较难打开。当猫用足够的力推动加重的门时，门转离框， 允许猫从门下穿过进入允许其与玩具互动的目标箱中。每次膳食处理对猫评估两次，在第 14天和再次第37天喂食后约5小时时。研究开始4天前不允许猫与毛绒玩具互动。所有 程序和测量改自维道斯思科（Widowski)和邓肯（Duncan)，2000。
[0088] 测试程序：每只猫单独地从集体起居室移出，并被置于开始畜栏中。将与类似于 填充老鼠玩具系到一根绳子上，并仅从目标畜栏的有机玻璃屋顶的中间的截孔悬下。被释 放到开始畜栏之后，允许猫用10分钟打开门，以能够接近玩具。每次测试系列以加到门的 〇重量开始。如果猫成功地打开门并进入目标箱，允许猫与玩具接触30秒。30秒后，猫遣 返回到开始箱，并向门增加额外的重量。单个测试天中，将该程序重复多达3次。在当天第 三次试验中，允许猫在目标箱中停留2分钟，以在其回到集体起居室之前提供与玩具玩耍 的足够时间。如果猫不试图打开门（在开始畜栏中10分钟后），结束当天的测试。在测试 的第二天（第37天），将猫最后成功打开门之前重量用于试验1，然后每次试验逐渐增加重 量。当猫试图推开门推了五次仍不成功时，移除重量，猫回到开始箱，用降低的重量再次测 试来限定为获得玩具工作的阈值。除了获得每只猫推开进入目标箱的最大门重量之外，还 测量其它行为模式以评估动力。测量了打开门的反应时间（latency)，打开门不成功尝试的 数目，以及来自打开门第一次故意与玩具接触的反应时间。
[0089] 结果：与喂对照饮食的猫相比，喂含有MH的测试饮食的猫在开始箱中花费较少时 间，有较多次成功试验，有较少次不成功试验以及推动较重的重量以获得玩具（表2)。
[0090] 表2:猫游戏的动力测量
[0092] 结论：这些数据有力地表明喂MH的猫比喂相同饮食但没有MH的猫有显著较大的 动力来游戏。
[0093] 实施例4
[0094] 已知脑血清素会影响情绪。血清素是脑中由色氨酸合成的，其进入大脑的吸收取 决于色氨酸与其它大的中性氨基酸总数的血浆比（Trp/LNAA)。其它大的氨基酸包括亮氨 酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。大家都接受，富含碳水化合物的饮食增加了该定 量，和富含蛋白质的饮食降低了该定量，换言之，当存在胰岛素敏感性降低和较大的血糖反 应时，预期会有较大的Trp/LNAA比。
[0095] 从喂对照饮食或对照饮食+MH的总共51只狗收集用于氨基酸分析的血液样品。从 两组拉布拉多猎犬收集血液样品。组1包括采样时年龄范围为12. 6岁至15. 7岁的19只 绝育拉布拉多猎犬，5只雄性和14只雌性。组2包括采样时年龄范围为8. 3岁至12. 5岁 的32只绝育拉布拉多猎犬，9只雄性和23只雌性。各组喂相似的对照饮食或测试饮食，其 中唯一的区别是富含mHep的鳄梨汁浓缩液内含物目的在于在饮食中供应200ppm MH。鳄梨 汁浓缩液来源于全果（肉、皮和核）鳄梨。采样时组1的狗己连续食用对照或测试饮食90 个月。采样时组2的狗己连续食用对照或测试饮食77个月。所有研究员、实验室助理和评 估员对喂养组是不清楚的。
[0096] 制备用于HPLC分析的血浆/血清样品
[0097] 除去血浆/血清样品的蛋白
[0098] 1.将100 μ L融解血浆或血清与100 μ L 0. 4mM正亮氨酸溶液混合进标记的10K旋 转过滤离心管中。
[0099] 2.于4°C下以15000x g离心30分钟。
[0100] 3.从离心机移出，弃去插入物，并重新关闭含流穿（flow through)(去蛋白样品） 的离心管。此时，可以将去蛋白样品储存在_20°C下，直到进一步加工，或你可以进入以下步 骤。。
[0101] 4.获取50 μ L等份去蛋白样品，并将其转移至标记的肯堡（Kimble)玻璃管中，并 置于冷冻干燥机烧瓶中和冷冻干燥机上，直至其干燥。
[0102] 5.用封口膜盖住干燥的肯堡管，并储存于_20°C下，直到加工时。
[0103] 再干步骤:
[0104] 1.从冷冻干燥机移出样品，并除去封口膜。同时，移出2个预干的"全AA标准物 (complete AA standard)"肯堡管（参见用于指导的"制备氨基酸标准物"）。
[0105] 2.向"全AA标准物"中加入25 μ L 0. 2mM谷氨酰胺。
[0106] 3.向每个样品/标准物小瓶中加入10 μ L再干溶液并使管涡旋。在通风橱中制备 再干溶液（TEA有臭味！）。
[0108] 4.在冷冻干燥机上干燥样品至少30分钟。
[0109] 衍牛步驟
[0110] 1.从冷冻干燥机中移出样品。
[0111] 2.向每个小瓶中加入20 μ L衍生溶液，并使管涡旋。在通风橱中制备衍生溶液。
[0112]
[0113] 3.将样品放入冷冻干燥机烧瓶中，在室温下培养20分钟。
[0114] 4.将烧瓶放在冷冻干燥机上，直至干燥（至少45分钟）。
[0115] 再稀释样品用于HPLC
[0116] 1.将100 μ L生理A缓冲液加到各标准物和样品中，很好地涡旋。
[0117] 2.使用玻璃巴斯德（Pasteur)吸管将肯堡管中所有内容物转移到将装在较大自 动采样机小瓶内的小玻璃插入管中一密切注意放置各样品的小瓶数量，并确保小瓶数量与 你计算机上的样品排列中指定的对应。红色隔片用于标准物小瓶，和白色隔片用于样品小 瓶。
[0118] 3.将自动采样机小瓶传送（carousel)置于HPLC系统中。
[0119] 用HPLC测量样品
[0120] 缓冲液制备
[0121] 牛理 A (Physiol A)
[0122] # 一般而言，一次制备2L或4L生理A。
[0123] 1.测量2(或4)L超纯水（nanopure water)并放在大塑料烧杯中。
[0124] 2.从烧杯移出700 yL/2L(1400 yL/4L)的水，并弃去。
[0125] 3.将 700 μ L/2L(1400 μ L/4L)的 10mg/mL EDTA 二钠二水合物加到烧杯中。
[0126] 4.称出19.05g/2L(38. 10g/2L)乙酸钠，并加入烧杯中。
[0127] 5.在搅拌盘上混合溶液，直到所有乙酸钠都溶解。
[0128] 6.调节溶液的pH，将冰醋酸逐滴加入以使pH下降至6. 45 (±0. 01)。
[0129] 7.过滤溶液，以除去任何空气。
[0130] 8.量出 1950mL/2L(3900mL/4L)过滤的溶液，然后加入 50mL/2L(100mL/4L)乙腈 (注意：分别量出这些，不是仅把乙腈加到量筒顶部，因为这样是行不通的）
[0131] 9.将新溶液小心地倒入与HPLC连接的适合玻璃瓶中（标记的生理A)并避免引入 任何气泡。
[0132] 牛理 B(Phvsiol B)：
[0133] #通常一次制备1L。
[0134] 1.将以下物质一起混合在烧杯中：
[0135] a. 450mL 乙臆
[0136] b.400mL 超纯水
[0137] c. 150mL 甲醇
[0138] 2.过滤溶液以除去任何空气。
[0139] 3.将溶液小心倒入与HPLC连接的适合玻璃瓶中（标记的生理B)并避免引入任何 气泡。
[0140] 制备氨基酸标准物
[0141] 用于客页外氨基酉$的储备溶液(stock solution)：
[0142] 1.为下面每种物质制备储备溶液（约100 μ m 〇 1/mL = 0. lOOmmol/mL = 10Ommol / L)：
[0143] L_ 天门冬酰胺（MW = 132. 12mg/mmol)-称出约 26mg
[0144] L_ 瓜氨酸（MW = 175. 19mg/mmol)-称出约 36mg
[0145] L-半胱氨酸盐酸盐（MW = 175. 16mg/mmol)-称出约 36mg
[0146] L_ 谷氨酰胺（MW = 146. 15mg/mmol)-称出约 30mg
[0147] L_ 正亮氨酸（MW = 131. 17mg/mmol)-称出约 26mg
[0148] L-鸟氨酸盐酸盐（MW = 165. 62mg/mmol)-称出约 34mg
[0149] 2.对于每种氨基酸，将氨基酸直接称入2mL离心管中，并记录准确重量（至 0. lmg)。然后，向离心管中精确加入2mL超纯水，关闭管，并涡旋以溶解所有粉末。
[0150] 3.计算每种氨基酸的准确浓度，并将其记录在离心管上：
[0151] 浓度（mmol/mL)=[(重量以 mg 计）/(Mff 以 mg/mmol 计）]/2mL
[0152] 4.储存在-20 °C下，直至使用。
[0153] 0