本发明涉及生物医药领域，具体涉及人TMEM200C在制备前列腺癌诊断产品中的应用。
背景技术：
：前列腺癌是常见的男性生殖系统恶性肿瘤之一。世界范围内，前列腺癌发病率在男性所有恶性肿瘤中位居第二，在美国前列腺癌的发病率已经超过肺癌，成为第一位危害男性健康的肿瘤。亚洲前列腺癌的发病率远远低于欧美国家，但近年来呈现上升趋势，且增长比欧美发达国家更加迅速。前列腺癌患者主要是老年男性，一般在50岁以后发病，95％发生于60岁以上的老年男性，发生率持续地随着年龄增长而增加。前列腺癌早期多无任何症状，即使有所不适，也不足以引起病人的重视，当肿瘤增大压迫尿道时，又往往与前列腺增生相混淆。在我国约80％的病人首先发现远处转移病灶才发现前列腺癌。此时，病变已达晚期，预后不良。前列腺癌的临床诊断方式目前主要有血清前列腺特异性抗原(PSA)检测、直肠指检、直肠超声波检测、活组织病理检查等。PSA(ProstateSpecificAntigen)为前列腺组织特异性抗原，由前列腺的解剖结构可知PSA通过前列腺导管进入血液和尿液中，一些病例或生理情况下PSA会进入血液中去，如前列腺炎症、尿潴留、前列腺感染、前列腺增生和前列腺癌等，因此通过检测血清PSA水平来预测前列腺癌具有一定的假阳性率。从1991年开始，检测血清中PSA含量用于预测前列腺癌，含量高于4ng/mL认为是前列腺癌阳性，灵敏度79％，特异性20％-59％，平均灵敏度约33％，在浓度4-10ng/mL灰区部分，特异性是最低的，这时往往需要通过侵入性的穿刺活检进行确定，给患者带来极大痛苦及精神和经济负担。所以PSA并不能较好的作为诊断前列腺癌的标志物。直肠指检是最简单、最经济实用的方法，主要通过医生的食指触摸前列腺，用以发现很多无症状的前列腺癌患者，有可能获得早期诊断及根治的机会。但以上的方法都存在局限性。例如直肠指检的局限性主要在4个方面：(1)患者前列腺肿块不大时，易漏诊；(2)部分患者前列腺癌肿大不明显，但已属于晚期，不易根治；(3)患者直肠有疾患时不能使用此检测；(4)医生经验不足时可能有漏诊或者误诊的可能。目前，对于中晚期前列腺癌患者，手术治疗的效果差，大多数采用药物治疗。根据不同的病情可以采用化学药物治疗、外放射治疗、放射性核素内放射治疗以及各种疗法的综合应用等。然而，放化疗药物不仅作用于肿瘤，还可以作用于肿瘤周围健康的组织，因而在杀伤肿瘤的同时，也给机体带来了很大的副作用，最终影响对肿瘤的治疗效果。TMEM200C(transmembraneprotein200C，跨膜蛋白200c)是蛋白编码基因，位于第18号染色体上。现有研究，通过芯片实验验证TMEM200C在类风湿骨关节炎患者FLSs细胞中表达上调。目前，还没有关于TMEM200C与前列腺癌相关的报道。因此，本领域迫切需要开发早期判断前列腺癌的特异性标志物，并开发前列腺癌的靶向药物。技术实现要素：为了实现前列腺癌的早期发现，早期干预，本发明的目的在于提供一种新的前列腺癌相关mRNA，以及该mRNA的表达产物。本发明的目的还在于提供前列腺癌相关mRNA或其表达产物在用于制备前列腺癌诊断产品中的应用。为实现上述目的，本发明首先提供TMEM200C或其表达产物在用于制备前列腺癌诊断产品中的应用。优选地，所述TMEM200C或该mRNA的表达产物在前列腺癌组织中表达上调。进一步地，所述诊断产品包括检测试剂或试剂盒。优选地，所述检测试剂包括TMEM200C的特异性引物、特异性抗体、探针和/或芯片。其中，所述检测试剂包括：(1)抗TMEM200C蛋白的特异性抗体；和/或(2)特异性扩增TMEM200C的引物。其中，所述抗TMEM200C蛋白的特异性抗体为Anti-TMEM200Cantibody。进一步地，本发明提供了一种用于检测前列腺癌的诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增前列腺癌相关mRNA的引物和说明书，所述前列腺癌相关mRNA是TMEM200C。优选地，所述引物具有SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的引物。优选地，所述的说明书中注明以下内容：当检测对象的前列腺癌细胞或组织中TMEM200C表达量E1与正常前列腺细胞或组织的TMEM200C表达量E2之比≥2，则提示该检测对象前列腺癌的几率高于普通人群。所述的E1是检测对象的前列腺癌细胞或组织的TMEM200C表达量；所述的E2是正常人群的正常前列腺细胞或组织的TMEM200C表达量。所述的正常前列腺细胞或组织包括癌旁的前列腺细胞或组织。所述的表达量是相对于对照基因(如GAPDH)的相对表达量。优选地，所述试剂盒还包括10×Buffer、dNTP、MgCL2、Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂。进一步地，本发明提供了一种TMEM200C抑制剂，所述抑制剂包括TMEM200C的抗体、TMEM200C核酸的反义RNA、microRNA、siRNA、shRNA以及TMEM200C的活性抑制剂。优选地，所述治疗前列腺癌的抑制剂含有下列中的一组或几组siRNA：SEQIDNO.5和SEQIDNO.6、SEQIDNO.7和SEQIDNO.8、SEQIDNO.9和SEQIDNO.10。更优选的，所述治疗前列腺癌的抑制剂含有siRNA序列为SEQIDNO.9和SEQIDNO.10。进一步地，上述抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗前列腺癌的药物组合物中的应用。优选地，所述的药物组合物包括TMEM200C抑制剂作为活性成分，和药学上可接受的载体。所述载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其组合。优选地，所述的药物通过选自下组的用药方式进行给药：口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、舌下含化、直肠灌注、鼻腔喷雾、口腔喷雾、皮肤局部或全身经皮用药。所述的药物的制剂选自下组：片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂、喷雾剂。所述的TMEM200C抑制剂以0.01-20mg/kg体重的剂量(每次或每天)施用于哺乳动物。所述的哺乳动物包括人、小鼠、大鼠，更佳地，为人。本发明的有益效果如下：本发明公开了一种与前列腺癌相关的TMEM200C，并进一步证实该TMEM200C或该mRNA的表达产物在前列腺癌组织中表达上调。利用该mRNA检测前列腺癌不仅能够快速有效的做到早期检测，而且为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。附图说明图1WB检测正常前列腺RWPE1细胞与3个前列腺癌细胞株中TMEM200C蛋白的表达情况。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社，2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。本发明的发明人对前列腺癌组织样本及癌旁组织样本的mRNA进行高通量转录组测序，通过生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选mRNATMEM200C，现有研究中并没有TMEM200C和前列腺癌相关的报道，进一步，发明人进行了分子生物学方法验证，证实了TMEM200C在前列腺癌细胞中表达上调。本发明的TMEM200C是在本发明之前的已知mRNA，其基本信息如下：Genbank登录号：NCBI参考序列:NM_001080209.1，来源于人类基因组。本发明还采用RT-PCR方法和Western-BLot方法检测上述mRNA在前列腺癌组织和癌旁正常组织的表达，并验证了该mRNA在前列腺癌中表达上调。本文使用的术语“表达上调”指对应于所表达基因的序列，其中序列量的测量证明，与从正常个体或从通过前列腺癌分期确定与前列腺癌不同的已鉴定疾病状态的个体中分离的生物学样品中的同一基因相比，所述基因在从患前列腺癌或通过前列腺癌分期确定的前列腺癌已鉴定疾病状态的个体中分离的生物学样品中的表达水平增加。根据本发明，“表达上调”是指通过本发明方法杂交强度测量的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更高的表达增加，例如20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高或者高于1倍，最高为2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或更高。实施例1高通量测序筛选差异表达基因1、取样取2012年10月到2015年12月期间在北京协和医院泌尿外科手术中获得组织标本27例，所有标本均经病理学检查证实，其中癌旁组织样本8例、前列腺癌标本19例，编号后置-80℃低温冰箱保存。2、对组织样本进行总RNA提取采用Reagent(invitrogen，货号15596-018)进行样本RNA提取，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：收集样本后冻存于液氮，取出后把组织放入已预冷的研钵中进行研磨，待组织样本成粉末状后：①加入Trizol，室温保存5分钟；②加氯仿0.2mL，用力振荡离心管，充分混匀，室温下放置5分钟-10分钟；③12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(吸70％)到另一新离心管管中，注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质。移入新管，加入等体积的-20℃预冷异丙醇，充分颠倒混匀，置于冰上10分钟；④12000rpm高速离15分钟后小心弃掉上清液，按1mL/mLTrizol的比例加入75％DEPC乙醇洗漆沉淀(4℃保存)，洗漆沉淀物，振荡混合，4℃下12000rpm高速离心5分钟；⑤弃去乙醇液体，室温下放置5分钟以充分晾干沉淀，加入DEPC处理过的水溶解沉淀；⑥用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度，冻存于-80℃。RNA质量判定标准：RNA样本的OD260/OD280值为1.7-2.2之间；总RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带；70℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。3、RNA样品的质量分析RNA提取后琼脂糖凝胶电泳，从电泳结果可以初步判定提取的RNA样品质量合格与否，是否可以用于进一步的转录组分析。进而通过NanoDrop1000分光光度计检测RNA样品的提取情况，RNA-seq测序的样品要求：OD260/OD280为1.8-2.2。4、高通量测序测序平台为Illumina公司的HiSeq2500高通量测序平台，进行高通量转录组深度测序，测序后我们运用Fast-QC(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)软件对测序数据的质量进行整体评估，包括碱基的质量值分布，质量值的位置分布，GC含量，PCRdupLication含量，kmer的frequency等。在差异基因表达分析时，根据得到的FPKM值，采用国际公认算法EBSeq进行差异筛选。其中，筛选时，LOG2FC>1或<-1，FDR<0.05。为了更好的理解差异表达基因的功能，我们对差异表达基因进行了GeneOntology和信号通路分析，并对差异表达基因进行功能注释和蛋白质互相作用网络分析，鉴于以上数据分析的结果，结合文献我们筛选了差异表达TMEM200C，该mRNA在前列腺癌组织样本中表达上调。实施例2RT-PCR验证前列腺癌组织及癌旁组织TMEM200C表达情况1、材料20例前列腺癌组织样本及8例癌旁组织样取自北京协和医院2012至2015年期间泌尿外科手术中前列腺癌样本，对其进行分组及编号。所有样本均经过病理学检查证实。2、方法2.1对组织样本进行总RNA提取，同实施例1的提取方法。2.2逆转录合成cDNA采用IIIReverseTranscriptase(invitrogen，货号18080-044)进行cDNA反转录，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：使用逆转录试剂盒，用逆转录缓冲液对1μg总RNA进行逆反录合成cDNA。采用25μL反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA。将获得的cDNA样品稀释10倍后保存在-20℃冰箱备用。2.3ReaL-TimePCR2.3.1仪器及分析方法用ABI7500型荧光定量PCR仪，采用2-ΔΔCt法进行数据相对定量分析。2.3.2引物设计采用在线引物引物设计，基因序列参照NCBI:NM_001080209.1(TMEM200C)，内参选GAPDH，引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如下：表1引物序列操作过程如下：表2ReaLTime反应体系组分加入量2×mix10μL上游引物(10uM)0.5μL下游引物(10uM)0.5μL模板2μL加入灭菌蒸馏水至25μL(一)反应体系：用PowerGreenPCRMasterMix(invitrogen，货号4367659)进行扩增，实验操作按产品说明书进行。扩增程序为：95℃5min，(95℃15sec，61℃45sec)×35个循环。(二)引物筛选将各样本cDNA混合后，以此为模板进行5倍梯度稀释，稀释后样品各取2μL作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增，同时在60-95℃进行融解曲线分析，根据扩增效率高和溶解曲线单峰原则进行引物筛选。(三)样品ReaLTime-PCR检测将各样品cDNA10倍稀释后取2μL作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增。同时在60-95℃进行溶解曲线分析。二、实验结果实时定量PCR扩增曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，表明各反应管的扩增效率相近，极限平而无上扬现在，曲线指数期斜率较大，说明扩增效率较高；样本扩增产物溶解曲线都是单峰，说明扩增产物只有一条，为特异性扩增；根据qRT-PCR的相对定量公式：2-ΔΔCt×100％，比较TMEM200C在前列腺癌组织和癌旁组织中的表达水平。结果显示：qRT-PCR扩增结果稳定，其中TMEM200C在前列腺癌患组织中的表达水平为癌旁组织的3倍，以上结果验证了高通量转录组表达数据的整合分析TMEM200C在前列腺癌患者中表达上调的结果。实施例3WB方法检测前列腺癌组织中TMEM200C的蛋白表达水平一、材料人正常前列腺上皮细胞RWPE1、人前列腺癌细胞株PC3、DU145、LNCaP均购自美国ATCC公司，胎牛血清、RPMI1640培养基、K-SMF培养基购自Gibco公司；二、方法(一)蛋白样品制备1、细胞培养前列腺癌PC3、DU145、LNCaP细胞采用含10％的胎牛血清、100U/mL青霉素及100U/mL链霉素的RPMI1640培养基，正常前列腺上皮细胞RWPE1采用K-SMF培养基，所用细胞在37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中传代培养，所述培养方法采用参考文献中的培养方法进行培养(赖彩永,苏泽轩,叶东明等.同源异型盒基因EN2在前列腺癌细胞中的表达及意义[J].实用医学杂志,2013,11:1721-1724)。2、细胞总蛋白提取1)将细胞从CO2培养箱中取出，置于相差显微镜下观察，选择生长良好且铺满整个培养瓶瓶底的细胞用于蛋白质提取。提前准备预冷离心机至4℃。2)准备冰盒备用，倒掉培养瓶中的旧培养基，用PBS洗涤培养瓶中残余培养基三次，倒置于滤纸上，尽量吸干水分后，迅速用细胞刮板将细胞刮下，加入1-2mLPBS2-3次，充分洗涤并收集PBS洗涤液置于离心管中并放入冰盒中。3)将收集好的细胞1500rmp低温离心5min，弃上清。4)每1x107个细胞加RIPA裂解液(Beyotime)1mL，置于冰上，并在在超声细胞破碎仪中超声3-5min。5)放置10min后4℃下12000g离心10min，取上清，置于冰盒中备用。(二)利用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行总蛋白定量采用康为世纪微量BCA蛋白定量试剂盒(货号：CW2011)，具体步骤见其说明书。(三)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)1、蛋白质样品变性:a)根据BCA蛋白质浓度测定结果，每个凝胶加样孔中加入相同质量的总蛋白提取物。按照每1微升蛋白样品加入0.25微升蛋白上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5x)。b)100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。c)冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。2、胶板制备:采用Bio-Rad公司的微型垂直板电泳装置制备0.75mm厚的凝胶，照说明书安装好玻璃板后，先在小烧杯中配制5mL10％的分离胶，配方如下：表3分离胶配方组分用量30％丙烯酰胺溶液1.7mLTris-HCL(1.5M，pH8.8)1.3mL10％SDS0.05mL10％AP0.05mLTEMED0.002mL灭菌ddH2O补充至5mL混匀后立即灌胶，然后加1mL蒸馏水覆盖，室温下放置约30min待胶聚合后，用蒸馏水洗2-3次，再用滤纸吸干。然后制备2mL5％的浓缩胶，配方如下：表4浓缩胶配方混匀后立即灌胶，插入样品梳，避免产生气泡，待胶凝固后，取出样品梳，后用蒸馏水和1x蛋白电泳缓冲液先后冲洗样品孔。3、上样及电泳将凝胶板装在电泳装置上，内槽中加满1x蛋白电泳缓冲液，外槽中1x蛋白电泳缓冲液应超过铂丝，按顺序上样。在末端泳道中加入蛋白质质量标准蛋白梯度。电泳时蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。(四)蛋白质印迹1、按照上述方法先进行SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白。2、预先用转印缓冲液浸泡NC膜、滤纸、海棉垫。SDS-PAGE结束后取出凝胶，去除浓缩胶，在Tris/甘氨酸缓冲液中漂洗数秒，然后置于转印缓冲液中浸泡15-30min。打开电转印夹，每侧垫上一块专用的用转印缓冲液浸泡透的海棉垫，再各放一块转印液浸透的滤纸，滤纸与海棉垫大小相同或与NC膜，凝胶大小相同均可，将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将NC膜平放在凝胶上，去除气泡，夹好电转印夹。在电泳槽加满电转印液，插入电转印夹，将电泳槽放入冰箱内(电转印液之前要放入冰箱内预冷)，连接好电极，接通电流，转印夹的NC膜应对电泳槽的正极。3、封闭：用1xTBS漂洗一次。加入含5％的无脂奶粉TBS封闭缓冲液，置于振荡培养箱中进行封闭；4、一抗杂交：弃封闭液，加入用一抗稀释液稀释的一抗(Anti-TMEM200Cantibody(HPA047253-100UL))杂交溶液，置于4℃杂交过夜，第二天在振荡培养箱中进行杂交；5、回收一抗杂交液，用TBST洗膜3次；6、弃TBST，加入用封闭缓冲液稀释的二抗(GoatAnti-RabbitIgG,HRPConjugated(CW0103))杂交溶液，置于振荡培养箱中进行杂交；7、弃二抗溶液，用TBST洗膜3次；8、ECL化学发光及图像采集和分析：按照高灵敏度化学发光检测试剂盒(康为世纪货号CW0049B)，具体步骤参照说明书。9、以β-Actin作为内参进行数据标准化，以正常前列腺RWPE1细胞中TMEM200C作为参照样本，观察三种前列腺癌细胞中TMEM200C蛋白的相对表达水平。三、实验结果结果如图1所示，与正常前列腺RWPE1细胞相比，前列腺癌细胞株LNCaP、DU145、PC3中TMEM200C蛋白的表达量显著上调。实施例4RNAi干扰TMEM200C表达及对前列腺癌细胞的影响一、材料1、细胞系前列腺癌PC3细胞株2、siRNA设计与合成依据在线设计软件siDirectversion2.0(http://design.rnai.jp/)，根据基因序列参照NCBI:NM_001080209.1(TMEM200C)，设计相应的siRNA，具体序列见表3。设计后送往合成公司合成。表3siRNA序列列表二、实验方法1、细胞分组C组：空白对照组；C1组：转染脂质体组；C2组：转染非特异性的siRNA-NC组；S1，S2，S3组：转染特异性的siRNA组。2、转染按照LipofectamineTM2000TransfectionReagent提供的步骤进行。(1)细胞培养方法，同实施例3所示。(2)将5×104细胞接种在6孔板上，这些用于初期接种的细胞数量，应能在24小时内使细胞汇合达到70％；(3)准备siRNA-LipofectamineTM2000复合物:a.以250μLOpti-MEM稀释5μLLipofectamineTM2000，轻轻混匀，室温下孵育5分钟；b.实验各组分别取7.5μLsiRNA加入250μLOpti-MEMI中进行稀释，并轻轻摇动将其混匀；c.孵育5分钟后，将稀释的siRNA和LipofectamineTM2000混合后在室温下孵育20分钟。(4)在培养板中的每个孔中都加入细胞、培养基及siRNA-LipofectamineTM2000复合物。然后轻轻摇动培养板，使他们充分混合；(5)放置在37℃，CO2培养箱内孵育48小时，在荧光显微镜下观察细胞转染数量，检测转染效率；(6)转染效率为荧光镜与光镜视野中的细胞数量的比值，细胞的转染效率均达到90％以上，方可以进行后续的实验。计算公式如下：转染效率＝发荧光细胞的数量/相同视野下的细胞数量×100％3、应用ReaL-timePCR方法检测转染前后TMEM200C表达的变化(1)标准曲线的构建：选取在50mL培养瓶中正常培养的前列腺癌细胞1瓶，提取RNA，测定RNA浓度和纯度，进行逆转录反应，将反应生成的DNA模板十倍稀释，得到相当于104-101copies/μL的DNA模板，分别加入TMEM200C引物和内参引物，配制25μL反应体系，使用ReaL-timePCR扩增仪，进行PCR扩增反应。得到TMEM200C和内参的标准曲线。(2)ReaL-timePCR方法检测转染前后TMEM200C表达的变化：提取各组细胞的RNA，测定RNA浓度和纯度，进行逆转录反应，每组DNA模板同时进TMEM200C和内参的ReaL-timePCR反应，实验重复三次。(3)对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。三、实验结果分别用3条TMEM200C的siRNA及对照siRNA转染第一代前列腺癌细胞，结果显示在大量前列腺癌细胞内发现绿色荧光，证明前列腺癌细胞内已经得到了siRNA的转染，然后在荧光镜和光镜下观察前列腺癌细胞数量，进行转染效率的检测，结果显示转染率均达到90％以上。ReaL-timePCR结果显示，转染非特异性的siRNA-NC组对前列腺癌细胞中TMEM200C表达无明显抑制作用，和空白对照组无统计学差异，转染的3个TMEM200C-siRNA组都对前列腺癌细胞中TMEM200C表达起到一定抑制作用，TMEM200C-siRNA1抑制率为50％，TMEM200C-siRNA2和TMEM200C-siRNA3抑制效果最明显，抑制率达66％和75％。实施例5MTT法检测前列腺癌细胞的增殖抑制情况一、MTT法实验步骤1、在96孔板中，按照每孔加入约1×104细胞，然后在37℃5％CO2的条件下培养24小时；2、按照实验分组(空白对照组、转染siRNA-NC组、转染TMEM200C-siRNA3组，每组6个重复)继续培养直至适合检测；3、接着在37℃，5％CO2及100％湿度的条件下继续孵育适当时间；4、同时用DilutionBuffer将5×MTT稀释成1×MTT；5、在每孔中加入50μL1×MTT，并在37℃条件下孵育4小时；6、吸出上清液后，在每孔中还需加入150μLDMSO，并将其放置在平板摇床上进行摇匀；7、将酶标仪波长设定为570nm，检测每个孔的光密度。8、细胞增殖抑制率的计算：细胞增殖抑制率％＝(1-实验孔OD值/对照细胞OD值)×100％，对照细胞OD值为正常培养细胞孔的OD值。二、实验结果与未转染的空白对照组相比，转染siRNA-AC对细胞增殖无明显影响(P>0.05)，转染TMEM200C-siRNA3可以明显抑制前列腺癌细胞增殖，可用于前列腺癌药物的制备，抑制率随时间的延长而增加，组间比较差异具有显著性(P<0.05)，结果见表4所示。表4各组前列腺细胞的增殖抑制率(％)虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1 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