1.一种多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
S1、将所述多价多特异性抗体的表达序列进行拆分,获得若干部分抗体,包括A部分抗体和B部分抗体;所述A部分抗体包括第一轻链、第一重链和第二重链的Fc链,该Fc链的N端融合了IC;所述B部分抗体包括第二轻链和第二重链的VH+CH1链,该VH+CH1链的C端融合了IN;所述第一轻链和第一重链为特异性结合第一抗原的抗体的第一轻链和第一重链;所述第二轻链和第二重链为特异性结合第二抗原的抗体的第二轻链和第二重链;
S2、经全基因合成构建真核或原核生物表达载体,用瞬转或稳转方法分别表达、制备包括A部分抗体和B部分抗体的所述若干部分抗体;
S3、进行A部分抗体和B部分抗体的体外反式剪接,或是进行A部分抗体、B部分抗体和其他部分抗体的体外反式剪接,即得所述多价多特异性抗体。
2.根据权利要求1所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,所述第一重链的CH3结构域的界面生成了凸起,所述凸起可以定位在所述N端融合了IC的第二重链的Fc链的CH3结构域的界面内的凹洞中;或是,所述第一重链的CH3结构域的界面生成了凹洞,在所述凹洞内可以定位在所述N端融合了IC的第二重链的Fc链的CH3结构域的界面生成的凸起。
3.根据权利要求1所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,步骤S2中,所述表达为通过哺乳动物细胞表达系统表达。
4.根据权利要求3所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,步骤S2中,所述哺乳动物细胞为293E、293F或CHO细胞。
5.根据权利要求1所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,步骤S2的表达产物,通过亲和层析ProteinL,或ProteinA/G层析纯化方法得到;步骤S3中的多价多特异性抗体,通过ProteinA/G层析纯化方法得到。
6.根据权利要求1所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,步骤S3中,所述体外反式剪接为在巯基化合物存在条件下进行的断裂蛋白内含肽的反式剪接反应。
7.根据权利要求1~6中任一项所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特 征在于,步骤S1中,所述若干部分抗体还包括C部分抗体,所述C部分抗体包括特异性结合第三抗原的抗体的第三单链,所述第三单链的一端融合了IN;所述第一重链的Fc链的C端融合了IC,或是所述第二重链的Fc链的C端融合了IC。
8.根据权利要求1~6中任一项所述的多价多特异性抗体的表达和制备方法,其特征在于,步骤S1中,所述若干部分抗体还包括C部分抗体和D部分抗体;所述C部分抗体包括特异性结合第三抗原的抗体的第三单链,所述第三单链的一端融合了IN;所述D部分抗体包括特异性结合第四抗原的抗体的第四单链,所述第四单链的一端融合了IN;所述第二重链的Fc链的C端融合了IC,所述第一重链的Fc链的C端融合了IC。
9.一种免疫杂交蛋白的表达和制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
A1、将所述免疫杂交蛋白的表达序列进行拆分,获得蛋白分子和A部分抗体,或A部分抗体和B部分抗体;所述A部分抗体包括第一轻链、第一重链和第二重链的Fc链,该Fc链的N端融合了IC;所述B部分抗体包括第二单链,该单链的一端融合了IN;所述蛋白分子的一端融合了IN;所述第一轻链和第一重链为特异性结合第一抗原的抗体的第一轻链和第一重链;所述第二重链和第二单链为特异性结合第二抗原的抗体的第二重链和第二单链;
A2、经全基因合成构建真核或原核生物表达载体,用瞬转或稳转方法表达、制备获得A部分抗体,或分别获得A部分抗体和B部分抗体;
A3、进行A部分抗体和蛋白分子的体外反式剪接,或是进行A部分抗体和B部分抗体的体外反式剪接,即得所述免疫杂交蛋白。
10.根据权利要求9所述的免疫杂交蛋白的表达和制备方法,其特征在于,所述蛋白分子包括细胞因子、毒素多肽或活性多肽。
11.一种免疫杂交蛋白的表达和制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
B1、将所述免疫杂交蛋白的表达序列进行拆分,获得蛋白分子、A部分抗体和B部分抗体;所述A部分抗体包括第一轻链、第一重链和第二重链的Fc链,该Fc链的N端融合了IC;所述B部分抗体包括第二轻链和第二重链的VH+CH1链,该VH+CH1链的C端融合了IN;所述第一轻链和第一重链为特异性结合第一抗原的抗体的第一轻链和第一重链;所述第二轻链和第二重链为特异性结合第二抗原的抗体的第二轻链和第二重链;所述蛋白分子的一端融合了IN,所述第二重链的Fc链、第一重链的Fc链中至少一条Fc链的C端融合了IC;
B2、经全基因合成构建真核或原核生物表达载体,用瞬转或稳转方法分别表达、制备获得A部分抗体和B部分抗体;
B3、进行A部分抗体、B部分抗体和蛋白分子的体外反式剪接,即得所述免疫杂交蛋白。
12.根据权利要求11所述的免疫杂交蛋白的表达和制备方法,其特征在于,所述蛋白分子包括细胞因子、毒素多肽或活性多肽。
13.一种免疫毒素的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一,将目标免疫毒素的结构序列分割为结构一和结构二;所述结构一为抗体或者抗体片段部分,所述结构二为毒素部分;
步骤二,分别表达结构一和结构二;
步骤三,通过断裂蛋白内含肽的反式剪接反应,将结构一和结构二连接,得到目标免疫毒素。
14.一种细胞因子融合抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一,将目标细胞因子融合抗体的结构序列分割为两部分,即结构一和结构二;所述结构一为抗体或者抗体片段部分,所述结构二为细胞因子部分;
步骤二,分别表达结构一和结构二;
步骤三,通过断裂蛋白内含肽的反式剪接反应,将结构一和结构二连接,得到目标细胞因子融合抗体。
15.一种ADC抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一,将目标ADC抗体的结构序列分割为两部分,即结构一和结构二;所述结构一为抗体或者抗体片段部分,所述结构二为化合物部分;
步骤二,分别表达结构一和结构二;
步骤三,通过断裂蛋白内含肽的反式剪接反应,将结构一和结构二连接,得到目标ADC抗体。