一种含黄芪甲苷药物分离制备及定性、定量测试前处理方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药物分离制备及定性、定量前处理方法，具体涉及一种含黄芪甲苷药物在分离制备及定性、定量测试前的前处理方法。
【背景技术】
[0002]黄苗是常用中药，包括豆科植物亚历山大黄苗(AstragalusalexandrinusBoiss)根、深裂黄苗如tragalus dissectus 的根、膜荚黄苗 dtragalusmembranaceus(Fisch.)Bungede)的根、绵毛黄苗(Astragalussieversianus Pal1.)的根、多刺黄苗Astragalus spinosus Vahl地上部分。主要成分包括阜苷、黄酮及多糖等，而黄苗甲苷
而)是皂苷类的主要成分之一。具有显著降低血糖、糖化血红蛋白和尿蛋白的作用；可降低肾皮质和血清中的AGEs、具有抗氧化作用；对醛糖还原酶有抑制作用；抑制系膜细胞增生、减轻肾脏肥大的作用；增强机体免疫力、提高机体的抗病能力、抗病毒作用、抗应激功效等。可用于预防和治疗糖尿病肾病。
[0003]目前，处方中包含黄芪的药物种类及数目越来越多，而黄芪甲苷是黄芪中的主要指标成分之一，常作为定性定量指标。若直接对其进行分析，则因杂质干扰太大而不能满足分析的要求。《中国药典》2010版一部黄芪药材项下黄芪甲苷的前处理包括索氏提取、蒸干后水溶解、正丁醇萃取、氨试液洗涤、大孔树脂柱层析等过程，该方法具有操作繁琐、处理效率低、准确度低、重复性差等缺点。《香港中药材标准》中虽然对黄芪甲苷的处理方法进行了改进，用甲醇超声取代索氏提取的方法，但依然采用正丁醇萃取等操作，依然具有操作繁琐、重复性差等缺点。实践证明，萃取是决定准确度、重复性结果及处理效率最重要的关键步骤，在萃取过程中，容易产生乳化、分层不明显等现象影响结果的准确度。因此，两种法定前处理方法均未避免萃取这一关键步骤，因此均存在上述缺陷。
[0004]发明人根据黄芪甲苷的结构特征，采用弱碱性溶液去除有机酸类、酚类等物质；再用较低浓度的乙醇溶液洗脱层析柱，继续除去一部分杂质，达到消除杂质干扰、实现分离制备及定性、定量分析的目的。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种含黄芪甲苷药物的前处理方法，克服目前黄芪甲苷前处理方法中存在的缺陷。
[0006]本发明运用一种简便易行、准确度高、重复性好的方法对其进行处理，主要涉及黄芪甲苷的纯化过程。
[0007]为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下:
1.黄芪甲苷提取物的制备:取含黄芪甲苷药物，采用常规提取工艺提取、浓缩获得黄芪甲苷提取物浸膏或溶液。
[0008]2.上样液的制备:取含黄芪甲苷的浸膏或溶液，加入10~100倍的氨试液，摇匀，即得;
3.纯化:将上样液转移至大孔树脂中，至上样完毕，用1~10倍柱体积稀乙醇冲洗树脂柱，弃去洗脱液；
4.收集:待稀乙醇除杂完毕，再用较高浓度乙醇冲洗树脂柱，收集洗脱液，获得黄芪甲苷。
[0009]上述步骤I中所述的含黄芪甲苷提取物浸膏为含黄芪甲苷药物经提取制备所得，可采用已知的超声提取、回流提取、索氏提取等多种提取工艺。
[0010]上述步骤2中所述的氨试液为市售常规试剂。
[0011]上述步骤3大孔树脂为市售通用规格，型号可包括AB-8、HPD100, D-10U HP20、H20、D1400。
[0012]上述步骤3所述的稀乙醇为市售乙醇加水稀释，浓度为10?50%，优选40%。
[0013]上述步骤4所述的高浓度乙醇为市售乙醇加水稀释，浓度为60?95%，优选70%。
[0014]通过上述过程制成的黄芪甲苷可用于含黄芪药物的分离制备及定性、定量测定。
[0015]本发明具有以下有益效果:
1.含黄芪药物的前处理采用一次柱层析分离即可实现，制得的黄芪甲苷可用于分离制备及定性、定量测定，相比于《中国药典》2010版一部、《香港中药材标准》及其它文献方法操作更为简便；
2.本发明方法制得的黄芪甲苷在开展定性、定量测试研究中重复性好，加样回收率合格，优于其它已知的前处理工艺。
【附图说明】
[0016]图1为黄芪甲苷结构式。
[0017]图2为黄芪甲苷专属性试验(1.空白溶剂；2.阴性对照；3.黄芪甲苷对照品；4.阳性供试品)。
[0018]图3为黄芪甲苷线性关系结果。
[0019]图4为实施例1结果。
[0020]图5为实施例2结果。
[0021]图6为实施例3结果。
[0022]图7为实施例4结果。
[0023]图8为实施例5结果。
[0024]图9为实施例6结果。
[0025]图10为黄芪甲苷薄层定性检测结果。
【具体实施方式】
[0026]实施例1:
取含黄芪甲苷的浸膏lg，加1ml氨试液，摇匀，制成上样液，转移至D1400大孔树脂(湿法装柱，直径1.0 X 30cm,柱体积24ml)上，用24ml (I倍柱体积)10%乙醇洗脱树脂，再用120ml (5倍柱体积)60%乙醇洗脱，收集洗脱液，即得。
[0027]实施例2:
取含黄芪甲苷的浸膏lg，加50ml氨试液，摇匀，制成上样液，转移至HPD100大孔树脂(湿法装柱，直径1.0 X 30cm,柱体积24ml)上，用60ml (2.5倍柱体积)30%乙醇洗脱树脂，再用24ml (I倍柱体积)95%乙醇洗脱，收集洗脱液，即得。
[0028]实施例3:
取含黄芪甲苷的浸膏lg，加10ml氨试液，摇匀，制成上样液，转移至HP20大孔树脂(湿法装柱，直径1.0 X 30cm,柱体积24ml)上，用120ml (5倍柱体积)30%乙醇洗脱树脂，再用60ml (2.5倍柱体积)80%乙醇洗脱，收集洗脱液即得。
[0029]实施例4:
取含黄芪甲苷的浸膏lg，加10ml氨试液，摇匀，制成上样液，转移至H20大孔树脂(湿法装柱，直径1.0 X 30cm,柱体积24ml)上，用240ml (10倍柱体积)50%乙醇洗脱树脂，再用120ml (5倍柱体积)70%乙醇洗脱，收集洗脱液，即得。
[0030]实施例5:
取含黄芪甲苷的浸膏lg，加10ml氨试液，摇匀，制成上样液，转移至DlOl大孔树脂(湿法装柱，直径1.0 X 30cm,柱体积24ml)上，用120ml (5倍柱体积)40%乙醇洗脱树脂，再用120ml (5倍柱体积)70%乙醇洗脱，收集洗脱液，即得。
[0031]实施例6:
取含黄芪甲苷的浸膏lg，加10ml氨试液，摇匀，制成上样液，转移至AB-8大孔树脂(湿法装柱，直径1.0 X 30cm,柱体积24ml)上，用240ml (10倍柱体积)50%乙醇洗脱树脂，再用240ml (10倍柱体积)80%乙醇洗脱，收集洗脱液，即得。
[0032]黄芪甲苷的定量定性分析
对本发明实施例下制备的黄芪甲苷样品进行定量测定，并按照《中国药典》2010版黄芪项下黄芪甲苷的定性定量检测方法进行检测。结果表明，该检测方法具有良好的专属性、线性(r=0.9992)、精密度(RSD=L 1%)、重复性(RSD=L 2%)、稳定性(RSD=L 5)及加样回收率(RSD=L 8%)。专属性结果见附图2，线性结果见附图3，不同实施例均能满足定量要求，结果见附图4?9。
[0033]对本发明实施例制备的黄芪甲苷样品进行薄层定性分析，结果表明，该检测方法能够很好地将黄芪甲苷的斑点显现出来，具有良好的可行性和准确度结果见附图10。
[0034]本发明适用于含黄芪甲苷药物中黄芪甲苷的分离制备及定性定量工作中的样品前处理，本发明能大大简化黄芪甲苷前处理流程及提高处理效率，具有简便易行、可操作性好、实用性强、准确度高等优点，对含黄芪甲苷的药物中黄芪甲苷的前处理具有一定的指导意义。
【主权项】
1.一种含黄芪甲苷药物分离制备及定性定量测试前处理方法，其特征在于:取含黄芪甲苷提取物浸膏，加入其重量10?100倍的氨试液，摇匀制成上样液；将上样液转移到大孔树脂柱中，至上样完毕；用I?10倍柱体积稀乙醇冲洗树脂柱以除去杂质；最后用I?10倍柱体积高浓度乙醇洗脱获得黄芪甲苷。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:大孔树脂为市售通用规格，型号可包括AB-8、HPD100, D-101、HP20、H20、D1400。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:稀乙醇为市售乙醇加水稀释，浓度为10 ?50%，优选 40%。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:高浓度乙醇为市售乙醇加水稀释，浓度为60 ?95%，优选 70%。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述的含黄芪甲苷提取物浸膏为含黄芪甲苷药物经提取制备所得，可采用已知的多种提取工艺。6.根据权利要求1?5所述，其特征在于:制成的黄芪甲苷可用于含黄芪药物的分离制备及定性、定量测定。
【专利摘要】本发明公开了一种黄芪甲苷的前处理方法，该方法适用于含黄芪甲苷药物的分离制备及定性定量工作中的样品前处理。方法内容主要是将药物提取，浓缩得浸膏，浸膏用氨试液溶解，摇匀制成上样液，转移至大孔树脂层析柱上，待上样完毕，用稀乙醇冲洗树脂柱以除去杂质，最后用高浓度乙醇洗脱获得黄芪甲苷。本发明相比于已公开的其它方法，操作简便、准确度高、实用性强，对药物中黄芪甲苷的分离制备及定性、定量测试均具有较高的应用价值。
【IPC分类】G01N30/90, C07J53/00, G01N30/06
【公开号】CN105085600
【申请号】CN201410203169
【发明人】张继全, 刘春林, 周升永, 阮克锋, 冯怡, 吴飞
【申请人】上海张江中药现代制剂技术工程研究中心
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月14日