专利名称:耐热化蔗糖磷酸化酶(sp)的方法
技术领域：
本发明涉及耐热蔗糖磷酸化酶和编码所述耐热蔗糖磷酸化酶的基因。另外，本发明还涉及生产所述耐热蔗糖磷酸化酶的方法。
背景技术：
蔗糖磷酸化酶(以下也称SP或SP酶)是例如可用于α-葡聚糖合成及葡萄糖-1-磷酸(G-I-P)合成的酶。
α -葡聚糖(尤其是不溶性直链淀粉)被认为具有与膳食纤维相同的功能，可用于健康食品。另外，线性α-葡聚糖的直链淀粉具有这样的特征，例如能在其分子内包含碘、脂肪酸等，因而预期可用于诸如药物、化妆品和卫生产品的领域。直链淀粉也可用作生产具有与直链淀粉相似包合能力的环糊精及环链淀粉(cycloamylose)的原料。而且，含直链淀粉的膜的抗张强度与通用塑料相当，有良好的前景用作生物可降解塑料的原材料。因此，预期直链淀粉可在各种应用中使用。但是，很难获得足够纯的直链淀粉，这种淀粉也非常昂贵，因而仅在试剂水平分销，而很少用作工业原材料。因此，需要一种稳定而便宜地生产直链淀粉的方法。
例如G-I-P可用作医疗抗菌剂、抗肿瘤剂(以钼络合物形式)、治疗心脏病的药物(以胺盐形式)及α-葡聚糖合成的底物。
据报道，一些细菌(链球菌属细菌、明串珠菌属微生物、大肠杆菌、乳酸菌(lacticacid bacteria)等)中存在SP，这些细菌中所发现的SP的氨基酸序列和碱基序列是已知的。
α -葡聚糖或G-I-P生产中可使用各种SP，经常使用来自明串珠菌属细菌的SP。这是因为容易获得较大量的酶。
α-葡聚糖的工业生产中，需要基本上除去其他污染酶的活性，尤其是磷酸酶活性和淀粉酶活性。这是因为如果使用SP和GP合成α-葡聚糖的过程中有磷酸酶，生成的反应中间体G-I-P会降解，使α-葡聚糖收率降低。如果存在淀粉酶，所合成的α-葡聚糖会发生降解使其分子量变小。因此，必须去除这些污染酶。大量生产SP时，大肠杆菌和枯草杆菌是表达SP基因的理想宿主。但是，如图2和图3所示，大肠杆菌具有淀粉酶活性和磷酸酶活性，而枯草杆菌具有淀粉酶活性。如图2和图3所示，这些宿主具有的酶不能被55°C热处理灭活，但几乎能被60°C热处理完全灭活。因此，希望得到即使在60°C热处理后也不丧失活性的耐热SP，或是耐热性比淀粉酶或磷酸酶更强的SP。
作为参考，下列表1给出了热处理前后不同细菌(大肠杆菌TG-1、大肠杆菌BL21及枯草杆菌ANA-I)细胞提取物中淀粉酶活性和磷酸酶活性的具体数值。
表 1
8
权利要求
1.耐热化蔗糖磷酸化酶，其通过修饰天然蔗糖磷酸化酶获得，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置上具有与天然蔗糖磷酸化酶的氨基酸残基不同的氨基酸残基与基序序列 1 :AVGGVHLLPFFPSTGDRGFAPIDYHEVDSAFGDWDDVKRLGEKYYLMFDFMINHIS 中第14位对应的位置、第四位对应的位置和第44位对应的位置；与基序序列 2 :RPTQEDVDLIYKRKDRAPKQEIQFADGSVEHLWNTFGEEQID 中第 7 位对应的位置、第19位对应的位置、第23位对应的位置和第34位对应的位置；以及与基序序列 3 ILPEIHEHYTIQFKIADHDYYVYDFALPMVTLYSLYSG 中第 19 位对应的位置；其中(1-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列1中第14位对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸或异亮氨酸；或(1-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列1中第四位对应的位置具有氨基酸残基脯氨酸、丙氨酸或赖氨酸；或(1-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列1中第44位对应的位置具有氨基酸残基组氨酸或精氨酸；或(2-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第7位对应的位置具有氨基酸残基亮氨酸或异亮氨酸；或(2-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第19位对应的位置具有氨基酸残基甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或酪氨酸；或(2-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第23位对应的位置具有氨基酸残基精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸或缬氨酸；或(2-4)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第34位对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸；或(3-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列3中第19位对应的位置具有氨基酸残基甘氨酸、半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸或丝氨酸；并且其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7. 0、20mM Tris缓冲液中于55°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的20%或更多；并且其中所述天然蔗糖磷酸化酶的氨基酸序列由一种核酸分子编码，该核酸分子在严谨条件下与由编码选自下组的氨基酸序列的碱基序列组成的核酸分子杂交SEQ ID NO :2, SEQIDNO :4,SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10,SEQ ID NO :12,SEQ ID NO : 14、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO :18 禾口 SEQ ID NO :20。
2.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述天然蔗糖磷酸化酶来源于变异链球菌、肺炎链球菌、表兄链球菌或缓症链球菌。
3.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述天然蔗糖磷酸化酶来源于变异链球菌或肠膜明串珠菌。
4.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列1中第14位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基丝氨酸或异亮氨酸。
5.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列1中第四位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基脯氨酸、丙氨酸或赖氨酸。
6.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列1中第四位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基脯氨酸。
7.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列1中第44位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基组氨酸或精氨酸。
8.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列1中第44位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基精氨酸。
9.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列2中第7位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基亮氨酸或异亮氨酸。
10.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列2中第19位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或酪氨酸。
11.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列2中第19位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基缬氨酸或酪氨酸。
12.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列2中第23位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸或缬氨酸。
13.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列2中第23位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基组氨酸。
14.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列2中第34位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基丝氨酸。
15.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列3中第19位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基甘氨酸、半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸或丝氨酸。
16.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中在与基序序列3中第19位对应的位置上，所述耐热化蔗糖磷酸化酶具有氨基酸残基甘氨酸。
17.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7.0、20mM Tris缓冲液中于57°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的10%或更多。
18.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7.0、20mM Tris缓冲液中于57°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37 °C酶活性的20%或更多。
19.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在含20%蔗糖的pH7. 0、20mM Tris缓冲液中于65°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的10%或更多。
20.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在含20%蔗糖的pH7. 0、20mM Tris缓冲液中于65°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的20%或更多。
21.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶至少在与基序序列1中第14位对应的位置上具有与天然蔗糖磷酸化酶不同的氨基酸残基。
22.权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶至少在与基序序列3中第19位对应的位置上具有与天然蔗糖磷酸化酶不同的氨基酸残基。
23.生产耐热化蔗糖磷酸化酶的方法，该方法包括修饰含有编码第一蔗糖磷酸化酶的碱基序列的第一核酸分子，从而获得含修饰碱基序列的第二核酸分子；制备含第二核酸分子的表达载体；将该表达载体导入细胞中以表达耐热化蔗糖磷酸化酶；和回收所表达的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置具有与第一蔗糖磷酸化酶氨基酸残基不同的氨基酸残基与基序序列 1 :AVGGVHLLPFFPSTGDRGFAPIDYHEVDSAFGDWDDVKRLGEKYYLMFDFMINHIS 中第14位对应的位置、第四位对应的位置和第44位对应的位置；与基序序列 2 :RPTQEDVDLIYKRKDRAPKQEIQFADGSVEHLWNTFGEEQID 中第 7 位对应的位置、第19位对应的位置、第23位对应的位置和第34位对应的位置；以及与基序序列 3 ILPEIHEHYTIQFKIADHDYYVYDFALPMVTLYSLYSG 中第 19 位对应的位置；其中(1-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列1中第14位对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸或异亮氨酸；或(1-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列1中第四位对应的位置具有氨基酸残基脯氨酸、丙氨酸或赖氨酸；或(1-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列1中第44位对应的位置具有氨基酸残基组氨酸或精氨酸；或(2-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第7位对应的位置具有氨基酸残基亮氨酸或异亮氨酸；或(2-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第19位对应的位置具有氨基酸残基甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或酪氨酸；或(2-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第23位对应的位置具有氨基酸残基精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸或缬氨酸；或(2-4)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列2中第34位对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸；或(3-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与基序序列3中第19位对应的位置具有氨基酸残基甘氨酸、半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸或丝氨酸；并且其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7. 0、20mM Tris缓冲液中于55°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的20%或更多；并且其中所述第一蔗糖磷酸化酶是天然蔗糖磷酸化酶；并且其中所述天然蔗糖磷酸化酶的氨基酸序列由一种核酸分子编码，该核酸分子在严谨条件下与由编码选自下组的氨基酸序列的碱基序列组成的核酸分子杂交SEQ ID NO :2, SEQIDNO :4,SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :12,SEQ ID NO :14,SEQ IDNO :16, SEQ ID NO :18 禾口 SEQ ID NO :20。
24.权利要求
23所述的方法，其中所述第一蔗糖磷酸化酶来源于变异链球菌、肺炎链球菌、表兄链球菌或缓症链球菌。
25.权利要求
23所述的方法，其中所述第一蔗糖磷酸化酶来源于变异链球菌或肠膜明串珠菌。
26.权利要求
23所述的方法，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7.0、20mMTris缓冲液中于57°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的10%或更多。
27.权利要求
23所述的方法，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7.0、20mMTris缓冲液中于57°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37 °C酶活性的20%或更多。
28.权利要求
23所述的方法，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶至少在与基序序列1中第14位对应的位置上具有与第一蔗糖磷酸化酶不同的氨基酸残基。
29.权利要求
23所述的方法，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶至少在与基序序列3中第19位对应的位置上具有与第一蔗糖磷酸化酶不同的氨基酸残基。
30.核酸分子，包含编码权利要求
1所述耐热化蔗糖磷酸化酶的碱基序列。
31.包含权利要求
30所述核酸分子的载体。
32.包含权利要求
30所述核酸分子的细胞。
33.合成葡萄糖-1-磷酸的方法，该方法包括使含权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶、蔗糖和无机磷酸的反应液反应而生成葡萄糖-ι-磷酸。
34.权利要求
33所述的方法，其中所述反应在50°C 70°C的温度下进行。
35.合成葡萄糖聚合物的方法，该方法使含下列物质的反应液反应生成葡萄糖聚合物权利要求
1所述的耐热化蔗糖磷酸化酶；以α -葡萄糖-1-磷酸为底物的第二种磷酸化酶；蔗糖；引发剂；以及无机磷酸或葡萄糖-ι-磷酸。
36.权利要求
35所述的方法，其中所述葡萄糖聚合物是α-葡聚糖。
37.权利要求
35所述的方法，其中所述第二种磷酸化酶是α-葡聚糖磷酸化酶。
38.权利要求
35所述的方法，其中所述第二种磷酸化酶选自纤维二糖磷酸化酶、纤维糊精磷酸化酶、昆布二糖磷酸化酶、昆布糊精磷酸化酶、β -1，3-葡聚糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶。
39.权利要求
35所述的方法，其中所述反应在50°C 70°C的温度下进行。
40.通过修饰天然蔗糖磷酸化酶得到的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置具有与天然蔗糖磷酸化酶不同的氨基酸残基与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第47位苏氨酸(T47)对应的位置、第62位丝氨酸(S62)对应的位置、第77位酪氨酸(Y77)对应的位置、第1 位缬氨酸(V128)对应的位置、第140位赖氨酸(K140)对应的位置、第144位谷氨酰胺^!144)对应的位置、第155位天冬酰胺(N155)对应的位置和第249位天冬氨酸(DM9)对应的位置；其中(1-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第47位苏氨酸对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸或异亮氨酸；或(1-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第62位丝氨酸对应的位置具有氨基酸残基脯氨酸、丙氨酸或赖氨酸；或(1-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第77位酪氨酸对应的位置具有氨基酸残基组氨酸或精氨酸；或(2-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第1 位缬氨酸对应的位置具有氨基酸残基亮氨酸或异亮氨酸；或(2-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第140位赖氨酸对应的位置具有氨基酸残基甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或酪氨酸；或(2-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第144位谷氨酰胺对应的位置具有氨基酸残基精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸或缬氨酸；或(2-4)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO 2氨基酸序列中第155位天冬酰胺对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸；或(3-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第249位天冬氨酸对应的位置具有氨基酸残基甘氨酸、半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸或丝氨酸；并且其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7. 0、20mM Tris缓冲液中于55°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的20%或更多；其中所述天然蔗糖磷酸化酶的氨基酸序列由一种核酸分子编码，该核酸分子在严谨条件下与由编码选自下组的氨基酸序列的碱基序列组成的核酸分子杂交SEQ ID NO :2, SEQIDNO :4,SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10,SEQ ID NO :12,SEQ ID NO : 14、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO :18 禾口 SEQ ID NO :20。
41.生产耐热化蔗糖磷酸化酶的方法，该方法包括下列步骤修饰含有编码第一蔗糖磷酸化酶的碱基序列的第一核酸分子，从而获得含修饰碱基序列的第二核酸分子；制备含第二核酸分子的表达载体；将该表达载体导入细胞中以表达耐热化蔗糖磷酸化酶；和回收所表达的耐热化蔗糖磷酸化酶，其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置具有与第一蔗糖磷酸化酶氨基酸残基不同的氨基酸残基与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第47位苏氨酸(T47)对应的位置、第62位丝氨酸(S62)对应的位置、第77位酪氨酸(Y77)对应的位置、第1 位缬氨酸(V128)对应的位置、第140位赖氨酸(K140)对应的位置、第144位谷氨酰胺^!144)对应的位置、第155位天冬酰胺(N155)对应的位置和第249位天冬氨酸(DM9)对应的位置；其中(1-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第47位苏氨酸对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸或异亮氨酸；或(1-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第62位丝氨酸对应的位置具有氨基酸残基脯氨酸、丙氨酸或赖氨酸；或(1-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第77位酪氨酸对应的位置具有氨基酸残基组氨酸或精氨酸；或(2-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第1 位缬氨酸对应的位置具有氨基酸残基亮氨酸或异亮氨酸；或(2-2)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第140位赖氨酸对应的位置具有氨基酸残基甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或酪氨酸；或(2-3)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第144位谷氨酰胺对应的位置具有氨基酸残基精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸或缬氨酸；或(2-4)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第155位天冬酰胺对应的位置具有氨基酸残基丝氨酸；或(3-1)所述耐热化蔗糖磷酸化酶在与SEQ ID NO :2氨基酸序列中第249位天冬氨酸对应的位置具有氨基酸残基甘氨酸、半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸或丝氨酸；并且其中所述耐热化蔗糖磷酸化酶在pH7. 0、20mM Tris缓冲液中于55°C加热20分钟后，所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C的酶活性为加热之前所述耐热化蔗糖磷酸化酶在37°C酶活性的20%或更多；其中所述第一蔗糖磷酸化酶是天然蔗糖磷酸化酶；并且其中所述天然蔗糖磷酸化酶的氨基酸序列由一种核酸分子编码，该核酸分子在严谨条件下与由编码选自下组的氨基酸序列的碱基序列组成的核酸分子杂交SEQ ID NO :2, SEQIDNO :4,SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10,SEQ ID NO :12,SEQ ID NO : 14、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO :18 禾口 SEQ ID NO :20。
42.合成葡萄糖-1-磷酸的方法，该方法包括使含权利要求
40所述耐热化蔗糖磷酸化酶、蔗糖和无机磷酸的反应液反应以生成葡萄糖-ι-磷酸。
43.合成葡萄糖聚合物的方法，包括使含下列物质的反应液反应以生成葡萄糖聚合物权利要求
40所述耐热化蔗糖磷酸化酶；以α -葡萄糖-1-磷酸为底物的第二种磷酸化酶；蔗糖；引发剂；以及无机磷酸或葡萄糖-ι-磷酸。
专利摘要
提供通过修饰天然SP获得的耐热蔗糖磷酸化酶和制备所述耐热化SP的方法。与天然蔗糖磷酸化酶相比，所述耐热SP在下列位置中至少一个位置的氨基酸残基不同分别对应于基序序列1的第14位、第29位和第44位的位置、对应基序序列2的第7位、第19位、第23位和第34位的位置以及对应基序序列3的第19位的位置；并且在20mM Tris缓冲液(pH7.0)中于55℃加热20分钟以后，所述耐热SP在37℃的酶活性是未加热耐热SP在37℃的酶活性的20％或更多。
文档编号C12P19/04GKCN1845990 B发布类型授权 专利申请号CN 200480025320
公开日2012年3月21日 申请日期2004年8月31日
发明者柳濑美千代, 栗木隆, 藤井和俊, 饭干雅惠, 高田洋树, 鹰羽武史 申请人:江崎格力高株式会社导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (1), 非专利引用 (1),