料中达到一定数量级， 植物乳杆菌菌体数量可达30~50亿C化/mLW上，较优化前培养基10~20亿C化/mU活 菌数提高了 2~5倍，总酸含量从1. 0-1. 5%提高到1. 7~3%W上。而且，采用低成本的 农业副产品部分或全部替代MRS培养基中的葡萄糖和有机氮源，既成本低廉，又充分利用 了资源。培养基成本从MRS培养基2855元/吨左右降低至843元/吨左右，降低2000元 左右成本。另外，本发明所提供的植物乳杆菌液体培养基，不仅适用于植物乳杆菌的发酵培 养，也可W用于嗜酸乳杆菌的发酵培养。
[0032] 下面结合实施例对本发明作进一步描述。
[0033] 实施例1
[0034] 1、本发明液体培养基：
[0035] 糖蜜40g，玉米浆lOg，鱼溶浆15g，磯酸氨二锭5g，己酸钢5g，硫酸儀0. 58g，硫酸 车孟0. 25g，吐温80 1血，蒸馈水1L，抑值为6.8。
[0036] 2、对比例配方；
[0037] (1)种子培养基：蛋白腺lOg、牛肉膏lOg、酵母粉5.Og、葡萄糖5.Og、吐温80 1. 0血、巧樣酸氨二锭 2.Og、无水己酸钢 5.Og、K2HPO42.Og、MnS〇4? &0 0. 25g、M拆〇4 ? 7&0 0. 58g、蒸馈水1.化，抑值6.8。
[003引 （2)MRS固体培养基；蛋白腺10.Og、牛肉膏10.Og、酵母膏5.Og、葡萄糖20.Og、 无水己酸钢5.Og、巧樣酸氨二锭2.Og、吐温80 1. 0血、K2HPO42.Og、M拆O4? 7&0 0. 58g、MnS04? &0 0. 25g、琼脂 20.Og、蒸馈水 1. 0L，抑值6.8。
[0039] 做MRS液体培养基；蛋白腺10.Og、牛肉膏10.Og、酵母粉5.Og、葡萄糖20.Og、 吐温 80 1. 0血、巧樣酸氨二锭 2.Og、无水己酸钢 5.Og、K2HPO42.Og、MnS〇4? &0 0. 25g、 M拆O4? 7&0 0. 58g、蒸馈水 1.OL，抑值6.8。
[0040] 3、配置方法如下；
[004U 称取培养基各配方进行溶解，调配最适抑值。
[0042] 将上述溶解的培养基配方进行121°C灭菌20min，含葡萄糖培养基单独115°C灭菌 30min。
[0043] 4、植物乳杆菌的培养方法如下；
[0044]培养条件；W植物乳杆菌为发酵菌株，接种至MRS液体培养基中活化后再转接种 至本发明液体培养基中，初始抑值6.2~6.8,在30~35°C下厌氧静置培养18~2化，接 种量（v/v)为4~10%。W本发明培养基配方培养植物乳杆菌为实验组，在相同条件下转 接至WMRS液体培养基中培养植物乳杆菌作对照组。
[0045] 5、生长曲线的测定
[0046] 取斜面菌种一环，接入MRS液体培养基中，30°C培养2化活化，将活化后的植物乳 杆菌，分别接入50mL的本发明液体培养基和50mL的MRS液体培养基中，接种量为4%。在 35°C下厌氧静置培养2化，每隔化取样，直到发酵终止。W对应的未接入菌种的液体培养基 作参比，测定样品0D600nm值。绘制植物乳杆菌在不同培养基中的生长曲线，生长曲线如图 1所示。
[0047] 6、植物乳杆菌生物量的测定
[0048] 取培养结束的发酵液2mL至离屯、管中，在8000r/min转速下离屯、8min，倒去上清 液，加入ImL蒸馈水后震荡溶解成菌悬液，最后稀释成适当倍数后，利用分光光度计测得 0D600nm值，W对应的未接入菌种的液体培养基为参比。
[0049] 实验组培养2化后植物乳杆菌0D600nm值为10. 33,对照组培养1她后植物乳杆菌 0D600nm达最高为9. 01。
[0050] 7、植物乳杆菌活菌数的测定
[0化1] 培养结束后摇匀取样，采用平板梯度稀释涂布法检测发酵液中的植物乳杆菌的活 菌数。
[0化2] 其中，实验组培养2化后植物乳杆菌活菌数达40亿C化/mLW上，对照组培养1她 后植物乳杆菌活菌数达18亿C化/mL左右。
[0053] 8、总有机酸含量的测定
[0化4] 培养结束后取5mL发酵液于烧杯中，采用酸碱滴定的方法测定总有机酸含量。
[0化5] 其中，实验组培养2化后总有机酸含量为1. 8%，对照组培养1她后总有机酸含量 1. 5%。
[0056] 9、成本对照
[0化7] 将实验组配方成本与对照组进行对比，对比结果如下表1所示，实验组的成本为 843元/吨左右，对照组MRS培养基的成本为2855元/吨左右，实验组比对照组成本低2000 兀左右。
[0化引表1两种培养基配方成本对照表
[0059]
【主权项】
1. 一种植物乳杆菌液体培养基，其特征在于，其配方组成如下： 糖蜜10-50g/L，玉米浆10-50g/L，鱼溶浆10-50g/L，磷酸氢二铵5-25g/L，乙酸钠2-8g/L，硫酸镁 0. 5-lg/L，硫酸锰 0. 1-0. 5g/L，吐温l-3mL/L; 其中，培养基的pH值为6. 0-6. 8左右。
2. 根据权利要求1所述的植物乳杆菌液体培养基，其特征在于，其配方组成如下： 糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，鱼溶浆15g/L，磷酸氢二铵5g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁 0? 58g/L，硫酸锰 0? 25g/L，吐温lmL/L。
3. 根据权利要求1或2所述的植物乳杆菌液体培养基，其特征在于，所述鱼溶浆用鱼粉 替代。
4. 根据权利要求3所述的植物乳杆菌液体培养基，其特征在于，所述玉米浆用大豆提 取液替代。
5. 根据权利要求1或2所述的植物乳杆菌液体培养基，其特征在于，所述玉米浆用大豆 提取液替代。
6. -种植物乳杆菌的发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤： 以植物乳杆菌为发酵菌株，接入MRS液体培养基中活化处理；将活化后的植物乳杆菌， 接入如权利要求1~5任一所述的植物乳杆菌液体培养基中，接种量为4%~10%，进行发 酵培养18~24小时； 其中，发酵培养的条件为在30~35°C下厌氧静置培养。
7. 根据权利要求6所述的植物乳杆菌的发酵培养方法，其特征在于，所述活化处理的 过程为在MRS液体培养基中30°C培养24小时。
【专利摘要】本发明公开了一种植物乳杆菌液体培养基植物乳杆菌的发酵培养方法，以糖蜜、玉米浆、鱼溶浆、磷酸氢二铵等为原料，糖蜜替代MRS葡萄糖，玉米浆替代牛肉膏，鱼溶浆替代酵母粉，无机氮源替代蛋白胨。采用低成本的农业副产品部分或全部替代MRS培养基中的葡萄糖和有机氮源，同时优化培养基组合，不仅提高了植物乳杆菌的菌体数量和有机酸含量，同时明显降低了生产成本。
【IPC分类】C12R1-25, C12N1-20
【公开号】CN104774795
【申请号】CN201510209378
【发明人】李职, 杨宽民, 刘茂锋, 黎明, 王玄珂, 陈辉燕, 何庆华
【申请人】深圳比利美英伟营养饲料有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月28日