影响，在其他因素为零水平时其中两种因素的交互作用。响应面曲面图表 示响应值的大小，如果响应面图的弯曲程度相对来说比较小，则提取条件的变化对响应值 的影响较小，表现为影响不显著，相反，如果响应面图的弯曲程度很大，则说明提取条件的 变化对响应值的影响显著，等高线图说明响应值的最大值在楠圆的中屯、，从中屯、到边缘逐 渐减小，楠圆排列密集说明提取因素的变化对响应值的影响显著，反之。等高线的形状可W 反映两个因素的交互作用的大小，楠圆说明交互作用显著，圆形说明交互作用不显著。
[0043] 分析响应面图可知，低水平和高水平的乙醇浓度和时间对响应值的影响显著，两 因素的交互作用显著，当乙醇浓度处于某一值时，随着时间的增加，响应值的变化大。在其 他因素为零水平时，乙醇浓度和料液比从低水平到高水平的变化时，响应值变化不明显，两 因素的交互作用不显著。同理可知，XlX4、X3X4、拉X4因素对响应值的影响显著，运与方差分析 的结果一致。
[0044] 溫度和料液比交互作用影响显著，随溫度的增加弯曲程度增加，玉米须黄酬提取 量增加。浓度和时间的交互作用显著，表现为曲面弯曲程度大。可推断对响应值的影响顺序 为:溫度〉料液比〉浓度〉时间，运基本和方差分析结果一致。功率固定为450W，得到最佳提取 条件:浓度51.8%，时间19.9min，料液比1:41.44，溫度为80°C。为了操作方便，将最佳的提 取条件修正为浓度52%，时间为20min，料液比为1:40，溫度为80°C，最佳条件下的提取量为 11.28mg/g，与理论值11.30mg/g相差不大，表明优选的工艺效果明显。
[0045] 黄酬的安全性评价
[0046] 玉米须黄酬半数致死量(LDso)测定预试验
[0047] 试验前将小鼠禁食12h，不限制饮水。取禁食后的小鼠随机分为2组:玉米须黄酬组 和空白组，每组6只（雌雄各半）。受试样品（最优条件下的玉米须黄酬粗提物)组按最大灌胃 量(lOg/kg)给药1次，空白组灌胃给予等体积生理盐水。
[004引给药后连续观察Hd内，小鼠姿态正常，叫声正常，无不安现象，无疫李，震颤，麻 搏，惊厥，强制性动作等，也无易兴奋现象，呼吸正常，无恶屯、，呕吐，腹泻，便血，便尿等现 象。14d观察期结束后，将每组小鼠处死进行解剖，肉眼没有观察到主要脏器病理变化。结果 显示，玉米须黄酬按最大灌胃量（lOg/kg)灌胃给药后，小鼠均未出现死亡，表明玉米须黄酬 毒性很低，测不出LDso。
[0049] 玉米须黄酬最大耐受量(MTD)测定正式试验
[0050] 试验前将小鼠禁食12h，不限制饮水。取禁食后的小鼠随机分为2组:玉米须黄酬组 和空白组，每组10只（雌雄各半）。受试样品组按最大灌胃量（lOg/kg)的剂量灌胃给药，空白 组灌胃给予等体积生理盐水。每化给药一次，共给药3次，累计给药剂量为30g/kg。
[0051]刚灌胃完，小鼠出现活动迟缓现象，皮毛出现不柔顺现象，但很快恢复正常。给药 后连续观察14d，观察期内给药小鼠未死亡1只，未出现竖毛、躁动、竖尾、兴奋跳跃、騰缩、多 动、对刺激反应迟缓或过敏，也未出现强直、震颤及共济失调等症状。试验期间小鼠的体重 和摄食量变化，各实验组与空白组相比，均无显著性差异(P>〇.05)。
[0化2] 14d观察期结束后，从小鼠眼球取血，离屯、取血清进行41；1\451\41^\61〇]指标检测， 结果见表4。立即将小鼠处死进行解剖，肉眼没有观察到主要脏器病理变化。然后迅速取出 主要脏器，称重并计算脏器系数，结果见表5。
[0化3] 表4急毒试验血清生化指标（；±s)
[0055] 注:各组与空白组对比：p〉0.05
[0化6] 从表4可知，剂量组小鼠血清中ALT、AST、ALP、GLU等指标均正常，与空白组相比均 无显著性差异(P>〇.〇5)。
[0化7]表5急毒试验脏器系数（，单位mg/g)
[0化9] 注:各组与空白组对比：p〉0.05
[0060]脏器系数通常能反映中毒引起的病变情况。如表5所示，试验中未观察到有明显病 变的脏器，且剂量组各器官脏器系数与空白组相比均无显著性差异(P>〇.05)。
[0061] 试验结果表明，玉米须黄酬W最大灌胃剂量lOg/kg给药3次(累计剂量为30g/kg)， 小鼠并未出现任何不良反应，因此小鼠对玉米须黄酬的最大耐受量为30g/kg。
[0062] 实施例2
[0063] 在实施例1的基础上得到玉米须黄酬粗提物后进行纯化。
[0064] 所述玉米须黄酬的纯化方法为:将玉米须黄酬粗提物配成浓度为1.0~1.5mg/mL 溶液上AB-8大孔吸附树脂，吸附时间为化，W4BV用量55~65%乙醇溶液洗脱，洗脱流速为 1.5~2mL/min，浓缩干燥得玉米须黄酬纯化物。
[0065] 优选玉米须黄酬粗提物配成浓度为1.2mg/mL溶液，用58 %乙醇溶液洗脱，洗脱流 速为 1.8mL/min。
[0066] 对优选纯化条件纯化后的玉米须黄酬纯化物进行成分鉴定，其中含有芹菜素、香 叶木素、木犀草素、绿原酸和芦下，芹菜素和香叶木素含量比为1:1，木犀草素、绿原酸和芦 下含量比为1:25:5。
[0067] 玉米须黄酬纯化物成分鉴定：
[0068] 乙酸乙醋萃取物
[0069] 供试品：纯化黄酬乙酸乙醋萃取物硅胶柱纯化后，继续用葡聚糖凝胶柱洗脱的组 分上样。
[0070] 对照品液制备：用甲醇分别配制Img/mL的木犀草素，山奈酪、芹菜素、香叶木素、刺 芒柄花素、芦下和搬皮素溶液，稀释至50yg/mL，备用。
[0071] 色谱条件:LC-20AT型高效液相色谱仪旧本岛津）；色谱柱:VP-0DS(4.6 X 250mm，5 皿）；
[0072] 检测器类型：SPD-CT010AVP型二极管阵列检测器;检测波长:350nm;柱溫:40°C;进 样量:流速：ImL/min;流动相：甲醇-0.1 %憐酸-水溶液。洗脱模式:梯度洗脱(O-Imin: 40 %甲醇洗脱；I-IOmin : 50 %甲醇洗脱；30min : 60 %甲醇洗脱；40min: 75 %甲醇洗脱； SOmin: 95 %甲醇洗脱）；60min: 95 %甲醇洗脱）图1为样品与标准品的HPLC对比图。
[0073] 1号样品：1号峰保留时间t = 12.03min，与芦下的出峰时间相似，但二者的紫外吸 收图谱不一致，一号峰位置的化合物在A = 355nm处无吸收，因此1号峰基本可W确定不是芦 下;2号峰保留时间t = 28.47min，在A = 340nm处有吸收峰，紫外吸收图谱和芹菜素相同，可 判断为芹菜素;3号峰保留时间t = 28.99min，在A = 344nm处有吸收，与标准品紫外吸收图谱 对比，可判断为香叶木素。
[0074] 2号样品：1号峰保留时间t = 28.18,在A = 340nm处有吸收峰，紫外吸收图谱与芹菜 素一致，因此可W断定为芹菜素;2号峰保留时间t = 29.20,在A = 344nm处有吸收，且与香叶 木素的紫外吸收图谱一致，可判断为香叶木素。
[0075] 乙酸乙醋萃取物HPLC显示纯化后黄酬有芹菜素、香叶木素，两者之比约为1:1。
[0076] 正下醇萃取物
[0077] 将AB-8树脂纯化后的黄酬用正下醇萃取，分配制成相同浓度的化合物，按照上述 条件进行HPLC色谱分析。结果见图2,样品1-7的出峰位置与标准品B相比较，样品中8号峰位 置t = 22.59min，与标准品中3号峰出峰位置相近t = 22.62min，且二者的紫外吸收图谱基本 一致，因此可判断样品2-7中均含有木犀草素。
[0078] 采用绿原酸、芦下、搬皮素及山奈酪四种标准品，得到标准混合色谱图，如图3。正 下醇萃取物上ODS柱后流份，按上述HPLC条件，调整流动相的极性，进样，得到图3和图4。结 果为：1号峰1[?=13.0071]1；[]1，标准品绿原酸1[?=12.9311]1；[]1，二者的保留时间接近，且从二者 的紫外谱图来看，二者在326nm处均有最大吸收波长，在263nm处均有最小吸收波长，且峰型 也一致，推断化合物为绿原酸。5号峰与标准品芦下tR = 24.985min-致。
[0079] 综上所述，乙酸乙醋部分含有芹菜素和香叶木素，含量约为1:1，正下醇部分含有 木犀草素、绿原酸和芦下，S者比例约为1:25:5。
[0080] 玉米须黄酬的抗炎作用
[0081] 包括小鼠耳肿胀和大鼠足肿胀2个试验说明玉米须黄酬的抗炎效果。
[0082] 小鼠耳肿胀试验
[0083] 1.材料和方法
[0084] 1.1主要试剂、药品及仪器
[0085] 玉米须黄酬为本实施例优选条件下的玉米须黄酬纯化物，生理盐水为吉林康乃尔 制药有限公司，数显恒溫水浴锅、电子天平等仪器。
[00化]1.2实验动物
[0087] 健康昆明种小鼠雄性50只，体质量20 ± 2g，SD大鼠雄性25只，体质量200 ± 20g，购 于吉林大学实验动物中屯、;试验用鼠均SPF级别，动物饲养室溫度为