联氨基姜黄素在制备抗皮肤鳞状细胞癌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体设及一种联氨基姜黄素在制备抗皮肤鱗状细胞癌 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 近30年来，我国癌症发病率及死亡率一直呈持续增长的趋势。皮肤鱗状细胞癌是 发病率较高的皮肤恶性肿瘤，其在皮肤恶性肿瘤中占有较大比例，一般为80%至90%，其发 病率有逐年增高趋势，在老年人中尤其明显。该类癌症因其恶性程度高，西医治疗目前无有 效且经济的手段。
[0003] 信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator oftranscription3，STAT3)是多种致癌性信号通路的关键分子，其下游调控着许多与肿瘤 细胞生长、调亡、血管生成和转移有关的关键分子，如切ClinDl ,Survivin,Bcl-2等。STAT3 参与细胞生长、分化、分裂及发育等多种生理过程，并在细胞恶性转化中起重要作用。STAT3 是转录信号传导子与激活子家族(STAT)的重要成员。STAT3作为转录因子在没有特异性的 刺激时定位于胞质内，当细胞受到刺激时，STAT3上的SH2结构域与受体上被憐酸化的酪氨 酸的残基结合，同时自身被JAK憐酸化。STAT3是EGFR，IL-6/JAK等多个致癌性酪氨酸激酶信 号通道的汇聚焦点，STAT3激活后诱导与细胞增殖、分化、生存、调亡密切相关的关键基因的 异常表达，通过各种途径促进细胞增殖，恶性转化，阻碍细胞调亡表达出致癌作用，目前被 定义为一种癌基因。
[0004] 其中，姜黄素作为一种中药在抗癌应用中被广泛应用。姜黄素是一种天然植物多 酪类色素，从姜科植物姜黄中提取，也存在其它姜科植物中。姜黄素广泛存在于我国传统中 药姜黄的根茎中。近年来研究表明，姜黄素在抗肿瘤、抑制炎症反应、抗氧化、抗类风湿等方 面具有很好的药理作用。姜黄素在动物模型上对皮肤癌、肝细胞癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、 乳腺癌、胃癌等多种肿瘤细胞具有明显地抑制作用，并可诱导肿瘤细胞调亡，但是姜黄素水 溶性差，生物利用度低等缺点严重制约了临床的应用。
【发明内容】
[0005] 为了解决现有技术中姜黄素不能在临床上广泛应用的缺陷，本发明提供了联氨基 姜黄素在制备抗皮肤鱗状细胞癌药物中的应用。
[0006] 本发明提供了一种联氨基姜黄素在制备抗皮肤鱗状细胞癌药物中的应用。
[0007] 其中，质量浓度大于15WH01/L的联氨基姜黄素能明显抑制人皮肤鱗状细胞癌A431 细胞的生长。
[000引其中，联氨基姜黄素通过抑制STAT3信号通路及STAT3基因表达来降低人皮肤鱗状 细胞癌A431细胞的侵袭性。
[0009]本发明的有益效果:本发明首次提出了联氨基姜黄素在制备抗皮肤鱗状细胞癌药 物中的应用。联氨基姜黄素通过抑制STAT3信号通路的活化及该信号通路祀基因STAT3的表 达来降低皮肤鱗状细胞癌A431细胞的侵袭性。联氨基姜黄素易溶于水，生物利用度高，能替 代姜黄素在临床上广泛地应用。
【附图说明】
[0010]图1是联氨基姜黄素对A431细胞体外侵袭能力的影响，A:阴性对照组;B: 5皿01/L 联氨基姜黄素处理组;CaOwnol/L联氨基姜黄素处理组;D:15wiiol/L联氨基姜黄素处理组；
[0011] 图2是Western blot检测联氨基姜黄素处理后A431细胞中STAT3和P-STAT3蛋白的 相对表达量；
[0012] 图3是Western blot检测姜黄素处理后A431细胞中STAT3和P-STAT3蛋白的相对表 达量；
[OOK]图4是联氨基姜黄素对A431细胞中STAT3和P-STAT3蛋白表达的影响；
[0014] 图5是联氨基姜黄素对A431细胞中STAT3基因mRNA转录水平的影响。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明进行详细地解释说明。
[0016] 本发明中用到的主要仪器及试剂：
[0017] 人皮肤鱗癌细胞A431由中国科学院上海细胞生物研究所提供；STAT3鼠单克隆抗 体及P-STAT3鼠单克隆抗体由美国Cell Si即aling Technologies公司提供;联氨基姜黄素 购自中国药品生物制品检定所;MTT购自美国Sigma公司;RPMI1640培养基购自美国GIBCO公 司；Transwe 11小室购自Mi Iliproe公司；PCR引物及BSA稀释液由上海生工合成， ReverTraAce-Q-RT-PCR kit购自TOYOBO公司，蛋白干粉购自中国博±德公司。
[0018] 细胞培养方法:A431细胞在含10 % FBS的RPMI1640培养基，放置于细胞培养箱中 (37°C、5%C〇2)，当细胞生长至80 %融合时，用0.化％膜酶传代。
[0019]实施例1
[0020] MTT法检测联氨基姜黄素对细胞的杀伤力：
[0021 ]取对数生长期细胞，按4 X IO3个/孔接种于96孔板中，边缘孔加入无菌PBS，培养 2地后，分别加入浓度为5、10、15、20、25、30、35、40、50皿〇1/1联氨基姜黄素，同时设阴性对 照组(0.1 %二甲基亚讽DMSO)和空白对照组，每组设3个复孔，0.1 % DMSO可抑制人皮肤鱗状 细胞癌A431细胞的增殖。培养24、48、7化后，10(K)r/min离屯、，弃去培养液，每孔加入18化1无 血清RPMI1640培养基及20山MlT溶液(5mg/ml)，继续培养地，lOOOr/min离屯、，弃去上清，每 孔加入10化1 DMSO，摇床振荡IOmin。酶标仪49化m波长处测定光密度A值，并按W下公式计 算细胞生存率（％ )。实验重复3次。
[0022] 细胞生存率（％ )=(实验组A490-空白对照组A490)/实验对照组A490 X 100%。
[0023] SPSS13.0统计学软件处理，W均数±标准差表示数据，独立样本t检验用于各实验 组组间均数分析，单因素方差分析多组数据，P<〇.05为在统计学有意义。
[0024] 结果如表1所示，联氨基姜黄素浓度15皿ol/L，作用时间24h为临界点，联氨基姜黄 素浓度>15皿ol/L，作用时间>2地细胞的生长抑制呈时间和剂量依懒性，差异在统计学上 有意义(P<〇.〇〇l);联氨基姜黄素浓度< 15皿ol/L，作用时间<24h时，联氨基姜黄素对细 胞毒性作用无统计学意义，细胞存活率>85%。所W W联氨基姜黄素浓度^ 15WH01/L，作用 时间为^ 24h时为侵袭和粘附试验的条件。
[0025]表1不同浓度的联氨基姜黄素对A431细胞的抑制率
[0027] 注：*VS 5、10、15 皿 〇1/L，P<0.05; AVS 5、10 皿 ol/L，P<0.0;〇VS 5、10、20、25y mol/L，P<0.05;#VS 5、15、20、25皿〇1/1，？<0.05;国￥5 2地，？<0.05;参￥5 4化，？<0.05
[0028] 实