实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售获得的常规产品。
[0038] 实施例1
[0039] -种苜蓿多目标联产提取分离方法，步骤如下：
[0040] 1)、取苜蓿鲜草，清洗后甩干，然后进行碾切、打浆，得到浆液，对浆液中的纤维进 行研磨后加入纤维素酶进行酶解，纤维素酶的添加量为苜蓿鲜草重量的〇. 5%，酶解时间为 55h ；
[0041] 2)、将酶解后的浆液离心，得到草渣和上清液，草渣回收作为饲料，上清液进行多 级串联酶解；
[0042] 3)、多级串联酶解的级别设置为4级，每一级别酶解的温度范围控制在25-35Γ之 间，pH控制在6-7之间，且从第一级别到下一级别的温度逐渐升高，而pH值则逐渐降低；多 级串联酶解所用的酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物；木瓜蛋白酶的添加量为上清液 重量的0. 2%，中性蛋白酶的添加量为上清液重量的0. 16% ;多级串联酶解的时间为45h ;
[0043] 3)、将多级串联酶解后的浆液用活性炭脱色，脱色得到的叶绿素回收利用，脱色的 液体采用连续式卧式螺旋卸料沉降离心机进行分离，得到上清液和固体物质；固体物质为 多肽，多肽的得率为6.2% ;
[0044] 上清液采用高效三效真空蒸发器进行浓缩，浓缩物料出口温度50°C，出料浓度 30%，得到浓缩液，将浓缩液送至压力式喷粉塔进行造粒喷粉，即得到以叶黄素为主的产 品。
[0045] 实施例2
[0046] -种苜蓿多目标联产提取分离方法，步骤如下：
[0047] 1)、取苜蓿鲜草，清洗后甩干，然后进行碾切、打浆，得到浆液，对浆液中的纤维进 行研磨后加入纤维素酶进行酶解，纤维素酶的添加量为苜蓿鲜草重量的1%，酶解时间为 48h ；
[0048] 2)、将酶解后的浆液离心，得到草渣和上清液，草渣回收作为饲料，上清液进行多 级串联酶解；
[0049] 3)、多级串联酶解的级别设置为5级，每一级别酶解的温度范围控制在30_50°C之 间，pH控制在6-7之间，且从第一级别到下一级别的温度逐渐升高，而pH值则逐渐降低；多 级串联酶解所用的酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物；木瓜蛋白酶的添加量为上清液 重量的0. 4%，中性蛋白酶的添加量为上清液重量的0. 4% ;多级串联酶解的时间为48h ;
[0050] 3)、将多级串联酶解后的浆液用活性炭脱色，脱色得到的叶绿素回收利用，脱色的 液体采用连续式卧式螺旋卸料沉降离心机进行分离，得到上清液和固体物质；固体物质为 多肽，多肽的得率为6.3% ;
[0051] 上清液采用高效三效真空蒸发器进行浓缩，浓缩物料出口温度52°C，出料浓度 32%，得到浓缩液；将浓缩液送至压力式喷粉塔进行造粒喷粉，即得到以叶黄素为主的产 品。
[0052] 实施例3
[0053] -种苜蓿多目标联产提取分离方法，步骤如下：
[0054] 1)、取苜蓿鲜草，清洗后甩干，然后进行碾切、打浆，得到浆液，对浆液中的纤维进 行研磨后加入纤维素酶进行酶解，纤维素酶的添加量为苜蓿鲜草重量的1. 5%，酶解时间为 50h ；
[0055] 2)、将酶解后的浆液离心，得到草渣和上清液，草渣回收作为饲料，上清液进行多 级串联酶解；
[0056] 3)、多级串联酶解的级别设置为5级，每一级别酶解的温度范围控制在40-55Γ之 间，pH控制在6-7之间，且从第一级别到下一级别的温度逐渐升高，而pH值则逐渐降低；多 级串联酶解所用的酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物；木瓜蛋白酶的添加量为上清液 重量的〇. 15%，中性蛋白酶的添加量为上清液重量的0. 15% ;多级串联酶解的时间为48h ;
[0057] 3)、将多级串联酶解后的浆液用活性炭脱色，脱色得到的叶绿素回收利用，脱色的 液体采用连续式卧式螺旋卸料沉降离心机进行分离，得到上清液和固体物质；固体物质为 多肽，多肽的得率为5.8% ;
[0058] 上清液采用高效三效真空蒸发器进行浓缩，浓缩物料出口温度52°C，出料浓度 33%，得到浓缩液；将浓缩液送至压力式喷粉塔进行造粒喷粉，即得到以叶黄素为主的产 品。
[0059] 实施例4
[0060] -种苜蓿多目标联产提取分离方法，步骤如下：
[0061] 1)、取苜蓿鲜草，清洗后甩干，然后进行碾切、打浆，得到浆液，对浆液中的纤维进 行研磨后加入纤维素酶进行酶解，纤维素酶的添加量为苜蓿鲜草重量的2%，酶解时间为 45h ；
[0062] 2)、将酶解后的浆液离心，得到草渣和上清液，草渣回收作为饲料，上清液进行多 级串联酶解；
[0063] 3)、多级串联酶解的级别设置为6级，每一级别酶解的温度范围控制在25-55Γ之 间，pH控制在6-7之间，且从第一级别到下一级别的温度逐渐升高，而pH值则逐渐降低；多 级串联酶解所用的酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物；木瓜蛋白酶的添加量为上清液 重量的0. 2%，中性蛋白酶的添加量为上清液重量的0. 3% ;多级串联酶解的时间为50h。
[0064] 3)、将多级串联酶解后的浆液用活性炭脱色，脱色得到的叶绿素回收利用，脱色的 液体采用连续式卧式螺旋卸料沉降离心机进行分离，得到上清液和固体物质；固体物质为 多肽，多肽的得率为6% ;
[0065] 上清液采用高效三效真空蒸发器进行浓缩，浓缩物料出口温度55°C，出料浓度 35%，得到浓缩液；将浓缩液送至压力式喷粉塔进行造粒喷粉，即得到以叶黄素为主的产 品。
[0066] 试验例1
[0067] 将实施例1-4制得的以叶黄素为主的产品进行成分检测，得到的结果如表1所示。
[0068] 表1以叶黄素为主的产品成分检测结果
[0071] 从表1可以看出，得到的以叶黄素为主的产品各营养物质含量丰富，品质高。
[0072] 试验例2
[0073] 将实施例1得到的多肽，进行检测，其多肽大小均小于2000Da，大多在 1000-2000Da之间。取该多肽250g进行氨基酸含量检测，得到的结果如表2所示。
[0074] 表2多肽中氨基酸的含量
[0075]
[0076] 另外，实施例2-4制得的多肽的各种氨基酸的含量与实施例1 一致。
[0077] 本发明得到的多肽具有非常高的生物活性，该多肽制成喷剂后喷施于人体皮肤， 能快速的紧致皮肤，特别是对于喷施于产后的妈妈的腹部，喷施两周即可使松垮的皮肤恢 复如初；该多肽还能够与纤维结合，形成纤维蛋白，对治疗癌症有很大的应用前景；另外， 该多肽制成口服制剂，具有非常好的提高人体免疫力的效果，对关节病也具有非常好的效 果。
[0078] 尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的 精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中 包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
【主权项】
1. 一种苜蓿多目标联产提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 、取苜蓿鲜草，预处理后经碾切、打浆后，得到浆液，在所述浆液中加入纤维素酶进 行酶解； (b) 、将酶解后的浆液分离，得到草渣和上清液，所述草渣回收作为饲料，所述上清液进 行多级串联酶解； (c) 、将多级串联酶解后的浆液进行脱色，脱色得到的叶绿素回收利用，脱色的液体进 行分离，得到上清液和固体物质，其中的上清液回收，得到以叶黄素为主的产品，固体物质 即为多肽。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（a)中，所述浆液在加入纤维素酶 之前，还包括对所述浆液中的纤维进行研磨的步骤。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤（a)中，所述纤维素酶的添加量为 所述苜蓿鲜草重量的〇. 5% -2%，酶解时间为45-55h。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（b)中，所述多级串联酶解具体 为： 多级串联酶解的级别设置为4-6级，每一级别酶解的温度范围控制在25-55°C之间，pH 控制在6-7之间，且从第一级别到下一级别的温度逐渐升高，而pH值则逐渐降低。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤（b)中，所述多级串联酶解所用的 酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物，所述木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的添加重量比例为 1 : 0? 8-1. 5〇6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤（b)中，所述多级串联酶解所用的 酶的添加量为酶解物质重量的0. 3% -0. 8% ;所述多级串联酶解的时间为45-50h。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（c)中，所述分离采用连续式卧式 螺旋卸料沉降离心机进行。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（c)中，所述其中的上清液回收通 过以下方法进行： 将上清液进行浓缩后干燥，得到以叶黄素为主的产品。9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤（c)中，所述浓缩采用高效三效真 空蒸发器进行，浓缩物料出口温度50-55°C，出料浓度30-35%，得到浓缩液； 将所述浓缩液送至压力式喷粉塔进行造粒喷粉，即得。10. 根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，在步骤（a)中，所述苜蓿鲜草 为：苜蓿从收割到加工不超过4小时。
【专利摘要】本发明涉及苜蓿有效成分提取领域，特别涉及一种苜蓿多目标联产提取分离方法，包括以下步骤：取苜蓿鲜草，预处理后经碾切、打浆后，得到浆液，在浆液中加入纤维素酶进行酶解；分离，得到草渣和上清液，草渣回收作为饲料，上清液进行多级串联酶解；脱色，脱色得到的叶绿素回收利用，脱色的液体进行分离，得到上清液和固体物质，其中的上清液回收，得到以叶黄素为主的产品，固体物质即为多肽。本发明提供的苜蓿多目标联产提取分离方法，利用生物酶法提取植物蛋白，得到的多肽活性高，并且将苜蓿的有效成分全部利用，不仅减少了环境污染，还增加附带产值，具有重大意义。
【IPC分类】C12P23/00, C12P21/06, A23K1/12
【公开号】CN105018558
【申请号】CN201510383317
【发明人】王代军, 郑子芳, 韩似良
【申请人】浙江黛君生物医药科技有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月3日