一种生物碱二聚体及其制备方法与作为抗病毒剂的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物碱二聚体（alkaloid dimer)化合物及其制备方法与应用，特 别是涉及一种对单纯疱瘆I型病毒（HSV-I)和肠道病毒71 (EV71)具有极强的抑制作用的 生物碱二聚体及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 单纯疱瘆I型病毒是一种包裹着的DNA病毒，具有高发病率，潜伏期长，嗜神经组 织的特点，潜伏于周围神经系统，主要感染儿童，免疫力低下者以及器官移植者，一旦受到 外界适当刺激就会大规模爆发，引发脑炎和角膜炎，严重者能致人死亡。目前临床上抗病毒 药物主要是核苷类抗生素，如阿昔洛韦，但近年来耐药性感染人群迅速增加。肠道病毒71 是一种小的单正链RNA病毒，是引起儿童手足口病主要病原体，能够引起严重的神经系统 并发症，导致婴儿和儿童不可逆的脑功能损伤甚至死亡。目前没有对EV71有效的疫苗和药 物，临床治疗以对症、支持治疗为主。它们已经对人类的健康尤其是儿童的健康造成严重的 影响。因此，寻找新的抗病毒药物尤其是结构新颖的抗病毒药物已成为亟待解决的课题。 海洋微生物独特的生存环境（高压、高盐、缺氧、避光等），促使海洋微生物产生大量结构新 颖、具有抗病毒活性的化合物，为寻找潜在的抗病毒药物提供了重要来源。但是关于海洋微 生物来源的具有抗HSV-I和EV71活性的化合物的报道还相当少，尤其是具有潜在开发成为 手性药物的海洋来源化合物的报道。
【发明内容】
【主权项】
1. 一种式I结构的生物碱二聚体，，其特征在于具有式I的结构式为
2. 权利要求1所述的式I化合物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对真菌 Pestalotiopsis sp. (ZJ-2009-7-6)进行菌种培养，再在发酵培养基中对该真菌进行发酵 培养，将所得菌丝体用氯仿-甲醇混合液（I : 1)浸提3次减压浓缩后，用乙酸乙酯萃取3 次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏分别进行正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析后， 再经HPLC高效液相制备色谱，将所得洗脱液浓缩，得到式I化合物；其中所述菌种培养基中 含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水；所述的发酵培养基中含有大米、粗海盐、水、 溴化钾、氯化钙；所述的色谱分离为正相硅胶柱色谱分离、凝胶柱层析分离和高效液相色谱 分呙。
3. 如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述菌种培养基优选含有葡萄糖 0· 1% -5.0%、酵母膏 0.01 % -1%、蛋白胨 0.01 % -1%、琼脂 0· 1% -3.0%、氯化钠 0. 05% -5%，其余为水，上述百分含量均为重量百分比，培养温度优选为0-30°C，培养时间 优选为3-15天。
4. 如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述发酵培养基优选含有大米 1.0% -80. 0% (重量百分比，下同）、氯化钠0.05% -5%，氯化钙0.01 % -5%，溴化钾 0. 01 % -5%，其余为水，培养温度优选为0-30°C，培养时间优选为20-100天。
5. 如权利要求2-4任一项所述的制备方法，其特征在于所述的正相硅胶柱层析采用的 固定相为200-300目硅胶，流动相为体积比为50% -100%的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂； 所述Sephadex LH-20凝胶柱层析采用的流动相为体积比为氯仿：甲醇=I : 1的混合 溶剂；所述HPLC高效液相制备色谱中采用的色谱柱为Kromasil 10 X 250mm，5 μ m，流速为 1. 0-5. OmL/min，流动相为体积比20 % -70 %的甲醇-水混合溶剂。手性拆分，优选Kromasi I 系列手性柱，Kromasil 10X250mm，5 μπι，流速优选为L 0-5. OmL/min，流动相优选体积比为 40% -95%的无水乙醇-正己烷混合溶剂。
6. 权利要求1所述的式I化合物为晶体，其特征在于该晶体的空间群为P-1，晶胞 参数为 a= 9.7492(19) A，b= 10.793(2) A,c= 12.316(3) A, α = 106.75(3)。，β = 97.22(3)。，γ = 95.45(3)°，V =Ι219·4(4)Α3, Z = 2, Dc=L 358g/cm3, F (OOO) = 532， μ = 0. 106mm_1〇
7. 权利要求6所述晶体的制备方法，其特征在于将式I化合物溶于甲醇、乙醇、水、四氢 呋喃或丙酮中的任一种或几种，静置缓慢结晶即可得到式I化合物的晶体。
8. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于静置缓慢结晶的条件为在0-30°C下，静 置1-30天。
9. 一种抗病毒剂，其特征在于其含有权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受 的盐作为有效成分。
10. -种抗病毒剂，其特征在于其含有权利要求6所述的晶体作为有效成分。
11. 权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐在制备抗病毒剂中的应用。
12.权利要求7所述的晶体在制备抗病毒剂中的应用。
【专利摘要】一种生物碱二聚体及其制备方法与作为抗病毒剂的应用，制备时先对真菌Pestalotiopsis sp.(ZJ-2009-7-6)进行菌种培养，再对该真菌进行发酵培养，将所得菌丝体用氯仿-甲醇混合液(1∶1)浸提3次减压浓缩后，用乙酸乙酯萃取3次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏依次进行正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、HPLC高效液相色谱，即得式I化合物。本发明提供一种抗病毒剂，其特征在于以式I化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分，用于预防和/或治疗由单纯疱疹I型病毒(HSV-1)和/或肠道病毒71(EV71)引起的疾病。CGMCC NO.696020121217
【IPC分类】C07D498-20, A61P31-20, A61P31-22, C12R1-645, A61K31-499, C12P17-18
【公开号】CN104876945
【申请号】CN201510201548
【发明人】邵长伦, 王长云, 贾彦来, 管菲菲, 王翠芳, 魏美燕
【申请人】中国海洋大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年4月22日