聚合物胶束，PEG-HZ-PLA代表含腙键的聚合物胶 束，Free DOX代表游离的阿霉素原料药。
【具体实施方式】
[0019] 以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细说明，但本发明的保护范 围并不局限于此。
[0020] 实施例1 一种PH敏感可降解聚合物，所述聚合物为下述结构的化合物：
140彡η彡410,且η为整数。
[0021] 所述聚合物的合成路线如下：
将8.0g mPEG (Mn=5000)和0.3g对羧基苯甲醛反应。溶剂50mLDCM (二氯甲烷)，催化 剂3.(^00：(二环己基碳二亚胺)，0.458〇麻？（4-二甲氨基吡啶)，室温反应2411，减压抽 滤，依次用异丙醇（lOOmL)、冰乙醚（_4°C，50mL)洗涤沉淀得淡黄色固体粉末，真空干燥，得 到化合物1 ; IOg对羟基苯甲酸甲酯和3. 2mL水合肼（80%)反应，mol比1:1。溶剂为30mL无水乙 醇，80°C反应2h，减压抽滤，用无水乙醇洗涤沉淀，得白色粉末状晶体，真空干燥，得到化合 物2 ; 5g化合物1和0. 15g化合物2反应，mol比1:1，溶剂为15mLDMF，60°C反应24h，加入 无水乙醚（-4°C，50mL)使产物沉淀析出，减压抽滤至干，真空干燥得粉末状固体，得到化合 物3 ; 化合物3和丙交酯反应，mol比控制在1:200和1:500之间，溶剂甲苯（20mL到50mL)， 催化剂辛酸亚锡（〇. 4 mL)，氮气保护，100°C反应24h，再加入乙醚（_4°C，50mL)使产物沉淀 析出，减压抽滤至干得固体产物，真空干燥，得到目标化合物4。根据聚合物的核磁共振图谱 (图1)，计算出聚合物物的分子量。根据投料mol比，得到产物中η的值控制在140和410 之间。图1中给出了合成过程中产物的核磁图，确认了结构。
[0022] 载有紫杉醇胶束的制备：称取3mg紫杉醇和27mg聚合物溶于ImL丙酮后，搅拌下 缓慢加入30mL去离子水中，常温常温搅拌24h后溶剂挥发完全，然后经0. 22 μ m滤膜过滤 得到紫杉醇的pH敏感树枝状聚合物载药胶束。
[0023] 载有阿霉素胶束的制备：称取27mg聚合物溶于ImL丙酮，称取3mg阿霉素溶于ImL 二甲亚砜后，将阿霉素自由碱的二甲亚砜溶液和聚合物的丙酮溶液混合。将此混合溶液搅 拌下缓慢滴入30mL去离子水中，滴加完毕后，装入透析袋(截留分子量：8000-14000)中避 光用去离子水透析，每4h更换一次透析介质，36h后用0. 22 μ m滤膜过滤，即制得载阿霉素 聚合物胶束。
[0024] 载紫杉醇聚合物胶束的药物释放研宄：将一定量的吐温80分别溶于2种不同pH 的醋酸盐缓冲液（0. 01M，pH=4. 0和pH=5. 0)和磷酸缓冲液（0. 01M，pH=7. 4)中配制成含 0. 5% (W/V)吐温80的缓冲液作为释放介质。将9mL载紫杉醇聚合物胶束平均分为三份，分 别加入透析袋中（截留分子量：8000-14000)，放入15mL不同pH的释放介质中，在恒温振荡 器中进行释放研宄（37°C，IOOrpm)。在0. 5h、lh、3h、6h、9h、12h、24h取样2mL，每次取样后补 加入2mL相应的新鲜释放介质。样品用高效液相色谱法检测紫杉醇含量。得到载药胶束在 不同PH条件下的释放曲线，如图2所示。该pH敏感性聚合物载药胶束能够在生理条件下 (pH=7. 4)保持稳定，所负载的紫杉醇不被释放或者释放量较小。而在酸性环境下（pH=4. 0 或pH=5.0)药物快速释放。
[0025] 载阿霉素聚合物胶束的药物释放研宄：阿霉素释放研宄的释放介质为2种不同pH 的醋酸盐缓冲液（0. 01M，pH=4. 0和pH=5. 0)和磷酸缓冲液（0. 01M，pH=7. 4)。将3mL载阿 霉素聚合物胶束平均分为三份，分别加入透析袋中（截留分子量：8000-14000)，放入20mL 不同pH的释放介质中，在恒温振荡器中进行释放研宄（37°C，IOOrpm)。在0. 5h、lh、3h、6h、 9h、12h、24h取样3mL，每次取样后补加入3mL相应的新鲜释放介质。样品用荧光分光光度 计检测阿霉素含量(激发波长48 lnm，发射波长558nm)，得到载药胶束在不同pH条件下的释 放曲线，如图3所示，pH敏感性聚合物载药胶束能够在生理条件下（pH=7. 4)保持稳定，所 负载的阿霉素不被释放或者释放量较小。而在酸性环境下（pH=4. 0或pH=5. 0)药物快速释 放。
[0026] 聚合物空白胶束及载阿霉素胶束的细胞毒性测试：取处于指数生长期的HeLa细 胞、RAW 264. 7细胞接种到96孔板上，每孔含I X IO4个细胞，培养24h后（37°C、5v% CO2)，分 别加入不同的聚合物胶束或载药胶束继续培养，使聚合物胶束的最终浓度梯度为：〇. Olmg/ mL、0.1 mg/mL、0. 25 mg/mL、0. 5 mg/mL、l mg/mL。载药胶束所含的最终阿霉素浓度梯度为： 0· 01 μ g/mL、0. 1 μ g/mL、l μ g/mL、10 μ g/mL、15 μ g/mL。每个浓度均设 3 个复孔，同时用未 处理的细胞作为对照。加入样品以后继续培养48h(37°C、5v% C02)，进行MTT检测：每孔加 MTT(噻唑蓝）溶液（5mg/mL，PBS溶解，pH=7. 4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔 内培养上清液，每孔加150 μ L DMS0,摇床低速振荡（37°C )10min，使结晶物充分溶解，在酶 联免疫监测仪上测定各孔光吸收值(检测波长：570nm)。以含样品孔与空白对照孔的吸光度 平均值之比作为细胞存活率。空白胶束对HeLa细胞和RAW 264. 7细胞的几乎没有毒性（图 4)，而载阿霉素的胶束对两种细胞产生了不同程度的抑制，腙键的引入、腙键化学环境和胶 束核的构建材料对抑制作用有不同程度影响（图5)。
【主权项】
1. 一种pH敏感可降解聚合物，其特征在于，所述聚合物为下述结构的化合物：140彡n彡410,且n为整数。2. 权利要求1的pH敏感可降解聚合物的制备方法，其特征在于，所述聚合物的合成路 线如下：(1) 聚乙二醇单甲醚和对羧甲苯甲醛为原料，二氯甲烷为溶剂，DCC和DMP为催化剂， 室温至原料完全反应，经后处理得化合物1 ; (2) 对羟基苯甲酸甲酯和水合肼反应，mol比控制在1:1和1:3之间，溶剂为无水乙醇， 至原料完全反应，经后处理得到化合物2 ; (3) 化合物1和化合物2的mol比控制在1:1和1:5之间，在溶剂DMF中进行反应，反 应结束经后处理得到化合物3 ; (4) 以化合物物3和丙交酯为原料，摩尔比控制在1:200和1:500之间，甲苯作为溶剂， 辛酸亚锡作为催化剂，惰性气体保护下，温度控制在90-100°C之间进行反应，反应结束后经 后处理得到目标化合物4。3.权利要求1所述pH敏感可降解聚合物作为载药胶束的应用。
【专利摘要】一种pH敏感可降解聚合物、其制备方法和应用，所述聚合物为下述结构的化合物： 140≤n≤410，且n为整数。本发明pH敏感聚合物作为载药胶束时的特点包括：（1）真正纳米级（<200nm），非常均一稳定；（2）多靶向技术（克服单靶向不足），包括长循环纳米粒子的天然靶向，pH敏感的物理化学靶向，充分获得肿瘤靶向性；（3）载药量大、稳定性好，减少了治疗成本和由于游离药物释放产生的副作用；（4）在肿瘤组织内迅速释放药物，获得局部高浓度，快速杀灭癌细胞，不易产生耐药性，（5）高度肿瘤靶向性使其在正常组织分布很少，副作用很小；即使少量到达非肿瘤部位，由于pH敏感性，药物几乎不释放或释放速率很小，副作用很小。
【IPC分类】C08G63/685, C08G63/08, C08G63/664, A61K9/107, A61K47/34
【公开号】CN104961887
【申请号】CN201510393122
【发明人】宋仕永, 徐靖, 卜永强, 秦本凯, 栾淑娟, 李稳稳, 刘隆臻
【申请人】河南大学
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年7月7日