提高稻瘟病抗性的水稻OsMOS4基因及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高稻瘟病抗性的水稻OsMOS4基因，能够对水稻OsMOS4基因进行过量表达和RNAi沉默表达，利用农杆菌转化获得转基因水稻。通过转基因植株对稻瘟病菌抗性测定及其水杨酸含量分析，结果表明OsMOS4过量表达植株叶片内的水杨酸含量显著多于对照组，而RNAi转基因株系则低于对照组；此外，稻瘟病菌接种过量表达植株可增强水稻抗病能力，表明OsMOS4基因可参与水稻的抗病性调控，而且可能是水稻SAR途径的关键基因，该基因的表达可促进水稻抗病能力提高，具有较好的开发前景。
【专利说明】提高稻瘟病抗性的水稻0sM0S4基因及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种提高稻瘟病抗性的水稻0sM0S4基因，本发明还涉及该水稻0sM0S4基因的稻瘟病抗性应用。
【背景技术】
[0002]在植物育种上应用分子生物学技术，能够克服传统育种法的种间隔离现象，为培育作物抗病品种提供了新思路，大大提高了育种效率，显著地缩短了育种周期[I]。植物对病原菌侵害的防御，一方面是靠植株(主要是叶片)表面的蜡层、角质层等特殊细胞壁结构及分泌毒素等建立第一道防线，这些防卫措施没有专一性，可以对较广范围病原起作用
[2];另一方面，如果病原菌突破了上述的第一道防线，植物细胞表面的受体基因(PTI途径)和体内的(ETI途径)抗性基因(Rgene)编码的蛋白会对病原菌有特异性的识别，启动一系列防卫基因的表达，然后进行自身防卫[3,4]。系统获得抗性(systemic acquiredresistance, SAR)即是指植物受到病原微生物的局部侵染后所表现出的整体水平的抗性，它是一种系统的、非专化、长效的抵御病原微生物的机制[5-7]。SAR可以提高植株对细菌、真菌以及病毒的持久抗性，其信号通路是由R基因和avr基因识别后[8，9]，导致细胞程序性死亡,产生过敏反应(HR)，之后由HR产生的局部抗性通过信号分子的传导导致植株体内水杨酸的积累，进而诱导一系列抗病防卫反应相关基因的激活表达，从而抵御病原菌的侵染，产生系统获得抗性SAR[10]。
[0003]稻瘟病是水稻生长过程中可能发生的重要病害之一，系统获得抗性(systemicacquired resistance, SAR)是植物抗病的重要机制,在拟南芥中NPR、SNC、M0S、EDS类蛋白参与了 SAR反应，但在水稻中该反应相关基因并不清楚。
[0004]近年来，拟南芥中SAR相关基因的克隆获得了突破性的进展，特别是1997年拟南芥中NPRl基因的克隆，证实了 NPRl基因在调控拟南芥的SAR反应中起到中心作用[11]。拟南芥中过量表达NPRl基因，可以使拟南芥产生SAR反应，并对多种植物病原菌的抗性显著提高[11]。最近的研究表明组成型表达NPRl基因的水稻转基因植株对白叶枯病和稻瘟病都表现出明显抗性。除了 NPRl外，近些年来在拟南芥中又先后克隆了 edsl[12]、SNCl[13]、NPR4[14]、M0S[15]等一系列控制植物SAR反应的关键基因。SNCl单突变植株，植株表现出明显的矮化、黄化、叶片卷曲等水杨酸植株体内积累的表型，而M0S/SNC1双突变植株受水杨酸在植株体内积累的影响明显减小，表明在抗病信号通路中MOS (modifier of SNC1)是SNCl上游的一个修饰基因，对SNCl所引发的感病性具有一定的修饰作用。目前，关于NPR等参与的SAR信号通路的研究虽取得了一定进展，但在水稻中尚没有MOS类型基因功能的报道。
【发明内容】
[0005]本发明提供了一种提高稻瘟病抗性的水稻0sM0S4基因，解决了现有技术条件下水稻的抗性差，难以有效抵抗稻瘟病的问题。[0006]本发明还提供了上述的水稻0sM0S4基因的稻瘟病抗性应用。
[0007]本发明的技术方案是，利用水稻的基因组数据库，对水稻MOS类基因进行筛选和分析，采用RT-PCR方法克隆一个MOS类的水稻基因，命名为0sM0S4，将所述0sM0S4基因导入植物细胞、组织或器官，再将被转化的植物细胞、组织或器官培育成植株，得到抗病性提高的转基因植株，并证明该基因具有增强水稻稻瘟病抗性的功能。
[0008]本发明的有益效果是，利用水稻基因组信息，克隆得到一个MOS类基因，命名为0sM0S4,能够对水稻0sM0S4基因进行过量表达和RNAi沉默表达，利用农杆菌转化获得转基因水稻。在此基础上，进行了转基因植株对稻瘟病菌抗性测定及其水杨酸含量分析，结果表明0sM0S4过量表达植株叶片内的水杨酸含量显著多于对照组，而RNAi转基因株系则低于对照组。此外，稻瘟病菌接种过量表达植株可增强水稻抗病能力，表明0sM0S4基因可参与水稻的抗病性调控，而且可能是水稻SAR途径的关键基因，该基因的表达可促进水稻抗病能力提高，具有较好的开发前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是本发明0sM0S4水稻基因的载体结构示意图；
[0010]图2是本发明0sM0S4水稻基因的RT-PCR扩增；
[0011]图3是本发明0sM0S4基因的MOS蛋白的系统进化分析图；
[0012]图4是本发明0sM0S4基因的MOS蛋白的核定位信号分析；
[0013]图5是本发明0sM0S4基因的遗传转化与检测；
[0014]图6是本发明0sM0S4基因的转基因植株体内自由态水杨酸含量的HPLC检测；
[0015]图7是本发明0sM0S4基因的转基因水稻的稻瘟病抗性分析。
【具体实施方式】
[0016]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0017]本发明0sM0S4水稻基因表达的核糖核酸分子序列信息计算机可读版本是:
[0018]核苷酸序列:
[0019]ATGGCGGCGGAGGCCGCGGCGGAGATCGTGCGGGAGATCGCGGCGGTGGGCGCCGCCGAT
[0020]TTGGCTGCGGCCGCCGAGCCGCTGCGCGCGGACTGCCTCCGCCTCGCTCGGAAGGTCTCG
[0021]CTGCTGTCGCACCTCGTCGCGGAGGTCGCCGAGGCGGGGGCCGGGGGTGGGGACGCGGAC
[0022]GCGGCGGATTCGTGGTTGGGGGATCTGGTCAGGGCGCTGCAGGCCGCCAGGAGGTTCGTC
[0023]GAGCTCGGGCGCGCGCCGGCGCGACCGTCGAGGGCGTCGGATCAGGATGCCGTCTGCAAC
[0024]AATGTTGCTGTTCAGTTCAAGTTTGTGACTTGGCAGTTGCAAACAGTTCTAGCAAGACTT
[0025]CCACAGAGCTGTTTTCAAATATCAGATGAAGTTCAAGAAGAGGTTGATTTAGTGCGAGCT
[0026]CAGCTTCGAAGAGAAATGGAGAAGAAAGGAGACATTGATGTAAACATTTTTTCAAAATTC
[0027]CATGATATCTTAGCTCTTCATGTTAGTACTGTTGGATCGCAGTCTGAGCAATCACATGGC
[0028]CAGCCAGACACACCACAGATGGAAAACTTATGCAACGGTCATCTGGAGTTGCAAAATATC
[0029]ATTATGCTAGTTTCAGAAATAAGTGGGGTGCCCAAGTCTGACGCAGAGAGAATAACTTCT
[0030]CAGCTAATTGAAGGACTTGAAAACATGAGAGTTACAGATTCTAAAAAACCTGTCAGTGTT
[0031]AGCCAATCAAGTGATGAAACAAAAGCATCTCCTGAGACACATAAGAAGTCTGACGCCGTG[0032]GCTATTCCTGAAGATTTTCGATGCCCAATATCTCTTGAGCTGATGAGAGATCCTGTCATT
[0033]GTTTCCACAGGACAGACCTACGAGCGTGCCTTCATCCAAAGGTGGATAGACTGTGGAAAC
[0034]CGGACCTGTCCTAAAACTCAACTGAAGCTACAAAACATTACTCTGACCCCAAATTATGTT
[0035]CTGCGAAGTTTGATATTGCAGTGGTGTGAGGAAAAAGGGATCGAACCACCTACCAGATCT
[0036]AAGAACGATGGTGCATATCTTGAGGTTGGTGGGGAGAGAGTAGCTATTGAAACATTAGTT
[0037]CGTAATCTCTCTAGTAGCTCATTAGATGAACGGAAATCGGCTGCTGCCGAAATAAGATCT
[0038]TTGGCCAAGAAAAGCACTGACAATCGTATACTTCTAGCGGAATCTGGTGCAATATCCGCT
[0039]CTAGTGAAACTTTTGTCCTCCAAAGACCTGAAAACCCAAGAACATGCAGTTACAGCTCTT
[0040]CTGAATCTCTCCATATATGATCAGAACAAGGAACTGATAGTAGTTGCGGGTGCCATTGTC
[0041]CCAATCATACAGGTGTTGAGGAAGGGGGGCATGGAGGCAAGAGAAAATGCAGCTGCAGCT
[0042]ATTTTCAGCTTGTCACTTATTGATGATAACAAGATAACTATTGGAAGCACTCCAGGGGCA
[0043]ATTGAAGCATTAGTTGAGTTGCTGCAGAGTGGCAGTCCAAGGGGTAGAAAAGATGCAGCA
[0044]ACAGCACTGTTCAACTTATGCATATACCAAGCAAACAAGGTCCGTGCAGTTCGAGCAGGA
[0045]ATCCTCGCACCACTGATTCAGATGCTGCAGGATTCATCCAGAAATGGAGCTATTGACGAA
[0046]GCACTAACAATCTTGTCAGTTCTTGTGAGCCACCATGAGTGTAAAATTGCCATAGCGAAG
[0047]GCTCATGCTATACCCTTTTTGATAGACTTGTTGAGGTCAAGTCAGGCCCGTAACAAGGAG
[0048]AATGCTGCAGCCATCTTGCTTGCCCTTTGCAAGAAGGATGCTGAGAACCTCGCTTGTATA
[0049]GGGAGGTTGGGTGCTCAAATACCACTAACTGAGCTGTCCAAGACCGGCACAGACAGAGCC
[0050]AAGCGCAAGGCAACCTCTCTCCTGGAGCATCTCAGTAAGTTGCAGGTGCTCTAA
[0051]氨基酸序列:
[0052]MAAEAAAEIVREIAAVGAADLAAAAEPLRADCLRLARKVSLLSHLVAEVAEAGAGGGDAD
[0053]AADSWLGDLVRALQAARRFVELGRAPARPSRASDQDAVCNNVAVQFKFVTWQLQTVLARL
[0054]PQSCFQISDEVQEEVDLVRAQLRREMEKKGDIDVNIFSKFHDILALHVSTVGSQSEQSHG
[0055]QPDTPQMENLCNGHLELQNIIMLVSEISGVPKSDAERITSQLIEGLENMRVTDSKKPVSV
[0056]SQSSDETKASPETHKKSDAVAIPEDFRCPISLELMRDPVIVSTGQTYERAFIQRWIDCGN
[0057]RTCPKTQLKLQNITLTPNYVLRSLILQWCEEKGIEPPTRSKNDGAYLEVGGERVAIETLV
[0058]RNLSSSSLDERKSAAAEIRSLAKKSTDNRILLAESGAISALVKLLSSKDLKTQEHAVTAL
[0059]LNLSIYDQNKELIVVAGAIVPIIQVLRKGGMEARENAAAAIFSLSLIDDNKITIGSTPGA
[0060]IEALVELLQSGSPRGRKDAATALFNLCIYQANKVRAVRAGILAPLIQMLQDSSRNGAIDE
[0061]ALTILSVLVSHHECKIAIAKAHAIPFLIDLLRSSQARNKENAAAILLALCKKDAENLACI
[0062]GRLGAQIPLTELSKTGTDRAKRKATSLLEHLSKLQVLo
[0063]
[0064]本发明所提供的与抗病性相关的0sM0S4基因，来源于水稻日本晴(Oryza sativaL.japonica.cv.Nipponbare),编码具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质:
[0065]1)序列表中的 SEQ ID NO:1 ；
[0066]2)将序列表中的SEQ ID NO:1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有0sM0S4功能的蛋白质。
[0067]所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。[0068]本发明利用水稻的基因组数据库，对水稻MOS类基因进行筛选和分析，采用RT-PCR方法克隆一个MOS类的水稻基因，命名为0sM0S4，将所述0sM0S4基因导入植物细胞、组织或器官，再将被转化的植物细胞、组织或器官培育成植株，得到抗病性提高的转基因植株，并证明该基因具有增强水稻稻瘟病抗性的功能。
[0069]1、本发明0sM0S4水稻基因的制备及实验检测
[0070]1.1)本发明0sM0S4水稻基因的制备材料
[0071]水稻品种选用日本晴(Oryzasativa L.spp.japonica, var nippobare), T4 连接酶和限制性内切酶均选用TaKaRa公司的产品；Trizol选用上海生工生物工程有限公司的产品；DNA回收试剂盒、质粒提取试剂盒、PEASY-T1Cloning vector、pEASY_T3Cloningvector均选用北京全式金生物技术有限公司的产品；反转录试剂盒选用Promega公司的产品O
[0072]1.2)水稻Mos基因的生物信息学分析
[0073]运用MEGA5.0软件(www.megasoftware, net)对0sM0S4蛋白序列及来自拟南芥、玉米的MOS蛋白序列进行同源性比对,采用Neighbor-Joining法计算遗传距离,构建系统发育树。
[0074]1.3) 0sM0S3 基因的克隆
[0075]分蘖期水稻提取叶片总RNA，然后进行反转录处理得到cDNA，再采用RT-PCR法扩增出全长基因，T载体连接片段，经过测序验证序列正确性；同时，亦扩增了该基因的200bp的外显子区域，分别构建0sM0S4基因的过表达载体、GFP融合表达载体及RNAi载体，见图1所示。
[0076]图1是本发明0sM0S4水稻基因的载体结构示意图，其中的A是0sM0S4基因过表达载体是0sM0S4基因的RNAi载体；C是0sM0S4与GFP基因融合表达载体。
[0077]1.4)载体转化与转基因植株获得
[0078]利用基因枪转化法将表达载体P1302-0sM0S4-mGFP导入洋葱表皮细胞，实现0sM0S4基因瞬时表达，设P1302-mGFP为对照组。
[0079]选取饱满、成熟的水稻籽粒，剥去外壳，用75%酒精对种子消毒5分钟，用于愈伤组织诱导和农杆菌转化，经PCR检测获得阳性苗，取T1代种子进行检测以筛选纯合子转化株。
[0080]1.5)转基因植物的水杨酸含量与抗病性检测
[0081]提取RNAi转基因植株、过表达转基因植株和对照组不同植株叶片的游离态水杨酸。在每种样品中加入了 500ng的2-甲氧基苯甲酸作为内参物质，利用HPLC测定水杨酸含量。收集浙江、湖南各地的稻瘟病生理小种,将保存的菌株接种至PDA固体培养基中，再黑光灯诱导产孢3天。选取四叶至六叶期水稻顶端第一片完全展开叶，首先放入浓度为
0.lmg/ml苯骈咪唑(BMZ)做保绿剂的溶液中，接种方法为使用移液器在水稻叶片表面均匀点上孢子悬浮液，然后喷洒0.1%吐温溶液进行保湿，盖上皿盖后先高湿度下黑暗培养3天，最后在光下培养，7天左右观察侵染症状。
[0082]2.对上述的试验检测结果的分析
[0083]2.1) 0sM0S4水稻基因的克隆与系统进化分析
[0084]提取日本晴水稻叶片总RNA，设计引物进行RT-PCR扩增，扩增结果经琼脂糖凝胶电泳后，凝胶像系统拍照后见图2所示，在图2中的该条带大小为1800bp，与目的基因大小基本一致。连入T载体进行测序，序列命名为0sM0S4，利用生物信息学方法在水稻、玉米、拟南芥中进行同源搜索，发现了 15个同源基因，根据蛋白质比对结构进行进化树分析，发现MOS类基因具有较好的同源性和较保守的结构，见图3所示，图3中的比例尺单位为遗传距离。
[0085]2.2) 0sM0S4基因的亚细胞定位
[0086]利用基因枪进行转化，从而获得0sM0S4在洋葱表皮细胞中的瞬时表达信息。如图4所示，利用荧光显微镜，在激发光488nm处，0sM0S4-GFP定位在细胞核内，其中的A是转GFP空载体，无激发光照射；B是转P1302-0sM0S4-mGFP融合表达质粒，无激发光照射；C是转GFP空载体，445-490nm激发光源照；D是转P1302-0sM0S4-mGFP融合表达质粒，445-490nm 激发光源照射；A、C 为对照(35S-GFP)，A、B 为 35S-GFP、35S-0sM0S4_GFP 的在488nm处观察到的荧光图谱，C、D为在明场下35S-GFP、35S-0sM0S3_GFP的信息。对照组在洋葱表皮细胞的质和核中均有绿色荧光，而含有目的基因的载体只在细胞核的部位有绿色荧光出现。这说明0sM0S3的主要作用部位是在细胞核。
[0087]2.3)过表达和RNAi转基因植株的检测
[0088]剪取一定量的转基因植株叶片，采用CTAB法提取基因组DNA，然后设计潮霉素基因(Hpt)引物，扩增Hpt基因的部分片段，见图5所示，A是水稻愈伤与农杆菌共培养，B是选择，C是分化，D是生根，E是炼苗和移栽，F是潮霉素基因PCR检测。可以显示在6个独立的转基因植株里都扩增出了目的片段，片段纯化以后进行测序分析为Hpt基因的序列，同时未转化植株没有扩增出任何片段，说明Hpt基因已经整合到水稻的基因组中，证明了目的基因整合到水稻基因 组中。
[0089]2.4)转基因植株的水杨酸含量和抗病性鉴定
[0090]通过自交获得T2代纯合植株，植株体内自由态水杨酸含量的高低直接与植株的抗病性相关，利用高效液相色谱法，以邻茴香酸为内参并通过峰面积的计算，分别获得了过量转基因植株和RNAi转基因植株及对照自由态水杨酸的含量。如图6所示，WT代表非转基因植株:0vmos-4，Ovmos-8, Ovmos-12 ;T2 代过表达转基因植株:RNA1-M_4，RNA1-M-9,RNA1-M-3为0sM0S4RNAi转基因植株。结果显示:在六个不同的转基因株系中，0sM0S4过表达植株体内水杨酸的含量明显高于对照组；而0sM0S4RNAi植株体内自由态水杨酸的含量大明显低于对照组。
[0091]对获得的6个转基因株系和对照进行稻瘟病初步抗性鉴定，结果发现过表达转基因株系病斑的面积显著小于对照组，对照组的病斑面积显著小于RNAi转基因植株，见图7所示，A是中花11, B是Ovmos-4过表达植株，C是RNA1-m_9植株。而对转化重组抗稻痕病基因的转基因水稻进行初步鉴定后，发现过量表达0sM0S4基因能够对稻瘟病产生抗性。
[0092]3.实验结论
[0093]SAR 是一种依赖于发病相关蛋白(pathogenesis-related protein, PR protein)的表达，当植物受到病原微生物侵害时，通过一系列的信号转导途径使整株植株在较长时间内表现出对较广泛的病原微生物的抵抗力的一种抗病机制[16]。其中PR蛋白是SAR反应中的标志蛋白，而这种抗性是由多种PR蛋白共同协调发挥作用而不是某一特定PR蛋白起作用的结果[17，18]。在SAR信号转导途径中，信号分子SA可以从侵染位点传递到更远侧的组织，并诱导远侧组织产生SAR。研究SAR抗病反应途径中的信号传导基因，不仅利于了解植物的抗病机制，还能增强植株对病原物的非特异性抗性，增加粮食产量，减少农药使用量，从而为今后环保高效的植物抗性新品种的培育奠定了坚实的基础。
[0094]拟南芥中关于SAR信号传导的研究比较清楚，在拟南芥中sncl单突变植株，植株表现出明显的矮化，黄化，叶片卷曲等水杨酸植株体内积累的表型，而mos/sncl双突变植株受水杨酸在植株体内积累的影响明显减小，表明在抗病信号通路中MOS (modifier ofSNCl)是SNCl上游的一个修饰基因[19]。对SNCl所引发的感病性具有一定的修饰作用。目前，关于NPR，SNCl，MOS，EDS等参与的SAR信号通路的研究虽然取得了一些进展，但仍旧还有很多的未知，水稻中关于SAR信号传导的研究还比较少。目前已经从水稻中克隆了 NPR类型基因，其过量表达可显著提高植物的抗病性。
[0095]从水稻中克隆了一个MOS类蛋白，其可能参与植物的抗病反应，从进化树结构分析显示，0sM0S4与拟南芥、玉米的MOS类蛋白具有高度的同源性，都含有一个Nup96的核孔蛋白，定位在细胞核，可能参与植株的SA抗病性信号通路，表明这类基因在进化上十分保守。克隆的0sM0S4基因属于植物MOS类基因，且具有MOS类基因的结构和功能。又构建了植物过量表达载体和干涉载体，并利用农杆菌介导转化水稻，成功将干涉载体导入了水稻中，获得了转基因植株。利用HPLC技术，测定了转基因植株中游离态水杨酸的含量，结果显示，在0sM0S4RNAi转 基因植株体内的游离态水杨酸含量明显低于野生型植株，而水杨酸作为植物抗病反应途径中的重要的信号分子，其含量的降低，会导致植物对病原微生物的敏感性增加，说明了 RNAi干涉0sM0S4的表达导致植物对病原微生物的敏感性增加。通过稻瘟病的接种实验也可证明，水杨酸含量的高低与水稻抗病能力有直接的关系。
[0096]SAR系统是植物抵抗疾病系统的一个重要组成部分，是植物对多种病原体非特异性，持久的系统抗性，对植物的生长发育意义重大，多年来一直是研究热点。对SAR系统的研究，旨在寻找一个更加有效的防治病害的方法，从而可以少用乃至不用化学农药抵御疾病。这将对改善植物的品质，保护环境以及生物防治具有深远影响。本发明成功克隆了 SAR系统的关键基因0sM0S4并对其功能做了初步的分析，获得了抗病能力增强的转基因植株，是一种优异的种质资源，为利用基因工程技术培育新的水稻抗病品种坚实的基础。
[0097]参考文献:
[0098][I] Qiu X H, Xue R, Li X M, et al.Review of rice transformation and itsapplication on breeding.Sheng Wu Gong Cheng Jin Zhan, 1998, 8 (5):45-49.[0099][2]Helliwell EE, Yang Y.Molecular strategies to improve rice diseaseresistance.Methods Mol Biol,2013，956:285-309.[0100][3]Tsuda, K., Sato, M., Stoddard, T., et al.Network properties of robustimmunity in plants.A network approach to plant immunity shows complexinteractions between defence hormone signalling pathways acting in both PTI andET1.PLoS Genet, 2009, 5，el000772.[0101][4]Cheng YT, Li Y, Huang S, et al.Stability of plant immune-receptorresistance proteins is controlled by SKPl-CULLINl-F-box(SCF)-mediated proteindegradation.Proc Natl Acad Sci U S A, 2011，108:14694-14699.[0102][5]YalPani N, Silverman P, Wilson TM, et al.Salicylic acid is a systemicsignal after an inducer of pathogenesis-related proteins rice plants fromoxidative damage caused by biotic and abiotic stress.Plant J，2004，40:909—919.[0103][6]Maeda TjIshiwari H Tiadinil.A plant activator of systemic acquiredresistance,boosts the production of herbivore-1nduced plant volatiles thatattract the predatory mite Neoseiulus womersleyi in the tea plant Camelliasinensis.Exp Appl Acarolj 2012, 58:247-258
[0104][7]He Z H.Signal network of plant disease resistance.Zhi Wu Sheng LiXue Ba0.2001，27(4):281-290.[0105][8] Shimono M，Koga H，Akagi A，et al.Rice WRKY45plays important roles infungal and bacterial disease resistance.Mol Plant Pathol, 2012, 13:83-94.[0106][9]Takken F L，Albrecht M，Tameling W 1.Resistance proteins:moIecuIarswitches of plant defence.Curr Opin Plant Biol，2006，9:383-390.[0107][10]Robatzek S.Vesicle trafficking in plant immune responses.Cellmicrobial, 2007，9:1-8.[0108][ll]Cao Hj Glazebrook Jj Clarke, J D，et al.The Arabidopsis NPRlgene thatcontrols systemic acquired resistance encodes a novel protein containingankyrin repeats.Cell, 1997，88:57-63.[0109][12]Li X，Clarke J D，Zhang Y，et al.Activation of an EDSl-mediated R-genepathway in the snclmutant leads to constitutive, NPRl-1ndependent pathogenresistance.Mol Plant Microbe In，2001，14:1131-1139.[0110][13]Zhang Y，Li X.A putative nucleoporin96is required for both basaldefense and constitutive resistance responses mediated by suppressor ofnprl-1, constitutivel.Plant Cell.2005，17 (4): 1306-16.[0111][14] Liu G，Holub EB，Alonso J M，et al.An Arabidopsis NPRl-1ikegene, NPR4, is required for disease resistance.Plant J，2005，41 (2):304-318.[0112][15]Palma K，Zhang Y，Li X.An importin alpha homolog, M0S6, plays animportant role in plant innate immunity.Curr Biol,2005,15(12):1129-1135.[0113][16] Gozzo F，Faoro F.Systemic acquired res i stance (50yearsafter discovery):moving from the lab to the field.J Agric FoodChemj 2013，61:12473-12491.[0114][17]Kunkel B N, Brooks D M.Cross talk between signaling pathways inpathogen defense.Curr Opin Plant Biol，2002，4:325-331.[0115][18] Lan A，Huang J，Zhao W，et al.A salicylic acid-1nduced rice (Oryzasativa L) transcription factor 0sWRKY77is involved in disease resistance ofArabidopsis thaliana.Plant Biol (Stuttg)，2012，15:452-461.[0116][19] Cheng Y Tj Germain Hj Wiermer M，et al.Nuclear pore complex componentM0S7/Nup88is required for innate immunity and nuclear accumulation of defenseregulators in Arabidopsis.Plant Cell.2009，21 (8):2503-2516。
【权利要求】
1.一种提高稻瘟病抗性的水稻0SM0S4基因，其特点在于，该0sM0S4水稻基因表达的核糖核酸分子序列信息计算机可读版本是， 核苷酸序列:
ATGGCGGCGGAGGCCGCGGCGGAGATCGTGCGGGAGATCGCGGCGGTGGGCGCCGCCGAT
TTGGCTGCGGCCGCCGAGCCGCTGCGCGCGGACTGCCTCCGCCTCGCTCGGAAGGTCTCG
CTGCTGTCGCACCTCGTCGCGGAGGTCGCCGAGGCGGGGGCCGGGGGTGGGGACGCGGAC
GCGGCGGATTCGTGGTTGGGGGATCTGGTCAGGGCGCTGCAGGCCGCCAGGAGGTTCGTC
GAGCTCGGGCGCGCGCCGGCGCGACCGTCGAGGGCGTCGGATCAGGATGCCGTCTGCAAC
AATGTTGCTGTTCAGTTCAAGTTTGTGACTTGGCAGTTGCAAACAGTTCTAGCAAGACTT
CCACAGAGCTGTTTTCAAATATCAGATGAAGTTCAAGAAGAGGTTGATTTAGTGCGAGCT
CAGCTTCGAAGAGAAATGGAGAAGAAAGGAGACATTGATGTAAACATTTTTTCAAAATTC
CATGATATCTTAGCTCTTCATGTTAGTACTGTTGGATCGCAGTCTGAGCAATCACATGGC
CAGCCAGACACACCACAGATGGAAAACTTATGCAACGGTCATCTGGAGTTGCAAAATATC
ATTATGCTAGTTTCAGAAATAAGTGGGGTGC CCAAGTCTGACGCAGAGAGAATAACTTCT
CAGCTAATTGAAGGACTTGAAAACATGAGAGTTACAGATTCTAAAAAACCTGTCAGTGTT
AGCCAATCAAGTGATGAAACAAAAGCATCTCCTGAGACACATAAGAAGTCTGACGCCGTG
GCTATTCCTGAAGATTTTCGATGCCCAATATCTCTTGAGCTGATGAGAGATCCTGTCATT
GTTTCCACAGGACAGACCTACGAGCGTGCCTTCATCCAAAGGTGGATAGACTGTGGAAAC
CGGACCTGTCCTAAAACTCAACTGAAGCTACAAAACATTACTCTGACCCCAAATTATGTT
CTGCGAAGTTTGATATTGCAGTGGTGTGAGGAAAAAGGGATCGAACCACCTACCAGATCT
AAGAACGATGGTGCATATCTTGAGGTTGGTGGGGAGAGAGTAGCTATTGAAACATTAGTT
CGTAATCTCTCTAGTAGCTCATTAGATGAACGGAAATCGGCTGCTGCCGAAATAAGATCT
TTGGCCAAGAAAAGCACTGACAATCGTATACTTCTAGCGGAATCTGGTGCAATATCCGCT
CTAGTGAAACTTTTGTCCTCCAAAGACCTGAAAACCCAAGAACATGCAGTTACAGCTCTT
CTGAATCTCTCCATATATGATCAGAACAAGGAACTGATAGTAGTTGCGGGTGCCATTGTC
CCAATCATACAGGTGTTGAGGAAGGGGGGCATGGAGGCAAGAGAAAATGCAGCTGCAGCT
ATTTTCAGCTTGTCACTTATTGATGATAACAAGATAACTATTGGAAGCACTCCAGGGGCA
ATTGAAGCATTAGTTGAGTTGCTGCAGAGTGGCAGTCCAAGGGGTAGAAAAGATGCAGCA
ACAGCACTGTTCAACTTATGCATATACCAAGCAAACAAGGTCCGTGCAGTTCGAGCAGGA
ATCCTCGCACCACTGATTCAGATGCTGCAGGATTCATCCAGAAATGGAGCTATTGACGAA
GCACTAACAATCTTGTCAGTTCTTGTGAGCCACCATGAGTGTAAAATTGCCATAGCGAAG
GCTCATGCTATACCCTTTTTGATAGACTTGTTGAGGTCAAGTCAGGCCCGTAACAAGGAG
AATGCTGCAGCCATCTTGCTTGCCCTTTGCAAGAAGGATGCTGAGAACCTCGCTTGTATA
GGGAGGTTGGGTGCTCAAATACCACTAACTGAGCTGTCCAAGACCGGCACAGACAGAGCC
AAGCGCAAGGCAACCTCTCTCCTGGAGCATCTCAGTAAGTTGCAGGTGCTCTAA 氨基酸序列:
MAAEAAAEIVREIAAVGAADLAAAAEPLRADCLRLARKVSLLSHLVAEVAEAGAGGGDAD
AADSWLGDLVRALQAARRFVELGRAPARPSRASDQDAVCNNVAVQFKFVTWQLQTVLARL
PQSCFQISDEVQEEVDLVRAQLRREMEKKGDIDVNIFSKFHDILALHVSTVGSQSEQSHGQPDTPQMENLCNGHLELQNIIMLVSEISGVPKSDAERITSQLIEGLENMRVTDSKKPVSV
SQSSDETKASPETHKKSDAVAIPEDFRCPISLELMRDPVIVSTGQTYERAFIQRWIDCGN
RTCPKTQLKLQNITLTPNYVLRSLILQWCEEKGIEPPTRSKNDGAYLEVGGERVAIETLV
RNLSSSSLDERKSAAAEIRSLAKKSTDNRILLAESGAISALVKLLSSKDLKTQEHAVTAL
LNLSIYDQNKELIVVAGAIVPIIQVLRKGGMEARENAAAAIFSLSLIDDNKITIGSTPGA
IEALVELLQSGSPRGRKDAATALFNLCIYQANKVRAVRAGILAPLIQMLQDSSRNGAIDE
ALTILSVLVSHHECKIAIAKAHAIPFLIDLLRSSQARNKENAAAILLALCKKDAENLACI
GRLGAQIPLTELSKTGTDRAKRKATSLLEHLSKLQVLo
2.—种权利要求1所述的水稻0sM0S4基因的应用，其特点在于:该水稻0sM0S4基因，能提高水稻的稻瘟病抗性。
【文档编号】C07K14/415GK103789324SQ201410037501
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年1月26日 优先权日:2014年1月26日
【发明者】夏更寿 申请人:丽水学院