一种制备高纯度非达霉素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种制备高纯度非达霉素的方法。具体的，本发明的方法包括使用树脂层析和结晶的技术制备高纯度非达霉素。本发明的优点是两次柱层析都采用了普通的常压柱而没有采用中压制备色谱，从而大大减少了生产的前期设备投入，对设备要求低，有效的降低了生产成本，并且本发明采用树脂吸附和结晶的技术方法纯化非达霉素，操作方法简单，收率和纯度大大提高，本发明的总收率为50~60%，纯度99%以上，更适合应用于工业化生产。
【专利说明】一种制备高纯度非达霉素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及工业微生物【技术领域】，具体涉及一种大环内酯类抗生素的提取方法， 更具体的，涉及非达霉素的提取方法。
【背景技术】
[0002] 艰难梭菌感染（67〇5^/^￡//應￡///'_/<^7<9//?/'61<^/〇/7，0)1)是一种厌氧的革兰氏阳 性芽孢杆菌过度生长并释放毒素引起，可导致结肠炎症、严重腹泻甚至死亡。
[0003] 非达霉素（Fidaxomicin)是一种由放线菌属指孢囊菌 NRRL 18085 发酵产生的 18 兀环大环内酯类抗生 素，又叫非达米星、台勾霉素 B，2011年5月27日获FDA批准，用于治疗难辨梭菌(难辨梭 状芽胞杆菌）相关性腹泻（CDAD)的抗生素。其作用机理新颖，主要是通过抑制细菌的RNA 聚合酶而产生迅速的抗难治梭状芽孢杆菌感染（CDI)作用。其治疗CDI优于现有药物。同 时，研究发现非达霉素可用于治疗胃肠癌，具有非常广阔的前景。非达霉素 CAS Registry Number: 873857-62-6 ;分子式=C52H74Cl2O18 ;结构式如下式 I :
【权利要求】
1. 一种制备高纯度非达霉素的方法，该方法包括以下步骤： 1) 将从非达霉素发酵液中分离出的菌丝体用极性有机溶剂浸提，过滤得到滤液； 2) 将滤液加水稀释后，导入大孔吸附树脂进行吸附； 3) 吸附完毕，采用极性溶剂的水溶液作为预洗液对树脂净化，然后用极性溶剂与水混 合而成的解吸液进行解吸，得到非达霉素的粗品解吸液I ; 4) 将解吸液I浓缩，结晶，得到非达霉素粗品； 5) 非达霉素粗品用乙腈的水溶液溶解成上柱液，导入大孔吸附树脂进行吸附，经解吸 液解吸得到高纯度的非达霉素解吸液II ; 6) 将非达霉素解吸液II蒸除溶剂得到固体，再用极性有机溶剂重结晶，得到非达霉素 产品。
2. 根据权利要求1所述方法，其中步骤1)中所述的分离为过滤、压滤或离心；所述的 极性溶剂选自甲醇、乙醇或丙酮中的一种，或其中任一种与水的混合溶液，溶剂用量与菌丝 体的体积重量比为广5:1 (ml/g)。
3. 根据权利要求2所述方法，其中所述甲醇、乙醇或丙酮中任一种与水的混合溶液的 浓度为50%?80% (V/V)。
4. 根据权利要求1所述方法，其中步骤2)所述的大孔树脂为DIAION HP20、HP21、 SEPABEADS、SP825L、SP850、SP700、SP70或SP207,其用量与上柱液中非达霉素的体积重量 比为 50?150:1 (ml/g)。
5. 根据权利要求1所述方法，其中步骤2)所述的将滤液加水稀释是将滤液稀释至有机 溶剂浓度为30%?60%。
6. 根据权利要求1所述方法，其中步骤3)所述极性溶剂为甲醇、乙醇或丙酮；所述的 预洗液浓度为509T70% (V/V)，用量为2~3倍柱体积；所述解吸液的浓度为60%-90% (V/V)， 用量为2-5倍柱体积。
7. 根据权利要求1所述方法，其中步骤4)所述的浓缩是在40°C飞0°C温度下进行，浓 缩至有机溶剂浓度为1(T15%。
8. 根据权利要求1所述方法，其中步骤4)所述的结晶为将浓缩后的解吸液I温度降 至0°C ~20°C，抽滤、压滤或离心后得到非达霉素的一次结晶品的过程或者是将非达霉素的 一次结晶品再用有机溶剂进行一次或多次结晶的过程。
9. 根据权利要求8所述方法，其中所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸 乙酯中的一种，或选自混合溶剂甲醇/水、乙醇/水、乙酸乙酯/石油醚、乙酸乙酯/正已烷 中的一种。
10. 根据权利要求1所述方法，其中步骤5)所述的大孔吸附树脂为UniPS3、UniPS5、 UniPSlO、UniPS15、UniPS20、UniPS30、UniPS40 或 UniPS50,其用量与上柱液中非达霉素粗 品重量比为50?150:1 (V/W)。
11. 根据权利要求1所述方法，其中步骤5)所述的乙腈水溶液浓度为50% ;所述的解吸 液为40~70%的乙腈水溶液，所述解吸液用量为5~12倍柱体积。
12. 根据权利要求1所述方法，其中步骤6)所述的极性溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇。
【文档编号】C07H1/06GK104418925SQ201310400591
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年9月5日 优先权日:2013年9月5日
【发明者】唐恒, 杨久林, 孟宪柱, 袁建栋 申请人:重庆乾泰生物医药有限公司, 博瑞生物医药技术(苏州)有限公司