)形成凝胶。使用冷的(4°C ) IX PBS pH 7.4将溶液带来期望的体积和浓度，并且放置在37°C培养箱中用于发生凝胶化。
[0127]ECM能够在40分钟之后在溶液中形成基质。ECM衍生的凝胶在20 °C温度以下是液体。但是当温度上升至37°C时变成凝胶。
[0128]在由ECM制备凝胶时，所有的溶液应保持在冰上，并且下述变量必须根据美国专利号8，361，503的记载来确定，其通过引用以其整体并入本文:
[0129]Cf =终凝胶的浓度，以mg/ml计
[0130]Cs = ECM消化液的浓度，以mg/ml计
[0131]Vf =实验需要的终凝胶溶液的体积
[0132]Vd=从ECM消化液需要的体积，以ml计
[0133]V1QX=需要的10X PBS的体积，以ml计
[0134]V1X =需要的IX PBS的体积，以ml计
[0135]VNa()H =需要的0.1N NaOH的体积，以ml计
[0136]首先，确定需要的ECM凝胶的终浓度(Cf)和体积(Vf)。然后，通过乘以Cf (mg/ml) XVf (ml)，计算需要的ECM的质量。该值给出从ECM消化液需要的体积(Vd)，其中Vd=[Cf (mg/ml) XVf(ml)]/Cs。
[0137]通过计算的体积^^除以9，计算需要的10X PBS的体积(V 10X= V d/9)。通过计算的体积Vd除以10，计算需要的0.1N NaOH的体积(V_H= Vd/10)。计算需要的IX PBS的量，以使溶液至适当的浓度/体积，如下:vlx= vf-vd-v1M-v_H。添加所有的试剂(Vlx+Vd+V1M+V_H)至适当的容器(通常15或50ml离心管)，而没有ECM消化液(Vd)。将溶液放置在冰上并且在所有时间保持在冰上。
[0138]添加适当的来自ECM消化液的体积(Vd)至上面制备的PBS/NaOH混合物，并且与lml微量移液器充分混合，同时小心和避免在溶液中产生气泡。取决于ECM消化液的粘度，在转移期间可能有一些明显的体积损失。检测总体积并且添加适当的量，直到实现终体积。测量预凝胶溶液的pH值，其中pH值应为约7.4。
[0139]将预凝胶溶液添加至模具或至适当的孔。将模具或孔放置在37°C培养箱中最低40分钟。避免使用具有0)2控制的培养箱。如果水蒸发是关心的，将塑料自封袋放置在模具内侧，然后放置在培养箱中。凝胶化之后，可从模具移除凝胶并且放置在IX PBS上。如果在组织培养板上制备凝胶，可将IX PBS放置在凝胶顶部直到使用，以维持凝胶水合。样品计算:由10mg/ml原料液制备6ml终浓度为6mg/ml的凝胶。
[0140]SIS-ECM 施用稈序
[0141]可通过灌肠剂至诱导UC的大鼠的结肠施用SIS-ECM溶液或悬浮液。在施用移植物之后没有预期的宿主动物的排斥、感染或异常生理学响应。也可经内窥镜和经腹腔镜将溶液或悬浮液施用至结肠。相信本发明出人意料的结果将是刺激适当的组织重构，使得可用SIS溶液或悬浮液材料实现结肠粘膜的增加。
[0142]本发明流化的组合物可使得组织替换和修复，并且进一步使得治疗或治愈IBD，包括UC。根据本方法使用流化的粘膜下层组合物，以诱导天然结肠粘膜组织的再生长。通过注射有效量的流化的ECM组合物至缺陷组织的场所，可实现活体营养性特性，而不需要更侵入性的外科技术。
[0143]尽管已经参考某些优选的实施方式详细描述了本发明，但是在不背离下述权利要求描述和限定的范围和精神的情况下，存在变化和变型。
【主权项】
1.一种用于治疗、改善或治愈脊椎动物的下肠道组织的病况或疾病、或所述组织的损伤的方法，所述方法包括递送或刺激干细胞或祖细胞迀移至患病或损伤的组织，由此所述干细胞或祖细胞提供所述患病或损伤的组织的重建组织重构，从而实现不用结肠切除术来治疗、改善或治愈所述患病或损伤的组织。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述干细胞或祖细胞的所述递送是将包括所述干细胞或祖细胞的组合物直接施加至所述患病或损伤的组织的位点。3.如权利要求1所述的方法，其中，迀移所述干细胞或祖细胞是通过将细胞外基质(ECM)移植物或支架组合物施加至所述患病或损伤的组织的位点来刺激的。4.如权利要求3所述的方法，其中，所述ECM源自于选自小肠、大肠和膀胱的组织。5.如权利要求3所述的方法，其中，所述ECM被制备为固体片材或管材用于递送。6.如权利要求3所述的方法，其中，所述ECM被制备为选自溶液、悬浮液和凝胶的流体用于递送。7.如权利要求3所述的方法，其中，所述ECM进一步包括药物或生物制剂。8.如权利要求6所述的方法，其中，所述流体ECM以内窥镜方式递送。9.如权利要求1所述的方法，其中，所述下肠道组织由于下述疾病而导致患病或损伤:克罗恩病、溃疡性结肠炎、家族性腺瘤性息肉病、赫希施普龙氏病、狭窄、直肠炎、结肠或直肠癌或瘘管。10.一种用于治疗、改善或治愈脊椎动物的下肠道组织的病况或疾病、或所述组织的损伤的方法，所述方法包括通过下述步骤替换所述损伤或患病的组织: a.制备源自于下述组织的细胞外基质(ECM)移植物，所述组织选自小肠组织、大肠组织和膀胱组织；以及 b.将所述ECM移植物植入、移植、施用、施加或附着或附加至患病或损伤的下肠道组织， 由此通过重建组织重构而不用结肠切除术，治疗、改善或治愈下肠道组织的病况、疾病或损伤。11.如权利要求10所述的方法，其中，所述显示出病况、疾病或损伤的组织是结肠。12.如权利要求10所述的方法，其中，所述组织病况、疾病或损伤是由克罗恩病、溃疡性结肠炎、家族性腺瘤性息肉病、赫希施普龙氏病、狭窄、结肠或直肠癌、直肠炎或瘘管而导致的。13.如权利要求10所述的方法，其中，制备所述ECM移植组合物，并且以片材或管材的形式的固体移植物或支架递送。14.如权利要求10所述的方法，其中，制备所述ECM移植组合物，并且以流化的凝胶、溶液或悬浮液递送。15.如权利要求14所述的方法，其中，所述ECM通过灌肠剂递送。16.如权利要求14所述的方法，其中，所述ECM以内窥镜方式递送。17.如权利要求10所述的方法，其中，所述ECM移植物源自于小肠粘膜下层(SIS)。18.如权利要求10所述的方法，进一步包括下述步骤:在将ECM移植物植入、移植、施用、施加或附着或附加至所述患病或损伤的下肠道组织之前，切除或消融显示出病况、疾病或损伤的组织。19.如权利要求18所述的方法，其中，切除或消融步骤包括内窥镜粘膜切除。20.如权利要求18所述的方法，其中，切除或消融步骤包括Η)ΤΑ冲洗。21.—种治疗患者的炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括下述步骤: a)提供源自肠道组织的细胞外基质组合物；以及 b)将所述组合物施加或施用至显示出IBD的患者的肠道组织，以诱导用健康的下肠道组织原位替换患病或损伤的组织。22.如权利要求21所述的方法，其中，所述IBD选自溃疡性结肠炎和克罗恩病。23.如权利要求22所述的方法，其中，所述细胞外基质组合物的施加或施用刺激干细胞迀移至结肠组织，其中所述干细胞原位发育，以实现显示出溃疡性结肠炎或克罗恩病的肠粘膜组织的重建组织重构。24.如权利要求21所述的方法，其中，ECM移植物组合物被制备为流化的凝胶、溶液或悬浮液。25.如权利要求21所述的方法，其中，所述ECM是固体片材或管材。26.如权利要求21所述的方法，其中，所述ECM是通过灌肠法施用的溶液或悬浮液。27.如权利要求21所述的方法，其中，所述ECM是以内窥镜方式施用的溶液或悬浮液。28.如权利要求21所述的方法，其中，在施加或施用步骤b)之前，所述方法进一步包括切除或消融患病或损伤的结肠粘膜组织。29.如权利要求28所述的方法，其中，所述切除步骤包括内窥镜粘膜切除(EMR)或使用m)TA消融。30.如权利要求21所述的方法，其中，所述方法进一步包括选自以下步骤所组成的组中的任选步骤: a)在患者中产生回肠切口；以及 b)使用完全肠胃外营养法静脉内喂养患者，同时新的结肠粘膜形成或发育。31.一种组织特异性细胞外基质组合物，其用作替换大肠道粘膜的移植物，所述组合物源自下肠道组织。32.如权利要求29所述的组织特异性细胞外基质组合物，其中，所述下肠道粘膜是结肠。
【专利摘要】本发明提供用于治疗患病或损伤的组织如炎性肠病，例如，溃疡性结肠炎的方法和组合物，包括使用刺激干细胞迁移至损伤的组织的干细胞或组织移植物使组织再生。所述组织移植物可以是细胞外基质(ECM)材料，例如，组织特异性细胞外基质(TS-ECM)。该方法还可以包括在放置移植物之前，切除损伤或患病的组织的粘膜。
【IPC分类】A61K35/12, A61F2/00, A61F2/04, A61L27/38, A61L27/40
【公开号】CN105358095
【申请号】CN201480019982
【发明人】马克·拉墨尔, 斯蒂芬·F·巴迪拉克, 蒂莫西·基恩
【申请人】阿莎娜医疗股份有限公司, 联邦高等教育系统-匹兹堡大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年4月8日
【公告号】CA2907774A1, EP2983616A1, US20160045552, WO2014168964A1