环脂质体化ipo)的制备：
[0066] 将溶解在氯仿中的鸡蛋銷憐脂（sphingomyelin，SM)、胆固醇（Cholesterol)、 DSPE-PEG2000和DS阳-PEG2000-MAL按摩尔比50:45:5:0.巧日入园底烧瓶中，在70°C下用旋 转蒸发仪，W转速为10化pm/min旋转并打开真空累抽真空20min形成干燥薄膜，真空干燥仪 过夜干燥W去除残留的有机溶剂。
[0067] 其中原料SM、胆固醇、DSPE-阳G2000和DS阳-PEG2000-MAL选用的产品与实施例1中 相同。
[0068] 将瓶底的脂质薄膜用1 ml SOOmM的构祿酸缓冲液(pH = 4.0)进行水化，60°C水浴 超声30min后，在液氮、50°C水浴反复冻融6次。将产物装入脂质体挤推器，依次通过200nm、 100皿的聚碳酸醋膜各25次，最后过50皿的聚碳酸醋膜15次，开多成直径在100皿左右的PEG修 饰的空白脂质体化ipo)。
[00例 S2、包裹药物脂质体(VCR-Lipo)的制备
[0070]按照抗肿瘤药物：空白脂质体质量比1:9，取0.5mg长春新碱溶液（Img/ml)和对应 空白脂质体，加入1ml化抽K)4溶液(500mmol/L，pH9.0)调节外水相抑为7.2，放置65°C水浴5 分钟，即制备包裹硫酸长春新碱的纳米脂质体VCR-Lipo。其中，硫酸长春新碱使用的产品与 实施例1中相同。
[0071 ] S3、连接核酸适配体 SgcS，制备 sgcS/VCR-Lipo;
[0072] 根据核酸适配体和MAkWG2000-DSPE的摩尔比为1:10,取适量VCR-Lipo，加入适 量核酸适配体sgc8,在氮气保护环境下室溫反应24小时。加入2mM的0-半脫胺除去未反应的 MAL基团。用超滤离屯、管对sgc8/VCR-Lipo进行超滤离屯、后，1000 Orpm离屯、IOmin后，加入ImL 去离子水，1000 Orpm离屯、IOmin，洗去游离的硫酸长春新碱、0-半脫胺和核酸适配体SgcS，得 到适配体祀向脂质体载药系统sgc8/VCR-Lipo。
[007；3] 实施例3
[0074] 该实施例3制备适配体祀向脂质体载药系统sgc8/VCR-Lipo。
[0075] SI、PEG长循环脂质体化ipo)的制备：
[0076] 将溶解在氯仿中的鸡蛋銷憐脂（sphingomyelin，SM)、胆固醇（Cholesterol)、 DSPE-PEG2000和DS阳-PEG2000-MAL按摩尔比60:35:4:0.4加入园底烧瓶中，在50°C下用旋 转蒸发仪，W转速为20化pm/min旋转并打开真空累抽真空15min形成干燥薄膜，真空干燥仪 过夜干燥W去除残留的有机溶剂。
[0077] 其中原料SM、胆固醇、DSPE-阳G2000和DS阳-PEG2000-MAL选用的产品与实施例1中 相同。
[0078] 将瓶底的脂质薄膜用1 ml SOOmM的构祿酸缓冲液(pH = 4.0)进行水化，55°C水浴 超声25min后，在液氮、55°C水浴反复冻融4次。将产物装入脂质体挤推器，依次通过200nm、 100皿的聚碳酸醋膜各15次，最后过50皿的聚碳酸醋膜25次，开多成直径在100皿左右的PEG修 饰的空白脂质体化ipo)。
[0079] S2、包裹药物脂质体(VCR-Lipo)的制备
[0080] 按照抗肿瘤药物:空白脂质体质量比1:11，取0.5mg长春新碱溶液（Img/ml)和对应 空白脂质体，加入1ml化抽K)4溶液(500mmol/L，pH9.0)调节外水相抑为7.0，放置50°C水浴8 分钟，即制备包裹硫酸长春新碱的纳米脂质体VCR-Lipo。其中，硫酸长春新碱使用的产品与 实施例1中相同。
[0081 ] S3、连接核酸适配体 SgcS，制备 sgcS/VCR-Lipo;
[0082] 根据核酸适配体和MAL-PEG2000-DS阳的摩尔比为1:5,取适量VCR-Lipo,加入适量 核酸适配体sgc8,在氮气保护环境下室溫反应24小时。加入2mM的0-半脫胺除去未反应的 MAL基团。用超滤离屯、管对sgc8/VCR-Lipo进行超滤离屯、后，1000 Orpm离屯、IOmin后，加入ImL 去离子水，1000 Orpm离屯、IOmin，洗去游离的硫酸长春新碱、0-半脫胺和核酸适配体SgcS，得 到适配体祀向脂质体载药系统sgc8/VCR-Lipo。
[008；3] 实施例4
[0084]该实施例4制备适配体祀向脂质体载药系统AlO/ADM-Lipo。其中，ADM为阿霉素。该 实施例4与实施例1相同，只需将其中药物更换为阿霉素 ADM，核酸适配体更换为AlO即可。
[00化]实施例5
[0086]该实施例5制备适配体祀向脂质体载药系统S2.2/IDA-Lipo。其中，IDA为柔红霉 素。该实施例5与实施例1相同，只需将其中药物更换为柔红霉素（IDA),核酸适配体更换为 S2.2即可。
[0087] 实施例6
[008引该实施例6制备适配体祀向脂质体载药系统AS1411/DDP-Lipo。其中，DDP为顺销。 该实施例6与实施例1相同，只需将其中药物更换为顺销(DDP)，核酸适配体更换为AS1411即 可。
[0089] 实施例7
[0090] 该实施例7制备适配体祀向脂质体载药系统化Slla/TAX化-Lipo。其中，TAX化为紫 杉醇。该实施例7与实施例1相同，只需将其中药物更换为紫杉醇(TAX化），核酸适配体更换 为化Slla即可。
[0091] 本发明对上述各个实施例制备的适配体祀向脂质体载药系统进行了载药量、包封 率、粒径及对肿瘤细胞的祀向作用及治疗作用的实验，结果表明本发明中最终制得的适配 体祀向脂质体载药系统的粒径也为100-120nm。运些适配体祀向脂质体载药系统具有良好 的稳定性，在体内不易被化学和生物降解，能够很好地祀向至目标部位，且对祀向的肿瘤细 胞具有很好的治疗效果，尤其采用实施例1制备的产品效果最佳。下面W实施例1制备的适 配体祀向脂质体载药系统sgcS/VCR-Lipo为例对本发明的实验效果进行说明。
[0092] 1、硫酸长春新碱药物的包封率、载药量计算
[0093] 取0.3血sgc8/VCR-Lipo样本加入超滤离屯、管，1000 Orpm离屯、IOmin后，加入1血去 离子水，10000巧m离屯、lOmin，洗去游离的VCR。
[0094] 取超滤离屯、管滤上液，放入5ml容量瓶，加入250化10%聚乙二醇辛基苯基酸 (TritonX-IOO)，室溫放置20min，加入二次去离子水(MillQ)定容至5ml。吸取20化，在上述 色谱条件下注入液相色谱仪中，记录峰面积，根据标准曲线计算包入脂质体的药物含量。按 照W下公式计算脂质体的载药量和包封率：
[0095] 化C( % )=[脂质体中药物量/(脂质体中药物+载体总量）]X 100% ;
[0096] 包封率DLE( % )=(脂质体中包封的药物/脂质体中药物总量）X 100%。
[0097] 实验测得本发明实施例1制得的sgc8/VCR-Lipo的载药量为14.16%包封率为 90.63%。
[0098] 2、粒径检测
[0099] 请参阅图3A-C，为根据本发明优选实施例的适配体祀向脂质体载药系统各个阶段 颗粒的透射电镜图。该实验中使用的透射电镜为型号为H-7650的日立透射扫描电子显微 镜，加速电压为SOkv，放大倍率为200000X。图3A为空白脂质体Lipo，图3B为包裹硫酸长春新 碱的纳米脂质体VCR-Lipo,图3C为适配体祀向脂质体载药系统sgc8/VCR-Lipo。请结合参阅 图4,为根据本发明优选实施例的适配体祀向脂质体载药系统各个阶段颗粒的粒径分布图。 其中，A为空白脂质体Lipo; B为VCR-Lipo; C为sgcS/VCR-Lipo。结果显示，每种纳米粒子的粒 径分布均呈现正态分布，空白脂质体Lipo的粒径在90nm左右;VCR-Lipo的粒径在IOOnm左 右；sgc8/VCR-Lipo的粒径在1 IOnm左右。
[0100] 3、适配体祀向脂质体载药系统sgcS/VCR-Lipo对肿瘤细胞的祀向作用
[0101] 将实施例1的憐脂双分子层中标记细胞膜红色巧光探针(DiI)巧光染料，在核酸适 配体SgcS上标记异硫氯酸巧光素(FITC)巧光。分别得到FITC和DiI同时标记的sgc8/VCR- Lipo，W及DiI标记的空白脂质体Lipo。
[0102] 在15ml离屯、管中加入3X10化EM细胞，每管分别加入DiI标记的Lipo、sgc8/VCR-Lipo(核酸适配体的终浓度控制在200nM)，37°C解育20-30min。离屯、收集细胞并用PBS洗3 次。用多聚甲醒(4%)固定30min后用PBS洗3次。细胞用Img/ml DAPI染核5分钟，用PBS洗3次 并离屯、收集细胞。在倒置巧光显微镜下观察细胞的巧光强度并拍照。
[0103] 请参阅图5,为CEM细胞与sgc8/VCR-Lipo和VCR-Lipo的结合实验图。其中DAPI为 4'，6-二脉基-2-苯基吗I噪，用于染细胞核，呈蓝色巧光;DiI用于标记脂质体，呈红色巧光； FITC用于标记核酸适配体sgc8,呈绿色巧光;Merge表示带有巧光的纳米材料与不同细胞结 合合并的巧光。图5中A为sgcS/VCR-Lipo与CEM细胞解育后的巧光图；B为VCR-Lipo与CEM细 胞解育后的巧光图；C为con/VCR-Lipo与(EM细胞解育后的巧光图；Con代表对照适配体，其 与核酸适配体SgcS具有相同碱基数的DNA序列，但是与祀细胞不结合。
[0104] 4、适配体祀向脂质体载药系统sgcS/VCR-Lipo对肿瘤的治疗作用
[0105] 分别将实施例1的VCR、VCR-Lipo和sgc8/VCR-Lipo用PBS溶解或悬浮，得到VCR浓度 均为l.Ong/yl的VCR注射液、VCR-Lipo注射液和sgcS/VCR-Lipo注射液。
[0106] 取4-6周龄的近交系雌性裸鼠（BAL