专利名称：一种萍蓬草素a的制备方法
技术领域：
本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种萍蓬草素A的制备方法。
背景技术：
萍蓬草素A (Nudaphantin),分子式为C41H3tlO26,分子量为938.67,是从睡莲科植物日本萍蓬草M/pAar japonicum DC.根莖中分离得到的鞋质类物质，萍蓬草素A熔点为243-245°C，为白色粉末；药理研究表明，萍蓬草素A对金黄色葡萄球菌和酿酒酵母Sarcchomyces cerevisiae有抗菌作用，对拓扑异构酶II型呈抑制活性，IC50为0.2 μ M。日本萍蓬草是一种在北半球温带广泛分布的多年生根茎状的草科植物，在亚洲地区一直被作医药品使用，含有多种生物碱和鞣质。吴霞等发现日本萍蓬草根茎甲醇提取物对醋霉菌果蝇幼虫有杀虫活性，然而对鞣质的研究较少，因此研究出一种制备日本萍蓬草鞣质的方法是非常必要的，对扩大药源以及萍蓬草属植物的综合利用具有重要意义。目前对萍蓬草素A的研究较少，国内尚无萍蓬草素A提取工艺方面的相关报道。
发明内容
本发明要解 决的技术问题是提供一种利用硅胶和高速逆流色谱结合提取分离萍蓬草素A的方法。本发明所述的一种萍蓬草素A的制备方法，其特征在于按下列步骤进行:
一种萍蓬草素A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)将日本萍蓬草根茎粉碎，用乙醇溶液进行超声提取，提取液浓缩，得到日本萍蓬草根茎乙醇粗提液；
(2)用乙酸乙酯对粗提液进行萃取，乙酸乙酯萃取减压浓缩，得到浓缩液；
(3)浓缩液与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集萍蓬草素A洗脱液；
(4)洗脱液浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。步骤(I)中乙醇溶液为体积分数60-85%的乙醇水溶液，乙醇溶液与日本萍蓬草根茎的质量比为8-15:1。步骤(I)中超声频率为45-70ΚΗΖ。步骤(3)中二氯甲烷-甲醇体积比为17-2:1。步骤(4)中高速逆流色谱法溶剂系统为环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为(3-5):(2-3):(6-9): (2-5)，上相为固定相，下相为流动相。本发明的有益效果在于:本发明先用硅胶柱层析对目标成分进行富集，降低了后续工序的处理量，高速逆流色谱法分离纯化样品损失小、产品纯度高、制备量大。
具体实施方式
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下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明，下列实施例旨在举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1:
将日本萍蓬草根茎粉碎，取1kg，用12kg75%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为50KHz，提取3次，每次0.5h，提取液浓缩，得到日本萍蓬草根茎乙醇粗提液，用乙酸乙酯对粗提液进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇按体积比15:1、7:1、2:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集萍蓬草素A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:3:8:4为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为800rpm，流动相流速为3ml/min，根据检测器谱图收集萍蓬草素A流分，浓缩，冷冻干燥即得萍蓬草素A2.0g, HPLC检测含量为98%。实施例2:
将日本萍蓬草根茎粉碎，取1kg，用10kg70%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为45KHz，提取2次，每次1.5h，提取液浓缩，得到日本萍蓬草根茎乙醇粗提液，用乙酸乙酯对粗提液进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇按体积比17:1、9:1、2:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集萍蓬草素A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水3:2:6:4为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为750rpm，流动相流速为3.5ml/min，根据检测器谱图收集萍蓬草素A流分，浓缩，冷冻干燥即得萍蓬草素Al.9g，HPLC检测含量为97%。实施例3:
将日本萍蓬草根茎粉碎，取lkg，用8kg60%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为70KHz，提取2次，每次1.5h，提取液浓缩，得到日本萍蓬草根茎乙醇粗提液，用乙酸乙酯对粗提液进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇按体积比16:1、8:1、2:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集萍蓬草素A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水3:2:6:2为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为750rpm，流动相流速为4ml/min，根据检测器谱图收集萍蓬草素A流分，浓缩，冷冻干燥即得萍蓬草素A2.3g，HPLC检测含量为95%。实施例4:
将日本萍蓬草根茎粉碎，取1kg，用15kg85%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为65KHz，提取2次，每次lh，提取液浓缩，得到日本萍蓬草根茎乙醇粗提液，用乙酸乙酯对粗提液进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇按体积比17:1、9:1、2:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集萍蓬草素A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:3:9:5为溶剂系统，上相为固定相，下相为 流动相，主机转速为900rpm，流动相流速为2.5ml/min，根据检测器谱图收集萍蓬草素A流分，浓缩，冷冻干燥即得萍蓬草素A2.5g，HPLC检测含量为98%。
权利要求
1.一种萍蓬草素A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将日本萍蓬草根茎粉碎，用乙醇溶液进行超声提取，提取液浓缩，得到日本萍蓬草根茎乙醇粗提液； (2)用乙酸乙酯对粗提液进行萃取，乙酸乙酯萃取减压浓缩，得到浓缩液； (3)浓缩液与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集萍蓬草素A洗脱液； (4)洗脱液浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中乙醇溶液为体积分数60-85%的乙醇水溶液，乙醇溶液与日本萍蓬草根茎的质量比为8-15:1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中超声频率为45-70KHZ。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中二氯甲烷-甲醇体积比为 17-2:1。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中高速逆流色谱法溶剂系统为环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为(3-5):(2-3):(6-9): (2-5)，上相为固定相，下相为流动相。
全文摘要
本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种萍蓬草素A的制备方法。制备方法包括以下步骤将日本萍蓬草根茎粉碎，用乙醇溶液进行超声提取，得到醇提液，用乙酸乙酯对醇提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，与少量硅胶拌样后，挥干溶剂，上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。本发明操作简单、能耗小、产品纯度高。
文档编号C07H1/08GK103242385SQ20131018871
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月21日 优先权日2013年5月21日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司