用于预测或监控c-Met抑制剂效力的生物标志物的制作方法

用于预测或监控c-Met抑制剂效力的生物标志物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本文提供了通过分析一种或多种生物标志物来预测和/或监控c-Met抑制剂效力 的方法；用于预测和/或监控c-Met抑制剂效力的组合物，包括检测生物标志物的物质；用 于选择适于应用c-Met抑制剂的受试者的组合物，包括检测生物标志物的物质；用一种或 多种生物标志物来预测和/或监控c-Met抑制剂效力的方法；用一种或多种生物标志物选 择适于应用c-Met抑制剂的受试者的方法；和预防和/或治疗癌症的方法，包括向选择的受 试者施用c-Met抑制剂。
[0002] 相关技术的描述
[0003] 生物标志物通常指经过测量的特性（例如，天然存在的蛋白），其可用作外部因素 (例如，损伤）在生物体内引起的一些变化的指示。现已有活跃的研究将生物标志物应用于 诊断多种疾病，比如癌症、中风、痴呆等，以及预测或监控一些试剂的治疗作用。与药物研发 有关的生物标志物包括药效标志物（ro标志物）和预测性标志物，前者指示药物是否在体 内是功能上有效的，后者在用药前指示对具体药物最可能的应答。这样的标志物的使用有 助于建立药物的临床策略。例如，可将经设计以指示对于药物作用的灵敏度或抗性的预测 性标志物应用于患者的选择以允许更有效的药物治疗，且可利用药效标志物来监控单独的 患者中的药物活性，将它们综合可导致确立有效的治疗策略。并且，即使在没有预测性标志 物的情况下，药效标志物允许对药物的反应进行早期监控，从而允许在早期阶段鉴别药物 有效组和药物无效组。从而，可开发更有效和成功的药物疗法。此外，当应用于以浓度函数 监控药物应答时，药效标志物可以作为计算该药物适宜剂量的指标。
[0004] 目前为止，癌症是几大致死原因之一。虽然医学技术的发展带来了癌症治疗的显 著进步，但在过去的二十多年里，所有癌症的5年存活率仅提高了 10%。这是因为，癌症的 特性，比如快速生长、转移等，使其难以在适宜的时间进行诊断和治疗。对能提供癌症疗法 效力信息的适宜生物标志物的鉴定可极大地影响在最佳时间提供最适宜的癌症治疗的能 力。例如，患有肺癌的患者在癌症分类、基因型和蛋白分泌方面可彼此各不相同，从而必须 利用不同且合适的治疗剂进行治疗。对于用特定药物进行的化疗，对应的生物标志物（若 存在）将减少错误试验的次数而增加成功的可能性。在这方面，非常重要的是开发用于预 测和监控抗癌治疗剂效力的生物标志物。适当的生物标志物若成功开发，可对抗癌药物的 应用和价值以及利用其进行治疗的成功率产生巨大贡献。
[0005] c-Met是肝细胞生长因子（HGF)受体。肝细胞生长因子（HGF)作为多功能细胞因 子发挥作用，其结合c-Met受体的胞外结构域以调节各种正常细胞和肿瘤细胞中的细胞分 裂、细胞运动和形态发生。c-Met受体是具有酪氨酸激酶活性的膜受体。c-Met是原癌基因， 编码代表性的受体酪氨酸激酶。其间或参与负责癌症发展的多种机制，比如癌发生、转移、 迁移、血管发生和癌细胞侵入等，而与受体HGF无关，因此作为抗癌治疗的靶标而受到密切 关注。因此已开发了靶向的治疗，比如针对c-Met的抗体。
[0006] 用研发的c-Met靶向药物进行的治疗可能能更有效地治疗癌症，若存在能够预测 和监控药物疗效以选择适宜于该药物治疗的患者并监控患者对所述药物的应答的生物标 志物，则成功的可能性更大。因此，生物标志物的应用可用于建立有效的治疗策略。
[0007] 发明简述
[0008] -个实施方案提供了生物标志物，其用于预测和/或监控c-Met抑制剂的治疗 作用或用于选择适于应用c-Met抑制剂的受试者，其中所述生物标志物包括选自由IL-8、 b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种。
[0009] 另一实施方案提供了生物标志物的用途，所述生物标志物用于预测和/或监控 c-Met抑制剂的治疗作用或用于选择适于应用c-Met抑制剂的受试者，其中所述生物标志 物包括选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一 种。
[0010] 另一实施方案提供了组合物和试剂盒，所述组合物和试剂盒用于预测和/或监控 c-Met抑制剂效力或用于选择适于应用c-Met抑制剂的受试者，所述组合物和试剂盒包括 与选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种相互 作用的物质。
[0011] 另一实施方案提供了物质，所述物质与选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和 编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种相互作用，以用于预测和/或监控c-Met抑制剂 效力或用于选择适于应用c-Met抑制剂的受试者。
[0012] 另一实施方案提供了物质的用途，所述物质与选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/ BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种相互作用，所述用途为用于预测和/或监 控c-Met抑制剂效力或用于选择适于应用c-Met抑制剂的受试者。
[0013] 还提供了预测和/或监控c-Met抑制剂效力或选择适于应用c-Met抑制剂的受试 者的方法，包括在生物样品中测量选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白 的核酸组成的组的至少一种的存在（存在/不存在）、水平和/或突变。
[0014] 另一实施方案提供了抑制c-Met或预防和/或治疗癌症的方法，该方法包括将 c-Met抑制剂施用于通过本文方法选出的适于应用c-Met抑制剂的受试者。
[0015] 另一实施方案提供了 c-Met抑制剂或包括c-Met抑制剂的药物组合物，用于在受 试者中抑制c-Met和/或治疗癌症，其中所述受试者相较于其中c-Met抑制剂无效的参照 样品具有高水平的IL-8或编码IL-8的核酸；在施用c-Met抑制剂之后（相较于施用之前 的水平）显示了降低的水平的IL-8、b-IG-H3、MIF和/或编码其的核酸；和/或具有KRAS、 BRAF和/或编码其的核酸的突变。
[0016]另一实施方案提供了 c-Met抑制剂或包括c-Met抑制剂的药物组合物的用途，用 于在受试者中抑制c-Met和/或治疗癌症，其中所述受试者相较于其中c-Met抑制剂无效 的参照样品具有高水平的IL-8或编码IL-8的核酸；在施用c-Met抑制剂之后（相较于施 用之前的水平）显示了降低的水平的IL-8、bIG-H3、MIF和/或编码其的核酸；和/或具有 KRAS、BRAF和/或编码其的核酸的突变。
【附图说明】
[0017]图1A、1B、1C、1D和1E显示抗c-Met抗体的抗癌活性，是在移植了 Lovo细胞（图 1A)、HT29 细胞（图 IB)、EBC-1 细胞（图 1C)、Hs746T 细胞（图 1D)和 MKN45 细胞（图 1E) 的小鼠模型中，因抗c-Met抗体处理导致的肿瘤尺寸变化。
[0018] 图2是移植了癌细胞的小鼠模型中IL_8水平的图，显不了 IL_8水平和对于抗 c-Met抗体的反应性之间的关系。
[0019] 图3的多个图显示，在移植了人癌细胞的小鼠模型中，反应者组和无反应者组应 答不同剂量的抗c-Met抗体所致的IL-8血清水平变化。
[0020] 图4显示，在移植了患者来源的肿瘤组织的小鼠模型中，对照（载体（PBS)处理） 血清样品中的IL-8水平。
[0021] 图5是，在移植了患者来源的肿瘤组织的小鼠模型中，抗c-Met抗体处理组和未处 理组（对照PBS处理）的血清样品中的IL-8水平，显示了抗c-Met抗体处理之后，抗c-Met 抗体的抗癌效力和IL-8水平的变化之间的关系。
[0022] 图6是显示，在移植了典型的癌细胞系（EBC-1)的小鼠模型中，抗c-Met抗体处理 之后肿瘤尺寸的变化。
[0023] 图7是显示，在移植了典型的癌细胞系（Hs746T)的小鼠模型中，抗c-Met抗体处 理之后肿瘤尺寸的变化。
[0024] 图8是显示，在移植了典型的癌细胞系（EBC-1)的小鼠模型中，抗c-Met抗体处理 之后IL-8水平随时间的变化。
[0025] 图9是显示，在移植了典型的癌细胞系（Hs746T)的小鼠模型中，抗c-Met抗体处 理之后IL-8水平随时间的变化。
[0026] 图10是显示，在移植了 U87MG的小鼠模型中，抗c-Met抗体处理之后肿瘤尺寸的 变化。
[0027] 图11显示了用蛋白阵列盒进行化学发光免疫分析所测量的，U87MG细胞中蛋白表 达模式的变化。
[0028] 图12是显示，在抗c-Met抗体处理之后，在来自移植了不同癌细胞的小鼠模型的 血清中bIG_H3水平的变化。
[0029] 图13是显示，在抗c-Met抗体处理之后，在来自移植了患者来源肿瘤组织的小鼠 模型的血清中bIG-H3水平的变化。
[0030] 图14是显示，在抗C-Met抗体处理之后，在来自移植了患者来源肿瘤组织的小鼠 模型的癌组织裂解物中bIG-H3水平的变化。
[0031] 图15显示了用蛋白阵列试剂盒进行化学发光免疫分析所测量的，在移植了患者 来源肿瘤组织的小鼠模型（LXFA623)中蛋白表达模式的变化。
[0032] 图16是显示，在抗c-Met抗体处理之后，在来自移植了不同癌细胞系的小鼠模型 的血清中MIF水平的变化。
[0033] 图17是显示，在抗c-Met抗体处理之后，在来自移植了患者来源肿瘤组织的小鼠 模型的血清中MIF水平的变化。
[0034] 图18显示了通过Western印迹所测量的，在移植了患者来源的癌细胞的小鼠模型 中c-Met蛋白的表达水平。
[0035] 图19的多个图显示，在移植了患者来源的肿瘤组织的小鼠模型中存在或不存在 K-RAS和B-RAF突变的情况下，在抗c-Met抗体处理之后肿瘤尺寸的变化。
[0036] 图20的多个图显示，抗c-Met抗体反应者细胞系对其他c-Met抑制剂克唑替尼和 PHA665752处理的反应性。
[0037] 图21包含示出抗c-Met抗体无反应者细胞系对其他c-Met抑制剂；克唑替尼和 PHA665752的处理的反应性的图。
[0038] 图22的多个图显示，在不同c-Met抑制剂L3-lY/IgG2、克唑替尼和PHA665752处 理之后，在抗c-Met抗体反应者细胞系的培养液中IL-8的相对水平（％ )。
[0039] 图23的多个图显示，在不同c-Met抑制剂L3-lY/IgG2、克唑替尼和PHA665752处 理之后，在抗c-Met抗体无反应者细胞系的培养液中IL-8的相对水平（％ )。
[0040] 发明详述
[0041] 一个实施方案提供了用于预测和/或监控c-Met抑制剂的治疗作用或选择适于应 用c-Met抑制剂的受试者的生物标志物，其中所述生物标志物包括选自由IL-8、b-IG-H3、 MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种。
[0042] 另一实施方案提供了用于预测和/或监控c-Met抑制剂的治疗作用或选择适于 应用c-Met抑制剂的受试者的生物标志物的用途，其中所述生物标志物包括选自由IL-8、 b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种。
[0043] 另一实施方案提供了用于预测和/或监控c-Met抑制剂效力或选择可应用c-Met 抑制剂（即，将表现出效力）的受试者的组合物和试剂盒，所述组合物和试剂盒包括与选自 由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的核酸组成的组的至少一种相互作用的 物质。
[0044] 另一实施方案提供了包括与选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋 白的核酸组成的组的至少一种相互作用的物质的组合物和试剂盒，其用于预测和/或监控 c-Met抑制剂效力或选择适于应用c-Met抑制剂的受试者，或用于制备用于预测和/或监控 c-Met抑制剂效力或选择适于应用c-Met抑制剂的受试者的试剂（药物组合物）。
[0045] 另一实施方案提供了与选自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和编码这些蛋白的 核酸组成的组的至少一种相互作用的物质，其用于预测和/