作为靶点用于药物开发中的功能蛋白的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物开发领域，特别是涉及一组作为靶点用于药物开发中的功能蛋白。
【背景技术】
[0002]膜融合几乎涉及到每一个细胞的过程，如囊泡运输、胞吐作用和突触传递，这一过程涉及到一些蛋白分子如NSF、a-SNAP和SNARE复合物(包括syntaxins、SNAP-25和VAMP)ο Syntaxins和SNAP-25位于靶膜上，被称为t_SNARE或Q-SNARE，而VAMP位于转运囊泡膜上，被称为V-SNARE或R-SNARE。在膜融合的过程中同源的R-SNARE和Q-SANRE形成一个四螺旋束，被称为“反式”-SNARE复合体。随后NSF分子通过-SNAP结合在“反式”-SNARE复合体上，并利用ATP水解的能量来拆卸“反式”-SNARE复合体，从而进行新一轮的膜融合。
[0003]Numb分子是不对称的细胞命运的第一个确定的内在决定因素，它的一个突变可以使果蝇周围神经系统不能形成大部分感觉神经。动物细胞中含有两个同源的基因分别是和Numblike。在不同的细胞过程，如非对称细胞分裂、细胞分化、迀移、干细胞活化、粘着连接的维护、组织再生、肿瘤发生和甚至阿尔茨海默氏病相关的β -淀粉样前体蛋白(APP)裂解中Numb发挥着截然不同的作用。因至少有4个主要的可变剪接位点，进而生成4种不同的蛋白质_Numb65、66、71和72，连同Numblike —共五种Numb蛋白。Numb65、66和Numblike多在分化细胞表达，而Numb71和72大多在增殖细胞中表达。据推测，Numb65、66和Numblike促进细胞分化，而Numb71和72促进细胞增殖。不同的Numb蛋白定位于不同的亚细胞器:Numb65、71和Numblike大多定位于细胞质而Numb66和72主要是定位于膜，表明不同的亚型有着不同的功能。最近人们发现，Numb参与细胞器内吞过程并参与了许多网格蛋白依或非依赖的许多重要分子内吞转运过程，如Notch、EGFR表皮生长因子受体、转铁蛋白、整合素、N-钙粘蛋白、E-钙粘蛋白、L1、胆固醇等的转运。遗传证据表明，在非对称细胞分裂之后，Numb通过拮抗Notch信号有助于决定两个子细胞细胞命运。最近的一项研宄表明，Numb或者通过促进其溶酶体依赖的降解，或者降低其回收到血浆来抑制Notch活性。Numb也可以通过促进果幡的膜蛋白sanpodo的转运来措抗Notch信号。这些发现表明，Numb抑制Notch信号是通过调节胞内转运方式实现的。此外，Numb控制APP细胞内运输和介导亚型依赖性的切割方式，从而涉及APP代谢和阿尔茨海默氏病的发病机理。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题是提供一组作为靶点用于药物开发中的功能蛋白，能作为靶点进行药物开发用于治疗疾病。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是:提供一组作为靶点用于药物开发中的功能蛋白，所述功能蛋白为Numb、Monlb和NSF，以所述Numb、Monlb或NSF作为靶点进行药物开发，用于治疗早期胞内小体融合异常而引发的疾病。
[0006]在本发明一个较佳实施例中，所述Numb是所述Monlb和所述NSF调控早期胞内小体(EEs)融合的上游调控因子，所述Monlb和所述NSF是在EEs融合中通过SNARE发挥作用的。
[0007]在本发明一个较佳实施例中，所述Numb与所述Monlb相互作用，所述Monlb从cis-SNARE上解离所述NSF，控制SNARE的循环利用，从而调控胞内小体的融合。
[0008]在本发明一个较佳实施例中，所述Numb能够促进早期胞内小体的融合，所述Numb是早期胞内小体对接过程中的调控因子。
[0009]在本发明一个较佳实施例中，所述Numb中的Numb 65和Numb 71调控早期胞内小体的融合，所述Numb 65的序列为:
MNKLRQSFRRKKDVYVPEASRPHQWQTDEEGVRTGKCSFPVKYLGHVEVDESRGMHICEDAVKRLKATGKKAVKAVLWVSADGLRVVDEKTKDLIVDQTIEKVSFCAPDRNFDRAFSYICRDGTTRRWICHCFMAVKDTGERLSHAVGCAFAACLERKQKREKECGVTATFDASRTTFTREGSFRVTTATEQAEREEIMKQMQDAKKAETDKIVVGSSVAPGNTAPSPSSPTSPTSDATTSLEMNNPHAIPRRHAPIEQLARQGSFRGFPALSQKMSPFKRQLSLRINELPSTMQRKTDFPIKNAVPEVEGEAESISSLCSQITNAFSTPEDPFSSAPMTKPVTVVAPQSPTFQGTEWGQSSGAASPGLFQAGHRRTPSEADRWLEEVSKSVRAQQPQASAAPLQPVLQPPPPTAISQPASPFQGNAFLTSQPVPVGVVPALQPAFVPAQSYPVANGMPYPAPNVPVVGITPSQMVANVFGTAGHPQAAHPHQSPSLVRQQTFPHYEASSATTSPFFKPPAQHLNGSAAFNGVDDGRLASADRHTEVPTGTCPVDPFEAQWAALENKSKQRTNPSPTNPFSSDLQKTFEIEL，所述 Numb 71 的序列为:
MNKLRQSFRRKKDVYVPEASRPHQWQTDEEGVRTGKCSFPVKYLGHVEVDESRGMHICEDAVKRLKAERKF
FKGFFGKTGKKAVKAVLWVSADGLRVVDEKTKDLIVDQTIEKVSFCAPDRNFDRAFSYICRDGTTRRWICHCFMAV
KDTGERLSHAVGCAFAACLERKQKREKECGVTATFDASRTTFTREGSFRVTTATEQAEREEIMKQMQDAKKAETDKI
VVGSSVAPGNTAPSPSSPTSPTSDATTSLEMNNPHAIPRRHAPIEQLARQGSFRGFPALSQKMSPFKRQLSLRINEL
PSTMQRKTDFPIKNAVPEVEGEAESISSLCSQITNAFSTPEDPFSSAPMTKPVTVVAPQSPTFQGTEWGQSSGAASP
GLFQAGHRRTPSEADRWLEEVSKSVRAQQPQASAAPLQPVLQPPPPTAISQPASPFQGNAFLTSQPVPVGVVPALQP
AFVPAQSYPVANGMPYPAPNVPVVGITPSQMVANVFGTAGHPQAAHPHQSPSLVRQQTFPHYEASSATTSPFFKPPA
QHLNGSAAFNGVDDGRLASADRHTEVPTGTCPVDPFEAQWAALENKSKQRTNPSPTNPFSSDLQKTFEIELo
[0010]在本发明一个较佳实施例中，所述Monlb的序列为:
MEVG⑶TAAPAPGGAEDLEDTQFPSEEAREGGGVHAVPPDPEDEGLEETGSKDKDQPPSPSPPPQSEALSSTSRLWSPAAPENSPTCSPESSSGGQG⑶PSDEEWRSQRKHVFVLSEAGKPIYSRYGSVEALSATMGVMTALVSFVQSAGDAIRAIYAEDHKLVFLQQGPLLLVAMSRTSQSAAQLRGELLAVHAQIVSTLTRASVARIFAHKQNYDLRRLLAGSERTLDRLLDSMEQDPGALLLGAVRCVPLARPLRDALGALLRRCTAPGLALSVLAVGGRLITAAQERNVLAECRLDPADLQLLLDWVGAPAFAAGEAWAPVCLPRFNPDGFFYAYVARLDAMPVCLLLLGTQREAFHAMAACRRLVEDGMHALGAMRALGEAASFSNASSASAPAYSVQAVGAPGLRHFLYKPLDIPDHHRQLPQFTSPELEAPYSREEERQRLSDLYHRLHARLHSTSRPLRLIYHVAEKETLLAWVTSKFELYTCLSPLVTKAGAILVVTKLLRWVKKEEDRLFIRYPPKYSTPPATSTDQAAHNGLFTGLo
[0011]在本发明一个较佳实施例中，所述NSF的序列为: MAGRSMQAARCPTDELSLTNCAVVNEKDFQSGQHVIVRTSPNHRYTFTLKTHPSVVPGSIAFSLPQRKWAG
LSIGQEIEVSLYTFDKAKQCIGTMTIEIDFLQKKSIDSNPYDTDKMAAEFIQQFNNQAFSVGQQLVFSFNEKLFGLLVKDIEAMDPSILKGEPATGKRQKIEVGLVVGNSQVAFEKAENSSLNLIGKAKTKENRQSIINPDWNFEKMGIGGLDKEFSDIFRRAFASRVFPPEIVEQMGCKHVKGILLYGPPGCGKTLLARQIGKMLNAREPKVVNGPEILNKYVGESEANIRKLFADAEEEQRRLGANSGLHIIIFDEIDAICKQRGSMAGSTGVHDTVVNQLLSKIDGVEQLNNILVIGMTNRPDLIDEALLRPGRLEVKMEIGLPDEKGRLQILHIHTARMRGHQLLSADVDIKELAVETKNFSGAELEGLVRAAQSTAMNRHIKASTKVEVDMEKAESLQVTRGDFLASLENDIKPAFGTNQEDYASYIMNGIIKWGDPVTRVLDDGELLVQQTKNSDRTPLVSVLLEGPPHSGKTALAAKIAEESNFPFIKICSPDKMIGFSETAKCQAMKKIFDDAYKSQLSCVVVDDIERLLDYVPIGPRFSNLVLQALLVLLKKAPPQGRKLLIIGTTSRKDVLQEMEMLNAFSTTIHVPNIATGEQLLEALELLGNFKDKERTTIAQQVKGKKVWIGIKKLLMLIEMSLQMDPEYRVRKFLALLREEGASPLDFD。
[0012]在本发明一个较佳实施例中，所述早期胞内小体融合异常而引发的疾病为肿瘤和神经退行性疾病。
[0013]在本发明一个较佳实施例中，所述神经退行性疾病为阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿氏病。
[0014]本发明的有益效果是:本发明的作为靶点用于药物开发中的基因，以所述Numb、Monlb或NSF作为靶点进行药物开发，用于治疗早期胞内小体融合异常而引发的疾病，细胞质Numb蛋白作为一种新型调控因子招募胞楽Monlb定位到EEAl正面的囊泡上，从SNARE复合体解离下NSF，使SNARE复合体恢复原来状态，进一步开启新一轮的膜融合，暗示了 Numb可以控制多个关键节点，如内吞作用、回收和降解微调信号在各种生理过程的强度和持续时间。
【附图说明】
[0015]为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中:
图1是转染过的MCF7A细胞的裂解液免疫杂交结果，其中Numb和Actin蛋白的表达水平如图所示。
[0016]图2是通过荧光定量P