1.一种高产丙酮酸的大肠杆菌基因工程菌YP02(Escherichia coli),其特征在于,所述大肠杆菌基因工程菌的菌种保藏编号为CGMCC No.12463。
2.一种权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌YP02的构建方法,所述方法包括以下步骤:
1)采用同源重组技术,替换出发大肠杆菌菌株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的起始密码子ATG为GTG,获得重组大肠杆菌命名为重组大肠杆菌Ⅰ;其中,所述出发大肠杆菌为已经使丙酮酸氧化酶、乙酸激酶和乙酰磷酸化酶失活的大肠杆菌;
2)采用同源重组技术,将重组大肠杆菌Ⅰ中的柠檬酸合酶的起始密码子ATG替换为GTG,命名为重组大肠杆菌Ⅱ,即大肠杆菌基因工程菌YP02。
3.一种重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌由替换出发大肠杆菌中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的起始密码子ATG为GTG,并且替换柠檬酸合酶的起始密码子ATG为GTG获得;其中,所述出发大肠杆菌为已经使丙酮酸氧化酶、乙酸激酶和乙酰磷酸化酶失活的大肠杆菌。
4.权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌YP02的应用。
5.一种生产丙酮酸的方法,包括发酵权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌YP02得到丙酮酸的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在发酵过程中通入空气,消耗葡萄糖或其它碳源,生产丙酮酸,其中:
所述发酵温度为35-38℃;
所述发酵体系的pH值为6.5-7.5;
所述发酵时间为20-60小时;
所述发酵接种量的体积百分比为0.1%-10%;
发酵培养基中的碳源是葡萄糖、木糖和淀粉中的一种或几种;
发酵培养基中的氮源是酵母膏、蛋白胨、玉米浆、糖蜜、氨水、铵盐和尿素中的一种或几种。