下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有 的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检 测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
[0035] 实验制备氟苯尼考磷酸酯
[0036]1?试药
[0037] 薄层层析硅胶，分析纯，青岛海浪硅胶干燥剂厂；氟苯尼考，浙江润康药业有限公 司，含量99.8%;丙酮、二氯甲烷，分析纯，四川华星科技有限责任公司；乙醇、氢氧化钠、N，N-二甲基甲酰胺（DMF)、磷酸、乙酸乙酯、三氯氧磷等均为分析纯，成都市科龙化工试剂厂； 乙腈与甲醇，色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司。
[0038]2?仪器
[0039] 101A-4型电热鼓风干燥箱，上海实验仪器厂；SHZ-D(III)型循环水真空栗，巩义 市英峪予华仪器厂；85-2型恒温磁力加热搅拌器，杭州仪表电机有限公司；高效液相色谱 仪与FTIR-8400S型傅立叶红外光谱仪，岛津国际贸易上海有限公司；Millipore超纯水 系统，密理博中国有限公司；XT4-100B显微熔点测定仪，上海易测仪器有限公司；Olympus CH20B頂F-200生物显微镜与Olympus显微成像系统，日本奥林巴斯株式会社；pHS-25型酸 度计，成都方舟科技开发公司。API4000质谱仪，康圣环球。
[0040] 3?方法
[0041] 3. 1氟苯尼考磷酸酯的合成
[0042] 3. 1. 1合成原理
[0043] 图1为氟苯尼考与预计产物（氟苯尼考磷酸酯）的分子结构3D图，由绘制分子结 构ACD_CHEMSKETCH软件模拟绘制。从氟苯尼考球状图A与棒状图a可以看出，氟苯尼考分 子含有一个活性仲羟基，这个基团的存在为与三氯氧磷发生反应生成氟苯尼考磷酸酯提供 了可能性。图B和图b为产物3D结构的模拟图。
[0044] 氟苯尼考与三氯氧磷反应生成氟苯尼考磷酸酯的原理为：三氯氧磷经过水化生成 物质2或3,再与物质4氟苯尼考反应生成物质5,最后物质5在水的作用下水解成物质6， 即氟苯尼考磷酸酯，见图2。整个合成过程中，三氯氧磷作为反应原料和酰化试剂。该试验 比在氮气保护下反应操作要求低，比用吡啶、K0H、正丁基锂、N，N-二甲基苯、三乙胺、DMAP、 DMF等碱性试药作缚酸剂带入的杂质少，所得产物纯化过程简单，且成本相对较低。
[0045] 3. 1. 2反应装置
[0046] 如图3所示，在通风橱里安装反应装置，烧瓶A为反应瓶，置于水浴锅中，其余烧瓶 均为装有40%NaOH水溶液的尾气吸收瓶，由冷凝管无缝连接，B端接一无气气球，用来判断 尾气的吸收情况。
[0047] 3. 1. 3反应步骤
[0048] 氟苯尼考磷酸酯合成路线如图4所示。在冰浴条件下，向反应烧瓶内加入3g氟苯 尼考和10ml三氯氧磷。然后将反应瓶放在在30°C恒温水浴中，并在磁力搅拌下，通过漏斗 加入适量蒸馏水（30秒一滴）至刚好澄清透明。并用薄层色谱跟踪至氟苯尼考消失后再反 应30min。再将反应液冰盐浴降温至-20~-15°C，通过漏斗向反应瓶缓缓滴加蒸馏水水解 (控制反应瓶温度小于-15°C)，立即放入的冰箱静置过夜，充分析出晶体。
[0049] 3. 1. 4产物精制
[0050] 将析出晶体用循环水真空栗抽滤。用95%的丙酮冲洗晶体三次，然后将固体放 在40°C的电热鼓风干燥箱中，恒温干燥，得初产品。将初产品用90%的丙酮水溶液在40°C 溶解，趁热过滤，加入等体积的已经过滤的二氯甲烷，将混合液于4°C冰箱放置过夜，收集晶 体。
[0051] 3. 1. 5确定产物晶体形状
[0052] 直接对3. 1. 4项下析出的晶体拍照，得到产物的宏观晶体形状。并取少量晶体于 载玻片上，用少许80%的丙酮水溶液分散，盖上盖玻片于显微镜下观察，记录产物晶型。
[0053] 3. 2 鉴别
[0054] 3. 2. 1熔点测定
[0055] 用显微熔点测定仪测定氟苯尼考与产物的熔点。每组测三次。
[0056] 3.2.2pH值测定
[0057] 氟苯尼考pH测定：记录测试时室温。取0. 20g氟苯尼考于洁净的烧杯中，加入 20ml蒸馏水（物质没有完全溶解，故所测数值是饱和状态下的数值），过滤后利用酸度计即 pH计测定，再用精密pH试纸进行验证。同法测定0. 20g氟苯尼考磷酸酯的pH值。
[0058] 3. 2. 3 溶解性
[0059] 将氟苯尼考与产物研磨成细粉，在25°C±2°C，用高效液相色谱法测定二者在水 中的饱和溶解度。并分别测氟苯尼考、产物在氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、DMF、水中的溶解性，按 照中国药典2010凡例第五条操作，每隔5min强力振摇30s;观察30min内的溶解情况，如 果不存在目视可见的溶质颗粒，即视为完全溶解。对氟苯尼考和产物的溶解性进行名词术 语表述的标准见表1。
[0060]表1溶解性
[0061]
[0062] 3. 2. 4紫外分光光度计（UV)鉴别
[0063] 将氟苯尼考原料药与新合成的产物分别配制成56yg/ml的甲醇溶液，记录 200nm~400nm波长范围内紫外分光光度计扫描曲线，确定各物质特征吸收峰和最大吸收 波长。
[0064] 3. 2. 5红外扫描（IR)鉴别
[0065] 采用KBr压片法对氟苯尼考和产物进行红外定性鉴别。
[0066] 3. 2. 6 质谱（MS)鉴别
[0067] 分别将氟苯尼考与产物放在质谱仪中进行正离子轰击电离，获得EI-MS图谱。
[0068] 3. 2. 7薄层色谱（TLC)鉴别
[0069] 取适量氟苯尼考溶于甲醇中，将适量产物溶于水中，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：蒸 馏水=15:6:15:1做为展开剂。将两样品于同一张硅胶薄层色谱板上展开，碘瓶中显色。记 录谱图。
[0070] 4?结果分析
[0071] 4. 1氟苯尼考磷酸酯合成的最佳工艺
[0072] 在冰浴条件下，向反应烧瓶内加入3g氟苯尼考和10ml三氯氧磷。升温至室温，恒 温磁力搅拌，通过漏斗加入适量蒸馏水（30秒一滴）。室温下（25°C)发生反应lh后待反 应完成后，将反应液冰盐浴降温至-20~_15°C，通过漏斗缓缓向反应瓶滴加20ml蒸馏水水 解，立即放入的4°C冰箱，于冰箱静置过夜（12小时），充分析出晶体。将析出晶体用循环水 真空栗抽滤。用95%的丙酮冲洗晶体三次，然后将固体放在40°C的电热鼓风干燥箱中，恒 温干燥，得粗产品。将粗产品用90%的丙酮水溶液在40°C溶解，趁热过滤，加入等体积的已 经过滤的二氯甲烷，将混合液于4°C冰箱放置过夜（12小时），收集晶体，称得质量。
[0073] 4. 2理化性质
[0074] 经少许80%的丙酮水溶液分散的产物在显微镜下的晶形与自然光下的晶形形状 大致相同，均呈白色针状晶体，见图5。产物的熔点为147. 8~149. 5°C，与氟苯尼考的熔点 153. 2~153. 7°C有细微差异，但是差异不大。产物10mg/ml的前药水溶液pH值为1. 6,而 饱和氟苯尼考的pH值为5. 2。产物的pH值较氟苯尼考小，呈酸性，表明氟苯尼考与三氯氧 磷合成反应可能成功，使其分子中含有磷酸基