一种液体菌种发酵培养基的制作方法_3

文档序号:9270926阅读:来源:国知局
、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比3:2:2:1均匀混 厶 口 〇
[0化3] 2.木屑粉的制备;
[0054] 所述木屑粉的制备方法,包括如下步骤:将无发霉、无病虫银木末或废木屑除去杂 物,置于装有质量百分比浓度0. 5%的碳酸氨钢溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清 洗lOmin,冲洗、渐干,放入蒸汽蓋中于0. 35MPa蒸煮25min,取出,渐干,与植物油按质量比 100:1均匀混合,然后将混合物置微波干燥机于2000W、120°C微波福照5min,其中微波福照 10s,停留10s,最后超微粉碎至粒径0.4mm,密封包装即得木屑粉。
[0化5] 3.包被壳聚糖的制备;
[0056] 所述包被壳聚糖的制备方法,包括如下步骤;取壳聚糖加入其质量40%的质量百 分比浓度为11%的a-环状糊精水溶液中,制成软材,用20目筛制粒,得湿颗粒,置微波干 燥机中于功率2000W、70°C干燥5min,用20目筛快速整粒即得包被壳聚糖。
[0化7] 下述实施例2-7中所使用的中草药提取物、木屑粉及包被壳聚糖均为实施例1制 备,杏鲍茹菌种为福建省潭州市龙海食用菌研究所提供的"龙海3号",其它原料均为市购。 [0化引实施例2
[0化9] 一种利用发酵培养基制备液体菌种的方法,包括如下步骤:
[0060] 1)取保存好的杏鲍茹斜面菌种0. 2cm2的菌种块2块接种于平板培养基进行活化, 25°C恒温培养10天,如此活化2次,得平板种子;
[0061] 2)将平板种子用直径为0. 5cm的打孔器截取0. 2cm2的菌种块3块接入250mLS角 瓶中,液体种子培养基装液量为lOOmU于25°C恒温培养2天,然后放入恒温摇床中,25°C、 10化/min振荡培养3天得液体种子;
[0062] 如将液体种子W10 %的接种量接种于500血摇瓶中,摇瓶培养基装液量250mL,于 25°C、150r/min振荡恒温培养4天得摇瓶种子;
[0063] 4)将摇瓶种子W10%的接种量接种于化种子罐中,种子罐培养基装液量化,于 25°C、通气量化/min条件下恒温培养4天得种子罐种子;
[0064] 5)首先将种子罐种子W8%接种量接种于3化发酵罐,发酵罐培养基装液量15L 于31°C、通气量化/min恒温发酵1她,然后W0. 4°C/min速率降温至20°C,向发酵罐中加入 1Ig包被壳聚糖和900血种子罐种子,在通气量化/min条件下恒温发酵13h,最后W0. 3°C/ min速率升温至25°C,在通气量化/min条件下恒温发酵4她即得液体菌种;
[00化]所述平板培养基组成为;马铃馨200g/l,葡萄糖20g/l,蛋白腺5g/l,磯酸二氨钟 3g/L,硫酸儀 1. 5g/l,琼脂 20g/L,VBi0. 02g/L,余量为水,抑值 6. 0 ;
[0066] 所述液体种子培养基组成为;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,琼 脂2g/l,中草药提取物0. 2g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0.Ig/l,VBi O.Olg/L,余量为水,抑值6.0 ;
[0067] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提取 物0. 8g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/l,VBi0.Olg/l,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0068] 所述种子罐培养基组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物1.Og/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 4g/l,VBi0.Olg/l,余量为水, 抑值6. 0 ;
[0069] 所述发酵罐培养基的组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药 提取物1. 8g/l,木屑粉0. 8g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,VBi0.Olg/L余量为 水,抑值6.0 ;
[0070] 所述发酵罐培养基的制备方法为;按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆 饼粉质量5倍的水,用乳酸调节抑值为5. 5,加入加/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边揽 拌边加入黄豆饼粉,升温至93°C,保温,液化12min,然后降温至55°C,保温,边揽拌边加入 40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解25min,边揽拌边加入剩余水和其 它原料,均匀混合,调整抑值为6. 0,121°C灭菌40min即得发酵罐培养基。
[0071] 经上述方法制备的液体菌种菌丝球密度为5. 5X105个/I,菌丝球直径为0. 5mm, 菌丝球干重为lOOg/l,胞外多糖为3. 5g/L。
[0072] 实施例3
[0073] 一种利用发酵培养基制备液体菌种的方法,包括如下步骤:
[0074] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0075] 5)首先将种子罐种子W8%接种量接种于3化发酵罐,发酵罐培养基装液量15L 于30°C、通气量化/min恒温发酵12h,然后W0. 3°C/min的速率降温至18°C,向发酵罐中 加入lOg包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量化/min条件下恒温发酵lOh,最后W 0. 2°C/min的速率升温至24°C,在通气量化/min条件下恒温发酵45h即得液体菌种;
[0076] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[0077] 所述液体种子培养基组成为;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,琼 脂2g/l,中草药提取物0.Ig/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0.05g/l,VBi 0.Olg/L,余量为水,抑值6. 0 ;
[007引所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提取 物0. 5g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 2g/l,VBi0.Olg/l,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0079] 所述种子罐培养基组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物0. 8g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/l,VBi0.Olg/l,余量为水, 抑值6. 0 ;
[0080] 所述发酵罐培养基的组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药 提取物1. 5g/l,木屑粉0. 6g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,VBi0.Olg/L余量为 水,抑值6.0 ;
[0081] 所述发酵罐培养基的制备方法为;按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆 饼粉质量4倍的水,用乳酸调节抑值为5,加入加/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边揽 拌边加入黄豆饼粉,升温至90°C,保温,液化lOmin,然后降温至50°C,保温,边揽拌边加入 40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20min,边揽拌边加入剩余水和其 它原料,均匀混合,调整抑值为6. 0,123°C灭菌30min即得发酵罐培养基。
[0082] 经上述方法制备的液体菌种菌丝球密度为5. 0X105个/I,菌丝球直径为0. 6mm, 菌丝球干重为96g/l,胞外多糖为3. 2g/L。
[0083] 实施例4
[0084] 一种利用发酵培养基制备液体菌种的方法,包括如下步骤:
[0085] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0086] 5)首先将种子罐种子W8%接种量接种于3化发酵罐,发酵罐培养基装液量15L 于32°C、通气量化/min恒温发酵2化,然后W0. 5°C/min的速率降温至22°C,向发酵罐中 加入12g包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量化/min条件下恒温发酵16h,最后W 0. 4°C/min的速率升温至26°C,在通气量化/min条件下恒温发酵52h即得液体菌种;
[0087] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[008引所述液体种子培养基组成为;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,琼 脂2g/l,中草药提取物0. 3g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 15g/l,VBi 0.Olg/L,余量为水,抑值6. 0 ;
[0089] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提取 物1.Og/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 4g/L,VBi0.Olg/L,余量为水,抑 值 6. 0 ;
[0090] 所述种子罐培养基组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物1. 2g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 5g/l,VBi0.Olg/l,余量为水, 抑值6. 0 ;
[0091] 所述发酵罐培养基的组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药 提取物2g/l,木屑粉1.Og/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,VBi0.Olg/l,余量为水, 抑值6. 0 ;
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